專利名稱：：陽離子表面活性劑的抗病毒用途的制作方法陽離子表面活性劑的抗病毒用途本發(fā)明申請(qǐng)涉及陽離子表面活性劑的新用途。陽離子表面活性劑在現(xiàn)有技術(shù)中公知具有多種不同的用途。由月桂酸和精氨酸衍生得到的陽離子表面活性劑，特別是精氨酸單鹽酸鹽的月桂酰胺的乙基酯，后文命名為L(zhǎng)AE，可用于對(duì)抗微生物生長(zhǎng)的保護(hù)。LAE的化學(xué)結(jié)構(gòu)示于下式(1):〇Cl該產(chǎn)物的制備已經(jīng)描述于西班牙專利申請(qǐng)ES-A-512643。已經(jīng)研究了上式(1)的陽離子表面活性劑在大鼠中的代謝，這些研究顯示出快速吸收和代謝成天然存在的氨基酸和脂肪酸月桂酸，這些最終作為二氧化碳和尿素被排泌。毒理學(xué)研究表明，LAE對(duì)動(dòng)物和人類完全無害。因此，LAE和相關(guān)化合物特別適合被用于保存所有易于腐爛的食物產(chǎn)品。LAE和相關(guān)化合物同樣適用于化妝品中。該化合物對(duì)不同微生物的增殖有顯著抑制作用，例如細(xì)菌、真菌和酵母菌。LAE的最小抑制濃度示于下表1。4表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本發(fā)明的用途涉及下式(2)的陽離子表面活性劑，所述表面活性劑由脂肪酸和酯化的氨基二羧酸縮合得到,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中X—是Br—、Cl_、HS04—、從有機(jī)或無機(jī)酸得到的相反離子、或者以酚類化合物為基礎(chǔ)的陰離子；R1:是線性烷基鏈，來自通過酰胺鍵(amidicbond)與a-氨基酸基團(tuán)鍵合的8至14個(gè)碳原子飽和脂肪或羥基酸；R2是1至18個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基鏈或者是芳香基；R3:是—NH3N'H2-NH~(<:NH、\、\、NH和n可以是從0到4?？梢允窍喾措x子X—的來源的有機(jī)酸是檸檬酸、乳酸、乙酸、富馬酸、馬來酸、葡萄糖酸、丙酸、山梨酸、苯甲酸、碳酸、谷氨酸或其他氨基酸、月桂酸和脂肪酸例如油酸和亞油酸，而無機(jī)酸是磷酸、硝酸和硫氰酸?？梢允顷庪x子X—的基礎(chǔ)的酚類化合物是例如丁基化羥基茴香醚(BHA)和相關(guān)的丁基化羥基甲苯，叔丁基氫醌和對(duì)羥基苯甲酸酯例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和對(duì)羥基苯甲酸丁酯。以上化合物類別中最優(yōu)選的化合物是LAE。優(yōu)選在化合物使用前將其直接溶解在以下優(yōu)選的食品級(jí)溶劑之一水、乙醇、丙二醇、異丙醇、其他二醇、二醇的混合物以及二醇和水的混合物。如果治療應(yīng)該在特定pH值下進(jìn)行，則可推薦使用相應(yīng)的緩沖溶液。在另一方面，該化合物容易作為固體使用。應(yīng)由固體制劑保護(hù)的表面是，例如，食品或化妝品的表面。對(duì)上式(2)的陽離子表面活性劑而言，對(duì)其他微生物例如真菌和酵母菌的抗菌活性和生物活性已被明確記錄。陽離子防腐劑的抗病毒活性尚無記載。治療病毒感染的安全和有效的產(chǎn)品是急切并持久需要的。病毒感染的全球爆發(fā)顯示出了有效治療的復(fù)雜性。近期，禽流感的爆發(fā)導(dǎo)致迫切尋求最優(yōu)的工具來限制疾病的傳播。禽類流行性感冒(Avianinfluenza),目前也稱為禽流感(avianflu)，是一種流感A病毒導(dǎo)致的鳥類疾病，基本上是凝血素亞型H5或H7，其屬于正粘病毒科(CW/zo附y(tǒng);cov/〃'^^)。在相同的病毒組內(nèi)，發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致被稱為流行性感冒或流感的呼吸疾病的病毒。