專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種保健食品，具體說(shuō)是一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品及其制備方法。
背景技術(shù)：
在當(dāng)今社會(huì)，由于生產(chǎn)力快速提高，生活節(jié)奏日益加快，人們面對(duì)各方面的壓力也與日俱增，許多處于亞健康狀態(tài)的人群，由于工作強(qiáng)度加大，逐漸產(chǎn)生供氧不足的現(xiàn)象。隨著科技的發(fā)展，高層建筑日益增多，特別是在寫(xiě)字樓工作的人們，由于寫(xiě)字樓比較密閉，給氧相對(duì)不足，會(huì)經(jīng)常出現(xiàn)頭暈、耳鳴、倦怠乏力、胸悶等癥狀，容易引起嗜睡、注意力不集中。學(xué)生在教室上課，經(jīng)常感覺(jué)悶，愛(ài)打瞌睡，最主要的原因是教室內(nèi)人多，呼出大量的二氧化碳不能及時(shí)排出室外，而氧的供給又相對(duì)不足。怎樣提高學(xué)生上課的注意力，是許多家長(zhǎng)及教育工作者當(dāng)前的一項(xiàng)重要課題。
高空作業(yè)者、礦井工作者、體育運(yùn)動(dòng)者等也都是屬于缺氧的人群。此外，處于高原地區(qū)的人群或到高原地區(qū)旅游的人士，也可能會(huì)遇到乏氧的各種情況。
當(dāng)氧缺乏時(shí)，人的免疫能力也會(huì)迅速下降，對(duì)人體健康產(chǎn)生極為不利的影響。
目前尚沒(méi)有一種能夠用于耐缺氧和增強(qiáng)免疫力，并且安全可靠、無(wú)毒副作用的保健食品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足，提供一種用于耐缺氧和增強(qiáng)免疫力的保健食品。
本發(fā)明的保健食品是從祖國(guó)醫(yī)藥寶庫(kù)中篩選出的純天然原料人參果、紅景天、小麥胚芽油等為原料，參考現(xiàn)代藥理研究成果，按中醫(yī)理論科學(xué)組方增強(qiáng)其協(xié)同作用，并經(jīng)特殊工藝提取有效成分后精制而成，達(dá)到增強(qiáng)免疫力和提高缺氧耐受力的目的。
人參果為五加科植物人參(Panax gineng C.A.Meyer)的成熟果實(shí)，其主要成分為人參皂苷、多糖、生物堿及鐵、鎂、鋅、鉀等多種無(wú)機(jī)元素。
在增強(qiáng)免疫力方面，人參果能明顯增強(qiáng)小鼠外周血中性粒細(xì)胞吞噬指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)、PHA所致淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率及外周血中性粒細(xì)胞數(shù)量，具有顯著的增強(qiáng)免疫功能。
在提高缺氧耐受力方面，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明人參果總皂苷有促進(jìn)乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞DNA作用，對(duì)缺糖缺氧培養(yǎng)的缺氧性損傷的心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)還表明，人參果皂苷對(duì)皮下注射異丙腎上腺素縮短小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間均具有明顯對(duì)抗作用。
高山紅景天又名紅景天、庫(kù)葉紅景天，為景天科紅景天屬多年生草本植物，是長(zhǎng)白山珍稀藥用植物之一。其主要成分為紅景天甙、甙元酪醇以及黃酮等，此外還含有十八種氨基酸和鈣、鎂、錳等多種無(wú)機(jī)元素。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，高山紅景天有廣泛的藥理及營(yíng)養(yǎng)保健作用，且安全無(wú)毒，現(xiàn)已被廣泛用于保健食品的配制。
