專利名稱：放射性氟化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及診斷和放射診斷試劑，包括用正電子發(fā)射核素標(biāo)記的生物活性載體。 本發(fā)明還涉及用于使載體[18F]-氟化的方法和試劑，其中載體定義為對(duì)特定生物靶具有親 和力的分子，優(yōu)選為肽。得到的18F-標(biāo)記的綴合物可用作放射性藥物，尤其可用于正電子發(fā) 射斷層掃描(PET)。
背景技術(shù)：
用于診斷成像的放射性標(biāo)記的生物活性肽的應(yīng)用在核醫(yī)學(xué)中越來越重要。與特定 細(xì)胞類型選擇性相互作用的生物活性分子可用于將放射性遞送到靶組織。例如，放射性標(biāo) 記的肽具有將放射性核素遞送到腫瘤、梗塞和感染組織用于診斷成像和放療的顯著潛力。 18F的半衰期為約110分鐘，它是許多受體成像研究選擇的正電子發(fā)射核素。因?yàn)樗鼈冊?PET中具有定量檢測和表征各種疾病的實(shí)用性，因此18F-標(biāo)記的生物活性肽具有很大臨床 潛力。18F-標(biāo)記的肽存在的一個(gè)難點(diǎn)是現(xiàn)有18F-標(biāo)記試劑制備費(fèi)時(shí)。只能通過使用合適 的輔基實(shí)現(xiàn)肽和蛋白的18F的有效標(biāo)記。文獻(xiàn)中提出過幾種此類輔基，包括N-琥珀酰亞胺 基-4-[18F]氟苯甲酸酯、間-馬來酰亞胺基-N-(對(duì)-[18F]氟芐基)_苯甲酰胺、N-(對(duì)-[18F] 氟苯基)馬來酰亞胺和4-[18F]氟苯甲酰甲基溴。目前使用的用18F標(biāo)記肽和蛋白的幾乎 所有方法使用氟標(biāo)記合成子的活性酯。因?yàn)殡暮偷鞍卓赡芎軌蚺c活性酯反應(yīng)的許多官能 團(tuán)，所以這些當(dāng)前方法為非位點(diǎn)特異性。例如，含3個(gè)賴氨酸殘基的肽具有3個(gè)胺官能團(tuán)， 這3個(gè)胺官能團(tuán)對(duì)標(biāo)記的合成子的活性均相等。因此，仍然存在對(duì)18F-標(biāo)記輔基和方法的 需要，它們在溫和條件下允許快速、化學(xué)選擇性將18f尤其引入肽，以高放射性化學(xué)收率和 純度得到18F-標(biāo)記產(chǎn)物。另外，在臨床環(huán)境下，需要按照自動(dòng)化，來促進(jìn)放射性藥物的制備 的此類方法。盡管我們前期描述過在PET標(biāo)記策略中使用氨基氧基化學(xué)(W003/006491)，本 發(fā)明化合物不易與醛和酮反應(yīng)，但對(duì)某些含鹵素的化合物有選擇性。與先前公開的氨基氧 基相比，N-烷基氨基氧基部分的較高化學(xué)穩(wěn)定性提供優(yōu)勢，因?yàn)楦狈磻?yīng)減少至最少，且中間 體更穩(wěn)定，這有助于中間體的成功處理和儲(chǔ)存。發(fā)明詳述本發(fā)明提供放射性氟化方法，該方法包括使式(I)化合物與式(II)化合物反應(yīng) 18F-(接頭)-R2 (II)或，使式(III)化合物與式(IV)化合物反應(yīng) 18F-(接頭)-R4 (IV)其中R1為活性含鹵素基團(tuán)例如鹵代乙?；?、鹵代烯丙基或苯甲酰甲基商，或?yàn)樗谢?團(tuán)適用于參與烷基化反應(yīng)的環(huán)氧化物環(huán)，或?yàn)辂溈藸柺荏w例如馬來酰亞胺基或丙烯酸或取 代的丙烯酸衍生物，或?yàn)橐蚁┗揭蚁?，?yōu)選硝基乙烯基苯乙烯，或?yàn)橐蚁┗酋０?，或?yàn)?乙烯基砜。R2為N-烷基-氨基氧基基團(tuán)，在溫和條件下例如緩沖水溶液和微酸性pH中，該基 團(tuán)與R1進(jìn)行位點(diǎn)特異性反應(yīng)，得到式(V)化合物。其中式(III)的R3 = R2，且式(IV)的R4 = R1。式(III)化合物與式(IV)化合
物連接，得到式(VI產(chǎn)物 其中在兩種情況下，Y為烷基，優(yōu)選Y = -CH3。最優(yōu)選式(V)化合物，式(II)化合物的18F-接頭組件優(yōu)選包含式(VII-XI)中所
示類型化合物

其中n = n為0-20的整數(shù)
Z 為 0、N 或 S。也可選擇式(II)化合物中的接頭基團(tuán)，以提供最佳體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)，例如得到的 式(V)綴合物的有利排泄特性。具有不同親脂性接頭基團(tuán)的使用可顯著改變肽的體內(nèi)藥代 動(dòng)力學(xué)，以適應(yīng)診斷需要。例如，當(dāng)需要通過腎排泄將機(jī)體中的式(V)綴合物清除時(shí)，使用 親水性接頭，該接頭含由式X-XI衍生的接頭組件。同樣，需要通過肝膽排泄清除時(shí)，可選擇 疏水性接頭，該接頭含由式VII-IX衍生的接頭組件。本發(fā)明提供更具化學(xué)選擇性的放射性標(biāo)記方法，其中在肽或載體前體的合成期 間，預(yù)選擇引入標(biāo)記物的確切位點(diǎn)。連接反應(yīng)在分子中預(yù)定位點(diǎn)發(fā)生，且僅得到單一標(biāo)記的 產(chǎn)物。因此，該方法具有化學(xué)選擇性，據(jù)認(rèn)為，它是標(biāo)記多種藥物樣分子、肽生物分子例如小 蛋白的通用方法。在再一方面，本發(fā)明提供放射性氟化方法，該方法包括使式(la)化合物與式 (Ha)化合物反應(yīng)
綴合物
18F-(接頭)-0-NH-CH3 (Ila) 或
使式(Ilia)化合物與式(IVa)化合物反應(yīng)
栽體
(IHa)
H-C-N-O— 3 H
F-(接頭)_R4(IVa)
其中R1和R4定義分別同以上式(I)和(IV)化合物，分別得到式(Va)或(Via)
栽體 |~0-N—(接頭)~F(Via)
ch3其中接頭基團(tuán)定義同以上化合物?？稍诤线m的溶劑例如在pH范圍3-11的緩沖水溶液中，在5-70°C非極端溫度下，但 最優(yōu)選在環(huán)境溫度下完成該反應(yīng)。在本發(fā)明的再一方面，R1源自馬來酰亞胺和乙烯基苯乙烯類化合物，且最優(yōu)選下 式lb和Ic中代表的化合物
10
(Ic)在式(I)和(III)和在本發(fā)明的其它方面，除特別說明外，載體可定義為對(duì)相關(guān)受 體具有親和力的生物制品，該受體與疾病過程有關(guān)。生物制品可定義為小分子藥物樣藥效 團(tuán)蛋白或抗體，但優(yōu)選分子量小于30kDa的蛋白，最優(yōu)選小于100氨基酸的肽。用本發(fā)明方 法標(biāo)記的優(yōu)選的肽載體的實(shí)例為生長抑素衍生物例如奧曲肽、蛙皮素、血管活性腸肽、趨化 肽類似物、a “促黑激素調(diào)節(jié)素、神經(jīng)降壓肽、Arg-Gly-Asp肽、人促胰島素連接肽、內(nèi)皮素、 血管緊張素和甲?；鵢正亮氨酰_亮氨酰_苯丙氨酰_正亮氨酰_酪氨酰_酪氨酸。優(yōu)選 的用于標(biāo)記的肽為Arg-Gly-Asp肽和類似物，例如在W0 01/77415和W0 03/006491中描述
