專利名稱：骨癌的治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及骨癌治療領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
癌性骨腫瘤是在骨中發(fā)生的惡性異常生長(zhǎng)，包括骨的原發(fā)瘤，例如 骨肉瘤(或骨瘤)。骨腫瘤還可以包括在骨中發(fā)生的繼發(fā)瘤或轉(zhuǎn)移瘤。
惡性的原發(fā)性骨腫瘤包括骨肉瘤(osteosarcoma)、軟骨肉瘤 (chondrosarcoma)、 Ewing氏肉瘤(Ewing' sarcoma)和其它肉瘤。多發(fā)性骨 髓瘤是血液癌，其也通常表現(xiàn)為一種或多種骨腫瘤。 繼發(fā)性骨腫瘤包括從其它器官如乳腺、肺和前列腺擴(kuò)散而來的轉(zhuǎn)移 瘤。相比于四肢骨骼，轉(zhuǎn)移性腫瘤更多發(fā)于脊椎骨。起源于軟組織的腫瘤通 過直接入侵也可以繼發(fā)性地在骨中發(fā)生。 骨肉瘤是一種最常見的惡性骨癌，占原發(fā)性惡性骨腫瘤的35%。其 有向管狀長(zhǎng)骨干骺端區(qū)域的趨勢(shì)。50%的病例發(fā)生在膝蓋周圍。骨肉瘤是惡 性結(jié)締(軟)組織腫瘤，其贅生性細(xì)胞(neoplastic cell)呈現(xiàn)出成骨細(xì)胞的 分化并形成腫瘤骨。 骨肉瘤是在15歲以下兒童中排第6位的主要癌癥。在美國，骨肉 瘤每年影響400名20歲以下的兒童和500名成人(大多數(shù)在15至30歲間)。 卯0位患者中每年約有1/3死亡，或每年約300人死亡。它以第二高的發(fā)生 率發(fā)生在老年人中，通常與潛在的骨病理如Paget氏病、延髓梗塞或在先放 射(prior irradiation)有關(guān)。雖然約90%的患者能夠接受保肢手術(shù)，但是并 發(fā)癥如感染、假體松動(dòng)和不愈合或局部腫瘤復(fù)發(fā)可能會(huì)造成需要進(jìn)一步手術(shù) 或截肢。腫瘤可以位于長(zhǎng)骨的末端。其最通常影響脛骨或肱骨的上端，或股 骨的下端。由于鈣化骨的腫瘤骨針(tumor spicule)以直角輻射，腫瘤呈現(xiàn)固 體、堅(jiān)硬、不規(guī)則狀(在X-射線檢查下呈現(xiàn)出"樅樹形"或"旭日形")。這蘭且用形諷Loaman r二用。ki w夢(mèng)邁近周,脅—、。
骨肉瘤是狗中最常見的骨腫瘤，且通常侵害中年大型和巨型品種 狗，如愛爾蘭獵狼犬、靈緹、德國牧羊犬、羅威納犬和大丹犬。其在狗中的 發(fā)病率比在人中高十倍。圣伯納犬中已經(jīng)顯示出遺傳基礎(chǔ)。節(jié)育/閹割的狗中 發(fā)生骨肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)是未經(jīng)處理狗的兩倍。
本領(lǐng)域需要治療骨癌的方法。

發(fā)明內(nèi)容
—種治療方法，用于治療、至少部分預(yù)防、抑制或降低受試者骨腫 瘤的生長(zhǎng)，該方法包括至少部分地去除受試者的骨腫瘤，以及將與腫瘤至少 部分去除區(qū)域相鄰的骨區(qū)域與包含抑制腫瘤生長(zhǎng)的羥甲基轉(zhuǎn)移劑(methylol transfer agent)的凝膠相接觸。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了通過對(duì)受試者施用包含羥甲基轉(zhuǎn)移劑如滔羅定 (taurolidine)、滔羅胺(taurultam)、其混合物或其平衡物(equilibrium)的凝膠 以治療骨癌(如骨肉瘤)的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠是可再吸 收的。特別優(yōu)選所述凝膠是包含交聯(lián)的纖維狀蛋白的含水凝膠(aqueous gd) 或由交聯(lián)的纖維狀蛋白形成的含水凝膠。 根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述癌性腫瘤是肉瘤，如骨肉瘤、軟骨肉瘤或 Ewing氏肉瘤。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，所述腫瘤是來自骨以外組織的轉(zhuǎn)移性腫瘤或癌。 滔羅定通過在作用位點(diǎn)上轉(zhuǎn)移三個(gè)羥甲基基團(tuán)來發(fā)揮作用，滔羅胺 是中間代謝物，其本身轉(zhuǎn)移單個(gè)羥甲基基團(tuán)并釋放出高耐受化合物 taurinamide。因此，這兩種化合物的作用方式基本相同。在溶液中，滔羅定 和滔羅胺處于平衡狀態(tài)。"羥甲基轉(zhuǎn)移劑"是指含羥甲基的分子或在生理?xiàng)l件下能夠產(chǎn)生羥 甲基分子的化合物。含羥甲基的化合物的特征是具有R-CH2-OH基團(tuán)，其中 R是垸基、芳基或雜基團(tuán)(hetero group)。本發(fā)明還包括能夠產(chǎn)生或被轉(zhuǎn)化成含R-CH2-OH結(jié)構(gòu)的化合物的用途。 羥甲基轉(zhuǎn)移劑包括含羥甲基的化合物，如滔羅定和滔羅胺及其衍生 物?