專利名稱：一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種外用中藥，具體的是指一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，本發(fā)明的商品名稱為中華拔瘤膏藥。
背景技術(shù)：
腦腫瘤的治療是當(dāng)今現(xiàn)代醫(yī)學(xué)面臨的難題。據(jù)世界衛(wèi)生組織2003年的統(tǒng)計(jì)，依照地區(qū)、種族和環(huán)境污染程度的不同，包括良性和惡性的原發(fā)性腦腫瘤的年發(fā)病率為25-35人/10萬(wàn)人。其中原發(fā)性惡性腦腫瘤占60％以上。雖然神經(jīng)外科領(lǐng)域的兩大革命，即以CT問(wèn)世為劃時(shí)代標(biāo)志的影像診斷技術(shù)的進(jìn)步和顯微神經(jīng)外科技術(shù)的應(yīng)用，對(duì)神經(jīng)外科的發(fā)展起到了巨大的促進(jìn)作用，但是，傳統(tǒng)西醫(yī)對(duì)惡性腦腫瘤的治療方法仍不能取得滿意的效果。如惡性晚期腦腫瘤80％多在治療后一年死亡。
目前，全世界對(duì)腦腫瘤的治療方法是經(jīng)神經(jīng)外科開(kāi)顱手術(shù)，由于顱內(nèi)的生理解剖結(jié)構(gòu)給切除全部腦腫瘤帶來(lái)極大的難題，顱內(nèi)殘留的癌細(xì)胞因醫(yī)務(wù)種植會(huì)在短期內(nèi)復(fù)發(fā)與擴(kuò)散，配合神經(jīng)外科的方法只能是放療與化療。而放化療在抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的同時(shí)，又極大地?fù)p傷了人體的正常細(xì)胞，當(dāng)正常機(jī)體無(wú)法再承受放化療時(shí)，癌細(xì)胞自然復(fù)發(fā)，隨之二次開(kāi)顱手術(shù)，從而加速死亡。該方法不能根治腦腫瘤(惡性)只能相對(duì)的延長(zhǎng)患者的生命。我國(guó)中醫(yī)藥口服法治療腦腫瘤目前已進(jìn)入臨床應(yīng)用階段，但由于頭顱具有屏蔽藥物通過(guò)消化系統(tǒng)和血液系統(tǒng)進(jìn)入病灶的天然排斥機(jī)能，故療程長(zhǎng)、在短期內(nèi)療效不顯著，且長(zhǎng)期口服中藥由于毒性強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致患者消化系統(tǒng)的損傷，使患者無(wú)法堅(jiān)持完成全療程。
用中藥外敷的方法治療各種原發(fā)性中晚期腦腫瘤是我國(guó)中醫(yī)藥學(xué)界始終追尋的最理想治療方法。中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)張財(cái)醫(yī)師在對(duì)中華傳統(tǒng)中醫(yī)藥經(jīng)典理論——內(nèi)病外治方法深入研究和臨床實(shí)踐的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)藥理、病理、腦腫瘤生物特性、病理解剖與動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)的科學(xué)分析與了解，掌握了應(yīng)用中醫(yī)藥外敷治療方法根治中晚期腦腫瘤的醫(yī)學(xué)機(jī)理。為中華民族的中醫(yī)藥寶庫(kù)開(kāi)辟了一條通往世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，以中藥外敷療法率先攻克腦癌的新途徑。該療法不用開(kāi)刀手術(shù)，不需放療化療，是一種既安全又經(jīng)濟(jì)的有效新療法。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服神經(jīng)外科手術(shù)治療、放化療和中藥口服所不可愈越的難題，本發(fā)明人利用了中藥材原有的生物藥理特性，科學(xué)地調(diào)制成功一種外用中藥，即本發(fā)明提供一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥。
本發(fā)明是提供一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，屬中醫(yī)藥學(xué)內(nèi)病外治范疇，是一種利用中藥生物特性與藥理特性，通過(guò)其滲透功能，排除腦積液功能，消除癲癇，，阻斷癌細(xì)胞生存，殺滅癌細(xì)胞的靶細(xì)胞功能，將死亡癌細(xì)胞組織液排出體外等撥癰機(jī)制，同時(shí)提高機(jī)體免疫功能，最終達(dá)到治愈腦腫瘤的目的。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，它包括主藥和賦形劑，所述的主藥是由包含下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成全蝎 25-35川烏 16-20 草烏 16-20蛤殼(文蛤) 16-20穿山甲 15-25僵蠶 10-20 馬錢(qián)子 4-8 壁虎 3-7斬龍草 3-8 紅大戟 3-7甘遂 2-6 五倍子 1-3土牛膝 1-3 冰片(合成龍腦)0.5-1.5 蜣螂 0.5-1.5斑蝥 0.5-1.5 樟腦 0.5-1.5。
所述的主藥優(yōu)選由包含下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成全蝎 30川烏 18 草烏 18 蛤殼(文蛤) 18穿山甲 18僵蠶 15 馬錢(qián)子 6壁虎 5斬龍草 5 紅大戟 5 甘遂 4五倍子 2土牛膝 2 冰片(合成龍腦)1蜣螂 1斑蝥 1 樟腦 1。
所述的主藥還包含下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成麝香6-10和牛黃10-14；且優(yōu)選麝香8和牛黃12。
所述的賦形劑由下述以重量為單位計(jì)的原料藥制成紅花 3-7 甘草 3-7 蜈蚣 3-7陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485。
