專利名稱：：一種防治心血管系統(tǒng)疾病的控釋透皮貼劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種防治心血管系統(tǒng)疾病的藥物。
背景技術(shù)：
：心血管疾病是危害人民生命健康最嚴重的疾病，其發(fā)病率和病死率均占各類疾病之首。由于飲食習(xí)慣的改變、生活節(jié)奏的加快，心血管疾病發(fā)病率呈明顯上升趨勢，對患者的生活質(zhì)量產(chǎn)生重大影響。環(huán)維黃楊星D(C26H46N2O,CyclovirobuxineD，結(jié)構(gòu)如式1所示)是一種治療心血管疾病的藥物，收載于《中國藥典》2000年版一部，具有以下的物理化學(xué)特點分子量為402.364，熔點為219-222，為無色針狀結(jié)晶，脂溶性生物堿，油水分配系數(shù)大，在氯仿中易溶，在甲醇或乙醇中溶解，在丙酮中略溶，在水中微溶。這些特點基本符合制備經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的要求。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>環(huán)維黃楊星D常用劑型為口服制劑，這種劑型存在藥物肝臟首過效應(yīng)大，藥物吸收受胃腸道因素影響，需頻繁給藥的缺點。經(jīng)皮給藥系統(tǒng)是指皮膚敷貼方式給藥，藥物經(jīng)由皮膚吸收進入局部組織或全身血液循環(huán)，并達到有效血藥濃度、實現(xiàn)疾病治療或預(yù)防的一類制劑。中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?00610130075.7)公開了一種含中藥環(huán)維黃楊星D的貼劑，該貼劑由保護層、藥物貯庫層、控釋膜、藥物壓敏膠層和背襯層構(gòu)成，其中，藥物貯庫層含環(huán)維黃楊星D15-50%，藥物壓敏膠層含環(huán)維黃楊星D2-10%。該貼劑是由控釋膜控制環(huán)維黃楊星D的釋放并經(jīng)皮吸收，克服了口服劑型的缺點。但是，由于環(huán)維黃楊星D為脂溶性，較難溶解于水溶性基質(zhì)，因此使用水溶性基質(zhì)不能提供理想的透皮速率；該專利亦有記載可用的非水溶性基質(zhì)，如硅酮、聚異丁烯、丙烯酸酯類等傳統(tǒng)類型的壓敏膠，這些基質(zhì)雖然在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中得到大量的應(yīng)用，但它們?nèi)源嬖诓簧偃毕?1)疏水性較強，在皮膚上長時間的貼敷時，會產(chǎn)生積水現(xiàn)象，皮膚泛白；(2)載藥量較低，當藥物濃度超過飽和濃度時即完全改變壓敏膠性能，黏性大大降低，并析出藥物結(jié)晶，從而限制了藥物的透皮速率；(3)需要較長時間才能完全溶脹于溶劑中，延長了生產(chǎn)時間，由于所用有機溶劑大部分有毒，在大工業(yè)生產(chǎn)中必然會對人體產(chǎn)生危害及造成潛在的安全隱患問題，而且殘留的溶劑及所采用的橡膠壓敏膠會對皮膚產(chǎn)生刺激性和致敏性。除此之外，該貼劑使用了控釋膜控制藥物的釋放，增加了生產(chǎn)步驟和成本，且控釋膜的質(zhì)量好壞將直接影響環(huán)維黃楊星D的透皮速率。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種藥物釋放穩(wěn)定、對皮膚無刺激和致敏性的防治心血管系統(tǒng)疾病的控釋透皮貼劑。發(fā)明解決上述問題的技術(shù)方案是一種防治心血管系統(tǒng)疾病的控釋透皮貼劑，該貼劑由保護層、藥物釋放層、藥物貯庫層和背襯層依次層疊構(gòu)成(如圖1所示)，其中，所述的保護層為硅化防粘紙、聚乙烯膜或硅化聚酯膜；所述的背襯層為鋁箔、鋁箔及聚乙烯復(fù)合膜或聚酯復(fù)合膜；所述的藥物釋放層由3%8%的環(huán)維黃楊星D、60%70%的壓敏膠基質(zhì)、5%10%的復(fù)合透皮促滲劑、20%30%的增塑劑和3%的交聯(lián)劑制成；所述的藥物貯庫層由8%15%的環(huán)維黃楊星D、50%60%的壓敏膠基質(zhì)、1%5%的復(fù)合透皮促滲劑、20%30%的增塑劑和3%的交聯(lián)劑制成；所述的壓敏膠基質(zhì)為聚丙烯酸樹脂E100、RL100、RS100和LlOO中的一種或兩種以上；所述的復(fù)合透皮促滲劑為薄荷油、氮酮、丙二醇、油酸、桉葉油、吐溫類和肉豆蔻酸異丙酯中兩種或兩種以上的混合物；所述增塑劑為枸櫞酸三乙酯、癸二酸二丁酯、癸二酸二乙酯或酞酸二丁酯；所述交聯(lián)劑為琥珀酸、己二酸或壬二酸。本發(fā)明貼劑的制備方法由以下步驟組成(1)取壓敏膠基質(zhì)和交聯(lián)劑，混合，加無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，然后加入增塑劑和復(fù)合透皮促滲劑并混勻；取環(huán)維黃楊星D，按每克環(huán)維黃楊星D加IOml無水乙醇的比例用無水乙醇溶解后與上述膠狀溶液混合，攪拌均勻，并超聲30min使藥物完全溶解，制成含3-8%的環(huán)維黃楊星D的釋放層膠液；采用制備釋放層膠液相同的方法制得含8-15%的環(huán)維黃楊星D的貯庫層膠液；(2)將含藥釋放層膠液涂布在保護層上形成藥物釋放層，置于80°C下干燥30min，去除揮發(fā)性溶劑，冷卻備用；(3)將含藥貯庫層膠液涂布在背襯層上形成藥物貯庫層，置于80°C下干燥30min，去除揮發(fā)性溶劑，冷卻備用；(4)將藥物釋放層和藥物貯庫層復(fù)合，沖切。