的那些。優(yōu)選的肽載體含式(A)片段
其中x7為-NH2或含乙基乙二醇結(jié)構(gòu) 其中‘a(chǎn)’為1-10的整數(shù)，但最優(yōu)選‘a(chǎn)’為1，R1與前述式(I)相同。技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明方法也可用于其它生物分子例如蛋白、激素、寡核苷酸 和抗體片段，以及藥物樣小分子的放射性氟化，提供各種PET示蹤劑?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)的肽合成方法例如固相肽合成例如在Atherton，E. andSheppard, R.C. ；"Solid Phase Synthesis” ；IRL Press :0xford，1989 中描述的方法制備式(I)和 (III)化合物?？赏ㄟ^使肽的N或C-末端反應(yīng)，或與肽序列中含有的一些其它官能團(tuán)反應(yīng)， 將R1和R3基團(tuán)引入式(I)或(III)化合物中，該修飾不影響載體的結(jié)合特性。在優(yōu)選的
更優(yōu)選式(A)的肽
實(shí)例中，可用由 Carrasco 等(Biopolymers, Peptide Science, 2006, Vol 84 (4), p 414)描 述的氨基酸，將含N-烷基氨基氧基的基團(tuán)即Y-NH2-0-直接引入肽序列。優(yōu)選通過使肽胺官 能團(tuán)與活化酸反應(yīng)形成的穩(wěn)定的酰胺鍵引入官能團(tuán)R1和R3，并在肽合成期間或之后引入。 當(dāng)前體為酸時(shí)，則可原位使用活化劑例如六氟磷酸2-(lH-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四 甲基脲鐺(HBTU)或六氟磷酸N-[( 二甲基氨基)-lH-l，2，3-三唑并[4，5_b]吡啶-1-基亞 甲基]-N-甲基甲銨N-氧化物(HATU)，引入R1和R3?？捎上鄳?yīng)的式(XII)前體制備式(II)化合物 其中L為離去基團(tuán)，優(yōu)選對(duì)-甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲磺酸酯或鹵化物，Y和 接頭定義同前，其中R5為保護(hù)氮原子的合適保護(hù)基例如叔_ 丁氧基羰基，由此與回旋加速 器產(chǎn)生的[18F]_氟化物水溶液反應(yīng)，該[18F]_氟化物通過在合適的溶劑例如乙腈、N，N-二 甲基甲酰胺或二甲亞砜中，通常在升高的溫度例如60-150°C，適宜在60-120°C下，或通過 微波加熱，從堿(例如從四丁銨或K2C03/KryptOfix-222)中蒸發(fā)來適當(dāng)?shù)念A(yù)活化，然后用標(biāo) 準(zhǔn)方法例如酸解處理，將任何N-保護(hù)基團(tuán)除去?？捎上鄳?yīng)的式(XX)前體或其保護(hù)的衍生物制備式(IV)化合物L(fēng)-接頭-R4 (XX)其中L為離去基團(tuán)，優(yōu)選對(duì)-甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲磺酸酯或鹵化物，接 頭和R4定義同前。通過在合適的溶劑例如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜中，通常在 升高的溫度例如60-120°C下，從堿(例如從四丁銨或K2C03/KryptOfix-222)中蒸發(fā)來適當(dāng) 的預(yù)活化，L能夠與回旋加速器產(chǎn)生的[18F]_氟化物水溶液反應(yīng)。本發(fā)明還提供放射性藥物組合物，該組合物含有效量(例如有效用于體內(nèi)PET成 像的量)的通式(V)或(VI)化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的助劑、賦形劑或稀釋 劑。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案涉及通式(V)或(VI)化合物，它們用于醫(yī)療用途，尤其 是用于腫瘤成像(適合通過PET)；其中載體為Arg-Gly-Asp肽或其類似物，例如在TO 01/77415和W0 03/006491中描述的那些，優(yōu)選含以下片段的肽 其中X7為-NH2或 其中‘a(chǎn)’為1-10的整數(shù)，優(yōu)選a為1，其中R5在肽反應(yīng)后與賴氨酸殘基的￡-氨 基形成酰胺鍵，且由R1定義，但最優(yōu)選由Id和Ie結(jié)構(gòu)闡明
得到具有(If 和Ig)中所示結(jié)構(gòu)的式(I)化合物 可以足以產(chǎn)生需要信號(hào)的量，將本發(fā)明的放射性標(biāo)記綴合物給予患者，用于PET 成像，每70kg體重0.01-100mCi，優(yōu)選0. l-50mCi的典型放射性核素劑量通常足夠。因此，可按完全在本領(lǐng)域技能范圍內(nèi)的方法，用生理上可接受的載體或賦形劑，配 制用于給藥的本發(fā)明放射性標(biāo)記綴合物。例如，可使化合物、任選加入的藥學(xué)上可接受的賦 形劑懸浮或溶于含水介質(zhì)中，然后將得到的溶液或懸浮液滅菌。從本發(fā)明的再一方面看，提供本發(fā)明放射性標(biāo)記綴合物在制備放射性藥物中的用 途，此類藥物用于體內(nèi)成像，適宜為PET，優(yōu)選腫瘤成像方法；涉及將所述放射性藥物給予
13人或動(dòng)物體，并產(chǎn)生所述機(jī)體至少一部分的影像。從本發(fā)明的還再一方面看，提供產(chǎn)生人或動(dòng)物體的影像的方法，該方法涉及將放 射性藥物給予所述機(jī)體，例如給予至血管系統(tǒng)內(nèi)，和用PET在所述放射性藥物分布到所述 機(jī)體后生成所述機(jī)體至少一部分的影像，其中所述放射性藥物含本發(fā)明的放射性標(biāo)記綴合 物。從本發(fā)明的再一方面看，提供監(jiān)測用抗與癌癥有關(guān)的病癥，優(yōu)選血管發(fā)生病癥的 藥物，例如細(xì)胞毒藥物治療人或動(dòng)物體的效果的方法，所述方法包括給予所述機(jī)體本發(fā)明 的放射性標(biāo)記綴合物，和檢測所述綴合物被細(xì)胞受體，優(yōu)選內(nèi)皮細(xì)胞受體，尤其是a v旦3 受體的攝取，所述給予和檢測任選但優(yōu)選，例如在用所述藥物治療之前、期間和之后重復(fù)完 成。在本發(fā)明的還另一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于放射性氟化示蹤劑制備的試劑盒，該 試劑盒含有式(II)或(IV)的輔基和式(I)或(III)的化合物。按照本發(fā)明的再一方面，提供用于放射性氟化示蹤劑制備的試劑盒，該試劑盒含 有式(xx)的輔基和式(I)的化合物。按照本發(fā)明的另一方面，提供用于放射性氟化示蹤劑 制備的試劑盒，所述試劑盒含式0或0的輔基和式(III)的化合物。在使用試劑盒時(shí)，用上述方法，式()化合物將轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的式(II)化合物，且式 0或0化合物將分別轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的式(IV)化合物。優(yōu)選，可通過使反應(yīng)混合物通過固相 萃取(SPE)短柱，將式(II)和(IV)化合物與廢的反應(yīng)物分離。SPE短柱可含石墨墊、C18固 定相或離子交換樹脂。然后，式(II)和(IV)化合物將分別加入式(I)和(III)化合物中， 它們可適當(dāng)?shù)娜苡诰彌_水溶液(PH 3-11)。在非極端溫度下反應(yīng)1-70分鐘后，可將標(biāo)記的 肽例如通過SPE純化，并收集。