副流感病毒，屬于副粘病毒科(尸wamyxov/nW"e)的副粘病毒科亞科，包括影響人和動(dòng)物的病毒。病毒粒子直徑為150nm，多形性，具有從宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜衍生出的脂質(zhì)被膜，并具有長(zhǎng)度為10-14nm的凸出。它的基因組含有7-8個(gè)片段的線性、負(fù)義、單鏈RNA，導(dǎo)致基因組大小為10,000至14，600個(gè)核苷酸。此外，副粘病毒科和正粘病毒科就被膜糖蛋白的生物性質(zhì)而言享有特殊的關(guān)系。如下表2所見，副粘病毒科和正粘病毒科在他們的糖蛋白、脂質(zhì)和碳水化合物含量上沒有顯示出重大差異。7表2副粘病毒科和正粘病毒科族成員的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和碳水化合物含旦里。含量(％)副粘病毒科正粘病毒科蛋白質(zhì)70—7470-77脂質(zhì)20—2518—17碳水化合物65—8最初選定術(shù)語副流感是因?yàn)槟承┘膊“Y狀和流感高度類似，并且這兩種病毒類型均顯示出血凝作用和神經(jīng)氨酸酶活性。流感病毒和副流感病毒對(duì)外部影響，例如熱，顯示出相同的敏感性。在現(xiàn)有技術(shù)中相信，副流感病毒是很好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停脕泶_定試驗(yàn)化合物的生物活性。本發(fā)明人所作的研究得到意想不到的結(jié)果，即上式(2)的陽離子表面活性劑顯示出令人驚奇的、顯著的強(qiáng)抗病毒活性。迄今為止，這類化合物已知其抗微生物作用，但沒有預(yù)料到抗病毒作用。能夠觀察到針對(duì)牛痘、單純性皰疹和牛副流感病毒類型的抗病毒活性。對(duì)皰疹和牛副流感病毒類型的作用特別強(qiáng)，在這些類型中，很短的5分鐘接觸時(shí)間就足以實(shí)現(xiàn)最大的效應(yīng)。這可以被認(rèn)為是本發(fā)明特別出人意料的方面，即這樣短的時(shí)間之后就達(dá)到抗病毒的效應(yīng)。在病毒類型之間具有相似性，所述病毒類型顯示出對(duì)陽離子表面活性劑的抗病毒活性最為敏感，例如牛痘、單純性皰疹和牛副流感病毒類型和病毒諸如AIDS的導(dǎo)致因素——腺病毒。本發(fā)明人所研究過的陽離子表面活性劑被發(fā)現(xiàn)也對(duì)人類免疫缺陷病毒I有效。8本發(fā)明涉及式(2)的陽離子表面活性劑在處理任何種類受病毒污染影響的產(chǎn)品中的用途。這些產(chǎn)品可以是例如溫?zé)岬谋P子或者溫?zé)岬囊后w。待處理的產(chǎn)品可以是任何種類的用于處理病毒感染動(dòng)物的設(shè)備。在更廣的含義上，待處理的產(chǎn)品可以是容納動(dòng)物的設(shè)施，或者自然環(huán)境的一部分，例如地表或者水庫。本發(fā)明還涉及將式(2)的陽離子表面活性劑直接施用于動(dòng)物或人類，用于預(yù)防性或治療性處理病毒疾病。式(2)的陽離子表面活性劑可以作為溶液使用。這是一種處理地面、車輛和人的表面的合適方式。對(duì)于其他的用途，更合適的是將陽離子表面活性劑作為固體應(yīng)用，該固體可以同樣有效。處理產(chǎn)品以避免任何種類的病毒感染，包括式(2)陽離子表面活性劑的存在濃度，更具體的是根據(jù)優(yōu)選的LAE的實(shí)施方案，是待保護(hù)產(chǎn)品的約2至20,000ppm，優(yōu)選濃度為100至10,000ppm，和更優(yōu)選200至2,000ppm。這個(gè)濃度與已經(jīng)描述過的實(shí)現(xiàn)微生物作用的濃度相類似。