本發(fā)明貼劑具有以下特點和有益效果1、采用德國Rhom公司的Eudragit聚丙烯酸樹脂作為壓敏膠基質(zhì)，這種樹脂屬陽離子型聚甲基丙烯酸酯類，具有良好的成膜性，有E，L，S，RL和RS等多種型號，與環(huán)維黃楊星D及輔料有良好的相容性，對皮膚無毒、無刺激。這種樹脂最大的特點是具有較高的水蒸氣通透性和高的載藥量，可堿少貼劑的厚度和尺寸，而且它為顆粒形式，產(chǎn)品質(zhì)量易控，并易通過添加適宜的交聯(lián)劑和增塑劑調(diào)節(jié)貼劑的性能。2、在結(jié)構(gòu)上與膜控釋型貼劑不同之處在于沒有專門設(shè)置控釋膜，藥物釋放的速度由具有粘著作用的壓敏膠層控制，與皮膚接觸的表面即可輸出藥物。生產(chǎn)時使用涂布機涂布，涂布速度快，自動化程度高，制備方法簡單，生產(chǎn)成本低，同時可以防止膜控釋型貼劑的控釋膜損害所造成的藥物“傾卸”。3、采用藥物含量不同的雙層膠粘劑膜，與皮膚接觸的釋放層含藥較低，貯庫層含藥量高，使用時，隨釋放層藥量的減少，貯庫層中的藥物進入釋放層，平穩(wěn)均勻釋藥，使藥物釋放速率接近于恒定。4、選擇分散法制備粘膠分散型的控制釋放層與藥物貯庫層，適當溫度烘干并涂布，產(chǎn)品外形美觀，物理性狀優(yōu)良，質(zhì)量好，藥物分布均勻，制劑穩(wěn)定，長期放置無析晶等不穩(wěn)定現(xiàn)象發(fā)生。5、選用安全環(huán)保的無水乙醇溶脹高分子材料及溶解藥物可避免貼劑中有毒有機溶劑的殘留，且無公害。6、本發(fā)明貼劑在心前區(qū)給藥一次，即可迅速達到有效血藥濃度，用藥部位針對性強，局部組織的藥物濃度高，有利于心血管系統(tǒng)疾病的治療，且不良反應(yīng)少。7、本發(fā)明貼劑物理性能優(yōu)越，粘附性適宜，用藥安全順應(yīng)性好，對皮膚無刺激性和過敏性。為了更好地理解本發(fā)明，下面將通過實驗進一步說明本發(fā)明具有的有益效果。一、材料1、藥物本發(fā)明所述貼劑(面積為10cm2，每貼含環(huán)維黃楊星D20mg，1貼/1日)；黃楊寧片(南京小營制藥廠生產(chǎn)，批號國藥準字Z32020803)；環(huán)維黃楊星D口服灌胃液(2mg/ml，自制)；參比貼劑中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?00610130075.7)公開的一種含中藥環(huán)維黃楊星D的貼劑。2、儀器SummitP680型高效液相色譜儀(德國dionex公司)；電子分析天平BP2IID(Sartorius公司)；BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；TK-12A型透皮擴散試驗儀(上海凱偕科技貿(mào)易有限公司)；3、動物昆明種小鼠、SD大鼠和新西蘭兔均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。二、本發(fā)明貼劑的粘貼性測定1初黏力的測定方法初黏力表示制劑與皮膚輕輕地快速接觸時表現(xiàn)出的對皮膚的黏接能力，既通常所謂的手感黏性。采用滾球斜坡停止法測定，將一鋼球滾過平放在傾斜板上的黏性面，根據(jù)供試品的黏性面能夠黏住的最大鋼球的尺寸，評價其初黏性的大小。貼劑傾斜板傾角為45°。測定時將貼劑裁成2.5X5cm，揭去保護層，黏性面向上用雙面膠帶固定在傾斜板上。將不同規(guī)格的鋼球自斜面頂端自由滾下，觀察滾下的鋼球是否在試驗段內(nèi)被黏住(停止移動超過5秒)，找到試驗段能黏住的最大球號的鋼球。測定結(jié)果以鋼球的重量表示。2持黏力的測定方法持黏力表示制劑內(nèi)聚力的大小，膏體必須有足夠的內(nèi)聚力才能保證用藥后不會滑動，在撕去后不會在皮膚上殘留余物。將3X5cm的供試貼劑撕去保護層，沿平行于板的縱向方向黏貼在緊挨著的兩塊試驗板的中部。試驗板的下方垂直懸掛500g的砝碼后用秒表開始記時，記錄試樣從試驗板上脫落的時間，測定結(jié)果以脫落時間的長短衡量。3試驗結(jié)果本發(fā)明貼劑的初粘力為7.5g，持粘力為28min，貼劑的黏性適宜，能牢固地粘貼于皮膚表面，同時撕去貼劑時無拉絲及基質(zhì)殘留的現(xiàn)象，經(jīng)反復(fù)粘貼于皮膚后仍有良好的黏性。三、本發(fā)明貼劑及參比貼劑的體外皮膚滲透實驗1、標準曲線的繪制精密稱取環(huán)維黃楊星D對照品7.95mg,置于20ml的容量瓶中，加氯仿溶解至刻度，搖勻，即得0.3975mg/ml的對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液20μ1，50μ1，100μ1，150μ1,200μ1,300μ1于IOml具塞離心管中，40°C水浴N2流下?lián)]干氯仿，精密加入接收液(30%乙醇/生理鹽水)5ml，用24%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至堿性，加入氯仿3ml，渦旋振蕩30s后離心5min(3000rpm)。精密吸取氯仿液2ml，加入衍生化試劑(異氰酸苯酯氯仿溶液，2μl/ml)50l·!1，搖勻后避光放置30min，在40°C水浴中N2流下?lián)]干，殘渣用甲醇0.5ml溶解，0.45μm微孔濾膜過濾，濾液采用紫外柱前衍生化法測定，方法如下以進樣量對峰面積積分值進行線性回歸，得回歸方程A=42.468Q-5.4565，r=0.9962(A表示峰面積積分值，Q表示進樣量)，進樣量在0.106μg-1.59μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性考察都達到標準。