所述的賦形劑優(yōu)選下述以重量為單位計(jì)的原料藥制成紅花 5甘草 5 蜈蚣 5 陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485。
所述的陜西老陳醋濃汁是將陜西產(chǎn)老陳醋用文火熬成濃醋汁，使其濃度為200％，冷卻后即得。
所述賦形劑的制備方法是將所述的紅花、甘草、蜈蚣三味粉碎為細(xì)粉，與所述的陜西老陳醋濃汁按比例混合后用文火熬至三十分鐘，冷卻后即得。
所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為6-8∶2-4。
所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比優(yōu)選為7∶3。
用中藥外敷的方法治療中晚期惡性腦腫瘤，它的最大優(yōu)點(diǎn)在于不用通過(guò)開(kāi)刀手術(shù)，放療化療，徹底解決了中西醫(yī)傳統(tǒng)療法的各種弊端，只通過(guò)中藥外敷即可治愈腦腫瘤，治療成本低，病人無(wú)治療痛苦。
本發(fā)明的治療方法是根據(jù)西醫(yī)影像學(xué)手段(核磁和CT)確定病灶部位就近外敷施藥，療程為每天換藥一次，4-5天為一療程，共需6-7個(gè)療程可完成治療。一般1例晚期腦腫瘤治療全程需賦形劑總用量400-500毫升，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為7∶3，主藥與副藥調(diào)配后外敷。
(一)外敷中藥在本療法操作時(shí)應(yīng)對(duì)照核磁和CT影像中所顯示標(biāo)明的腫瘤病灶部位，根據(jù)腫瘤性質(zhì)、病灶大小、患者體重和臨床癥狀，將患者顱外頭發(fā)剃盡進(jìn)行定量外敷施藥(糊劑膏藥外敷——手術(shù)膜蓋嚴(yán)——膠布固定)。
(二)臨床表現(xiàn)1、敷藥后1-2個(gè)小時(shí)藥力可全部滲入顱內(nèi)達(dá)病灶部位；2、可見(jiàn)敷藥部位表皮與真皮間因大量腦積液滲出鼓起大量水泡，其細(xì)胞組織液呈黃紅色，臨床可用牙簽在水泡下部扎一個(gè)小孔放出腦積液(注意該藥不可在與機(jī)體接觸時(shí)使用任何金屬類(lèi)醫(yī)用器械，會(huì)形成感染)。3、當(dāng)大量腦積液排出顱外時(shí)，晚期重癥患者會(huì)因顱壓降低而快速蘇醒，中度患者可使因顱壓引起的復(fù)視消失，其它臨床癥狀如知覺(jué)和聽(tīng)覺(jué)也逐漸恢，癲癇消失。4、臨床可見(jiàn)顱外滲出大量的死亡癌細(xì)胞及組織液，經(jīng)4-5天逐漸干燥形成硬痂。由于硬痂阻隔了新藥的滲入和組織液的滲出渠道(顱骨板障和泌汗渠道)，需停止敷藥7天，待硬痂自然脫落后方可進(jìn)行第2個(gè)療程的敷藥。5、以此規(guī)律循環(huán)敷藥6-7個(gè)療程，至臨床未見(jiàn)死亡癌細(xì)胞與組織液滲出，即可進(jìn)行出院前影像學(xué)確診。
針對(duì)S180型實(shí)體瘤和艾氏腹水瘤以及腦膠質(zhì)3種腫瘤動(dòng)物模型，經(jīng)大量動(dòng)物模型驗(yàn)證，該療法的顯著療效是10天解剖試驗(yàn)動(dòng)物觀察實(shí)體瘤變化情況，瘤體重量普遍減少30％以上(約43g)，15天瘤體重量減少40％以上(約52g左右)。MO％、GR％、T-Bil和CK均顯著高于對(duì)照組；而Crea、T-P和ALB顯著下降，具有顯著的生物統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)急性毒性試驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，全療程未見(jiàn)皮膚過(guò)敏和皮膚刺激性反應(yīng)，動(dòng)物模型解剖未見(jiàn)各正常器官及組織有任何異常變化。本發(fā)明中藥外敷治療各種腦腫瘤抑制腦腫瘤的靶細(xì)胞性強(qiáng)，治療晚期腦腫瘤的作用與療效顯著。
為了進(jìn)一步證明本發(fā)明一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥(商品名稱中華拔瘤膏)的藥效，提供以下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
選用S180實(shí)體瘤和腦膠質(zhì)瘤G422等2種腫瘤動(dòng)物模型，觀察中華拔瘤膏對(duì)在體動(dòng)物的抗腫瘤作用，并選擇荷瘤動(dòng)物觀察對(duì)動(dòng)物免疫系統(tǒng)的影響。拔瘤膏選用高、中、低3個(gè)濃度，以環(huán)磷酰胺作為陽(yáng)性對(duì)照藥，并以生理鹽水作對(duì)空白照組，拔瘤膏采用外敷給藥，并作適當(dāng)覆蓋和固定，環(huán)磷酰胺采用腹腔注射給藥?？鼓[瘤試驗(yàn)進(jìn)行三批重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果顯示如下1.對(duì)S180實(shí)體瘤動(dòng)物模型，拔瘤膏連續(xù)外敷給藥，高濃度組對(duì)實(shí)體瘤的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用(P＜0.05)，3批試驗(yàn)?zāi)[瘤抑制率分別為31.6％、32.8％、30.7％，具有抗腫瘤作用。陽(yáng)性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺也具有顯著抗腫瘤作用，抑制率分別為51.2％、55.4％、46.7％。
2.對(duì)腦膠質(zhì)瘤G422動(dòng)物模型，拔瘤膏連續(xù)外敷給藥，高濃度組對(duì)腦膠質(zhì)瘤G422的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用(P＜0.05)，三批試驗(yàn)結(jié)果顯示，腫瘤抑制率分別為31.3％、31.8％、33.6％，具有抗腫瘤作用。陽(yáng)性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺具有抗腫瘤作用，抑瘤率分別為45.4％、42.2％、41.9％。