在增強(qiáng)免疫力方面，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明高山紅景天能夠增加小鼠免疫器官重量，并能明顯增強(qiáng)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能；能夠提高小鼠血清素水平，增強(qiáng)小鼠單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能；其含有的紅景天甙能夠增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，并能增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞殺傷Hca-F肝癌細(xì)胞的能力。此外，紅景天還能明顯促進(jìn)以雞紅細(xì)胞為免疫原小鼠抗體產(chǎn)生。
在提高缺氧耐受力方面，實(shí)驗(yàn)證明高山紅景天可明顯延長(zhǎng)常壓乏氧小鼠生存時(shí)間；經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還表明其醇提物對(duì)腦缺氧過(guò)程、心肌缺氧及組織中毒性缺氧均具有顯著的保護(hù)作用。此外，紅景天對(duì)缺氧所致膈肌細(xì)胞損傷也具有明顯的保護(hù)作用。
小麥胚芽油是以小麥胚芽為原料制取的一種谷物胚芽油。其主要含有豐富的不飽和脂肪酸、維生素E和廿八碳醇。因其特有生理功能，近年來(lái)備受歐洲各國(guó)及美、日等國(guó)消費(fèi)者青睞，譽(yù)之“長(zhǎng)壽維他命寶庫(kù)”、“防老抗衰”營(yíng)養(yǎng)食品。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究顯示小麥胚芽油能夠增強(qiáng)家兔單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能，提高機(jī)體免疫力；實(shí)驗(yàn)還表明，小麥胚芽油還具有非常明顯的抗疲勞作用，其所含的廿八碳醇能夠增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)的耐力，改善心肌功能，對(duì)提高機(jī)體耐缺氧能力具有較大的益處。
此外，小麥胚芽油中天然維生素E的存在提高了小麥胚芽油的安全性和穩(wěn)定性，可起到抗氧化作用。
本發(fā)明的保健食品，它是由下述重量份的原料制成的人參果20-60份、紅景天20-50份、小麥胚芽油10-40份。
本發(fā)明的保健食品可采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內(nèi)服制劑。
本發(fā)明的另一目的是提供這種保健食品的制備方法。
將上述各組分原料制成本發(fā)明的保健食品的制備方法，包括下述步驟(1)選取符合技術(shù)要求的人參果、紅景天、小麥胚芽油，備用；(2)將所述重量份的人參果，加入4-7倍重量的50-80％乙醇，提取3-8次，每次提取0.5-2小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得人參果提取物；(3)將所述重量份的紅景天，加入3-10倍重量的30-70％乙醇，提取2-3次，每次提取1-3小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得紅景天提取物；(4)將所述重量份的小麥胚芽油與(2)所得人參果提取物和(3)所得紅景天提取物，混合均勻，即得。
本發(fā)明的保健食品可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料制成任何一種常用口服劑型，如軟膠囊、硬軟囊、顆粒劑、片劑、口服液等。
本發(fā)明的保健食品經(jīng)功效實(shí)驗(yàn)、毒理實(shí)驗(yàn)及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，其作用顯著、無(wú)毒、穩(wěn)定性好，經(jīng)多數(shù)人服用證實(shí)具有很好的提高缺氧耐受力和增強(qiáng)免疫力作用，并易被人體吸收，可長(zhǎng)期服用。具有配方獨(dú)特、組方合理、功能顯著、安全可靠、吸收迅速、服用劑量小、制備方法完備成熟，生物利用度高等特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例和試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明并不限于實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員以本發(fā)明技術(shù)方案作某些修改，仍在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1-5本發(fā)明的保健食品軟膠囊的制備各實(shí)施例中各原料的重量配比見(jiàn)表1。
表1