2、大鼠離體皮膚的制備和處理取雄性SD大鼠，體重200士20g，將大鼠脫頸處死后，迅速以電動理發(fā)剪剔除腹毛，剝離腹部皮膚，在玻璃板上仔細剔除皮下脂肪組織和黏連物，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，鋁箔包封，冷凍保存，第二天取出，自然解凍，用生理鹽水沖洗干凈。3、透皮吸收實驗采用TK-12A型透皮擴散試驗儀，將皮膚固定在供藥池與接收池之間，角質(zhì)層向上分別與本發(fā)明貼劑和參比貼劑(面積均為3cm2)緊密接觸，角質(zhì)層面向供藥池，真皮層面向接收池與接收液接觸。在接收池中注入接收液(30%乙醇/生理鹽水)7ml，保持32士0.2°C恒溫水浴，磁力攪拌轉(zhuǎn)速為200士5rpm，預(yù)平衡lh，倒掉接收液。重新注入新鮮接收液，分別于擴散4h,8h,12h,16h,20h,24h,28h,32h,36h,40h,44h,48h取樣5ml，每次取樣后補加相同體積的新鮮接收液并排除接收池中的氣泡。樣液經(jīng)處理后采用紫外柱前衍生化法測定，按照標準曲線求出相應(yīng)藥物濃度，計算單位面積累積滲透量(Q，yg/cm2)，并與時間⑴進行回歸，得到方程yl=23.035X-39.466(r=0.9976)，y2=20.095χ_49·393(r=0.9968)(y表示單位面積累積滲透量Q，χ表示時間t)，直線斜率即為穩(wěn)態(tài)透皮速率常數(shù)J(yg/cm2·h)，測得的體外累積透皮藥量與時間的關(guān)系曲線見圖3，實驗結(jié)果見表1和表2表1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結(jié)果表明本發(fā)明貼劑的體外透皮速率常數(shù)J、Q48h均大于參比貼劑的數(shù)值，貼劑中藥物以零級釋放，48h持續(xù)穩(wěn)定釋放藥物，可維持恒定、持久、可控的有效血藥濃度，本貼劑的體外透皮速率和透過量能達到治療要求。四、體外釋藥試驗取本發(fā)明貼劑，照釋放度測定法(中國藥典2005年版二部附錄XD第三法)，采用溶出度測定法(中國藥典2005年版二部附錄XC第三法)的裝置，量取經(jīng)超聲脫氣處理過的釋放介質(zhì)(30%乙醇/生理鹽水)800ml注入溶出杯內(nèi)，預(yù)溫至32士0.5°C。轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，在4h，8h，16h分別取樣5ml，每次取樣后立即補充相同體積的空白釋放介質(zhì)。樣液經(jīng)處理后轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取環(huán)維黃楊星D對照品適量，加甲醇制成每ImL中約含0.25mg的溶液，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液10μL、供試品溶液20uL，經(jīng)衍生化處理后，依次注入液相色譜儀，按外標一點法以峰面積分別計算每片在不同時間的釋放量，結(jié)果表明藥物可從貼劑中完全釋放出，累積釋放百分率(Q%)與時間t(h)的關(guān)系見圖4。五、本發(fā)明貼劑藥動學(xué)實驗1.實驗方法健康新西蘭兔12只，體重22.5kg，隨機分為2組，每組6只，于實驗前24h用脫毛膏脫去腹毛，以清水洗凈，飼養(yǎng)待用。實驗當天取空白血后，貼劑組于腹部貼敷CVD透皮貼劑(面積為8cm2)，灌胃組給予口服灌胃液3ml，用烏拉坦作全身麻醉仰位固定，脫毛。在無菌條件下，沿胸骨中線切開皮膚，暴露胸骨，沿胸骨左縫剪斷1-2根肋骨，用小開胸器輕輕撐開胸腔切口，可見心包及搏動心臟。提起心包膜正中，用眼科剪將心包膜前部剪開，用止血鉗將左心耳輕輕提起，用持針器持小彎針在左冠狀動脈前降支根部(較深部)穿一線，結(jié)扎之，把心臟放回胸腔，迅速縫合胸壁。貼劑組于給藥后lh，2h，3h，4h，6h，8h，12h，16h，24h；灌胃組于給藥后0.5h，lh,1.5h，2h，3h，4h，6h，8h，IOh，12h由分離的股動脈取血1ml。取血后，同時耳緣靜脈注射Iml葡萄糖生理鹽水溶液。將采集的空白血樣和含藥血樣放入裝有冰袋的盒子靜置lh，離心15min(6000r/min)，分取血清0.5mL,加入3mol/L的NaOHlOOul，渦旋10s，再加氯仿lml，渦旋2min，離心(3000r/min，IOmin)，分取氯仿層，40°C氮氣吹于。殘渣加50μ1的氯仿溶解，衍生化試劑20μ1，渦旋混勻，避光放置30min，再各加IOOul的流動相，渦旋混勻，過0.45μm微孔濾膜，取濾液15μ1進樣測定。2.實驗結(jié)果6只兔貼敷透皮貼劑和6只兔灌胃給藥后測得的平均血藥濃度與時間的關(guān)系曲線圖見圖5，其藥代動力學(xué)參數(shù)見表3表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>兔體內(nèi)血藥濃度測定結(jié)果表明，環(huán)維黃楊星D控釋貼劑可維持較長的藥物體內(nèi)作用時間(MRT=37.12h)，由血藥濃度絕對波動和相對波動數(shù)據(jù)可知，本貼劑可避免口服給藥帶來的血藥濃度峰谷波動，維持血藥濃度于平穩(wěn)水平，符合心血管疾病的用藥特點。六、本發(fā)明貼劑主要藥效學(xué)實驗1.對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響小鼠50只，體重22士5g，雌雄各半，隨機分為5組空白對照組(給予不含藥的透皮貼劑)、黃楊寧片劑組(0.77mg/kg/d，灌胃給藥)、本發(fā)明貼劑大劑量組(16mg/kg)、環(huán)維黃楊星D貼劑中劑量組(8mg/kg)、壞維黃楊星D貼劑小劑量組(4mg/kg)。貼劑貼于心前區(qū)。