實(shí)施例
本發(fā)明通過實(shí)施例來舉例說明，其中使用以下縮寫
HPLC 高效液相色譜
匪R 核磁共振
hr(s)小時(shí)
min(s)分鐘
THF 四氫呋喃
DCM 二氯甲烷
DMF N，N-二甲基甲酰胺
TBAF 氟化四丁銨
MeOH 甲醇
DMS0 二甲亞砜
Boc 叔_ 丁氧基羰基
RT 室溫
i-Pr2-Net N，N-二異丙基乙胺
t-BDPSiCl 叔-丁基二苯基氯化甲硅烷
NaH 氫化鈉
EtOAcMBq
酸乙酯 兆貝克勒耳使用以下流動(dòng)相/梯度系統(tǒng)溶劑A :7jC (0.1%) TFA，溶劑B 乙腈(0. 1 % TFA)實(shí)施例1 ；甲苯-4-磺酸4-(N_甲基-N-Boc-氨基氧基)_ 丁酯的制備 化合物1(a) N-Boc-N-甲基羥胺攪拌下，在冰冷卻下，將N-甲基-羥胺(4，2g，0，05mol)溶于50%四氫呋喃(THF) 水溶液(20ml)。將碳酸鉀(3，6g，0，0275mol)加入該冰冷卻溶液中，然后加入溶于15ml THF 的二碳酸二叔丁酯(12g，0，055mol)。將混合物在0°C下攪拌2小時(shí)，再在室溫下攪拌2小 時(shí)。將THF減壓除去，將殘?jiān)苡贒CM。將溶液用水洗滌兩次，干燥(MgS04)，濃縮，得到粉紅 色低粘性油狀物6，47g(88% )。產(chǎn)物通過電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)鑒定(MlT理論值147，09 ； 實(shí)測值147，6)。產(chǎn)物使用時(shí)無需進(jìn)一步純化。(b) (4-溴-丁氧某)-叔丁某_ 二苯某_硅烷在氬氣氛下，向含i-Pr2-Net(10ml)的 4-溴-1- 丁 醇(2，75g，18mmol)的 DCM(10ml)溶液中加入t-BDPSiCl (5ml, 18mmol)。將溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，真空濃縮， 色譜純化(己烷/乙酸乙酯10 1)。得到4，39g(62% )低粘性無色油狀物。結(jié)構(gòu)用NMR確證。(c)0-[4_(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)_ 丁基]-N-甲基-N-Boc-羥胺將N-Boc-N-甲基羥胺(a) (0，74g,5mmol)溶于 10ml DMF,用 NaH(200mg，60 % 的 礦物油分散體，4，75mmol)處理，在氬氣氛下攪拌lh。將混合物冷卻至0°C，用4-溴-丁 氧基)_叔丁基-二苯基-硅烷(b) (l，56g，4mmol)的DMF(lOmL)溶液處理，在0°C下再攪 拌3小時(shí)。將溶劑減壓除去，將殘?jiān)苡贓tOAc (150mL)，傾入分液漏斗。將有機(jī)層用0，1M Na0H(5X50mL)、H20(50ml)、0，1M KHS04和鹽水(50ml)洗滌，用 MgS04 干燥。將溶劑除去后， 殘?jiān)?jīng)硅膠層析(己烷EtOAc 10 1)純化，得到0，588g(24%)。產(chǎn)物通過電噴霧質(zhì)譜 (ESI-MS)鑒定(MH+ 理論值 457，26 ；實(shí)測值 457，8)(d) 4- (N-甲基-N-Boc-羥胺)-丁 醇將18六？(1，61^，1，586讓01)加入溶于無水11冊20mL的0_[4_(叔丁基-二苯 基_硅烷氧基)_ 丁基]-N-甲基-N-Boc-羥胺(c) (588mg, 1，22mmol)。將反應(yīng)物在氬氣下攪 拌過夜。將NH4C1 (飽和)加入溶液(10mLX3)，將THF蒸發(fā)。將溶液用DCM萃取，將有機(jī)相 干燥(Na2S04)，蒸發(fā)。殘?jiān)?jīng)硅膠層析(己烷/EtOAc 1 1)純化，得到0，170g(63% )。產(chǎn) 物通過 HPLC (柱:Phenomenex Luna 3 ii C18 (2)，4，6 X 50mm，檢測214nm，梯度50%-100% B 洗脫 lOmin，其中 A = H20/0, 1% TFA，B =乙腈/0，1% TFA，流速2mL/min，Rt = 2，70min) 分析。進(jìn)一步確證通過NMR分析進(jìn)行。
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(e)甲苯-4-磺酸4-(N_甲基-N_Boc-羥胺)-丁酯在氬氣下，攪拌下，向冰浴冷卻的4-(N_甲基-N-Boc-羥胺)_丁-1-醇(d) (170mg, 0, 77mmol)和三乙胺(161 y L，1，155mmol)的無水DCMlOmL溶液中加入甲苯-4-磺酰氯 (190，8mg，1，OOlmmol)的無水DCM(5mL)溶液。15分鐘后，將冰浴撤去，將反應(yīng)混合物保持 在室溫下。2小時(shí)后，加入新試劑(三乙胺(32iiL，0，23mmol)、甲苯-4-磺酰氯(29，36mg， 0，154mmol)。24小時(shí)后，可在TLC上觀察到預(yù)期產(chǎn)物。30小時(shí)將新試劑加入反應(yīng)混合物 (三乙胺(53uL,0, 385mmol)、甲苯_4_磺酰氯(73，5mg，0，385mmol)，放置過夜。將有機(jī)相用 10% NaHC03(10mLX3)洗滌，用MgS04干燥。將有機(jī)相真空除去，經(jīng)硅膠閃層析(己烷乙酸 乙酯6 4)純化，得到lllmg(41，5%)產(chǎn)物。NMR顯示產(chǎn)物中存在甲苯-4-磺酰氯雜質(zhì)。需 要進(jìn)一步純化，以除去4-磺酰氯。在硅膠閃柱上，用正己烷Et0Ac(8 2)得到較好分離， 4-磺酰氯被除去。收率64mg(22% )。產(chǎn)物通過 HPLC (柱Phenomenex Luna 3 u C18 (2)， 4，6X50mm，檢測214nm，梯度20% -80% B 洗脫 lOmin，其中 A = H20/0, 1% TFA，B =乙腈 /0，TFA，流速2mL/min，Rt = 2，70min)分析。產(chǎn)物通過電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)鑒定(MH+ 理論值373，16 ；實(shí)測值373，9)。