3.對(duì)免疫系統(tǒng)的作用，選擇荷瘤S180動(dòng)物，觀察對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫的影響，結(jié)果顯示，試藥高濃度組使遲發(fā)性免疫反應(yīng)動(dòng)物的足跖腫脹顯著增加(P＜0.05)，血清溶血素HC50顯著升高(P＜0.05)，表明試藥拔瘤膏能改善荷瘤動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，提高體液免疫功能。
4.對(duì)應(yīng)激反應(yīng)的影響，中華拔瘤膏外用給藥，高劑量組可以增加小鼠的耐疲勞時(shí)間。
1材料1.1藥物中華拔瘤膏(以下簡(jiǎn)稱拔瘤膏)由本藥發(fā)明人張財(cái)提供，低溫處保存?zhèn)溆?。本拔瘤膏選用的主藥原料藥是全蝎30，川烏18，草烏18，蛤殼(文蛤)18，穿山甲18，僵蠶15，馬錢(qián)子6，壁虎5，斬龍草5，紅大戟5，甘遂4，五倍子2，土牛膝2，冰片(合成龍腦)1，蜣螂1，斑蝥1，樟腦1 麝香8 牛黃12賦形劑原料藥是紅花5，甘草5，蜈蚣5，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；拔瘤膏選用高、中、低3個(gè)濃度劑量組，高劑量組所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為8∶2中劑量組所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為7∶3低劑量組所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為6∶4環(huán)磷酰胺(CTX)中美合資 山西泰盛制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)050115。
1.2瘤株S180實(shí)體瘤株接種于小鼠腋下，并生長(zhǎng)旺盛，以上接種動(dòng)物均由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所提供，并于本實(shí)驗(yàn)室接種傳代，每隔14天左右傳代一次，用于連續(xù)試驗(yàn)。
1.3動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，體重18-22g，雌雄各半，購(gòu)于維通利華試驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(京)2002-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施許可證號(hào)SYXK(京)2004-0008。飼料均購(gòu)自北京科澳協(xié)力公司，每天喂食1次。
2方法和結(jié)果2.1中華拔瘤膏對(duì)S180瘤作用研究2.1.1小鼠S180細(xì)胞混懸液的制備選取已接種S180瘤，瘤大小為1cm左右腫瘤生長(zhǎng)良好的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，用碘酒、酒精消毒，摘取右腋下的腫瘤組織置于已消毒的燒杯中，剔除腫瘤外邊的組織，將腫瘤塊置于組織勻漿儀中，加1ml的生理鹽水進(jìn)行勻漿，取勻漿后腫瘤細(xì)胞以生理鹽水稀釋20倍，光學(xué)顯微鏡下計(jì)算1ml瘤液中活體瘤細(xì)胞數(shù)，以此計(jì)算瘤液的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋成2×106個(gè)/0.2ml。置于冰水中保存，75％酒精消毒小鼠右腋皮膚，按每鼠0.2ml接種于小鼠右腋皮下。整個(gè)操作在無(wú)菌條件下60min內(nèi)完成。接種24h后稱重，隨機(jī)分為5組空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組。每組10只小鼠，雌雄各半。
2.1.2實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果于分組當(dāng)天用5％Na2S脫毛劑，除去小鼠右腋下皮膚表面的毛，用清水洗去殘留的脫毛劑。中華拔瘤膏高、中、低劑量組開(kāi)始右腋下皮膚涂抹給藥，并作適當(dāng)固定保持藥物充分接觸皮膚不易揮發(fā)，陽(yáng)性對(duì)照藥(CTX 100mg/kg)、生理鹽水對(duì)照組腹腔注射給藥。中華拔瘤膏組、生理鹽水組連續(xù)給藥，陽(yáng)性對(duì)照藥組給藥7天。第11天，處死小鼠并稱體重，隨機(jī)嚴(yán)格剝離干凈皮下腫瘤組織，使用電子秤稱量(精確到0.01g)，計(jì)算各組瘤體平均重量及腫瘤抑制率。
腫瘤抑制率＝(空白對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/空白對(duì)照組瘤重×100％結(jié)果本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了三批重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1，表2，表3，表中結(jié)果顯示，對(duì)S180實(shí)體瘤動(dòng)物模型，拔瘤膏連續(xù)外敷給藥10d，高濃度組對(duì)實(shí)體瘤的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用(P＜0.05)，3批試驗(yàn)?zāi)[瘤抑制率分別為31.6％、32.8％、30.7％，具有抗腫瘤作用。陽(yáng)性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺也具有顯著抗腫瘤作用，抑制率分別為46.7％、51.2％、55.4％。
表1 中華拔瘤膏對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響(第一次實(shí)驗(yàn))