各組連續(xù)給藥7天，貼劑組每一天更換一次貼劑。于第7日末次給藥后0.5h，將動物放于125ml廣口磨口瓶內(nèi)，瓶內(nèi)置25g鈉石灰，并以濾紙覆蓋，每瓶放入一只小鼠，立即以凡士林封閉并計時，記錄自小鼠投入后至死亡的時間。結(jié)果見表4。由表4結(jié)果可知，黃楊寧片劑組和本發(fā)明貼劑大、中劑量組對小鼠常壓耐缺氧的存活時間均有明顯的延長作用(P<0.01或P<0.05)，貼劑小劑量組也有改善的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。表4對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響(χ士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白組比較，*P<0.05，**P<0.012.對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響雄性大鼠50只，體重250士30g，隨機分為5組模型細(給予不含藥的透皮貼劑)、黃楊寧片劑組(0.55mg/kg/d，灌胃給藥)、本發(fā)明貼劑大劑量組(16mg/kg)、本發(fā)明貼劑中劑量組(8mg/kg)、本發(fā)明貼劑小劑量組(4mg/kg)，貼于心前區(qū)。各組連續(xù)給藥7天，貼劑組每一天更換一次貼劑。于第7日末次給藥后0.5h，在烏拉坦0.65g/kg腹腔淺麻醉下背位固定，先測標準肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖(ImV=IOmm,紙速50mm/秒)，iv烏頭堿28μg/kg，記錄心律失常出現(xiàn)時間和恢復(fù)時間(以維持IOmin以上為完全恢復(fù))。實驗結(jié)果見表5。由表5結(jié)果可見，黃楊寧片組和貼劑大劑量組均能明顯延長烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常發(fā)生的時間，中、小劑量組也有延長趨勢。各給藥組均能明顯縮短烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的恢復(fù)時間。表5對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響(χ士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型組比較*Ρ<0.05，**Ρ<0.013.本發(fā)明貼劑對結(jié)扎冠狀動脈引起大鼠心肌缺血的影響心電圖ST段變化是心肌缺血最早期出現(xiàn)、最敏感和確切的指標之一。實驗方法雄性大鼠50只，體重250士30g，隨機分為5組(分組給藥方法同上)。于第7日末次給藥后0.5h，在烏拉坦0.65g/kg腹腔淺麻醉下背位固定，先測標準肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖(ImV=IOmm,紙速50mm/秒)，胸部被毛，消毒，沿左鎖骨中線縱形切開皮膚約2cm，在第四肋間以止血鉗撐開肋骨，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟。在動脈圓椎與左心耳心間冠狀靜脈處結(jié)扎左冠狀動脈后，把心臟放回胸腔，迅速縫合胸壁。分別于術(shù)后1、2、4、8、12和24h測心電圖變化，觀察ST段J點的抬高改變情況。結(jié)果見表6。由表6實驗結(jié)果可見，大鼠冠脈結(jié)扎后，心肌缺血可持續(xù)24h以上。黃楊寧片組和貼劑大劑量、中劑量組可抑制造模后Ih心電圖ST段J點抬高，與模型組相比，P<0.01或P<0.05。小劑量組也有明顯改善，但無統(tǒng)計學(xué)意義。黃楊寧片組作用可持續(xù)8h，貼劑大、中劑量組與之相比，作用可持續(xù)24h以上，說明本發(fā)明貼劑能減輕心肌缺血程度，而這種保護作用具有劑量依賴性，隨CVD劑量加大而作用增強，且具有控釋長效的特點。表6對結(jié)扎大鼠冠狀動脈引起心肌缺血的影響(χ士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與手術(shù)前比較*P<0.05，**P<0.014.本發(fā)明貼劑對結(jié)扎冠脈致心肌缺血大鼠血漿ET、AngIKPGI2,TXA2的影響腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是一個重要的水電解質(zhì)平衡調(diào)節(jié)系統(tǒng)。主要由腎素，血管緊張素原(Ang)，血管緊張素I(AngI)，血管緊張素II(AngII)和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)等組成。心肌組織內(nèi)AngII可直接引起冠脈收縮，可通過內(nèi)皮系統(tǒng)產(chǎn)生PGE2*PGI2調(diào)節(jié)冠脈張力，還可增加交感神經(jīng)末梢釋放幾茶酚胺，影響冠脈張力。內(nèi)皮素(ET)為血管內(nèi)皮細胞分泌的縮血管物質(zhì)和刺激細胞增生物質(zhì)，血管壁受損時釋放增加，心肌缺血再灌動物和急性心梗及不穩(wěn)定性心絞痛病人血中ET水平明顯升尚οFT可促進心肌及血管平滑肌合成釋放AngII，而AngII又可作用血管或心內(nèi)皮細胞，增加ET釋放。血漿Angll升高時，可阻礙血流流暢，減低心排血量和局部組織灌注，并調(diào)控胞漿Ca2+濃度與蛋白激酶C，促進原癌基因c-fos，c-myc表達，使細胞生長增殖，引起心肌肥厚和血管重構(gòu)，進而加重心血管系統(tǒng)的損傷。