將以上述范圍濃度的陽離子表面活性劑處理的產(chǎn)品是例如食品或化妝P叩o處理被病毒感染的表面，例如食物制品品的表面、化妝品的表面、地表、任何種類車輛的表面、和用于處理感染了病毒的動(dòng)物的任何設(shè)備的表面，所需要存在的式(2)的陽離子表面活性劑，更具體是根據(jù)優(yōu)選的LAE實(shí)施方案，處于足以在所述表面實(shí)現(xiàn)所需抗病毒作用的濃度水平。這樣的濃度水平將預(yù)期是在2至20,000ppm的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為100至10,000ppm，和更加優(yōu)選200至2,000卯m，含有要求權(quán)利的陽離子表面活性劑，根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案含有LAE。這些濃度根據(jù)含有陽離子表面活性劑的溶液濃度來給出，所述溶液應(yīng)用于被處理的表面。如果以式(2)的陽離子表面活性劑的固體制劑來處理表面，使用量9應(yīng)當(dāng)使得式(2)的陽離子表面活性劑的量應(yīng)在0.01至100mg/di^的范圍內(nèi)，優(yōu)選的量是0.5至50mg/dm2，和更優(yōu)選的量是1至10mg/dm2。處理液體制劑例如是飲用流體或天然水源例如湖泊或池塘，所需要存在的式(2)的陽離子表面活性劑，更具體是根據(jù)優(yōu)選的LAE實(shí)施方案，其濃度水平足以在飲用流體或水中實(shí)現(xiàn)所需的抗病毒作用。這樣的濃度水平將預(yù)期是在0.2至20,000ppm范圍內(nèi)，更優(yōu)選2至15,000ppm,更加優(yōu)選100至10,000卯m，和最優(yōu)選200至2，000ppm，含有式(2)的陽離子表面活性劑，根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案含有LAE。這些濃度根據(jù)在代處理的液體或水中的陽離子表面活性劑的濃度來提供。治療動(dòng)物或人意味著以適合于吸收根據(jù)本發(fā)明使用的化合物的方法來施用陽離子表面活性劑。化合物可以口服、胃腸外(包括腹膜內(nèi)、皮下和肌肉注射)或外用(局部、例如直腸、經(jīng)皮、通過滴注和經(jīng)鼻)給藥。所施用的制劑可以具有常規(guī)藥物制劑的形式，例如，膠囊、微膠囊、片劑、腸衣藥劑、顆粒劑、粉末劑、丸劑、軟膏、栓劑、混懸劑、糖漿、乳劑、液體、噴劑、吸入劑、滴眼劑和滴鼻劑。上述藥物制劑可以根據(jù)常規(guī)方法來生產(chǎn)，使用常規(guī)用于制劑的藥物配方的各種有機(jī)或無機(jī)載體，例如賦形劑(例如蔗糖、淀粉、甘露醇(mannit)、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石粉、磷酸鈣、碳酸鈣)、粘合劑(例如纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、聚丙基吡咯垸酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇，蔗糖、淀粉)、崩解劑(例如淀粉、羧甲基纖維素、羥丙基淀粉、碳酸氫鈉、磷酸鈣、貯檬酸鈣)、潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、aerosyl、滑石粉、十二烷基硫酸鈉)、矯味劑(例如檸檬酸、薄荷醇、甘氨酸、橘子粉)、防腐劑(苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯)、穩(wěn)定劑(例如擰檬酸、擰檬酸鈉、乙酸)、懸浮劑(甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸鋁)、分散劑(例如羥丙甲基纖維素)、稀釋劑(例如水)、基礎(chǔ)蠟(例如可可脂、白礦脂、聚乙二醇)和其他合適者。