注*為與對(duì)照組相比P＜0.05；**為P＜0.01表2 中華拔瘤膏對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響(第二次實(shí)驗(yàn))

表3 中華拔瘤膏對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響(第三次實(shí)驗(yàn))

2.2對(duì)腦膠質(zhì)瘤的作用2.2.1小鼠G422細(xì)胞混懸液的制備選取接種G422瘤，瘤大小為1cm左右腫瘤生長(zhǎng)良好的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，用碘酒、酒精消毒，摘取右腋下的腫瘤組織置于已消毒的燒杯中，剔除外邊的組織，將腫瘤塊置于組織勻漿儀中，加1ml的生理鹽水進(jìn)行勻漿，取勻漿后腫瘤細(xì)胞以生理鹽水稀釋20倍，光學(xué)顯微鏡下計(jì)算1ml瘤液中活體瘤細(xì)胞數(shù)，以此計(jì)算瘤液的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋成2×106個(gè)/0.2ml.置于冰水中保存，75％酒精消毒小鼠右腋皮膚，按每鼠0.2ml接種于小鼠右腋皮下。整個(gè)操作在無(wú)菌條件下60min內(nèi)完成。接種24h后稱重，隨機(jī)分為5組空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組。每組10只小鼠，雌雄各半。
2.2.2實(shí)驗(yàn)步驟于分組當(dāng)天用5％Na2S脫毛劑，除去小鼠右腋下皮膚表面的毛，用清水洗去殘留的脫毛劑。中華拔瘤膏高、中、低劑量組右腋下皮膚涂抹給藥，給藥量為0.5ml。陽(yáng)性藥對(duì)照組、空白對(duì)照組開(kāi)始腹腔注射給藥，中華拔瘤膏組、空白對(duì)照組連續(xù)給藥14天，陽(yáng)性對(duì)照藥組連續(xù)給藥7天。給藥前、給藥期間用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠的右前肢直徑進(jìn)行記錄，以腫瘤大小的變化和給藥時(shí)間t(d)作圖，繪制移植瘤生長(zhǎng)速度曲線。并在給藥期間觀察各給藥組小鼠的體重變化。藥后第15天，處死小鼠并稱體重，隨機(jī)嚴(yán)格剝離干凈皮下腫瘤組織，使用電子秤稱量(精確到0.01g)，計(jì)算各組瘤體平均重量及腫瘤抑制率。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了三批重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
腫瘤抑制率＝(空白對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/空白對(duì)照組瘤重×100％2.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了三批重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，對(duì)鼠腦膠質(zhì)瘤G422動(dòng)物模型，拔瘤膏連續(xù)外敷給藥14d，給藥期間小鼠腦膠質(zhì)瘤G422體瘤生長(zhǎng)明顯減小，體重變化不十分明顯，結(jié)果見(jiàn)表4，表5和

圖1，圖2。對(duì)3批試驗(yàn)?zāi)[瘤重進(jìn)行考察，高濃度組對(duì)實(shí)體瘤的重量均具有顯著的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，3批試驗(yàn)?zāi)[瘤抑制率均在30％以上，因此可以認(rèn)為具有抗腫瘤作用。陽(yáng)性對(duì)照藥CTX也具有顯著抗腫瘤作用(P＜0.01)，腫瘤抑制率為30％以上，結(jié)果見(jiàn)表6，表7，表8。
表4 給藥期間小鼠腦膠質(zhì)瘤G422大小(第15天為處死日)

圖1是G422瘤生長(zhǎng)曲線圖。
表5 中華拔瘤膏對(duì)接種腦膠質(zhì)瘤G422小鼠體重的影響(第15天為處死日)

圖2是接種G422瘤小鼠體重變化圖。
表6 中華撥瘤膏對(duì)小鼠腦膠質(zhì)瘤G422生長(zhǎng)的影響(第一次實(shí)驗(yàn))

表7 中華撥瘤膏對(duì)小鼠腦膠質(zhì)瘤G422生長(zhǎng)的影響(第二次實(shí)驗(yàn))

表8 中華撥瘤膏對(duì)小鼠腦膠質(zhì)瘤G422生長(zhǎng)的影響(第三次實(shí)驗(yàn))


討論中華拔瘤膏臨床主要針對(duì)各種晚期腦瘤，尤其對(duì)較普遍發(fā)生的膠質(zhì)性晚期腫瘤療效更為顯著。藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明中華拔瘤膏作用于S180實(shí)體瘤、腦膠質(zhì)瘤G422動(dòng)物模型，其中對(duì)S180實(shí)體瘤的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用，對(duì)腦膠質(zhì)瘤的有明顯抑制作用。同時(shí)中華拔瘤膏作為一中成藥的外用藥，毒副作用小，作用直接，用藥方便，值得開(kāi)發(fā)研究。
2.4中華拔瘤膏對(duì)荷瘤動(dòng)物免疫系統(tǒng)的影響2.4.1試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)設(shè)計(jì)一系列給藥劑量(濃度)觀察試藥對(duì)荷瘤動(dòng)物免疫系統(tǒng)的影響。
2.4.2試驗(yàn)材料2.4.2.1藥物與試劑拔瘤膏同上。用于皮膚外用涂抹。
北京人參蜂王漿市售，北京三九藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，口服液，主要原料蜂蜜、人參、蜂王漿、五味子。規(guī)格10支×10ml，每100ml中含總皂甙60mg～85mg，10-羥基-α-癸烯酸14mg～18mg，用于免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老。生產(chǎn)批號(hào)20040707，保質(zhì)期至2007年6月。臨用時(shí)直接應(yīng)用，用于口服給藥。