制備本發(fā)明的保健食品軟膠囊所用輔料(助懸劑)可選用下述重量份的原料蜂蠟0.2-2份。
制備本發(fā)明的保健食品軟膠囊所用囊材的原料重量配比可為明膠1份；甘油0.2-0.6份；水1份。
其制備方法是(以實(shí)施例3為例，其它實(shí)施例除原料用量不同外，制備方法與實(shí)施例3基本相同)(1)選取符合技術(shù)要求的人參果、紅景天、小麥胚芽油，備用。
(2)將36kg人參果放入提取罐中，加入6倍重量216kg的60％乙醇，提取3次，每次提取2小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得人參果提取物。
(3)將38kg紅景天放入提取罐中，加入8倍重量304kg的60％乙醇，提取3次，每次提取3小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得紅景天提取物。
(4)將18Kg小麥胚芽油、0.6Kg蜂蠟置于配料罐中，恒溫35℃混合攪拌后，將(2)所得人參果提取物和(3)所得紅景天提取物加入其中，繼續(xù)攪拌20-30分鐘，使物料混合均勻，100目過(guò)濾。過(guò)濾后的物料打入脫氣罐中，在恒溫35℃、壓力60-70mmHg真空下，慢速攪拌30-45分鐘以脫氣，脫氣后的物料打入保溫桶中，得軟膠囊內(nèi)容物。保溫于35℃，以利壓丸。
(5)取軟膠囊囊材配料，按常規(guī)制成軟膠囊包材。先將甘油與水放入溶膠罐中升溫至70-80℃，攪拌均勻后加入明膠，在該溫度下繼續(xù)攪拌2-3小時(shí)直至顏色均勻。將罐內(nèi)抽真空到60-70mmHg時(shí)攪拌脫氣20-30分鐘，脫氣后打入保溫桶中保溫于60℃，靜置2-3小時(shí)，以利出氣。
(6)將(5)制備的軟膠囊包材和(4)所得軟膠囊內(nèi)容物，分別抽入壓丸的兩個(gè)料斗中，調(diào)試機(jī)器直至囊皮的厚度、均勻度以及每粒膠丸的容量符合要求后，連續(xù)壓制生產(chǎn)，得本發(fā)明的保健食品軟膠囊。
各實(shí)施例中所用原料來(lái)源及技術(shù)指標(biāo)人參果、紅景天市購(gòu)，各原料均應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2005年版一部規(guī)定的質(zhì)量要求。
小麥胚芽油徐州愛(ài)普生物工程公司生產(chǎn)，符合Q/320307XAC01-2001規(guī)定技術(shù)要求。
經(jīng)檢測(cè)按實(shí)施例1-5制成的軟膠囊，每粒凈含量0.5g，每粒含總皂苷不少于27.5mg，紅景天苷不少于2.29mg，其它各項(xiàng)指標(biāo)均符合國(guó)家關(guān)于保健食品的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
食用方法口服，每日2次，每次2粒。
試驗(yàn)例1本發(fā)明的保健食品的提高缺氧耐受力功能檢驗(yàn)為考查本發(fā)明的保健食品的提高缺氧耐受力功能，將實(shí)施例3所得0.5 g/粒的1kg本發(fā)明的保健食品軟膠囊(以下簡(jiǎn)稱(chēng)軟膠囊)送山東省疾病預(yù)防控制中心，依據(jù)衛(wèi)法監(jiān)發(fā) 42號(hào)《保健食品檢驗(yàn)評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中提高缺氧耐受力功能檢驗(yàn)方法，檢驗(yàn)其提高缺氧耐受力功能。檢驗(yàn)報(bào)告如下1.材料和方法1.1樣品樣品內(nèi)容物為棕褐色液體。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，健康雌性ICR小鼠。
1.3劑量選擇軟膠囊的人體推薦量為每日2.0g/60kg體重，即0.33g/kg體重，擴(kuò)大10倍作為小鼠的中劑量組，即0.33g/kg體重，再設(shè)兩個(gè)劑量組為0.17g/kg體重和1.0g/kg體重(分別為人體推薦量的5倍和30倍)。各劑量組都以植物油配至相應(yīng)濃度，溶劑對(duì)照組灌胃植物油，按每天0.1ml/10g體重經(jīng)口灌胃小鼠。
1.4儀器與試劑250ml磨口廣口瓶、秒表、1ml注射器(刻度0.01ml)、剪刀、凡士林、亞硝酸鈉1.5實(shí)驗(yàn)方法1.5.1常壓耐缺氧試驗(yàn)取正常成年雌性小鼠，體重18-22g，隨機(jī)分為四組，分別為溶劑對(duì)照組和三個(gè)劑量組，各組按0.1ml/10g體重灌胃小鼠，連續(xù)灌胃30天后，于末次灌胃后1h，各組小鼠分別放入250 ml磨口廣口瓶?jī)?nèi)(每瓶1只)，用凡士林封瓶口，蓋嚴(yán)，使之不漏氣，立即計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察小鼠因缺氧而死亡時(shí)間。
1.5.2亞硝酸鈉中毒試驗(yàn)取正常成年雌性小鼠，體重18-22g，隨機(jī)分為四組，分別為溶劑對(duì)照組和三個(gè)劑量組，各組按0.1ml/10g體重灌胃小鼠，連續(xù)灌胃30天后，于末次灌胃后1h，各組動(dòng)物按220mg/kg(0.1ml/10g體重)腹腔注射亞硝酸鈉，立即計(jì)時(shí)，記錄動(dòng)物存活時(shí)間。
1.5.3急性腦缺血缺氧試驗(yàn)取體重18-22g的正常成年雌性小鼠，隨機(jī)分為四組，分別為溶劑對(duì)照組和三個(gè)劑量組，各組按0.1ml/10g體重灌胃小鼠，連續(xù)灌胃30天后，于末次灌胃后1h，各組動(dòng)物自頸部逐只斷頭，立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時(shí)間。
1.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法(Dunnett檢驗(yàn)法)進(jìn)行檢驗(yàn)。
2.結(jié)果2.1軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響，見(jiàn)試1表1-試1表3。
試1表1常壓耐缺氧試驗(yàn)小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重(g)