根據(jù)本發(fā)明的用途，陽離子表面活性劑的劑量應(yīng)該以實(shí)現(xiàn)所需的預(yù)防或治療效果需要的劑量來確定。對(duì)口服或胃腸外施用而言，常用劑量應(yīng)該是0.1mg/kg至10mg/kg。人類常用劑量可以是每個(gè)個(gè)體的單位劑量為0.1至1000mg，更優(yōu)選每個(gè)個(gè)體0.5至500mg。該劑量可以根據(jù)癥狀的嚴(yán)重度，每天施用1至4次。在動(dòng)物中的常用劑量可以是每劑0.1至100mg，優(yōu)選每劑0.5至50mg。本發(fā)明的應(yīng)用效果通過下面的實(shí)施例來闡明。在下面的試驗(yàn)中，計(jì)算了減少因數(shù)(reductionfactor)。減少因數(shù)根據(jù)下式來計(jì)算v"-lO。在該方程中R'代表減少因數(shù)，V'代表試驗(yàn)化合物樣品的體積，a，是在所加樣品中的病毒濃度(^og值)，v"是最終樣品的體積，a"是處理后的病毒濃度^log值)。在以下的實(shí)驗(yàn)中，計(jì)算了清除因數(shù)。清除因數(shù)根據(jù)下式來計(jì)算在該式中CL是消除因數(shù)(清除因數(shù))，q，是病毒的起始濃度('。log值)，q"是病毒的最終濃度(^og值)。11實(shí)施例1.研究LAE對(duì)病毒牛副流感3病毒的活性。細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基從Earle(ICNflow,Rf.ll-100-24)獲得Eagle最低必需培養(yǎng)基(EMEM)，補(bǔ)充有10。/o的胎牛血清(Biowhittaker,參考號(hào)D14-810F)，2nM谷氨酰胺(Biowhittaker，參考號(hào)17-605E),非必需氨基酸(Biowhittaker,參考號(hào)13-114E),100單位青霉素，100pg鏈霉素/ml和1mM的丙酮酸鈉。批號(hào)10234的LAE(CAS60372-77-2)具有的LAE含量為88.7%。所研究的3型牛副流感株是SF-4(ATCCVR-281)。實(shí)驗(yàn)條件LAE的研究濃度為200ppm。所有實(shí)驗(yàn)在室溫下進(jìn)存。8ml去離子水與lml病毒混懸液混合。加入lml的LAE溶液(含有2000ppm的LAE)，產(chǎn)生LAE終濃度為200ppm。5和60分鐘后，取出測(cè)定用樣品。實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)允許在接觸時(shí)間為5至60分鐘后得出LAE有效性的結(jié)論。結(jié)果示于下表3。12表3病毒濃度加入LAE之前8.09±0.33加入LAE60之后分鐘減少因數(shù)26.46±0.32清除因數(shù)26.29±0.32在LAE處理60分鐘之后，沒有檢測(cè)到殘留的病毒生物體。類似的結(jié)果在5分鐘后也達(dá)到了。在試驗(yàn)中病毒顆粒的數(shù)目通過定量分析TCID50來確定(培養(yǎng)組織的感染劑量)。實(shí)施例2LAE對(duì)1型皰疹病毒的活性。所研究的病毒是皰疹病毒科中a皰疹病毒亞科的單純型病毒。測(cè)定條件的選擇類似于實(shí)施例1的條件。LAE的研究濃度為200卯m。結(jié)果示于下表4。表4病毒濃度加入LAE之前7.94±0.37加入之后LAE60分鐘減少因數(shù)S6.18士0.36清除因數(shù)26.24±0.3713以LAE處理60分鐘之后，沒有檢測(cè)到殘留的病毒生物體。類似的結(jié)果在5分鐘后也達(dá)到了。實(shí)施例3LAE對(duì)牛痘病毒的活性。所研究的病毒是痘病毒科的正痘病毒類型。