；衔锾狭_定和滔羅胺公開于美國專利第5,210,083號(hào)中。其它適合的含 羥甲基的化合物包括taurinamide衍生物和尿素衍生物。本發(fā)明所用滔羅定衍 生物、滔羅胺衍生物、taurinamide衍生物和尿素衍生物的實(shí)例可以參見WO 01/39763A2。本發(fā)明所用的特別優(yōu)選的羥甲基轉(zhuǎn)移劑是滔羅定、滔羅胺、其 混合物和/或平衡物、其生物學(xué)活性衍生物和其混合物。 所述化合物也可以是taurinamide衍生物或尿素衍生物。本發(fā)明所用 的滔羅定衍生物、滔羅胺衍生物、taurinamide衍生物和尿素衍生物的實(shí)例可 以參見WO01/39763A2。 其它適于誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的含羥甲基的化合物包括但不限于1,3-二 羥甲基-5,5-二甲基海因(1，3-dimethylol-5,5-dimethylhydantoin)、六亞甲基四 胺或諾昔硫脲(noxythiolin)。滔羅定衍生物或滔羅胺衍生物是指分別具有滔羅 定或滔羅胺的至少10%抗腫瘤活性的磺酰胺化合物?；酋０坊衔锏姆肿邮?為R2N-S02R'。本文所述化合物的衍生物可以在結(jié)構(gòu)上區(qū)別于參比化合物(如 滔羅定或滔羅胺)，但是優(yōu)選保持參比化合物的至少50%生物學(xué)活性，如細(xì) 胞凋亡的誘導(dǎo)活性。優(yōu)選地，衍生物具有參比化合物的至少75%、 85。％、 95 %、 99%或100%生物學(xué)活性。在一些情況中，衍生物的生物學(xué)活性可以超 過參比化合物的活性水平。衍生物也可以具有參比化合物所不具有的特征或 活性。例如，衍生物可以具有減低的毒性、或延長(zhǎng)的臨床半衰期等。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了通過將可再吸收的含水凝膠(其水相 包含水溶性羥甲基轉(zhuǎn)移劑)置于骨內(nèi)空腔中并在其中保留直到被再吸收，來 治療、至少部分預(yù)防、抑制或降低骨或骨內(nèi)空腔中癌細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的 方法。然而，在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，凝膠可以比較快速地被吸
收，如在幾周的時(shí)間內(nèi)，優(yōu)選在10至14天被吸收，羥甲基轉(zhuǎn)移劑的釋放主
要是通過再吸收過程而不是通過羥甲基轉(zhuǎn)移劑從凝膠向外的擴(kuò)散。用于插入到待治療空腔內(nèi)的凝膠可以是成形的固體形式如棒狀，因
此其直徑可以是2mm至20mm，長(zhǎng)度可以是20 mm至150 mm。在本發(fā)明
的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠是顆?；蛄钚问健Ｊ褂眠@種形式有可能完全填滿任何形狀或大小的空腔，而無需使移植物具有特定結(jié)構(gòu)?？煽焖僭傥盏哪z優(yōu)選含水凝膠，其包含交聯(lián)的水溶性纖維狀蛋
白，如硬蛋白(如原膠原或部分水解的膠原、原膠原)或彈性蛋白(包括， 特別是明膠)。彈性蛋白是腱和動(dòng)脈的彈性纖維狀蛋白。膠原是皮膚、腱和骨 的非彈性纖維狀蛋白，且包括三螺旋結(jié)構(gòu)的原膠原分子鏈?？梢酝ㄟ^檸檬酸 緩沖液提取法從如幼小哺乳動(dòng)物的皮膚中得到原膠原。部分水解的膠原、原
膠原或彈性蛋白的分子量范圍優(yōu)選100,000至350,000。水煮時(shí)，膠原產(chǎn)生蛋 白質(zhì)明膠。 優(yōu)選地，即使在有其它纖維狀蛋白存在時(shí)，所述可再吸收凝膠也可 以包括或包含明膠。這確保了凝膠的彈性且避免了不適當(dāng)?shù)膭傂?，在一些?況中所述剛性會(huì)在將凝膠插入到待治療的空腔中時(shí)引發(fā)一些問題。高彈性度 是有利的，例如當(dāng)凝膠是三維形狀(如棒狀)形式時(shí)，凝膠優(yōu)選包含80重量 %至100重量％的明膠，優(yōu)選基本為100%的明膠。然而，當(dāng)所提供的凝膠 是粒狀，其彈性度必須通過堅(jiān)固度進(jìn)行平衡以便進(jìn)行適當(dāng)?shù)牧；Ｔ诖饲闆r 中，可以使用某些含量的纖維狀蛋白而非明膠，且明膠含量的范圍可以是如 總蛋白質(zhì)重量的60%至80% (如約70%)，其余的可以是原膠原或部分水解 的膠原、原膠原或彈性蛋白，或是未水解膠原或彈性蛋白的纖維。當(dāng)然，如 果需要所述顆?？梢园吆康拿髂z，且如果充分地交聯(lián)可以使用100 Q/^的明膠。 明膠的制備模式可以影響明膠的性質(zhì)。通過皮膚膠原的酸性水解可 以制備所謂的可食用明膠，且發(fā)現(xiàn)其在水中分散時(shí)具有約4.2的？11值。另一 方面，通常通過骨膠原的堿性水解制備骨明膠，且其在水中分散時(shí)具有的酸 性小，pH值如約6.0。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在與等量交聯(lián)劑的反應(yīng)中，相比于較高酸性 的可食用明膠，較低酸性的骨明膠可以得到堅(jiān)固的、更有彈性的凝膠。