試1表2亞硝酸鈉中毒試驗(yàn)小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重(g)

試1表3急性腦缺血性缺氧試驗(yàn)小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重

由試1表1、試1表2、試1表3可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)前后各組小鼠的體重?zé)o顯著性差異(P＞0.05)。
2.2軟膠囊對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響，見(jiàn)試1表4。
由試1表4可見(jiàn)，不能延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間，各劑量組與溶劑照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
2.3軟膠囊對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響，見(jiàn)試1表5。
由試1表5可見(jiàn)，軟膠囊能延長(zhǎng)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間，高劑量組與溶劑對(duì)照組比較，有顯著性差異(P＜0.05)。
試1表4軟膠囊對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響

試1表5對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響

2.4軟膠囊對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間的影響，見(jiàn)試1表6。
由試1表6可見(jiàn)，軟膠囊能延長(zhǎng)急性腦缺血性缺氧小鼠的耐缺氧時(shí)間，各劑量組與溶劑對(duì)照組比較，均有顯著性差異(P＜0.05)。
試1表6軟膠囊對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間的影響

3.結(jié)論以0.17、0.33、1.0g/kg體重劑量的軟膠囊灌胃30天1、能延長(zhǎng)急性腦缺血性缺氧小鼠的耐缺氧時(shí)間，各劑量組與溶劑對(duì)照組比較均有顯著性差異P＜0.05；2、能延長(zhǎng)亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間，高劑量組與溶劑對(duì)照組比較有顯著性差異P＜0.05，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明的保健食品軟膠囊具有提高缺氧耐受力功能。
試驗(yàn)例2本發(fā)明的保健食品的增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)為考查本發(fā)明的保健食品的增強(qiáng)免疫力功能，將實(shí)施例3所得0.5g/粒的1kg本發(fā)明的保健食品軟膠囊(以下簡(jiǎn)稱(chēng)軟膠囊)送山東省疾病預(yù)防控制中心，依據(jù)衛(wèi)法監(jiān)發(fā)(2003)42號(hào)《保健食品檢驗(yàn)評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中功能學(xué)評(píng)價(jià)及檢驗(yàn)方法，檢驗(yàn)其增強(qiáng)免疫力功能。檢驗(yàn)報(bào)告如下1.材料與方法1.1樣品樣品內(nèi)容物為棕褐色液體。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司繁殖的SPF級(jí)ICR雌性小鼠，體重18-22g，共192只，分為四組，免疫一組進(jìn)行臟器/體重比值、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、抗體生成細(xì)胞檢測(cè)及血清溶血素測(cè)定；免疫二組進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)；免疫三組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；免疫四組進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)。
1.3劑量選擇軟膠囊人體推薦量為每天2g/60kg體重，實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組，即0.17g/kg體重組、0.33g/kg體重組、1.00g/kg體重組，低、中、高三個(gè)組的劑量分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍。用植物油將樣品配至所需濃度，即取0.34g(低)、0.66g(中)、2.00g(高)樣品用植物油配至20ml，同時(shí)設(shè)立油對(duì)照組，按每天0.1ml/10g體重經(jīng)口灌胃30天后，測(cè)各項(xiàng)免疫指標(biāo)。
1.4儀器與試劑紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、電子天平、數(shù)顯游標(biāo)卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(50μl)、CO2培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、顯微鏡、玻片架、200目篩網(wǎng)、手術(shù)器械、秒表、一次性定量取血管、24孔和96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
SRBC、補(bǔ)體(豚鼠血清)、Hanks液、SA緩沖液、瓊脂糖、印度墨汁、Na2CO3溶液、都式試劑、YAC-1細(xì)胞、RPMI1640完全培養(yǎng)液、乳酸鋰、INT、PMS、NAD、0.20mol/Ltris-HCL緩沖液、1％NP40、ConA、1％冰醋酸、MTT液、酸性異丙醇、1mol/L HCL溶液、PBS緩沖液、Giemsa染液等。
1.5實(shí)驗(yàn)方法1.5.1遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法)小鼠腹腔注射2％(V/V)SRBC，致敏后4天測(cè)量左后足跖厚度，然后在測(cè)量部位皮下注射20％(V/V)SRBC，每鼠注射20μl，注射后24小時(shí)測(cè)量左后足跖部厚度，同一部位測(cè)量三次，取均值。以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來(lái)表示DTH的程度。
1.5.2ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)無(wú)菌取脾，制備脾細(xì)胞懸液，用Hanks液洗2次，每次離心10min(1000r/min)，將細(xì)胞懸浮于1ml RPMI 1640完全培養(yǎng)液中，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106個(gè)/ml。將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加入75μl ConA液，另一孔作為對(duì)照，置5％CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí)，每孔吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT 50μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打均勻使紫色結(jié)晶完全溶解，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，以加ConA孔的OD值減去不加ConA孔的OD值表示淋巴細(xì)胞增殖能力。