TXA2與PGI2是生物活性完全相反的血管活性物質(zhì)，TXA2是很強的血小板誘聚劑和血管收縮劑，使血小板致密管系統(tǒng)中Ca2+游離，引起致密體收縮，并釋放ADP和5-HT使血管收縮，所以TXA2是血管的強烈收縮因子；而PGI2則是血小板聚集抑制劑和血管擴張劑，PGI2是血管壁中花生四烯酸(AA)代謝產(chǎn)物，是一種有效的血小板內(nèi)源性抑制劑，阻止血栓形成，是一種強烈的血管擴張因子。TXA2與PGI2的性質(zhì)極不穩(wěn)定，不易檢測，而其代謝產(chǎn)物TXB2,6-keto-PGIla則較穩(wěn)定，因此測定TXB2J-Iieto-PGI1a的濃度，可反映TXA2與PGI2的含量。實驗方法SD大鼠70只，雌雄各半，隨機分為7組假手術(shù)組、模型組、0.55mg/kg、l.IOmg/kg、2.20mg/kgCVD灌胃給藥組，4mg/kg、8mg/kg、16mg/kgCVD貼劑組。假手術(shù)組、模型組、貼劑各劑量組灌胃給予蒸餾水20ml/kg，CVD口服各劑量組灌胃給予相應(yīng)藥物，CVD貼劑各劑量組，動物腹部經(jīng)脫毛后貼敷相應(yīng)藥物。各組連續(xù)給藥7天，貼劑組每一天更換一次貼劑。于第7日末次給藥后0.5h，用20%烏拉坦腹腔麻醉大鼠(0.5mL/100g)，背位固定，用大半個橡皮球正好套住大白鼠的頭頸部，連接動物呼吸機，進行呼吸牽引。胸部去毛，消毒，在左鎖骨中線縱行切開皮膚約2cm，在第四和第五肋間打開胸腔，剪開心包，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈后(假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎)，送回胸腔，并擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，待呼吸穩(wěn)定后停止人工呼吸。各實驗組均于術(shù)后4h眼眶靜脈取血，抗凝分離血漿。用放射性免疫法測血漿內(nèi)皮素(ET)、血管緊張素AngII(AngII)及〃前列環(huán)素(PGI2)和血栓素A2(TXA2)的代謝產(chǎn)物6-酮前列腺素Fla(6-keto-PGIla)和TXB2水平。實驗結(jié)果見表7。由表7實驗結(jié)果可知，CVD貼劑大、中劑量組和CVD灌胃給藥大、中劑量組均可顯著降低急性心肌缺血大鼠血漿ET、AngII、TXA2水平，增加血漿PGI2水平及PGI2/TXA2比值，改善大鼠心肌缺血損傷時伴有血管內(nèi)皮細胞的平衡失調(diào)。小劑量組也有改善的作用，但作用不明顯。表7對結(jié)扎冠脈致心肌缺血大鼠血漿ET、AngII、PGI2、TXA2影響(χ士s，n=10)~組別假手模型組灌胃給藥組-貼劑組<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與假手術(shù)組比較#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較*P<0.05，**P<0.015.本發(fā)明貼劑對結(jié)扎冠脈致心肌缺血大鼠心肌組織S0D、CK活性和MDA含量的影響乳酸脫氫酶LDH和肌酸激酶CK是存在于心肌細胞中的酶，只有在心肌細胞受到損傷或壞死時才可能大量釋放到血液中，對它們的活性進行監(jiān)測可以作為反映心肌壞死程度的指標。測試MDA含量可以反映脂質(zhì)過氧化程度，間接反映出細胞損傷的程度。實驗方法SD大鼠70只，雌雄各半，隨機分為7組假手術(shù)組、模型組、0.55mg/kg、l.IOmg/kg、2.20mg/kgCVD口服給藥組，4mg/kg、8mg/kg、16mg/kgCVD貼劑組。假手術(shù)組、模型組、貼劑各劑量組灌胃給予蒸餾水20ml/kg，CVD口服各劑量組灌胃給予相應(yīng)藥物，CVD貼劑各劑量組，動物腹部經(jīng)脫毛后貼敷相應(yīng)藥物。各組連續(xù)給藥7天，貼劑組每一天更換一次貼劑。于第7日末次給藥后0.5h，用20%烏拉坦腹腔麻醉大鼠(0.5mL/100g)，背位固定，用大半個橡皮球正好套住大白鼠的頭頸部，連接動物呼吸機，進行呼吸牽引。胸部去毛，消毒，在左鎖骨中線縱行切開皮膚約2cm，在第四和第五肋間打開胸腔，剪開心包，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈后(假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎)，送回胸腔，并擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，待呼吸穩(wěn)定后停止人工呼吸。各實驗組均于術(shù)后4h摘取心臟，用0.9%生理鹽水制備心肌勻漿，測定心肌勻漿中的磷酸肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。SOD活性用鄰苯三酚自氧化法測定，其他物質(zhì)同血清酶學(xué)指標的測定。實驗結(jié)果見表8。由表8實驗結(jié)果可知CVD貼劑大、中劑量組和CVD灌胃給藥大、中劑量組均可顯著抑制結(jié)扎冠脈致心肌缺血模型大鼠心肌中SOD、CK活性降低，MDA含量升高，小劑量組也有緩解的趨勢，但效果不明顯。結(jié)果提示CVD貼劑與口服給藥在合理劑量條件下均具有保護缺血心肌作用。