然而， 在交聯(lián)前可以優(yōu)選將明膠溶液中和至如約7.0，以便使凝膠具有更完全的生理 相容性。 根據(jù)所期望的性質(zhì)，纖維狀蛋白優(yōu)選構(gòu)成(comprise)5重量％至30 重量％的凝膠，優(yōu)選約10-20重量％。在體溫下凝膠優(yōu)選保持固體，但這不 是必須的。因此，例如當(dāng)凝膠相對(duì)較硬時(shí)，再吸收性較低。這可以通過使用 更多的甲醛來實(shí)現(xiàn)。類似地，如果期望更快的再吸收，則使用較軟的凝膠可能是適合的。當(dāng)要求顆粒時(shí)可以優(yōu)選較硬的凝膠，因?yàn)槠涓菀妆粰C(jī)械?；Ｄz也可以包含有利地改變其物理和/或生化性質(zhì)的其它添加劑。一 種有用的所述添加劑是磷酸鈣，其具有提高凝膠堅(jiān)固性的作用。此外，可以 認(rèn)為當(dāng)把凝膠置于空腔內(nèi)時(shí)，磷酸鈣通過緩釋可以起到向骨提供鈣的作用。 多糖和聚乙烯吡咯烷酮，特別是較高分子量(如約40,000)的多糖和聚乙烯 吡咯烷酮，也可以提供較慢的再吸收。除羥甲基轉(zhuǎn)移劑以外，還可以使用其它可溶于凝膠的溶脹水 (swelling water)中的藥劑如止痛劑。此外，溶脹水還可以包含其它溶解的 添加劑，所述添加劑促進(jìn)傷口愈合和/或有利地改變凝膠的物理和生化性質(zhì)。 例如，其可以是氨基酸、糖、多羥基醇、食鹽等。最后，凝膠也可以包含X-
射線造影劑。 優(yōu)選的活性物質(zhì)是羥甲基轉(zhuǎn)移劑，如滔羅定、滔羅胺、其混合物或 其平衡物。當(dāng)使用滔羅定和/或滔羅胺時(shí)，其被吸收至凝膠中的水溶液濃度優(yōu) 選是0.5重量％~5重量％，如約1重量％ 4重量％。當(dāng)凝膠是粒狀形式時(shí)， 滔羅定和/或滔羅胺優(yōu)選是2 4重量％，更優(yōu)選是4重量％。在室溫下，滔羅 定在水中的溶解度僅為約2%~3%，因此在更高濃度時(shí)， 一些物質(zhì)將以混懸液 形式存在，如細(xì)小的滔羅定晶體的混懸液。 也可以包含元素碘和聚乙烯吡咯烷酮的絡(luò)合物(complex)。
纖維狀蛋白的交聯(lián)對(duì)促進(jìn)凝膠的粘結(jié)性是必要的，且其通過與自由 氨基基團(tuán)的反應(yīng)也可以用于降低對(duì)"外源"蛋白的免疫反應(yīng)。優(yōu)選的交聯(lián)劑 是羥甲基轉(zhuǎn)移劑，如甲醛或衍生自甲醛的羥甲基轉(zhuǎn)移劑(如滔羅定和/或滔羅 胺)。通常，使用甲醛作為交聯(lián)劑時(shí)，凝膠中結(jié)合甲醛的百分?jǐn)?shù)相對(duì)于蛋白優(yōu) 選為2.0 5.0，優(yōu)選2.3 4.0。因此，例如使用10%的含水明膠時(shí)，可方便地 在初始時(shí)加入約3.6%的甲醛，清洗后結(jié)合甲醛的水平降至約2.7%。然而， 如果在初始時(shí)僅加入約2.7%的甲醛，則通?？刹贿M(jìn)行隨后的清洗。在優(yōu)選的 實(shí)施方案中，最終的產(chǎn)物中基本沒有游離甲醛存在。此外，本發(fā)明允許利用 無毒交聯(lián)劑(如那些用于交聯(lián)其它聚合材料的交聯(lián)劑)提供交聯(lián)凝膠。這意 味著當(dāng)將其置于骨腔中時(shí)，不會(huì)有在凝膠中存在殘余量的毒性物質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)。 根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)凝膠是可再吸收的凝膠時(shí)，其優(yōu)點(diǎn)是在治療中僅需要一次手 術(shù)。 一旦空腔充滿凝膠，可以將傷口閉合并無需再次打開。
當(dāng)使用甲醛進(jìn)行凝膠交聯(lián)時(shí)，通過將含適量凝膠形成蛋白的羥甲基 轉(zhuǎn)移劑水溶液和任何其它期望成分加溫，從而溶解蛋白，并隨后加入甲醛(優(yōu) 選甲醛水溶液或是甲醛聚合物如三聚乙醛形式)，可以很便利地制備交聯(lián)的凝
膠。其中特別常用的是福爾馬林(36-40%的甲醛水溶液)。當(dāng)使用明膠時(shí)， 其可以是如可食用明膠或骨明膠。如上所述，與可食用明膠相比，骨明膠通 常產(chǎn)生更堅(jiān)硬或更堅(jiān)固的凝膠。通常，可使用的水溶液是每100 g水溶液包 含如0.3-4.75 g滔羅定和/或滔羅胺、7.0-12.0 g (如10.0 g)明膠、任選的1-35 g (如25 g)磷酸二鈣。除滔羅定和/或滔羅胺以外，水溶液可以包含添加劑 (如硫酸慶大霉素、硫酸軟骨素和聚乙烯吡咯烷酮)；如果需要也可以加入細(xì) 磨的骨粉。在此混合物中通常使用約0.75-1.0 g的約36%甲醛水溶液。隨后 將溶液倒入一個(gè)或多個(gè)預(yù)熱的模(如長(zhǎng)管)中，并使其冷卻。在冷卻和凝固 后，如果需要可以將凝膠切割成大小適當(dāng)?shù)钠?，并且如果需要可以通過常 規(guī)的?；瘷C(jī)或切碎機(jī)將其?；?。