Alsever‘s液葡萄糖2.000g、檸檬酸鈉0.800g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.420g、加蒸餾水100ml混勻，10磅10min滅菌。
都氏試劑氰化鉀 0.025g高鐵氰化鉀 0.100g碳酸氫鈉 0.500g蒸餾水 1000ml無(wú)水碳酸鈉西安化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號(hào)030812，配制成0.1％Na2CO3溶液，用于稀釋血液。
2.4.2.2儀器設(shè)備150mm鍍鉻游標(biāo)卡尺北京量具刃具廠生產(chǎn)，精度0.02mm；
顯微鏡OLYMPUS CH.2顯微鏡，日本OLYMPUS公司產(chǎn)品；HD型單列恒溫水浴鍋，遼陽(yáng)市恒溫儀器廠制造。
UV-1601 PC型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)，日本Shimadzu公司產(chǎn)品。
2.4.2.3動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，體重18～22g，雌雄各半，購(gòu)于維通利華試驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(京)2002-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施許可證號(hào)SYXK(京)2004-0008。飼料均購(gòu)自北京科澳協(xié)力公司，每天喂食1次。
豚鼠3只，體重460～500g，雄性，用于取血分離血清。由北京通利實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)SCXK(京)2000-0018。
健康雄性綿羊，家養(yǎng)，用于取血提供綿羊紅細(xì)胞。
2.4.3試驗(yàn)方法2.4.3.1對(duì)小鼠的遲發(fā)性免疫作用綿羊紅細(xì)胞懸液的制備無(wú)菌條件下，由健康的成年綿羊外頸靜脈取血，至于有玻璃珠的三角燒瓶中，振動(dòng)10min，以除去纖維蛋白，加入相當(dāng)于羊血2倍的Alsever`s液，搖勻，置于4度冰箱中保存?zhèn)溆?。臨用時(shí)取出，用生理鹽水洗滌3次，每次2000rpm離心10min，棄上清液配成所需濃度。
植瘤于超凈工作臺(tái)中，先取S180瘤液0.1ml，以生理鹽水20倍稀釋，光學(xué)顯微鏡下計(jì)算瘤液中活體瘤細(xì)胞數(shù)，以此計(jì)算1ml瘤液的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋成2×106個(gè)/0.2ml，置于冰水中，每只小鼠前肢腋下皮下注射后的瘤液0.2ml。
給藥小鼠(已植瘤)50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只(雌雄各半)，分別為空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組和試藥高、中、低三個(gè)劑量組，連續(xù)給藥10天，第4天尾靜脈注射羊紅細(xì)胞約5×106個(gè)/只致敏，第10天用20％羊紅細(xì)胞0.02ml分別注入小鼠后肢左腳掌皮下，右后肢腳掌皮下注射0.02ml的生理鹽水，24h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量足跖腫脹度(FPR)，以兩足厚度差值作為遲發(fā)性免疫反應(yīng)(DTH)指標(biāo)。
數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)算各組足K值、α值x±S對(duì)各組間進(jìn)行Student’t檢驗(yàn)，采用孫瑞元、陳志揚(yáng)、鄭青山教授等主編的DAS軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，判定顯著性差異。
2.4.3.2對(duì)小鼠體液免疫的影響羊紅細(xì)胞懸液的制備(方法同上)。
臨用時(shí)取上述所保存的羊紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次，每次2000rpm離心5min，棄去上清液，用生理鹽水以3∶5(v∶v)稀釋，使紅血球濃度為每毫升約20億個(gè)。
豚鼠血清制備在無(wú)菌條件下，從健康豚鼠心臟取血，放置約1h后，用長(zhǎng)針將凝固血于管壁玻璃，使血清充分滲出，2000rpm離心5min，取血清-20℃保存，臨用時(shí)用生理鹽水1∶10稀釋。
免疫與給藥小鼠(植瘤方法同前)50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只(雌雄各半)，分別為空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組和試藥高、中、低三個(gè)劑量組，連續(xù)給藥10天，給藥第3天，每只小鼠ip3∶5棉羊紅細(xì)胞稀釋液0.2ml，第10天給藥后20min眼眶取血進(jìn)行溶血素測(cè)定。
血清凝集素測(cè)定眼眶取血于離心管內(nèi)，放置約1h后，使血清充分分離出，2000rpm離心10min，取血清，生理鹽水稀釋200倍按下表進(jìn)行試驗(yàn)。

然后于37℃水浴中保溫10min，冰浴終止反應(yīng)后2000rpm離心10min，取上清液1.0ml，都氏液3.0ml于試管內(nèi)。
用空白對(duì)照管于540nm波長(zhǎng)處調(diào)零待測(cè)個(gè)管吸收度值。
綿羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血值測(cè)定管取10％綿羊紅細(xì)胞稀釋液0.25ml，都氏試劑4.0ml于另一試管內(nèi)用于測(cè)定綿羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血值。