進(jìn)一步確證通過NMR分析進(jìn)行。實(shí)施例2 作為無放射件標(biāo)準(zhǔn)品(cold standard)的0_(4~氟-丁基)-(N~甲基-N-Boc-羥 胺)的制備化合物2將KF(4, 64mg，0, 080mmol)禾P kryptof ix (30, lmg，0，080mmol)溶于無水乙腈 (0，75mL)。在氬氣下，將混合物攪拌5min，然后加入溶于無水乙腈(0，250mL)的化合物 l(15mg，0，040mmol)。將混合物在60°C下加熱1小時(shí)。1小時(shí)后，TLC顯示反應(yīng)完全。將 溶劑蒸發(fā)，殘?jiān)?jīng)硅膠閃層析純化，用己烷/Et0Ac(l 1)，得到4，5mg(51% )。產(chǎn)物通過 HPLC(柱:Phenomenex Luna 3 ii C18 (2)，4，6X 50mm，檢測214nm，梯度20% -70% B 洗脫 lOmin，其中 A = H20/0, 1% TFA，B =乙腈/0，1% TFA，流速2mL/min，Rt = 2，70min)分析。 產(chǎn)物通過電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)鑒定(MH+理論值221，14 ；實(shí)測值221，7)。結(jié)構(gòu)用NMR確證。實(shí)施例3 放射合成化合物2和與2-溴苯乙酮綴合 在SynChrom R&D模塊上，由Raytest進(jìn)行放射合成。在Krytptofix 222(39，lmg/1 mL 乙腈)和碳酸鉀(65，7mg/l mL 水)的存在下， 通過在N2下加熱至90°保持9分鐘，將18F-氟化物(高達(dá)lGBq)共沸干燥。在此期間，加 入2XlmL乙腈，蒸發(fā)。冷卻至<40°后，加入甲苯-4-磺酸4-(N-甲基-N-Boc-氨基氧 基)_ 丁酯(化合物1) (3mg/lmL乙腈)溶液。將反應(yīng)容器加熱至70°C保持20分鐘，完成標(biāo) 記。將粗反應(yīng)混合物注射到HPLC，檢測波長214nm，等度流速，用60/40CH3CN/H20洗脫。色 譜圖顯示標(biāo)記化合物的收率良好，約86% RCP與無放射性標(biāo)準(zhǔn)品共洗脫。使粗反應(yīng)混合物 通過S印-Pak鋁柱，用2mLACN洗脫，將游離氟化物除去，測量游離氟化物的活性(游離氟化 物的貢獻(xiàn)度小于15% )。在HPLC上再分析“純化的”混合物，以確定游離氟化物是否除去。 在90°C下，將lmL(lOOMBq)純化的產(chǎn)物在lmL 1M HC1中水解20分鐘，將B0C-保護(hù)基除去， 得到100%未保護(hù)的F-18放射性標(biāo)記化合物。將lmL水解產(chǎn)物用10mL milli-Q水稀釋，將 pH調(diào)至pH 11-12，通過預(yù)調(diào)節(jié)的SEP-PAK C-18柱洗脫。測量到柱上活性為30，IMBq。將柱 用2mL DMF洗脫到反應(yīng)瓶中，得到具有23MBq的2mL洗脫液。加入含10 P L 二異丙基乙胺的 6mg溴-苯乙酮，在90°C下加熱10分鐘。反應(yīng)混合物通過HPLC分析，由在5，46分鐘洗脫 的新峰，顯示綴合物形成的證據(jù)，該新峰具有比對(duì)應(yīng)于“游離”前體的峰大的面積(57% )。 HPLC (柱Xterra (waters) 5 ii C18 4，6 X 250mm，檢測250 和 214nm，Nal 檢測器梯度等度； 40% A = H20,60% C =乙腈，流速lmL/min)。實(shí)施例4:
甲苯-4-磺酸2-「2_(N-甲基-N-B0C-氨基氧基)-乙氧基乙酯的制備 化合物1(a) N-Boc-N-甲基羥胺在冰冷卻下，攪拌下，將N-甲基-羥胺(4，2g，0，05mol)溶于50%四氫呋喃(THF) 水溶液(20ml)。將碳酸鉀(3,6g,0,0275mol)加入該冰冷卻溶液，然后加入溶于15ml THF 的二碳酸二叔丁酯(12g，0，055mol)。將混合物在0°C下攪拌2小時(shí)，再在室溫下攪拌2小 時(shí)。將THF減壓除去，將殘?jiān)苡贒CM。將溶液用水洗滌兩次，干燥(MgS04)，濃縮，得到 6,47g(88% )粉紅色低粘性油狀物。產(chǎn)物通過電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)和NMR鑒定(MH+理論 值147，09 ；實(shí)測值147，6)。產(chǎn)物使用時(shí)無需進(jìn)一步純化。(b)甲苯-4-磺酸2-(2-羥基-乙氧基)乙酯向一縮二乙二醇(22g，207，5讓ol)的CH2C12 (100ml)溶液中加入三乙胺(10，5g， 103，75mmol)。一次性加入9，89(51，8mmol)甲苯_4_磺酰氯。將溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。 在5% MeOH/DCM中進(jìn)行TLC。1/2小時(shí)后，TLC顯示產(chǎn)物形成。1小時(shí)又15分鐘后，將反應(yīng) 混合物用0，1M KHS03和5% NaHC03洗滌。將有機(jī)相用Na2S03干燥，減壓蒸發(fā)。將粗反應(yīng) 混合物用硅膠捕集，經(jīng)CombiFlash companioninstrument (330g柱)閃層析純化，用己烷/ EtOAc 50/50。結(jié)構(gòu)通過NMR確證。(c) 4-甲苯-磺酸2-「2-(叔丁某-二苯某-硅烷氧,某)_乙氧某]_乙酯在氬氣氛下，向含i-Pr2-Net(6mL，l，2當(dāng)量)的甲苯_4_磺酸2_(2_羥基-乙氧 基)乙酯(b) (7, 622g,29, 28mmol)的 CH2C12 (30ml)溶液中加入 t-BDPSiCl (9ml，1，2 當(dāng)量， 35, 136mmol)和催化量的DMAP。將溶液在室溫下攪拌2天。TLC提示反應(yīng)完全。將粗反應(yīng) 混合物用lOOmLDCM稀釋，用2*100mL水和100mL鹽水洗滌。將有機(jī)相用MgS04干燥，在真 空下蒸去，經(jīng)Companion Combiflash (120g柱)閃層析純化，用0%乙酸乙酯-50% (EtOAC/ 己烷)梯度洗脫30分鐘。外觀透明粘性油狀物。結(jié)構(gòu)通過NMR確證。(d)0-{2-「2_(叔-丁基-二苯基-硅烷氧基)_乙氧基1-乙基丨-N-甲 基-N-B0C-羥胺在氬氣下，在經(jīng)烘箱干燥的燒瓶(50mL)中加入NaH(60 %的礦物油分散 體)481mg(12，03mmol)。將分散體用戊烷洗滌3次，將礦物油除去。向純NaH中加入5mL THF (無水)。緩慢加入N-B0C-N-甲基羥胺(a) 1，53mg (10，43mmol)的5mL THF溶液。將反 應(yīng)混合物放置1/2小時(shí)至不再看到氣體產(chǎn)生。將溶液置于冰浴上，攪拌1/2小時(shí)，然后滴 加4g(8，02mmol)4-甲苯-磺酸2_[2_(叔-丁基-二苯基-硅烷氧基)_乙氧基]-乙酯 (c)。將溶液在冰浴上放置1/2小時(shí)，然后在室溫下攪拌過夜。將溶劑減壓除去，將殘?jiān)苡?Et0Ac(200mL)，傾入分液漏斗。將有機(jī)層用 0，1M Na0H(5X50mL)、H20(50ml)、0，lm KHS04 和鹽水(50ml)洗滌，用MgS04干燥。除去溶劑后。用Companion Combiflash閃層析將殘 渣純化，用甲醇/DCM梯度(甲醇0-20%洗脫19分鐘)。結(jié)構(gòu)通過NMR確證。