痘病毒科覆蓋了具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的復(fù)雜病毒，具有含病毒DNA的核(170—250kbp的雙鏈)。LAE的研究濃度為200ppm。結(jié)果示于下表5。表5病毒濃度加入LAE之前5.94±0.34加入LAE60之后分鐘2.40減少因數(shù)3.92±0.36清除因數(shù)3.54±0.34用LAE處理60分鐘之后，檢測(cè)到活的牛痘病毒生物體數(shù)目顯著降低。處理5分鐘后，也觀測(cè)到活的牛痘病毒生物體數(shù)目的很大降低。1權(quán)利要求1.下式(2)的陽離子表面活性劑在治療病毒感染中的用途，所述陽離子表面活性劑由脂肪酸和酯化的氨基二羧酸縮合得到其中X-是Br-、Cl-、或HSO4-、有機(jī)或無機(jī)酸衍生的相反離子、或者基于酚類化合物的陰離子；R1是線性烷基鏈，來自通過酰胺鍵與α-氨基酸基團(tuán)鍵合的8至14個(gè)碳原子飽和脂肪酸或羥基酸；R2是1至18個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈或者是芳香基團(tuán)；R3是—NH3或和n是0到4。2.權(quán)利要求l的用途，用于制備在動(dòng)物或人類中治療病毒感染的藥物。3.權(quán)利要求2的用途，其中陽離子表面活性劑通過口服、胃腸外(包括腹膜內(nèi)、皮下和肌肉注射)或外用(局部，例如直腸、經(jīng)皮、通過滴注或經(jīng)鼻)進(jìn)行施用。4.權(quán)利要求3的用途，其中式(2)的陽離子表面活性劑是精氨酸單鹽酸鹽的月桂酰胺的乙基酯(LAE)。5.權(quán)利要求2至4任一項(xiàng)的用途，用于治療由流感病毒導(dǎo)致的疾病。6.權(quán)利要求5的用途，其中流感病毒是導(dǎo)致禽流感的病毒。7.權(quán)利要求2至6任一項(xiàng)的用途，用于動(dòng)物或人類的預(yù)防性應(yīng)用。8.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的用途，用于處理被病毒感染的表面，例如食物制品的表面、化妝品的表面、地表、任何種類車輛的表面、和用于處理病毒感染的動(dòng)物的任何設(shè)備的表面。9.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的用途，用于處理液體制劑例如飲用流體或者天然水源。10.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的用途，用于處理食品。11.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的用途，用于處理化妝品。12.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中病毒是牛痘、單純性皰疹和牛副流感病毒類型的病毒。全文摘要本發(fā)明提供了由脂肪酸和酯化的氨基二羧酸縮合得到的陽離子表面活性劑，例如從月桂酸和精氨酸，特別是精氨酸單鹽酸鹽的月桂酰胺的乙基酯(LAE)，可以用于對(duì)抗微生物生長(zhǎng)的保護(hù)。該類型的陽離子表面活性劑也有效對(duì)抗病毒感染。將LAE加入到培養(yǎng)的1型皰疹病毒、牛痘病毒和牛副流感3病毒中，導(dǎo)致在這些培養(yǎng)物中幾乎完全減少病毒生物體，這些效果在5和60分鐘后觀測(cè)到。文檔編號(hào)A61K31/16GK101500552SQ200680055519公開日2009年8月5日申請(qǐng)日期2006年8月3日優(yōu)先權(quán)日2006年8月3日發(fā)明者澤維爾·羅卡巴亞拉泊維拉,羅杰·塞格雷特龐斯,薩吉·菲格拉斯羅加申請(qǐng)人:米雷特實(shí)驗(yàn)室股份公司