表8對結(jié)扎冠脈致心肌缺血大鼠心肌組織SOD、CK活性和MDA含量影響(χ士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與模型組比較*P<0.05，**P<0.01綜上所述，本發(fā)明貼劑在合理用藥劑量條件下，可抑制造模動物心電圖ST段J點抬高，可顯著抑制心肌組織中脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，保持機體SOD水平，顯著降低急性心肌缺血大鼠血漿ET、AngII、TXA2水平，增加血漿PGI2水平及PGI2/TXA2比值，改善大鼠心肌缺血損傷時伴有血管內(nèi)皮細胞的平衡失調(diào)。對小鼠常壓耐缺氧的存活時間有明顯的延長作用，能明顯延長烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常發(fā)生時間，縮短烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失?；謴?fù)時間，具有明顯的模型動物缺血心肌保護作用。七、本發(fā)明透皮貼劑的皮膚刺激性和過敏性試驗1.皮膚刺激性試驗取家兔6只，于給藥前24h將動物背部脫毛。破損皮膚用手術(shù)刀將去毛消毒皮膚劃破，以滲血為度，控制各動物皮膚的破損程度基本保持一致。采用自身同體對比法，左側(cè)為破損皮膚組，右側(cè)為完整皮組。將本發(fā)明貼劑貼于脫毛區(qū)，以不致敏膠布固定。給藥24h后，揭去貼劑，于l、24、48、72h至第7天觀察給藥部位有無紅斑、水腫等情況。參照《中藥新藥與臨床前研究指導(dǎo)原則》與《中藥藥理毒理研究的技術(shù)要求》，對每只動物試驗結(jié)果按新藥臨床前研究指導(dǎo)原則進行刺激反應(yīng)評分及刺激強度評價。試驗結(jié)果本品經(jīng)新西蘭兔皮膚刺激性試驗，完整皮膚組及破損皮膚組均未見紅斑、水腫等刺激性反應(yīng)，表明本貼劑無刺激性。2.皮膚過敏性試驗取250300g健康白色豚鼠30只，每組10只，雌雄各半，在給受試藥物前24h將豚鼠背部左側(cè)去毛，去毛面積約為3cmX3cm。陽性致敏物可用2，4_二硝基氯代苯(DNCB)配置成1%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度。第一組為樣品組(給環(huán)維黃楊星D透皮貼劑)，第二組為陰性對照組(給空白貼劑)，第三組為陽性對照組(給陽性致敏物)，具體步驟如下。致敏接觸樣品組和陰性對照組分別取環(huán)維黃楊星D透皮貼劑和空白貼劑貼于豚鼠背部左側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照組用DNCB涂于左側(cè)脫毛區(qū)，持續(xù)6h后，用溫水洗去殘留物，第7天和第14天，以同樣方法各重復(fù)一次，共計3次。激發(fā)接觸于末次給受試物致敏后第13天，將動物右側(cè)脫毛，方法及面積同左側(cè)，次日，以左側(cè)給藥相同方法，于右側(cè)脫毛區(qū)分別給予環(huán)維黃楊星D透皮貼劑、空白貼劑、0.1%DNCB,6h后用溫水清洗殘留物，即刻觀察，然后于第24，48，72h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況。參照《中藥新藥與臨床前研究指導(dǎo)原則》與《中藥藥理毒理研究的技術(shù)要求》，對每只動物試驗結(jié)果進行過敏性反應(yīng)評分及過敏性程度評價。試驗結(jié)果樣品組、陰性對照組動物在激發(fā)給藥后的觀察期內(nèi)，皮膚反應(yīng)正常，無紅斑、水腫，致敏率為0%，按標準判定屬于無致敏性物質(zhì)；而陽性對照組動物在各規(guī)定時間點，均表現(xiàn)有明顯紅斑、水腫等過敏反應(yīng)，致敏率為100%。八、貼劑的藥物與輔料的配伍變化的熱分析熱分析技術(shù)已廣泛用于藥物與輔料間的相容性研究，熱分析是在溫度程序控制下(指等溫升溫，等速降溫或恒溫)測量物質(zhì)的物理性質(zhì)隨溫度變化的一類測試方法，可用于測試藥物原輔料的某些物理化學(xué)性質(zhì)，如相變溫度，配伍變化，穩(wěn)定性等。通過觀察特征峰的峰形、峰位，有無新峰出現(xiàn)及熔融熱焓ΔΗ的變化，可以了解藥物輔料間是否存在配伍禁忌，為處方輔料選擇提供依據(jù)。本實驗采用差示掃描量熱法(DSC)對貼劑的藥物和輔料之間的物理化學(xué)性質(zhì)進行了考察。1.實驗條件和方法以Al2O35mg為參比樣品，N2氣流速為50ml/min，升溫范圍25300°C，控制升溫速度5°C/min。實驗樣品分別為(I)CVB-D5mg，(2)交聯(lián)劑5mg，(3)EudragitElOO5mg，(4)CVB-DEudragitElOO=71，(5)CVB-DEudragitElOO=I7，(6)CVB_D貼劑。貼劑除去保護層與背襯層，其余樣品以瑪瑙研缽研成細粉后置于鋁盤中，按實驗條件程序升溫。于DSC-60差示掃描量熱分析儀(日本Kyoto公司)上進行DSC測定。2.實驗結(jié)果各樣品的測試結(jié)果分別見圖611。由圖6可見，原料藥環(huán)維黃楊星D的DSC曲線吸熱峰峰形尖銳；圖7為交聯(lián)劑的DSC曲線，由圖可以看出，交聯(lián)劑在187°C時有明顯的吸熱峰；圖8可見ElOO壓敏膠DSC吸熱峰平緩，無相變。圖9與10分別為原藥與壓敏膠比例為71和17時樣品的DSC曲線，由圖知前者原藥峰尖銳的DSC相變峰仍然存在。原藥與壓敏膠比例為17時，DSC原藥峰變?yōu)榘鴮挼拟g峰，表明原藥和丙烯酸樹脂壓敏膠之間無化學(xué)變化。圖11為本發(fā)明貼劑的DSC曲線，由圖可知，原藥峰消失，說明藥物在貼劑中是以分子態(tài)或無定形態(tài)存在。環(huán)維黃楊星D與所選輔料之間無配伍禁忌。當制成本發(fā)明貼劑時，藥物是以非晶態(tài)存在于骨架材料中，可見本發(fā)明貼劑的熱力學(xué)性能高。