1.5.3小鼠臟器/體重比值及血清溶血素測(cè)定小鼠腹腔注射SRBC五天后，摘眼球取血，離心取血清稀釋200倍，進(jìn)行半數(shù)溶血值測(cè)定。然后處死動(dòng)物，取胸腺、脾臟稱(chēng)重，計(jì)算臟器/體重比值。同時(shí)制備細(xì)胞懸液，進(jìn)行抗體生成細(xì)胞測(cè)定。
1.5.4抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jerne改良玻片法)取脾，制成細(xì)胞懸液。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后與等量雙倍Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5 ml，再向管內(nèi)加50μl 10％SRBC(v/v，用SA液配制)、20μl脾細(xì)胞懸液，迅速混勻后，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在玻片架上，放入CO2培養(yǎng)箱溫育1.5h后，然后用SA液稀釋的補(bǔ)體(1∶8)加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。
1.5.5小鼠碳廓清試驗(yàn)小鼠尾靜脈注射1∶3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入立即計(jì)時(shí)，注入墨汁后2、10min，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20μl，并將其加到2ml Na2CO3溶液中，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處以Na2CO3溶液作空白對(duì)照測(cè)光密度值(OD)。將小鼠處死，取肝和脾臟稱(chēng)重，計(jì)算吞噬指數(shù)。
吞噬指數(shù)a＝結(jié)束體重×K1/3/(肝重+脾重)K＝(log OD1-logOD2)/(t2-t1)1.5.6小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)小鼠腹腔注射20％雞紅細(xì)胞懸液1ml，間隔30分鐘處死固定于鼠板上，剪開(kāi)腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃溫育30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，Giemsa染液染色10分鐘，用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)。
吞噬指數(shù)＝被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)1.5.7NK細(xì)胞活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)將靶細(xì)胞傳代培養(yǎng)，應(yīng)用前以Hanks液洗3次，用RPMI 1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個(gè)/ml。小鼠頸椎脫臼處死，無(wú)菌取脾，制備脾細(xì)胞懸液，用Hanks液洗2次，每次離心10min(1000r/min)。棄上清將細(xì)胞漿彈起，加入0.5ml滅菌水裂解紅細(xì)胞，20秒后再加入0.5ml 2倍Hanks液及8ml Hanks液，離心10min(1000r/min)，用1ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸，用1％冰醋酸稀釋后計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/ml。將靶細(xì)胞加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl ，試驗(yàn)孔加入100μl脾細(xì)胞(效靶化50∶1)，自然釋放孔加入100μl培養(yǎng)液，最大釋放孔加入100μl 1％NP40，37℃培養(yǎng)4小時(shí)，離心，取上清100μl置96孔酶標(biāo)板中，加入LDH基質(zhì)液100μl ，反應(yīng)3分鐘，以1mol/L的HCl終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)定OD值。

1.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，再用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法(Dunnett檢驗(yàn)法)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2.結(jié)果2.1軟膠囊對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響，見(jiàn)試2表1。
試2表1軟膠囊對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響

由試2表1可見(jiàn)，中、高劑量組小鼠的足跖腫脹度與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)。
2.2軟膠囊對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的影響，見(jiàn)試2表2。
試2表2軟膠囊對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的影響

由試2表2可見(jiàn)，低、中、高三個(gè)劑量組小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖能力與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
2.3軟膠囊對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響，見(jiàn)試2表3。
由試2表3可見(jiàn)，低、中、高三個(gè)劑量組小鼠的脾臟/體重比值和胸腺/體重比值與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
2.4軟膠囊對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響，見(jiàn)試2表4。
由試2表4可見(jiàn)，低、中、高三個(gè)劑量組小鼠的抗體生成細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
試2表3軟膠囊對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響