顆粒平均直徑的范圍通常是約0.1-10 mm、 優(yōu)選約1-5 mm、更優(yōu)選約1.5-5 mm且有利地約1.5-5 mm，以使其容易被填 入空腔內(nèi)并且不會(huì)通過滲出被洗去。在一些情況中，所述顆粒有可能是細(xì)粒， 以便在手術(shù)后其可以通過引流管由注射器灌輸?shù)娇涨粌?nèi)來使用。對(duì)于此目的， 粒徑優(yōu)選小于0.5 mm (如約0.4 mm)。 制備后，凝膠可以包含少量的游離甲醛，且其可以通過清洗直到清 洗水中不再有甲醛出現(xiàn)來去除；為了避免同時(shí)去除羥甲基轉(zhuǎn)移劑，優(yōu)選使用 羥甲基轉(zhuǎn)移劑的水溶液來完成清洗。使用氣相色譜(GC-WLD或FID)的測(cè) 試可以檢測(cè)出低至0.003%的游離甲醛。如上所述，初始加入的甲醛量要大于 清洗后最終結(jié)合在凝膠中的甲醛量。通?？梢栽诔跏紩r(shí)加入4%的甲醛(相 對(duì)于蛋白)以產(chǎn)生2.7%的結(jié)合甲醛。當(dāng)加入聚乙烯吡咯烷酮時(shí)，優(yōu)選甲醛百 分?jǐn)?shù)較低，如約3%。 凝膠需要24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間來固化，但是在清洗和粒化(如果需 要)前將凝膠放置更長(zhǎng)的時(shí)間是有利的。因此，可以將凝膠放置至少1 S天， 優(yōu)選4 7天，在此期間其堅(jiān)固性會(huì)得到很大提高，這或許是由于凝膠內(nèi)持續(xù) 的交聯(lián)反應(yīng)。當(dāng)要產(chǎn)生的凝膠是粒狀形式時(shí)，因?yàn)閳?jiān)固性的增加會(huì)改進(jìn)凝膠 的粒化性，所以此步驟特別有利。如上所述，交聯(lián)劑會(huì)受到羥甲基轉(zhuǎn)移劑(如滔羅定和/或滔羅胺)的影響。因此，可以以約4.75%的水平將滔羅定加入到可食用明膠的溶液中并 放置數(shù)天?；钚蕴狭_定的水平可能會(huì)輕微地下降，例如下降至約3.7%，但是 發(fā)生交聯(lián)可以產(chǎn)生堅(jiān)固性使人滿意的凝膠。不需要清洗來去除過量的甲醛。
在某些情況下，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以通過局部干燥來降低凝膠材料中的水 含量。例如，可以將材料干燥以減少60-80重量％ (如約70重量％)的水含 可以將凝膠條或凝膠片放入烘箱或熱風(fēng)柜，以略高于環(huán)境的溫度如 30°C-5(TC (如約40°C)來進(jìn)行干燥。也可以使用真空干燥來代替。因?yàn)椴?希望將材料完全地脫水，所以應(yīng)小心地監(jiān)測(cè)脫水的程度?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)以此方式 對(duì)材料進(jìn)行干燥的優(yōu)點(diǎn)是可以提高凝膠的堅(jiān)固性和?；浴?
如果凝膠是棒狀或其它形狀，可以很方便地將其無菌裝填于適合的 不透水且不透氣的包裝材料中，如通過使用70%的異丙醇水溶液清洗滅菌的 可密封的聚氯乙烯或聚乙烯箔中。所述箔可以背襯有紙和/或鋁箔以提高不透 水性。如果之前所有的步驟都在無菌條件下進(jìn)行，則不再需要滅菌。否則可 以使用環(huán)氧乙烷或甲醛進(jìn)行滅菌。因此，例如，可以將凝膠與約100ppm環(huán) 氧乙烷一起放置如約20天從而進(jìn)行滅菌。在此期間由于水解，環(huán)氧乙垸的水 平可以降至約1-2 ppm，隨后去除環(huán)氧乙垸。如果使用內(nèi)層和外層包裝的包 裝箔，可以更容易保持無菌狀態(tài)，僅把內(nèi)層包裝帶入手術(shù)室。
根據(jù)本發(fā)明， 一種特別有用的治療方法是將無菌顆粒形式的凝膠與 自體松質(zhì)組織混合，所述自體松質(zhì)組織來自同一患者的健康骨和/或人工骨礦 物質(zhì)或天然骨礦物質(zhì)，如Bio-Oss⑧(GeistlichAG)。髂嵴(iliac crest)可以提 供少量的松質(zhì)組織，而更大量的松質(zhì)組織可以從大轉(zhuǎn)子(trochanter major) 和髂后棘(spinailiacaposterior)獲得。凝膠與骨或骨礦物質(zhì)的混合物可以是 任何適合的比例，如1:9、 1:4、 3:7、 2:3、 1:1、 3:2、 7:3或4:1。在此應(yīng)用方 式中，所述凝膠應(yīng)該是等滲的，以便避免在接觸松質(zhì)組織時(shí)的滲透作用。因 此凝膠的水相可以是生理鹽水或乳酸林格氏液(Ringer lactate solution, 0.22 %乳酸、0.6% NaCl、 0.4% KCl、 0.4% CaCl26H20;用NaOH中和至酚紅 指示劑呈橙色(pH7.0)，在12"C滅菌15分鐘)。通常本發(fā)明的凝膠具有與皮 膚相容的膠體滲透壓。通過加入低分子量聚乙烯吡咯垸酮(PVP)，如分子量 范圍是8000-12,000道爾頓(如約11,000道爾頓)，可以提高膠體滲透壓。因200780033237.8