九、本發(fā)明貼劑長期放置的穩(wěn)定性考察1.影響因素試驗取本發(fā)明貼劑，除去外包裝，置于表面皿中，分別進行以下穩(wěn)定性影響因素試驗。高溫試驗將本發(fā)明貼劑于60°C溫度下放置10天，于第0天、第5天和第10天取樣，按穩(wěn)定性考察項目要求進行檢測，結(jié)果表明貼劑在高溫60°C條件下放置10天，各項考察指標未見明顯變化，本品于各時間點的累計釋藥百分率亦在標準范圍內(nèi)，表明本發(fā)明貼劑經(jīng)高溫試驗后穩(wěn)定性良好。高濕試驗將本發(fā)明貼劑開口置恒濕密閉容器中，在25°C分別于相對濕度90%士5%(KN03飽和溶液)條件下放置10天，于第0天、第5天和第10天取樣，按穩(wěn)定性考察項目要求進行檢測，結(jié)果表明貼劑在高濕(90%)條件下放置10天，增重百分率不超過5%，其余各項考察指標未見明顯變化，說明本發(fā)明貼劑在高濕環(huán)境下較穩(wěn)定，無引濕性。光照試驗將本發(fā)明貼劑放于45001x照度的光源裝置內(nèi)，放置10天，于第0天、第5天和第10天分別取樣，按穩(wěn)定性項目進行考察，結(jié)果表明貼劑在光照條件下放置10天，各項考察指標未見明顯變化，說明本發(fā)明貼劑在光照條件下較穩(wěn)定。2.耐熱試驗與耐寒試驗取本發(fā)明貼劑5片，除去保護層，置于120°C恒溫箱中加熱0.5h，取出放至室溫，貼劑手觸有粘性，粘著力符合規(guī)定要求。取本發(fā)明貼劑5片，除去保護層，置于0°C冰箱中72h，取出并作粘著力測試，能夠粘住7.5g鋼球，其粘著力符合規(guī)定要求。3.加速試驗取本發(fā)明貼劑，密封包裝，于溫度40°C、相對濕度75%(NaCl飽和溶液)的條件下放置6個月，分別于第0、1、2、3、6個月末取樣，進行以下穩(wěn)定性考察試驗，結(jié)果表明貼劑各項考察指標均無明顯變化，于各時間點的累計釋藥百分率亦在標準范圍內(nèi)，表明貼劑質(zhì)量較為穩(wěn)定。4.室溫留樣長期考察取本發(fā)明貼劑，密封包裝，置于室溫條件下(25士2°C，60%士10%)放置，分別于第0、3、6、9、12、18、24、36個月取樣檢測各項指標，并與0月樣品的數(shù)據(jù)比較。結(jié)果表明貼劑各項考察指標未見明顯變化，于各時間點的累計釋藥百分率亦在標準范圍內(nèi)，通過透射光在50倍的顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)均無結(jié)晶析出。結(jié)果表明本發(fā)明貼劑質(zhì)量穩(wěn)定，長期放置無析晶的不穩(wěn)定現(xiàn)象發(fā)生。圖1是本發(fā)明貼劑的結(jié)構(gòu)示意圖，其中1是保護層，2是藥物釋放層，3是藥物貯庫層，4是背襯層。圖2是本發(fā)明的制備工藝流程。圖3是本發(fā)明和參比貼劑的體外累積透皮藥量-時間曲線圖；其中，·,表示本發(fā)明貼劑，-▲-表示參比貼劑。圖4是本發(fā)明貼劑的體外釋藥曲線。圖5是給藥后平均血藥濃度與時間的關(guān)系曲線，其中_■-表示透皮給藥，_*_表示灌胃給藥。圖6是環(huán)維黃楊星D的DSC曲線。圖7是交聯(lián)劑的DSC曲線。圖8是EudragitElOO壓敏膠的DSC曲線。圖9是原料藥與壓敏膠比例為71時樣品的DSC曲線。圖10是原料藥與壓敏膠比例為17時樣品的DSC曲線。圖11是本發(fā)明貼劑的DSC曲線。具體實施例方式實施例11、處方(1)藥物釋放層和藥物貯庫層<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(2)保護層硅化防粘紙；(3)背襯層鋁箔。2、制備(1)稱取165克EudragitElOO和4克琥珀酸，加入220ml無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，加入70克癸二酸二丁酯、10克氮酮、5克丙二醇混合均勻，得壓敏膠液；稱取20克環(huán)維黃楊星D，以200ml無水乙醇溶解后與上述壓敏膠液混勻，并超聲30min使藥物完全溶解。采用流涎涂布工藝涂布在硅化防粘紙上，置于80°C下干燥30min，制成藥物釋放層，環(huán)維黃楊星D含量為0.6mg/cm2。(2)稱取170克EudragitElOO和5克琥珀酸，加入227ml無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，加入75克癸二酸二丁酯、5克氮酮、3克丙二醇混合均勻，得壓敏膠液；稱取30克環(huán)維黃楊星D，以300ml無水乙醇溶解后與上述壓敏膠液混勻，并超聲30min使藥物完全溶解。采用流涎涂布工藝涂布在鋁箔上，置于80°C下干燥30min，制成藥物貯庫層，環(huán)維黃楊星D含量為1.2mg/cm2。(3)將藥物釋放層和藥物貯庫層復(fù)合在一起，沖切成IOcm2的矩形貼劑，密封包裝。實施例21、處方(1)藥物釋放層和藥物貯庫層<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(2)保護層硅化聚酯膜；(3)背襯層鋁箔及聚乙烯復(fù)合膜。2、制備(1)稱取240克EudragitLlOO和4克琥珀酸，加入320ml無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，加入80克枸櫞酸三乙酯、8克薄荷油、4克油酸和8克丙二醇混合均勻，得壓敏膠液；稱取20克環(huán)維黃楊星D，以200ml無水乙醇溶解后與上述壓敏膠液混勻，并超聲30min使藥物完全溶解。