計(jì)算按下列公式計(jì)算每只小鼠樣品的半數(shù)溶血值HC50樣品HC50＝(樣品吸收度值÷羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血時(shí)吸收度值)×稀釋倍數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)算各組HC50值x±S對(duì)各組間進(jìn)行Student’t檢驗(yàn)，采用孫瑞元、陳志揚(yáng)、鄭青山教授等主編的DAS軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，判定顯著性差異。
2.4.4結(jié)果2.4.4.1拔瘤膏對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響從表9實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，所選用的中華拔瘤膏高、中、低三個(gè)劑量外敷給藥，對(duì)S180荷瘤小鼠DTH的影響，與空白對(duì)照組比較，DTH有增加的趨勢(shì)，但未見(jiàn)有顯著性差異(P＞0.05)，表明中華拔瘤膏對(duì)荷瘤動(dòng)物的細(xì)胞免疫功能有一定的改善作用。同樣試驗(yàn)條件下，陽(yáng)性對(duì)照藥人參蜂王漿有顯著性增加DTH(P＜0.05)，表明可以顯著提高荷瘤動(dòng)物的細(xì)胞免疫功能。
表9 中華拔瘤膏對(duì)荷瘤S180鼠遲發(fā)性免疫反應(yīng)的影響

注*為與對(duì)照組相比P＜0.05；**為P＜0.012.4.4.2拔瘤膏對(duì)小鼠體液免疫功能的影響表10實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，所選用的中華拔瘤膏高劑量組外敷給藥，對(duì)S180荷瘤小鼠血清凝集素(HC50)的影響，與空白對(duì)照組比較，HC50顯著升高(P＜0.05)，表明中華拔瘤膏可以顯著提高荷瘤動(dòng)物的體液免疫功能。同樣試驗(yàn)條件下，陽(yáng)性對(duì)照藥人參蜂王漿顯著增加HC50(P＜0.01)，表明可以顯著提高荷瘤動(dòng)物的體液免疫功能。
表10 中華拔瘤膏對(duì)荷瘤S180鼠血清凝集素的影響


2.4.5結(jié)論中華拔瘤膏能改善荷瘤S180動(dòng)物的細(xì)胞免疫功能，顯著提高機(jī)體的體液免疫功能。
2.5中華拔瘤膏對(duì)動(dòng)物應(yīng)激能力的影響2.5.1試驗(yàn)材料2.5.1.1藥物與試劑中華拔瘤膏同上。
S180瘤株北京腫瘤醫(yī)院傳代培養(yǎng)提供。
0.9％氯化鈉注射液山東齊都藥業(yè)有限公司。批號(hào)04120903人參蜂王漿北京三九藥業(yè)有限公司。批號(hào)20040707堿石灰北票礦務(wù)局氫氧化鈣廠。批號(hào)9307082.5.1.2動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，體重18～22g，雌雄各半，購(gòu)于維通利華試驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(京)2002-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施許可證號(hào)SYXK(京)2004-0008。飼料均購(gòu)自北京科澳協(xié)力公司，每天喂食1次。
2.5.2方法2.5.2.1試驗(yàn)分組與給藥方法每次試驗(yàn)取二級(jí)性成熟清潔級(jí)ICR小鼠60只，雌雄各半。隨機(jī)分為6組。中華拔瘤膏高劑量組、中華拔瘤膏中劑量組、中華拔瘤膏低劑量組、模型對(duì)照組，空白對(duì)照組。中華拔瘤膏外用給藥0.5ml/只，人參蜂王漿口服給藥20ml/kg，模型組給予等體積溶媒。
2.5.2.2試驗(yàn)方法取接種7d，處于指數(shù)生長(zhǎng)期且荷瘤狀況較好的種鼠，處死。無(wú)菌操作，抽取腹腔積液，用0.9％氯化鈉注射液將S180瘤株稀釋至2.0×106個(gè)/0.2ml，以每只0.2ml的細(xì)胞量接種于小鼠腋下。24h后開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥10d。
2.5.2.2.1耐缺氧試驗(yàn)取接種小鼠60只隨機(jī)分6組，皮膚外用給藥每日一次，連續(xù)10天。末次給藥后0.5小時(shí)，將各組小鼠放入盛有5克鈉石灰的250ml磨口廣口瓶?jī)?nèi)，密封瓶口，記錄自封瓶口至小鼠死亡時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表11。
2.5.2.2.2耐疲勞試驗(yàn)取接種小鼠60只隨機(jī)分6組，外用給藥每日一次，連續(xù)10天。末次給藥后0.5小時(shí)，于小鼠尾部負(fù)重(體重的10％)后投入24℃溫水槽中游泳，觀察并記錄小鼠自投入水中至頭部沉入水中7秒中不能游出水面的時(shí)間，作為游泳耗竭時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表12。
表11 中華拔瘤膏抗缺氧實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表12 中華拔瘤膏耐疲勞實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.5.3結(jié)果通過(guò)抗缺氧試驗(yàn)可以看出，中華拔瘤膏外用給藥，沒(méi)有增強(qiáng)小鼠的耐缺氧性，而同樣條件下，陽(yáng)性對(duì)照藥與模型組比較顯著性增強(qiáng)了小鼠的耐缺氧能力。
通過(guò)耐疲勞實(shí)驗(yàn)可以看出，中華拔瘤膏外用給藥，高劑量組連續(xù)給藥十天與空白組比較可以增強(qiáng)小鼠的耐疲勞能力，而中劑量、低劑量與對(duì)照組比較沒(méi)有明顯作用。
2.5.4結(jié)論中華拔瘤膏外用給藥，高劑量組可以增加小鼠的耐疲勞時(shí)間。