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為所述溶液中的鹽會(huì)影響凝膠冷卻時(shí)的凝固，優(yōu)選在凝膠凝固后通過將其包 含在用于去除甲醛的清洗液中來進(jìn)行鹽的加入。為了促進(jìn)所述鹽向凝膠中的 加入，所述清洗水中鹽的濃度可以是高滲的，且可以對(duì)其吸收進(jìn)入凝膠進(jìn)行 監(jiān)測(cè)直到實(shí)現(xiàn)等滲。然而，從等滲溶液中吸收則是十分迅速的。
本發(fā)明可以應(yīng)用于治療哺乳動(dòng)物(包括人和犬受試者)。當(dāng)治療狗
時(shí)，優(yōu)選包含滔羅定和/或滔羅胺的凝膠中不含PVP，因?yàn)橐恍┕穼?duì)PVP極 度敏感。在不含PVP的組合物中，可以用檸檬酸(如0.01-0.05重量％)替 代PVP。 根據(jù)特定情況，可以安裝從骨腔導(dǎo)向受試者體外的引流管以用于此 區(qū)域的引流，此后空腔通過手術(shù)閉合。當(dāng)很快發(fā)生愈合時(shí)，會(huì)有健康的液體 滲出。 在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠包含4%的滔羅定和/或滔羅 胺，其中2%的滔羅定和/或滔羅胺在溶液中，2%的滔羅定和/或滔羅胺作為 細(xì)小晶體懸浮在凝膠中。 在用于治療骨癌(如骨肉瘤)的優(yōu)選實(shí)施方案中，可以將腫瘤物從 骨中去除，在骨中形成空腔，然后將本發(fā)明的凝膠顆粒填入骨腔內(nèi)以便殺死 剩余的腫瘤細(xì)胞，和/或預(yù)防或至少部分抑制腫瘤細(xì)胞的進(jìn)一步生長(zhǎng)。如上所 述，骨材料和/或骨礦物質(zhì)可以與所述凝膠混合。此外，在治療期間，可以通 過如靜脈灌注對(duì)患者全身施用含水的羥甲基轉(zhuǎn)移劑如滔羅定和/或滔羅胺溶 液，所述治療期間可以包括手術(shù)前，手術(shù)中和/或手術(shù)后。
根據(jù)本發(fā)明，用于全身施用的羥甲基轉(zhuǎn)移劑的有效劑量可以包含的 藥物劑量單位在約0.1-1,000 mg/kg受試者體重的范圍內(nèi)，優(yōu)選為每天150-450 mg/kg、且最優(yōu)選為每天300-450 mg/kg。施用劑量也可以以克/天為基礎(chǔ)，約 為2-60克/天。優(yōu)選的劑量范圍可以是滔羅定為約2.5-30克/天，滔羅胺或與 滔羅定的混合物為4-60克/天。最優(yōu)選的劑量范圍是滔羅定約10-20克/天、 滔羅胺20-40克/天或其混合物。

用于注射或灌注的合適制劑可以包括含一種或多種增溶劑如多元 醇(如葡萄糖)的等滲溶液，以便提供滔羅定和/或滔羅胺濃度得到提高的溶 液。所述溶液描述于EP253662B1中。所述溶液中滔羅定和/或滔羅胺濃度的 范圍可以是1-60克/升。
羥甲基轉(zhuǎn)移劑通常難溶于水。因此，通常需要施用較大體積的含滔
羅定和/或滔羅胺的水溶液，如含10克至30克的滔羅定和/或滔羅胺的水溶 液。根據(jù)本發(fā)明，用于施用的優(yōu)選溶液包含約0.5-3重量％、約1-3重量％、 約2-3重量％或約2重量％的滔羅定和/或滔羅胺?？紤]到涉及的體積相對(duì)較 大，可以在一天中間隔多個(gè)時(shí)期方便地通過灌注施用這些化合物。
羥甲基轉(zhuǎn)移劑日總劑量的施用(優(yōu)選通過灌注)可以在24小時(shí)內(nèi) 以恒定的速率進(jìn)行，或通過分劑量更快灌注進(jìn)行(在每個(gè)分劑量之間有停頓)， 例如在2小時(shí)內(nèi)灌注250 ml2X的滔羅定和/或滔羅胺(5克劑量)溶液，隨 后暫停4小時(shí)，并在24小時(shí)灌注期間重復(fù)進(jìn)行以上灌注以達(dá)到20克的日總 劑量。也可以在1小時(shí)內(nèi)灌注250ml2X的滔羅定和/或滔羅胺溶液，在分劑 量之間停頓1小時(shí)，并i復(fù)以上灌注直到達(dá)到日劑量，這樣可以在小于24 小時(shí)的期間內(nèi)(即約半天)提供日總劑量，在當(dāng)天的剩余時(shí)間不進(jìn)行灌注。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，將4瓶(每瓶250ml) 2%的滔羅定和/或滔羅 胺溶液以每分鐘40滴的速率(每6小時(shí)一瓶)由靜脈施用于癌癥患者。通常 治療周期為進(jìn)行一周的日灌注，隨后有兩周的停頓期?？偟闹委熗ǔ＞哂兄?少兩個(gè)所述周期。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)滔羅定和/或滔羅胺的2%溶液以每個(gè)周期滴入 25-28瓶250 ml的滔羅定和/或滔羅胺的20/^溶液進(jìn)行靜脈施用時(shí)功效特別得 好。 根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方案，施用期包括以下日方案2小時(shí)內(nèi)施 用250 ml滔羅定和/或滔羅胺的2X溶液，隨后停頓4小時(shí)，并在24小時(shí)內(nèi) 重復(fù)進(jìn)行以上施用以達(dá)到總的全身日劑量。 