采用流涎涂布工藝涂布在硅化聚酯膜上，置于80°C下干燥30min，制成藥物釋放層，環(huán)維黃楊星D含量為0.7mg/cm2。(2)稱取188克EudragitLlOO和4克琥珀酸，加入251ml無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，加入75克癸枸櫞酸三乙酯、4克薄荷油、4克油酸和4克丙二醇混合均勻，得壓敏膠液；稱取30克環(huán)維黃楊星D，以300ml無水乙醇溶解后與上述壓敏膠液混勻，并超聲30min使藥物完全溶解。采用流涎涂布工藝涂布在鋁箔及聚乙烯復(fù)合膜上，置于80°C下干燥30min，制成藥物貯庫層，環(huán)維黃楊星D含量為1.3mg/cm2。(3)將藥物釋放層和藥物貯庫層復(fù)合在一起，沖切成IOcm2的矩形貼劑，密封包裝。實施例31、處方(1)藥物釋放層和藥物貯庫層<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>(2)保護層聚乙烯膜；(3)背襯層聚酯復(fù)合膜。2、制備(1)稱取175克EudragitRS100和7克琥珀酸，加入233ml無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，加入75克酞酸二丁酯、17克肉豆蔻酸異丙酯和7克丙二醇混合均勻，得壓敏膠液；稱取20克環(huán)維黃楊星D，以200ml無水乙醇溶解后與上述壓敏膠液混勻，并超聲30min使藥物完全溶解。采用流涎涂布工藝涂布在聚乙烯膜上，置于80°C下干燥30min，制成藥物釋放層，環(huán)維黃楊星D含量為0.5mg/cm2。(2)稱取120克EudragitRS100和6克琥珀酸，加入160ml無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，加入60克酞酸二丁酯、6克肉豆蔻酸異丙酯和4克丙二醇混合均勻，得壓敏膠液；稱取30克環(huán)維黃楊星D，以300ml無水乙醇溶解后與上述壓敏膠液混勻，并超聲30min使藥物完全溶解。采用流涎涂布工藝涂布在聚酯復(fù)合膜上，置于80°C下干燥30min，制成藥物貯庫層，環(huán)維黃楊星D含量為1.lmg/cm2。(3)將藥物釋放層和藥物貯庫層復(fù)合在一起，沖切成IOcm2的矩形貼劑，密封包裝。權(quán)利要求一種防治心血管系統(tǒng)疾病的控釋透皮貼劑，該貼劑由保護層、藥物釋放層、藥物貯庫層和背襯層依次層疊構(gòu)成；其中，所述的保護層為硅化防粘紙、聚乙烯膜或硅化聚酯膜；所述的背襯層為鋁箔、鋁箔及聚乙烯復(fù)合膜或聚酯復(fù)合膜；所述的藥物釋放層由3％～8％的環(huán)維黃楊星D、60％～70％的壓敏膠基質(zhì)、5％～10％的復(fù)合透皮促滲劑、20％～30％的增塑劑和1％～3％的交聯(lián)劑制成；所述的藥物貯庫層由8％～15％的環(huán)維黃楊星D、50％～60％的壓敏膠基質(zhì)、1％～5％的復(fù)合透皮促滲劑、20％～30％的增塑劑和1％～3％的交聯(lián)劑制成；所述的壓敏膠基質(zhì)為聚丙烯酸樹脂E100、RL100、RS100和L100中的一種或兩種種以上；所述的復(fù)合透皮促滲劑為薄荷油、氮酮、丙二醇、油酸、桉葉油、吐溫類和肉豆蔻酸異丙酯中兩種或兩種以上的混合物；所述增塑劑為枸櫞酸三乙酯、癸二酸二丁酯、癸二酸二乙酯或酞酸二丁酯；所述交聯(lián)劑為琥珀酸、己二酸或壬二酸。2.權(quán)利要求1所述貼劑的制備方法，該方法由以下步驟組成(1)取壓敏膠基質(zhì)和交聯(lián)劑，混合，加無水乙醇使其自然溶脹成透明膠狀溶液，然后加入增塑劑和復(fù)合透皮促滲劑并混勻；取環(huán)維黃楊星D，按每克環(huán)維黃楊星D加IOml無水乙醇的比例用無水乙醇溶解后與所制得的膠狀溶液混合，攪拌均勻，并超聲30min使藥物完全溶解，制成含3-8%的環(huán)維黃楊星D的釋放層膠液；采用制備釋放層膠液相同的方法制得含8-15%的環(huán)維黃楊星D的貯庫層膠液；(2)將含藥釋放層膠液涂布在保護層上形成藥物釋放層，置于80°C下干燥30min，去除揮發(fā)性溶劑，冷卻備用；(3)將含藥貯庫層膠液涂布在背襯層上形成藥物貯庫層，置于80°C下干燥30min，去除揮發(fā)性溶劑，冷卻備用；(4)將藥物釋放層和藥物貯庫層復(fù)合，沖切。全文摘要一種防治心血管系統(tǒng)疾病的控釋透皮貼劑，該貼劑由保護層、藥物釋放層、藥物貯庫層和背襯層依次層疊構(gòu)成，其中，所述的保護層為硅化防粘紙、聚乙烯膜或硅化聚酯膜；所述的背襯層為鋁箔、鋁箔及聚乙烯復(fù)合膜或聚酯復(fù)合膜；所述的藥物釋放層由3％～8％的環(huán)維黃楊星D、60％～70％的壓敏膠基質(zhì)、5％～10％的復(fù)合透皮促滲劑、20％～30％的增塑劑和1％～3％的交聯(lián)劑制成；所述的藥物貯庫層由8％～15％的環(huán)維黃楊星D、50％～60％的壓敏膠基質(zhì)、1％～5％的復(fù)合透皮促滲劑、20％～30％的增塑劑和1％～3％的交聯(lián)劑制成。本發(fā)明貼劑由有機溶劑分散法制備得到，其制備工藝簡單，制得的貼劑療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定，安全性好，使用方便，適合于心血管疾病的長期預(yù)防和治療。文檔編號A61K47/44GK101810596SQ200910042328公開日2010年8月25日申請日期2009年9月1日優(yōu)先權(quán)日2009年9月1日發(fā)明者于洋,劉新國,周玖瑤,周莉玲,李秀梅,魏敏申請人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)