皮膚過(guò)敏試驗(yàn)觀察中華拔瘤膏、賦型劑和陽(yáng)性致敏物(2，4-二硝基氯苯)對(duì)豚鼠皮膚的致敏作用。結(jié)果顯示，中華拔瘤膏對(duì)皮膚反應(yīng)平均值0，無(wú)致敏性，對(duì)照組為0，無(wú)致敏性，陽(yáng)性致敏物(2，4-二硝基氯苯)組為4.0，致敏率最高為83％，為高度致敏性。
皮膚刺激試驗(yàn)將中華拔瘤膏一次給藥在家兔完整和破損皮膚上，觀察每次去掉受試物后1h內(nèi)以及末次給藥后的72h內(nèi)對(duì)皮膚的刺激性。結(jié)果顯示，中華拔瘤膏和賦型劑的刺激反應(yīng)分值均為0，表明中華拔瘤膏單次給藥對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚均無(wú)刺激性。
急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察了拔瘤膏對(duì)大鼠完整皮膚和破損皮膚短時(shí)期一次性接觸所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。將全部大鼠背部脫毛3×3cm2，分完整皮膚和破損皮膚，分別給予賦形劑和拔瘤膏四個(gè)濃度(高、2中、低濃度)，給藥后24h觀察動(dòng)物的行為活動(dòng)、皮毛光澤、飲食、體重和死亡情況，連續(xù)觀察14天。全部大鼠在給藥后觀察期14天內(nèi)，未見(jiàn)明顯的毒性反應(yīng)，動(dòng)物的外部特征、排泄物、及行為表現(xiàn)均無(wú)異常。體重增長(zhǎng)情況與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備主藥全蝎30，川烏18，草烏18，蛤殼(文蛤)18，穿山甲18，僵蠶15，馬錢(qián)子6，壁虎5，斬龍草5，紅大戟5，甘遂4，五倍子2，土牛膝2，冰片(合成龍腦)1，蜣螂1，斑蝥1，樟腦1 麝香8 牛黃12將上述十九味藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混均，即得。
選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備賦形劑紅花5，甘草5，蜈蚣5，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；當(dāng)重量單位選擇克時(shí)，體積單位就對(duì)應(yīng)選擇毫升；選用陜西產(chǎn)地的老陳醋用瓦鍋用文火熬成陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485，濃度為原老陳醋濃度的200％，冷卻后備用；將所述的紅花5，甘草5，蜈蚣5三味粉碎為細(xì)粉，再與陜西老陳醋濃汁混合后用文火熬制三十分鐘，冷卻，即得。
所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為7∶3。
實(shí)施例2選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥為主藥全蝎35，川烏20，草烏20，蛤殼(文蛤)20，穿山甲25，僵蠶20，馬錢(qián)子8，壁虎7，斬龍草8，紅大戟7，甘遂6，五倍子3，土牛膝3，冰片(合成龍腦)1.5，蜣螂1.5，斑蝥1.5，樟腦1.5 麝香6 牛黃10選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備賦形劑紅花3，甘草3，蜈蚣3，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；所述主藥與賦形劑的制備方法同實(shí)施例1；所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為8∶2。
實(shí)施例3選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥為主藥全蝎25，川烏16，草烏16，蛤殼(文蛤)16，穿山甲15，僵蠶10，馬錢(qián)子4，壁虎3，斬龍草3，紅大戟3，甘遂2，五倍子1，土牛膝1，冰片(合成龍腦)0.5，蜣螂0.5，斑蝥0.5，樟腦0.5 麝香6 牛黃14選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備賦形劑紅花7，甘草7，蜈蚣7，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；所述主藥與賦形劑的制備方法同實(shí)施例1；所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為6∶4。
實(shí)施例4選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥為主藥全蝎25，川烏16，草烏16，蛤殼(文蛤)16，穿山甲15，僵蠶10，馬錢(qián)子4，壁虎3，斬龍草3，紅大戟3，甘遂2，五倍子1，土牛膝1，冰片(合成龍腦)0.5，蜣螂0.5，斑蝥0.5，樟腦0.5將上述十七味藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混均，即得。
選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備賦形劑紅花3，甘草3，蜈蚣3，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；當(dāng)重量單位選擇克時(shí)，體積單位就對(duì)應(yīng)選擇毫升；選用陜西產(chǎn)地的老陳醋用瓦鍋用文火熬成陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485，濃度為原老陳醋濃度的200％，冷卻后備用；將所述的紅花3，甘草3，蜈蚣3三味粉碎為細(xì)粉，再與陜西老陳醋濃汁混合后用文火熬制三十分鐘，冷卻，即得。
所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為8∶2。