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，施用期包括以下日方案1小時(shí)內(nèi) 灌注250ml的2X滔羅定和/或滔羅胺溶液，隨后停頓l小時(shí)，并重復(fù)以上施 用直到達(dá)到日劑量。如果總的劑量是20克(例如)，這種方案可以在7小時(shí) 的時(shí)間跨度內(nèi)通過4次灌注250 ml 2%的滔羅定來提供日劑量。在當(dāng)天的剩 余時(shí)間不進(jìn)行灌注。 在一些實(shí)施方案中，患者經(jīng)歷的給藥周期具有至少連續(xù)3天，最多 為約連續(xù)8天的施用期，在每個(gè)施用期后是約1天至約4周(如1-14天或甚 至3、 4周或更多周)的非施用期，在此期間不對(duì)患者施用羥甲基轉(zhuǎn)移劑。在 每個(gè)施用期內(nèi)，每天施用羥甲基轉(zhuǎn)移劑。例如，可以使用3、 4、 5、 6、 7和/或8天的施用期，并可以使用1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、
13和/或14天的非施用期。使用至少2個(gè)給藥周期，優(yōu)選地使用5-10個(gè)或更 多給藥周期。例如，可以使用2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或更多連續(xù)的給 藥周期。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用6個(gè)給藥周期，其中每個(gè)給藥周期具有5 天的施用期且每個(gè)施用期被2天的非施用期分開。在施用的每一天中，可以 每天4次向患者靜脈施用250 ml滔羅定和/或滔羅胺的2%溶液。
在另一實(shí)施方案中，非施用期在長(zhǎng)度上可以是1、 2、 3、 4或更多 周，如約2-4周。例如，連續(xù)的給藥周期可以具有連續(xù)3-8天(如7天)的 施用期，如每天4次灌注250 ml滔羅定的2X溶液，隨后是1、 2、 3、 4或 更多周(如3周)的非施用期。根據(jù)以上實(shí)施方案，使用至少2個(gè)給藥周期， 優(yōu)選5-10個(gè)或更多給藥周期。 液體和電解質(zhì)置換(fluid and electrolyte replacement)可以與靜脈滔羅 定和/或滔羅胺治療結(jié)合施用。 優(yōu)選以與250 ml滔羅定的2%溶液灌注平行的相同時(shí)間和相同灌注 速度施用量為250ml的全電解質(zhì)溶液。每天兩次監(jiān)測(cè)電解質(zhì)和血球計(jì)數(shù)，且 每天檢查一次中央靜脈壓。 如果觀察到高鈉血癥，首先應(yīng)該測(cè)定是否是由脫水引起的。在脫水 原因被排除之后，只有在液體被同時(shí)置換時(shí)才可使用利尿劑。
如果需要，可以清除自體骨材料和/或骨髓細(xì)胞的癌細(xì)胞，以免污染 樣品。自體骨材料和/或骨髓細(xì)胞可以來自受試者，或使用標(biāo)準(zhǔn)方法從哺乳動(dòng) 物供體得來。通過使自體骨材料和/或細(xì)胞在體外接觸羥甲基轉(zhuǎn)移劑(如滔羅 定和/或滔羅胺)對(duì)其進(jìn)行處理，以清除可造成污染的腫瘤細(xì)胞。在清洗所處 理的自體骨材料和/或細(xì)胞后，對(duì)哺乳動(dòng)物受體施用自體骨材料和/或骨髓細(xì) 胞制品。因此，經(jīng)過此種處理的干細(xì)胞可以重新組成受體的免疫系統(tǒng)。其可 以通過與使用包含羥甲基轉(zhuǎn)移劑(如滔羅定和域滔羅胺)的凝膠的治療，和 /或全身的羥甲基轉(zhuǎn)移劑(如滔羅定和/或滔羅胺)的施用相聯(lián)合來完成，如 本文所述。 羥甲基轉(zhuǎn)移劑可以單獨(dú)施用或與一種或多種其它抗腫瘤藥組合施 用。在一個(gè)實(shí)施方案中，補(bǔ)助劑通過凋亡以外的機(jī)制來殺死腫瘤細(xì)胞。例如， 在組合治療方案中施用抗代謝藥(嘌呤或嘧啶類似物)、垸化劑、交聯(lián)劑(如鉑化合物)、和插入劑、和/或抗生素。在給予包含羥甲基的藥劑前、后或同
時(shí)給予補(bǔ)助藥物。例如，羥甲基轉(zhuǎn)移劑可以與氟代嘧啶如5-氟尿嘧啶(5-FU)
共同施用。氟代嘧啶的日有效劑量的范圍可以是每個(gè)藥物劑量單位為約
0.1-1,000 mg。 5-FU的有效劑量的范圍可以是約100-5,000 mg/m"本表面積， 優(yōu)選約200-1,000 mg/n^體表面積，更優(yōu)選約500-600 mg/m2體表面積。通常 提供250 mg或500 mg瓶裝5-FU用于注射，或提供250 mg膠囊5-FU用于口服。通過以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，實(shí)施例并無意于限制本發(fā)明。 實(shí)施例1 將可食用明膠(125 g)在1%滔羅定水溶液(1250 ml)中分散約 IO分鐘，并隨后攪拌加熱至60'C。攪拌的同時(shí)將甲醛水溶液(36%， 12ml) 加入液體凝膠中。然后將混合物在6(TC攪拌10-15分鐘，并隨后將其倒入干 凈的預(yù)熱聚氯乙烯管(直徑14mm)中。將所述管過夜冷卻，切割成15mm 長(zhǎng)度并切開。隨后在1%滔羅定溶液中清洗所獲得的透明棒約4小時(shí)以便去 除過量甲醛。通過氣相色譜(GC-WLD)定量檢測(cè)甲醛，并繼續(xù)清洗直到?jīng)] 有游離甲醛擴(kuò)散到清洗水中。此方法對(duì)于游離甲醛的檢測(cè)限是0.003%。