試2表4軟膠囊對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響

2.5軟膠囊對(duì)小鼠血清溶血素的影響，見(jiàn)試2表5。
試2表5軟膠囊對(duì)小鼠血清溶血素的影響

由試2表5可見(jiàn)，低、中、高三個(gè)劑量組小鼠的血清溶血素水平與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
2.6軟膠囊對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，見(jiàn)試2表6。
由試2表6可見(jiàn)，低劑量組小鼠的單核-巨噬細(xì)胞碳廓清吞噬指數(shù)與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。
2.7軟較囊對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響，見(jiàn)試2表7。
由試2表7可見(jiàn)，高劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，中、高劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01、P＜0.05)。
試2表6軟膠囊對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

試2表7軟較囊對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響

2.8軟膠囊對(duì)小鼠NK細(xì)胞恬性的影響，見(jiàn)試2表8。
試2表8軟膠囊對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響

由試2表8可見(jiàn)，三個(gè)劑量組小鼠的NK細(xì)胞活性與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
試2表9軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響

試2表10各組小鼠的中期體重

試2表11各組小鼠的末期體重

試2表12軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響

2.9軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響，見(jiàn)試2表9、試2表10、，試2表11、試2表12。
由試2表9可見(jiàn)，小鼠的初始體重在低、中、高劑量組和對(duì)照組之間比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，即小鼠的初始體重在各組之間較為均衡。
由試2表12可見(jiàn)，各組小鼠的體重增加值與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
3.結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，軟膠囊能提高小鼠的足跖腫脹度，能提高單核-巨噬細(xì)胞碳廓清指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率指數(shù)；對(duì)小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖能力、抗體生成細(xì)胞數(shù)、血清溶血素水平、NK細(xì)胞活性及脾臟/體重比值和胸腺/體重比值無(wú)明顯影響。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》判定標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的保健食品軟膠囊具有增強(qiáng)免疫力的作用。
權(quán)利要求
1.一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品，其特征在于它是由下列重量份的原料，人參果20-60份、紅景天20-50份、小麥胚芽油10-40份，并按下述方法制成，(1)將所述重量份的人參果，加入4-7倍重量的50-80％乙醇，提取3-8次，每次提取0.5-2小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得人參果提取物；(2)將所述重量份的紅景天，加入3-10倍重量的30-70％乙醇，提取2-3次，每次提取1-3小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得紅景天提取物；(3)將所述重量份的小麥胚芽油與(2)所得人參果提取物和(3)所得紅景天提取物，混合均勻，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品，其特征在于所說(shuō)的保健食品可制成軟膠囊、硬膠囊、顆粒劑、片劑或口服液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品軟膠囊，其特征在于制備軟膠囊所用的輔料是下述重量份的原料蜂蠟0.2-2份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品軟膠囊，其特征在于制備軟膠囊所用囊材的原料重量配比為明膠1份；甘油0.2-0.6份；水1份。
5.如權(quán)利要求1所述的一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品的制備方法，其特征在于制備方法包括下述步驟(1)將所述重量份的人參果，加入4-7倍重量的50-80％乙醇，提取3-8次，每次提取0.5-2小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得人參果提取物；(2)將所述重量份的紅景天，加入3-10倍重量的30-70％乙醇，提取2-3次，每次提取1-3小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮，得紅景天提取物；(3)將所述重量份的小麥胚芽油與(2)所得人參果提取物和(3)所得紅景天提取物，混合均勻，即得。
全文摘要
一種用于耐缺氧、增強(qiáng)免疫力的保健食品及其制備方法，由人參果20－60、紅景天20－50、小麥胚芽油10－40重量份的原料，并將人參果、紅景天經(jīng)醇提減壓濃縮制得人參果、紅景天提取物，再與小麥胚芽油混合均勻后，按常規(guī)方法制成軟膠囊、硬膠囊、顆粒劑、片劑或口服液等。本發(fā)明的保健食品經(jīng)功效實(shí)驗(yàn)、毒理實(shí)驗(yàn)及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，其作用顯著、無(wú)毒、穩(wěn)定性好，經(jīng)多數(shù)人服用證實(shí)具有很好的提高缺氧耐受力和增強(qiáng)免疫力作用，并易被人體吸收，可長(zhǎng)期服用。具有配方獨(dú)特、組方合理、功能顯著、安全可靠、吸收迅速、服用劑量小、制備方法完備成熟，生物利用度高等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P37/00GK101015345SQ20071005526
公開(kāi)日2007年8月15日 申請(qǐng)日期2007年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月19日
發(fā)明者杜麗華, 徐道田, 金順姬, 劉志成, 王波 申請(qǐng)人:東北虎藥業(yè)股份有限公司