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(e)2-「2-(N-甲基-N-B0C-氨基氧基)-乙氧基-乙醇將TBAF(6，78mL，6，78mmol)加入溶于無水 THF(15mL)的 0-{2-[2-(叔-丁基-二 苯基-硅烷氧基)-乙氧基]-乙基} -N-甲基-N-B0C-羥胺(d) (3g，6，33mmol)。將反應(yīng)物 攪拌過夜。將THF蒸去，將殘?jiān)苡贒CM，用NH4C1 (飽和)(40mL)、水和鹽水洗滌。將有機(jī) 相干燥(MgS04)，并蒸去。將殘漁用 Companion Combiflash 40g 柱(梯度 MeOH 0-5% /DCM 洗脫20分鐘)閃層析純化。結(jié)構(gòu)通過NMR確證。(f)甲苯-4-磺酸2-「2-(N-甲基-N-B0C-氨基氧基)-乙氧基乙酯攪拌下，向2-[2-(N-甲基-N-B0C-氨基氧基)-乙氧基]-乙醇(e)lg(4, 25mmol) 的無水DCM(15mL)溶液中加入三乙胺(910mg，1254 y L，9mmol)和甲苯-4-磺酰氯(1620mg， 8, 5mmol)的15mL DCM溶液。將反應(yīng)混合物在氬氣下攪拌過夜。TLC顯示反應(yīng)完全(己烷/ 乙酸乙酯6 4)。將反應(yīng)混合物用50mL DCM稀釋，將有機(jī)相用NaHC035%、鹽水和水洗滌。 有機(jī)相經(jīng)MgS04干燥，過濾，減壓蒸發(fā)除去。將產(chǎn)物用Companion combiflash (40g柱)純 化，用己烷/乙酸乙酯梯度，10-65%乙酸乙酯/己烷洗脫20分鐘。結(jié)構(gòu)通過NMR確證。實(shí)施例5 0-12-(2-氟-乙氧基)_乙基1-N-甲基-N-B0C-羥胺的制備 化合物2將KF(58mg，lmmol)和 kryptofix (376mg，lmmol)溶于無水乙腈(2mL)。將混合物 攪拌5min，然后在氬氣下加入溶于無水乙腈(0，250mL)的化合物1 (200mg，0，51mmol)。將混 合物在80°C下加熱1小時(shí)。1小時(shí)后，TLC顯示反應(yīng)完全。將有機(jī)相減壓蒸去，再溶于DCM， 捕集在硅膠上。將物質(zhì)用硅膠閃層析純化，用己烷/乙酸乙酯1 1洗脫。收率83mg(0，35mmol)。結(jié)構(gòu)用NMR 確證。實(shí)施例6 馬來酰亞胺基-丙?；?Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH的制備 化合物3在含F(xiàn)moc-Lys(Boc)-Sasrin樹脂(0. lmmol)的全自動(dòng)化肽合成儀(ABI 433A合成機(jī))上，用slowmoc Single Couple方法，通過HBTU活化，裝配模型五肽 Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH。通過人工，用3_(馬來酰亞胺基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯 (0, 52mmol)使馬來酰亞胺基-丙酸偶合。同時(shí)將肽從樹脂上除去，在含三異丙基硅烷和水 的三氟乙酸95 2.5 2. 5v/v/v)中，進(jìn)行側(cè)鏈保護(hù)基的脫保護(hù)。過濾后，將溶液減壓濃縮，將殘?jiān)靡颐严礈臁４之a(chǎn)物經(jīng)反相制備層析(Phenomenex LunaCIS (2)柱，250*50mm， lOym;梯度0-30%溶劑B洗脫60min ；流速50mL/分鐘)純化，得到66mg(95% )純化合物。 產(chǎn)物經(jīng) LC-MS [Phenomenex Luna C 18_(2)，50*2. 0mm，5 ii m ；梯度 0-30% 溶劑 B 洗脫 5min ； 流速 0，6mL/min ；tE = 2. 86min]分析，m/z = 687. 6 (M+H) +，理論值 m/z = 687，34 (M+H)+實(shí)施例7 放射合成化合物2和與化合物3綴合 在GE Healtcare的示蹤劑Lab FxFn模塊上進(jìn)行放射合成。在Krytptofix222(39，lmg/lmL 乙腈)和碳酸鉀(65，7mg/lmL水)的存在下，在N2 下，通過加熱至100°保持9分鐘，將18F-氟化物(高達(dá)350MBq)共沸干燥。在此期間，加入 2X0，7mL乙腈，蒸發(fā)。冷卻至<50°后，加入甲苯甲苯_4_磺酸2_[2_(N-甲基-N-B0C-氨 基氧基)-乙氧基]-乙酯(化合物l)(5mg/l mL無水乙腈)的溶液。將反應(yīng)容器加熱至 90°C保持10分鐘，完成標(biāo)記。將粗反應(yīng)混合物用5mL水稀釋。樣品用于TLC，將50 y L注射 到 HPLC (Phenomenex gemine 150mm*4, 60C185 ii m)，檢測波長 214nm、254nm 和 Y -檢測器 (gamme-detector)，梯度流動(dòng)，用溶劑B 20-80%洗脫15min。TLC(1 1乙酸乙酯/己烷) 給出標(biāo)記化合物的良好收率 70% (n = 3)?；衔锱c無放射性參照標(biāo)準(zhǔn)品共洗脫。將粗 反應(yīng)混合物再用4mL水稀釋，通過Oasis HLB S印-Pak短柱(預(yù)調(diào)節(jié)的5mL MeCN和10mL 氏0)。將Oasis短柱用50mL 25%甲醇的水溶液洗滌，用1，5mL MeCN將純化的化合物洗脫 出，將0，3mL 2N HC1的乙醚溶液加入MeCN洗脫液，在室溫下攪拌5分鐘，將B0C基團(tuán)定量 除去，然后在N2流下，將有機(jī)相在65°C下減壓蒸發(fā)3分鐘，再過3分鐘后加入lmL MeCN。將5mg化合物3在0，8mL 0，4M乙酸Na緩沖液pH 5中的溶液加入干燥混合物中， 將反應(yīng)物加熱至70°C保持60min，完成綴合。在Omin和60min取樣。
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反應(yīng)混合物通過HPLC分析，通過在llmin與F19-參照標(biāo)準(zhǔn)品共洗脫的新峰，顯示 化合物3的綴合物形成的證據(jù)，該新峰的面積為(74% )(