在具有4.5 mm篩孔的Zyliss電動(dòng)切碎機(jī)中?；罅康乃霭?。
隨后將所述棒和顆粒封裝在可密封的、背襯有之前用70%的異丙醇 清洗的鋁箔的聚乙烯箔包裝中。隨后可以將其密封在類似的第二無菌包裝中。
為了形成顆粒，也可以將凝膠在更大器皿如結(jié)晶盤中成形，且可以 在冷卻后如上所述用1%的滔羅定清洗凝膠塊，并隨后在電動(dòng)切碎機(jī)中?；?。
實(shí)施例2 根據(jù)實(shí)施例1的步驟制備明膠棒，區(qū)別之處在于在凝膠形成和清洗 步驟中使用2%的滔羅定水溶液，并形成直徑是10 mm和15 mm的棒。
實(shí)施例3 重復(fù)實(shí)施例1的步驟，使用125 g比例為2: 1的明膠和原膠原的混 合物來替代明膠。原膠原衍生自動(dòng)物皮膚(小牛皮膚)，具有約130,000的分實(shí)施例4 重復(fù)實(shí)施例1的步驟，使用重量比為1: 3的膠原纖維和明膠的混 合物來替代明膠。由此得到的產(chǎn)物沒有僅使用明膠獲得的產(chǎn)物透明。向10%
的水懸液中加入膠原纖維。使用比例為1: 2的膠原纖維和明膠的混合物來制
備類似的產(chǎn)物，其中明膠的整體濃度增加至20%， 36%甲醛水溶液的量增加 至24 ml。
實(shí)施例5重復(fù)實(shí)施例1的步驟，但使用包含等滲乳酸林格氏液(0.22%乳酸、 0.6% NaCl、 0.4% KC1、 0.4% CaCl26H20;用NaOH中和至酚紅指示劑呈 橙色(pH7.0)，在120"C滅菌15分鐘)的2%滔羅定水溶液進(jìn)行清洗步驟。
在將凝膠制備成顆粒后，在無菌條件下將其與等重量的新鮮獲得的 松質(zhì)混合。
實(shí)施例6 將10g可食用明膠在包含5%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的100 ml的 2%滔羅定水溶液中攪拌30分鐘。隨后用25。X的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)至 7.0。加入lg 36/37%的甲醛水溶液，并將混合物繼續(xù)攪拌5分鐘，隨后加入 25 g的磷酸二鈣并繼續(xù)攪拌同時(shí)使溶液冷卻。 將凝膠放置至少4天(優(yōu)選4-7天)，隨后按約2 x 3 x 3 cm將其切 割成塊，并隨后使用(a) "Drainas印t" /NaCl溶液或(b)乳酸林格氏液加2 %的滔羅定溶液清洗，每次清洗進(jìn)行4小時(shí)，隨后更換溶液并將凝膠在新鮮 溶液中繼續(xù)清洗4小時(shí)。 最后用2%的滔羅定溶液清洗凝膠直到達(dá)到等滲壓。凝膠的滲透壓 如下清洗前200-400 mmol/kg，清洗后280-320 mmol/kg，由Wescor Inc.提 供的5100蒸汽壓滲壓計(jì)測(cè)定。 在切碎機(jī)中將凝膠粒化成1-2 mm粒徑的顆粒。如果需要可以將凝 膠置于勻漿器(如"Homocenta")中，并非常細(xì)碎地研磨以允許通過適合的引流管將其注入到腔中。最后，將?；哪z置于之前用異丙醇清洗過的塑 料容器中。
實(shí)施例7 將1000 ml的水溶液加熱至60°C ，并將260-280 Bloom gram的100 g可食用明膠(S.O.260)溶解在其中，所述水溶液包含2.55%的滔羅定和5 %的"Kollidon" K 17 PF (聚乙烯吡咯烷酮)，并加蒸餾水至1000 ml。用 25X的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。加入7.5 g 35%的甲醛水溶液("Merck"),并
將混合物攪拌15分鐘。將凝膠靜置7天，隨后將其在包含10%滔羅定的等 重量乳酸林格氏液中清洗9小時(shí)，隨后在新鮮溶液中清洗60小時(shí)。如前述將 凝膠?；?br> 實(shí)施例8 在60。C下將2.0 g的滔羅定溶解于94 g蒸餾水中，隨后冷卻至室溫， 加入1.5 g的乳酸(約91。％)，并用25X氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至7.0。加 入0.024 g的氯化鉀、0.024 g的六水合氯化鈣和0.33 g的氯化鈉。將溶液加 熱至6(TC并將2 g的明膠分散在其中。用25X的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。隨 后加入0.035 g的100%甲醛，并攪拌溶液直至完全澄清。將溶液倒入灌注燒 瓶(250 ml)中并在12(TC下用高壓滅菌20分鐘。