實(shí)施例5選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥為主藥全蝎35，川烏20，草烏20，蛤殼(文蛤)20，穿山甲25，僵蠶20，馬錢(qián)子8，壁虎7，斬龍草8，紅大戟7，甘遂6，五倍子3，土牛膝3，冰片(合成龍腦)1.5，蜣螂1.5，斑蝥1.5，樟腦1.5選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備賦形劑紅花7，甘草7，蜈蚣7，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；所述主藥與賦形劑的制備方法同實(shí)施例4；所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為6∶4。
實(shí)施例6選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備主藥全蝎30，川烏18，草烏18，蛤殼(文蛤)18，穿山甲18，僵蠶15，馬錢(qián)子6，壁虎5，斬龍草5，紅大戟5，甘遂4，五倍子2，土牛膝2，冰片(合成龍腦)1，蜣螂1，斑蝥1，樟腦1選擇如下以重量為單位計(jì)的原料藥制備賦形劑紅花5，甘草5，蜈蚣5，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；所述主藥與賦形劑的制備方法同實(shí)施例4；所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為7∶3。
權(quán)利要求
1.一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于它包括主藥和賦形劑，所述的主藥是由包含下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成全蝎25-35川烏16-20 草烏16-20蛤殼(文蛤)16-20穿山甲15-25 僵蠶10-20 馬錢(qián)子4-8壁虎3-7斬龍草3-8大戟3-7 甘遂2-6 五倍子1-3土牛膝1-3冰片(合成龍腦)0.5-1.5 蜣螂0.5-1.5斑蝥0.5-1.5 樟腦0.5-1.5。
2.如權(quán)利要求1所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的主藥優(yōu)選由包含下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成全蝎30 川烏18 草烏18蛤殼(文蛤)18穿山甲18 僵蠶15 馬錢(qián)子6 壁虎5斬龍草5紅大戟5甘遂4 五倍子2土牛膝2冰片(合成龍腦)1 蜣螂1斑蝥1 樟腦1。
3.如權(quán)利要求1所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的主藥還包含下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成麝香6-10和牛黃10-14。
4.如權(quán)利要求3所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于優(yōu)選麝香8和牛黃12。
5.如權(quán)利要求1、3所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的賦形劑由下述以重量為單位計(jì)的原料藥制成紅花3-7甘草3-7蜈蚣3-7陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485。
6.如權(quán)利要求5所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的賦形劑優(yōu)選下述以重量為單位計(jì)的原料藥制成紅花5甘草5蜈蚣5陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485。
7.如權(quán)利要求5所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的陜西老陳醋濃汁是將陜西產(chǎn)老陳醋用文火熬成濃醋汁，使其濃度為200％，冷卻后即得。
8.如權(quán)利要求5所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述賦形劑的制備方法是將所述的紅花、甘草、蜈蚣三味粉碎為細(xì)粉，與所述的陜西老陳醋濃汁按比例混合后用文火熬至三十分鐘，冷卻后即得。
9.如權(quán)利要求5所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為6-8∶2-4。
10.如權(quán)利要求9所述的一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，其特征在于所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，所述的主藥與所述賦形劑的用藥配比為7∶3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療中晚期腦腫瘤的外用中藥，它包括主藥和賦形劑，所述的主藥是由下述以重量為單位計(jì)的原料藥組成全蝎25－35，川烏16－20，草烏16－20，蛤殼(文蛤)16－20，穿山甲15－25，僵蠶10－20，馬錢(qián)子4－8，壁虎3－7，斬龍草3－8，紅大戟3－7，甘遂2－6，五倍子1－3，土牛膝1－3，冰片(合成龍腦)0.5－1.5，蜣螂0.5－1.5，斑蝥0.5－1.5，樟腦0.5－1.5麝香6－10，牛黃10－14，所述的賦形劑由下述以重量為單位計(jì)的原料藥制成紅花3－7，甘草3－7，蜈蚣3－7，陜西老陳醋濃汁(以體積為單位計(jì))485；所述的主藥與賦形劑調(diào)配后外敷，通過(guò)其滲透功能，排除腦積液功能，消除癲癇，阻斷癌細(xì)胞生存，殺滅癌細(xì)胞的靶細(xì)胞功能，將死亡癌細(xì)胞組織液排出體外等撥癰機(jī)制，同時(shí)提高機(jī)體免疫功能，最終達(dá)到治愈腦腫瘤的目的。
文檔編號(hào)A61K35/64GK1943644SQ20061014082
公開(kāi)日2007年4月11日 申請(qǐng)日期2006年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月11日
發(fā)明者張財(cái) 申請(qǐng)人:張財(cái)