圖1)。HPLC :Phenomenex gemine 150mm*4，60 C18 511111，梯度，溶劑8 0-40% 10 分鐘，溶劑 B 40% 10_15min。 圖1 化合物3的18F-綴合物的HPLC色譜圖。上色譜圖左側(cè)峰為未反應(yīng)的18F-合 成子，右側(cè)峰為18F_合成子-化合物3綴合物。下色譜圖為19F-合成子-化合物3參照標(biāo) 準(zhǔn)品(254nm)。實(shí)施例8 4-(2-硝基乙烯基)苯甲酰基-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH的制備 化合物6按實(shí)施例6 中所述裝配模型五肽 Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH，將 58mg(0，3mmol) 反式-硝基苯乙烯和156，5mg(0, 3mmol)PyA0P加入樹脂(0，2mmol)/純DMF，然后加入 102uL(0, 6mmol)DIPEA，將反應(yīng)物放置1小時(shí)。同時(shí)將肽從樹脂上除去，在含三異丙基硅烷 和水的三氟乙酸95 2.5 2.5 v/v/v)中，進(jìn)行側(cè)鏈保護(hù)基的脫保護(hù)。過濾后，將溶液減壓 濃縮，將殘?jiān)靡颐严礈?。粗產(chǎn)物經(jīng)反相制備層析(PhenomenexLima C18(2)柱，250*50mm， 10ym ；梯度0-40%溶劑B洗脫60min ；流速50mL/分鐘)純化，得到101mg(70% )純化合物。 產(chǎn)物經(jīng) LC-MS [Phenomenex Luna C 18_(2)，50*2. 0mm，5 ii m ；梯度 0-30% 溶劑 B 洗脫 5min ； 流速 0，6mL/min ；tE = 4. lOmin]分析，m/z = 711，3 (M+H)+，理論值 m/z = 711，3(M+H)+。實(shí)施例9 按以上實(shí)施例7中所述，進(jìn)行化合物18F-化合物4的放射合成和純化。將0，2mL 2N HC1的乙醚溶液加入含18F化合物4的MeCN洗脫液，在室溫下攪拌5分鐘，將B0C基團(tuán)定量 除去，然后在N2流和減壓下，將有機(jī)層在65°C下蒸發(fā)3分鐘，再過3分鐘后，加入lmLMeCN。將5mg化合物6在0，8mL 0，4M乙酸Na緩沖液pH 5中的溶液加入干燥混合物， 將反應(yīng)物在30°C下加熱5min。反應(yīng)混合物通過HPLC分析，通過在10，4min與19F_參 照標(biāo)準(zhǔn)品共洗脫的新峰顯示綴合物形成的證據(jù)，該新峰的面積為(72%)(圖2)。HPLC: Phenomenexgemine 150mm*4, 60 CI85 ii m，梯度，溶劑 B 0-40 %洗脫 10 分鐘，溶劑 B 40% 10_15min。
圖2.化合物6的18F-綴合物的HPLC色譜圖。上色譜圖左側(cè)峰為未反應(yīng)的18F_合
10rrin
Y
G&sisHLB 50mL25%l 洗脫液1,5mLI 0,2mL2MHCI/乙醚
CN 101854957 A說 明 書15/21 頁18F-化合物4與化合物6的綴合
OMNUO
ol^no 0
O 0T .
,N-0
22成子；右側(cè)峰為18F-合成子-化合物6綴合物。下色譜圖19F-合成子-化合物6參照標(biāo)準(zhǔn) 品(254nm)。實(shí)施例10 馬來酰亞胺某-丙酰基-RDG-肽的制各
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HN
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Vc
b
1化合物7在5mL 容器中，將 50mg(0，04mmol)肽 NC100717 溶于 lmLDMF。 將 21，3mg(0, lmmol) 3-(馬來酰亞胺基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯溶于含DIPEA 13，6 ill (0，08mmol)的lmL DMF，加入肽溶液中。將反應(yīng)物在室溫下攪拌1小時(shí)。將DMF蒸去。 粗產(chǎn)物經(jīng)反相制備層析(Phenomenex Luna C18(2)柱，250*50mm，10 y m ；梯度0-40%溶劑B 洗脫60min ；流速50mL/分鐘)純化，得到23mg (40 % )純化合物。產(chǎn)物經(jīng)LC-MS [Phenomenex Luna C18- (2)，50*2. 0讓，5 y m ；梯度 5-40 % 溶劑 B 洗脫 5min ；流速 0，6mL/min ;tE = 2. 74min]分析，m/z = 1409，9 (M+H)理論值 m/z = 1409，5 (M+H)+。實(shí)施例11 18F-化合物4與化合物7的綴合 按以上實(shí)施例7中所述進(jìn)行化合物18F-化合物4的放射合成和純化。將0，2mL 2N HC1的乙醚溶液加入MeCN洗脫液，在室溫下攪拌5分鐘，將B0C基團(tuán)定量除去，然后在N2流 和減壓下，將有機(jī)相在65°C下蒸發(fā)3分鐘，再過3分鐘后，加入lmL MeCN。將溶于0，6mL0, 4M 乙酸鹽緩沖液PH 5+0，4mL DMF的5，75mg化合物7加入干燥殘?jiān)?。將肽混合物加熱?0°C，45后，取樣。45min后，粗反應(yīng)混合物通過放射性-HPLC分析，表明18F_合成子24%結(jié)合至 肽中，18F-化合物與其真實(shí)標(biāo)準(zhǔn)品共洗脫。(圖3). HPLC :Phenomenex gemine 150mm*4，60 C18 511111，梯度，溶劑8 0-40%洗脫 10 分鐘，溶劑 B 40% 10_15min。
圖3 化合物7的18F-綴合物的HPLC色譜圖。上色譜圖左側(cè)峰為未反應(yīng)的18F_合 成子；右側(cè)峰為18F_合成子_化合物6綴合物。下色譜圖19F-合成子-化合物7參照標(biāo)準(zhǔn) 品(254nm)。實(shí)施例11 苯甲?；?反式_ |3 _硝基苯乙烯-RDG的制備 化合物8將40mg(0, 032mmol)肽 NC100717 溶于 2mL DMF。加入溶于 2mL DMF 和 DIPEA 16u L(0, 096mmol)的反式 硝基苯乙烯 12，3mg (0，064mmol)禾口 PyaOP 25mg(0，048mmol)。將混合物預(yù)活化10分鐘，然后加入肽(NC100717)中。15分鐘后，LC-MS 顯示反應(yīng)完全，將反應(yīng)混合物用MeCN/0，TFA(20mL)淬滅。將有機(jī)相減壓除去。粗產(chǎn)物 經(jīng)反相制備層析(Phenomenex Luna C18(2)柱，250*50mm，10 y m ；梯度5-45%溶劑B洗脫 60min ；流速50mL/分鐘)純化，得到12mg(26% )純化合物。產(chǎn)物通過LC-MS[Phenomenex Luna C18- (2)，50*2. 0mm, 5 ii m ；梯度 5-40 % 溶劑 B 洗脫 5min ；流速 0，6mL/min ； tE = 2. 74min]分析，m/z = 1433，6 (M+H)+，理論值 m/z = 1433，5 (M+H)+。