實(shí)施例9 將4.0 g的滔羅定溶解在100 g的蒸餾水中并通過攪拌分散10 g的 明膠。用25X的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。將溶液加熱至60。C并持續(xù)10-15分 鐘，并將其倒入預(yù)熱的聚氯乙烯管(直徑14mm)中。使管靜置數(shù)天并隨后 切開。發(fā)現(xiàn)所獲得透明棒具有的堅(jiān)固性與使用甲醛交聯(lián)所獲得凝膠的堅(jiān)固性 相似。檢測(cè)到少量的taurinamide，這是滔羅定進(jìn)行羥甲基轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。
實(shí)施例10使用4.75 g滔羅定和5 g PVP重復(fù)實(shí)施例8。實(shí)施例11 以50、 100和200 pM的滔羅定濃度檢測(cè)滔羅定對(duì)10種骨肉瘤細(xì)胞 系的作用。所述細(xì)胞系是SAOS-2(HTB-85)、 U20S (HTB-96)、 HOS、 143B、 LM5、 Hu09WT、 Hu09H3、 Hu09L13、 MG-63和MG-63 M8。滔羅定抑制 了所有受測(cè)的骨肉瘤細(xì)胞系。利用滔羅定的抑制導(dǎo)致凋亡細(xì)胞呈劑量依賴性 增加，且凋亡是caspase依賴性的。滔羅定對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系具有強(qiáng)的抗腫瘤 活性。
實(shí)施例12 治療方案 使用Taurolin (Geistlich AG) Gel (4%的滔羅定細(xì)小顆粒)治療整形 外科患者。通過清創(chuàng)術(shù)治療大量患有骨肉瘤的患者以除去骨腫瘤，并用混有 自體松質(zhì)或Bio-Oss (Geistlich AG)的Taurolin -Gel和多個(gè)引流管填充空腔。 未觀察到骨肉瘤復(fù)發(fā)。
濃度 凝膠制劑中滔羅定的濃度是4%， 一半溶解在水的液相中，另一半 作為細(xì)小晶體分散在凝膠中。
顆粒的大小Taurolin Gel顆粒的粒徑是約1.5-2 mm (直徑)。
權(quán)利要求
1、一種治療方法，用于治療、至少部分預(yù)防、抑制或降低受試者骨腫瘤的生長(zhǎng)，其包括至少部分地去除受試者骨腫瘤，以及將與腫瘤至少部分被去除區(qū)域相鄰的骨區(qū)域與包含抑制腫瘤生長(zhǎng)的羥甲基轉(zhuǎn)移劑的凝膠相接觸。
2、 權(quán)利要求l的方法，其中所述凝膠是可再吸收的。
3、 權(quán)利要求l的方法，其中所述凝膠是包含交聯(lián)纖維狀蛋白的含水凝膠。
4、 權(quán)利要求1的方法，其中所述凝膠包括明膠。
5、 權(quán)利要求4的方法，其中所述凝膠是至少部分交聯(lián)的。
6、 權(quán)利要求l的方法，其中所述羥甲基轉(zhuǎn)移劑包括滔羅定、滔羅胺、其 混合物、或其平衡物。
7、 權(quán)利要求6的方法，其中所述羥甲基轉(zhuǎn)移劑在所述凝膠中的濃度是約 0.5-5重量％。
8、 權(quán)利要求7的方法，其中所述濃度是約1-4%。
9、 權(quán)利要求7的方法，其中所述濃度是約2-4%。
10、 權(quán)利要求7的方法，其中，在所述凝膠中，溶解的羥甲基轉(zhuǎn)移劑的 濃度是約2-3%，晶狀羥甲基轉(zhuǎn)移劑的濃度是約1-2%。
11、 權(quán)利要求l的方法，其中所述凝膠包括顆粒。
12、 權(quán)利要求ll的方法，其中所述顆粒的粒徑范圍在約l-10mm內(nèi)。
13、 權(quán)利要求12的方法，其中所述粒徑是約1.5-5 mm。
14、 權(quán)利要求l的方法，其中所述凝膠是成形的固體形式。
15、 權(quán)利要求14的方法，其中所述成形的固體是棒狀。
16、 權(quán)利要求l的方法，其中所述區(qū)域是所述骨內(nèi)的空腔，將所述凝膠 與自體骨材料、人工骨礦物質(zhì)、天然骨礦物質(zhì)或其組合混合，并將由此形成 的混合物填入所述空腔中。
17、 權(quán)利要求1的方法，其還包括在與所述區(qū)域接觸前，將骨髓細(xì)胞與 所述凝膠混合。
18、 權(quán)利要求l的方法，其中所述區(qū)域是所述骨內(nèi)的空腔，在至少部分 地去除所述腫瘤后將所述凝膠填入所述空腔，可以在受試者體內(nèi)安裝從空腔導(dǎo)向受試者體外的引流管，并通過手術(shù)將空腔閉合。
19、 權(quán)利要求18的方法，其還包括通過所述引流管向所述空腔內(nèi)灌輸額 外的所述凝膠。
20、 權(quán)利要求1的方法，其中所述腫瘤是肉瘤。
21、 權(quán)利要求l的方法，其中所述腫瘤是骨肉瘤。
全文摘要
一種治療方法，用于治療、至少部分預(yù)防、抑制或降低受試者中骨腫瘤的生長(zhǎng)，該方法包括從受試者中至少部分地去除骨腫瘤，以及將與腫瘤至少部分去除的區(qū)域相鄰的骨區(qū)域與包含抑制腫瘤生長(zhǎng)的羥甲基轉(zhuǎn)移劑的凝膠相接觸。
文檔編號(hào)A61K9/00GK101528195SQ200780033237
公開日2009年9月9日 申請(qǐng)日期2007年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月7日
發(fā)明者羅爾夫·W·普菲爾曼 申請(qǐng)人:埃德蓋斯特利希索恩化學(xué)工業(yè)股份公司