實(shí)施例12 18F-化合物4與化合物8的綴合
按以上實(shí)施例7中所述，進(jìn)行化合物18F-化合物4的放射合成和純化。將0，2mL 2N HC1的乙醚溶液加入MeCN洗脫液，在室溫下攪拌5分鐘，將B0C基團(tuán)定量除去，然后 在隊(duì)流和減壓下，將有機(jī)相在65°C下蒸發(fā)3分鐘，再過3分鐘后，加入lmL MeCN。將溶 于0，8mL 0, 4M乙酸鹽緩沖液pH 5+0, 4mL DMF的化合物8 (5mg)加入干燥殘?jiān)?。將反?yīng)物 在30°C下放置5分鐘。粗反應(yīng)混合物通過放射性-HPLC分析，表明5分鐘后，18F-合成子 25%結(jié)合至肽中，18F-化合物與其真實(shí)標(biāo)準(zhǔn)品在12min共洗脫。(圖4). HPLC :Phenomenex geminel50mm*4, 60 C18 511111，梯度，溶劑8 0-40%洗脫 10 分鐘，溶劑 B 40% 10_15min。 圖4.化合物8的18F-綴合物的HPLC色譜圖。上色譜圖左側(cè)峰未反應(yīng)的18F_合 成子；右側(cè)峰18F-合成子_化合物8綴合物。下色譜圖19F-合成子-化合物8參照標(biāo)準(zhǔn) 品(254nm)。實(shí)施例13 乙烯磺?；鵢乙酸的合成 化合物9在250mL 3頸圓底燒瓶中，將1，lg(47，5mmol，1. 2當(dāng)量)鈉溶于25mL無水乙醇。 H2放出和鈉消失完全后，滴加2-巰基乙酸乙酯(4，60mL，40，7mmol, 1當(dāng)量)。將得到的混 合物攪拌20分鐘，然后加入57mL(57mmol，1，4當(dāng)量)溴乙烯(1M的THF溶液)。將混合物 轉(zhuǎn)移到高壓釜，加熱至105°C保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)。然后將THF和EtOH 真空蒸發(fā)，將殘?jiān)苡谒?120mL)，用乙醚(5X60mL)萃取。有機(jī)相經(jīng)(MgS04)干燥，將XS 溶劑真空除去。然后將粗物質(zhì)(2，9g)溶于10mL冰乙酸，冷卻至0°C。加入過乙酸36-40% (7，4mL，40mmol)，將反應(yīng)混合物在0°C下攪拌30min，然后讓溫度升至室溫，繼續(xù)攪拌2h。將 溶劑再次在真空除去，在自動(dòng)combiflash機(jī)上，粗產(chǎn)物經(jīng)閃層析(20% -100%乙酸乙酯/ 己烷洗脫10分鐘)純化。NMR確證結(jié)構(gòu)為亞砜。將所有流分收集，再用相對(duì)于亞砜(1.5g， 9, 2mmol)的過乙酸(2當(dāng)量)氧化至所有起始物質(zhì)消失。粗產(chǎn)物使用時(shí)無需進(jìn)一步純化。 將乙烯磺?；?乙酸乙酯溶于20mL 0，1M HC1，將混合物在100°C下回流13小時(shí)，得到乙烯 磺酰基_乙酸(1，2g,8mmol)。結(jié)構(gòu)通過NMR確證。乙烯磺?；?乙?；?Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH的制備 化合物10按實(shí)施例6 中所述裝配模型五肽 Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH。將 75mg(0，5mmol) 乙烯磺?；鵢乙酸和261mg(0，5mmol)PyA0P加入肽-結(jié)合的樹脂(0，lmmol)/純DMF(5mL) 中，然后加入171 iiL(lmmol)DIPEA，將反應(yīng)放置2h。同時(shí)在含三異丙基硅烷和水的三氟乙 酸95 2.5 2. 5v/v/v)中，將肽從樹脂上除去，并進(jìn)行側(cè)鏈保護(hù)基的脫保護(hù)。過濾后，將 溶液減壓濃縮，將殘?jiān)靡颐严礈?。粗產(chǎn)物經(jīng)反相制備層析(Phenomenex Luna C 18(2)柱， 250*50mm，10 u m ；梯度0-30%溶劑B洗脫60min ；流速10mL/分鐘)純化，得到51mg(76% ) 純化合物。產(chǎn)物通過 LC-MS [Phenomenex Luna C18-(2)，50*2. 0mm，5 ii m ；梯度 0-30 % 溶 劑 B 洗脫 5min ；流速 0，6mL/min ;tE = 2. 61min]分析，m/z = 668，4 (M+H) +，理論 m/z = 668，3(M+H)+。18F-化合物4與化合物10的綴合 在GE Medical系統(tǒng)的TracerLab FxFn模塊上進(jìn)行放射合成。在56mg Kryptofix 222 (K222 : 4，7，13，16，21，24-六氧雜-1，10-二氮雜雙環(huán)[8. 8. 8] 二十六烷)和溶于 215yL 水和785 y L乙腈(共計(jì)0. 8mL)的10mgK2C03的存在下，通過在N2流下，在100°下真空加 熱9分鐘，將18F-氟化物(200MBq)共沸干燥。在此期間，加入2X0，8mL乙腈，蒸發(fā)。冷卻 至< 50°后，加入甲苯甲苯-4-磺酸2-[2-(N-甲基-N-Boc-氨基氧基)-乙氧基]-乙酯 (化合物3) (3mg/l mL無水MeCN)溶液。將密閉反應(yīng)容器加熱至90°C保持10分鐘，完成標(biāo) 記。將粗反應(yīng)混合物用9mL水稀釋，并通過Oasis HLB S印-Pak短柱(Waters)(預(yù)調(diào)節(jié)的 5mL MeCN和10mL H20)。將Oasis短柱用50mL 25% MeOH的水溶液洗滌，將純化的化合物 用l，5mL MeCN洗脫。將2N HC1 (0. 2mL)的乙醚溶液加入MeCN洗脫液，將混合物在室溫下 攪拌5分鐘，將Boc基團(tuán)定量除去。將有機(jī)相在65°C下、在N2流下真空除去，保持3分鐘， 然后加入lmLMeCN，再在真空下除去，保持3分鐘。將5mg化合物10在0，8mL 0，4M乙酸Na緩沖夜pH 5中的溶液加入該干燥混合物， 將反應(yīng)物加熱至70°C保持lOmin，完成綴合。反應(yīng)混合物通過HPLC分析，顯示綴合物形成的證據(jù)(在8，92min與19F_參照標(biāo)準(zhǔn) 品共洗脫的新峰，40% 收率)HPLC :Phenomenexgemine 150mm*4, 60 C185 ii m，梯度，溶劑 B 0-40% 洗脫 10 分鐘，溶劑 B 40% 10-15min。
化合物11的18F-綴合物的HPLC色譜圖。上色譜圖19F-合成子-化合物xx參照 標(biāo)準(zhǔn)品(254nm).下色譜圖左側(cè)峰未反應(yīng)的18F_合成子；右側(cè)峰18F_合成子-化合物xx 綴合物。
權(quán)利要求
一種放射性氟化方法，所述方法包括使式(I)化合物與式(II)化合物反應(yīng)18F-(接頭-R2 (II)或，使式(III)化合物與式(IV)化合物反應(yīng)18F-(接頭)-R4(IV)其中R1為含鹵素部分；R2為N-烷基氨基氧基基團(tuán)；R3為N-烷基氨基氧基基團(tuán)；且R4為含鹵素部分；分別得到式(V)或(VI)綴合物其中Y為烷基或芳基，且式(II)和(V)化合物中的18F-接頭基團(tuán)選自包含通過穩(wěn)定鍵與18F原子連接的N-烷基氨基氧基部分的一組合成子，式(IV)和(VI)化合物中的18F-接頭基團(tuán)選自含鹵素的合成子。FPA00001137095900011.tif,FPA00001137095900012.tif,FPA00001137095900013.tif
2.權(quán)利要求1的方法，其中Rl為鹵代乙?；虮郊柞＜谆u基團(tuán)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中R4為鹵代乙?；虮郊柞＜谆u基團(tuán)。
4.權(quán)利要求1的方法，其中Y為甲基。
5.權(quán)利要求1的方法，其中式(II)和(V)化合物中的18F-接頭基團(tuán)選自 其中V為鹵素原子，優(yōu)選溴、氯或碘； η為0-20的整數(shù)； Z為0、Ν或S。
6.權(quán)利要求1的方法，其中式(IV)和(VI)化合物中18F-接頭基團(tuán)選自 其中V為鹵素原子，優(yōu)選溴、氯或碘； η為0-20的整數(shù)； Z為0、Ν或S。
7.一種放射性氟化方法，所述方法包括使式(Ia)化合物與式(IIa)化合物反應(yīng) (I Ia)或，使式(IIIa)化合物與式(IVa)化合物反應(yīng) H3C-N-O-I H 其中Rl和R4定義分別同以上式(I)和(IV)化合物；式(IIa)和(IVa)化合物中所述 接頭基團(tuán)各自為C1,烴基，適合為C1,烴基，任選包括1-30個(gè)雜原子，適合為1-10個(gè)雜原 子例如氧或氮，分別得到式(Va)或(Via)綴合物 CH3其中所述接頭基團(tuán)定義同式(IIa)或(IVa)化合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述接頭基團(tuán)選自烷基、烯基、炔基鏈；芳環(huán)、多芳環(huán)和雜芳環(huán)；和包含乙二醇、氨基酸或碳水化合物亞單元的聚合物。
9. 一種放射性氟化方法，所述方法包括使式(Vila)化合物 與式(Vllb)化合物反應(yīng)18F-接頭-v(viib)得到式(vile)化合物18F-接頭-NH(Y)-0-載體(VIIc)，其中Y為烷基或芳基取代基。
10.權(quán)利要求9的方法，其中化合物(VIlb)選自(VIII)、(IX)或(X) 18F- (CH2CH20) nCH2CH2-NHC0CH2"Br (VIII) (X)分別得到式(XII-XV)化合物18F-(CH2CH20)nCH2CH2-NHC0CH2"N(Y) -0-載體 (XII) 18F-(CH2)n-N(Y)-0-載體 (XIII) 18F- (C6H4) -C0-CH2-N (Y) -0-載體 (XIV) 其中n為0-20的整數(shù)；Y為烷基或芳基取代基。
11. 一種放射性氟化方法，所述方法包括使式(XVa)化合物 (XVa)其中V為鹵素，與通式(XVb)化合物反應(yīng) 18F-接頭-O-NH(Y) (XVb) 其中Y定義同前述化合物。
12.權(quán)利要求11的方法，其中式(XVb)化合物選自式(XVI)、(XVII)、(XVIII)化合物 其中Y、m和n定義同前述化合物。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述載體為Arg-Gly-Asp肽或其類似物。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述載體包含片段 。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述載體具有式(A) 其中X7為-NH2或 其中a為1-10的整數(shù)，且其中肽反應(yīng)后，R5與賴氨酸殘基的ε _氨基形成酰胺鍵或仲 胺鍵，且優(yōu)選選自以下目錄i-Vi i i 其中R6為活性酯活化基團(tuán)例如N-羥基琥珀酰亞胺或酰氯，且L和V同前所述。
16.—種式(I)或(III)化合物，所述化合物定義同權(quán)利要求1。
17.權(quán)利要求16的化合物，其中所述載體為Arg-Gly-Asp肽或其類似物。
18.權(quán)利要求16的化合物，其中所述載體包含片段
19.權(quán)利要求16的化合物，其中所述載體具有式(A) 其中X7為-NH2或 其中a為1-10的整數(shù)，其中肽反應(yīng)后，R5與賴氨酸殘基的￡-氨 基形成酰胺鍵或仲胺鍵，且優(yōu)選選自以下目錄i-viii 其中R6為活性酯活化基團(tuán)例如N-羥基琥珀酰亞胺或酰氯，且L和V同前所述。
20.一種式(V)或(VI)化合物，所述化合物定義同權(quán)利要求1。
21.權(quán)利要求20的化合物，其中所述載體為Arg-Gly-Asp肽或其類似物。
22.權(quán)利要求20的化合物，其中所述載體包含片段
23.權(quán)利要求20的化合物，其中所述載體具有式(A) 其中x7為-NH2或 其中a為1-10的整數(shù)，其中肽反應(yīng)后，R5與賴氨酸殘基的￡ _氨基形成酰胺鍵或仲胺 鍵，且優(yōu)選選自以下目錄i-viii 其中R6為活性酯活化基團(tuán)例如N-羥基琥珀酰亞胺或酰氯，且L和V同前所述。
24.一種放射性藥物組合物，所述組合物包含有效量的權(quán)利要求20的化合物以及一種 或多種藥學(xué)上可接受的助劑、賦形劑或稀釋劑。
25.權(quán)利要求20的化合物，所述化合物用于醫(yī)療用途。
26.權(quán)利要求20的化合物在制備放射性藥物中的用途，所述放射性藥物用于在體內(nèi)成 像的方法中使用。
27.—種產(chǎn)生人或動(dòng)物體影像的方法，所述方法包括給予所述機(jī)體權(quán)利要求20的化合 物，和用PET在所述化合物分布到所述機(jī)體后生成所述機(jī)體的至少一部分的影像。
28.—種監(jiān)測藥物治療人或動(dòng)物體的效果的方法，所述藥物抗與癌癥有關(guān)的病癥，優(yōu)選 血管發(fā)生病癥，所述方法包括給予所述機(jī)體權(quán)利要求21的化合物，和檢測所述化合物被細(xì) 胞受體的攝取，所述給予和檢測任選但優(yōu)選在所述藥物治療前、期間和之后完成。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(V)或(VI)綴合物、它們作為放射性藥物的用途、它們的制備方法和用于此類方法的合成中間體。
文檔編號(hào)A61K51/08GK101854957SQ200880115735
公開日2010年10月6日 申請日期2008年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月10日
發(fā)明者A·卡思伯森, D·E·奧爾伯格, M·索爾巴肯 申請人:通用電氣健康護(hù)理有限公司