專利名稱：一種抗輻射組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及保健食品領域，具體地說，涉及一種含有單核苷酸的抗輻射損傷的組合物。
背景技術：
由于經(jīng)濟的發(fā)展和城市的現(xiàn)代化，我國城市電磁環(huán)境日趨復雜。有專家指出城市空間人為電磁能量將以每年7-14％的速度增長，到2000年城市環(huán)境電磁能量密度最高比上個世紀70年代增長26倍。對每個家庭來說，家用電器的種類和數(shù)量在不斷增加，但是如電腦、電視、冰箱、微波爐、手機等家用電器在給人們帶來方便的同時也帶來大量的電磁輻射；另外，隨著醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，放療治療及大型檢查儀器的頻繁應用也給患者帶來了電磁輻射。
電離輻射作用于細胞時，經(jīng)過能量吸收與傳遞可由直接作用引起生物大分子的損傷。這些生物大分子與水分子同時存在于同一細胞環(huán)境中，故電離輻射也可引起水分子的電離與激發(fā)，水分子在電離和激發(fā)過程中均可產(chǎn)生自由基。自由基是在軌道外層具有不成對電子的不帶電的原子或分子，如H·或OH·等。自由基可造成細胞嚴重損傷，因為它具有很強的破壞分子結構的反應活性，可造成大分子的損傷。大約二分之一的輻射生物效應是由水分子自由基引起的，其余一半的生物效應則來自生物大分子的直接電離。
自由基性質(zhì)活潑，具有很強的氧化反應能力，很容易與其他物質(zhì)生成新的自由基，自由基反應往往可以連鎖方式進行下去。若反應體系中有自由基清除劑(亦稱抗氧化劑)存在，它就能有效地阻擋自由基的連鎖反應，從而起到清除自由基的作用。在正常情況下，人體內(nèi)的自由基是處于不斷產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡之中。如果自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，它會對生物體產(chǎn)生一系列損害，加速機體的衰老過程并誘發(fā)各種疾病。據(jù)研究，氧自由基是基因突變、癌癥生成的元兇，人體細胞核內(nèi)有23對染色體，儲存著所有的遺傳基因。基因本身也是由分子組成，氧自由基也可能向它們借貸或奪取電子，從而使抗癌基因失去抗癌活性，潛伏的原癌基因被激活，成為癌基因，如此癌魔便乘機出籠。目前的研究結果表明，自由基幾乎和人類常見的幾種主要疾病都有關系1、自由基對核酸的損害脫氧核糖核酸(DNA)是生物遺傳信息的攜帶者，是生物的遺傳物質(zhì)，與生物的繁殖、遺傳和變異密切相關。生物幾乎所有的遺傳信息都貯存在DNA中，這些信息通過信使RNA(mRNA)表達出來，合成蛋白質(zhì)而顯示出生物的特異性。如果DNA的結構或構象發(fā)生變化，其功能亦隨之改變，這是造成癌癥以及各種疾病的導火線。引起DNA異常的物質(zhì)有多種，其中最主要的是氧自由基，特別是羥基自由基，香煙、致癌物質(zhì)、放射線、紫外線等能損傷DNA也是由于它們都能產(chǎn)生活性氧自由基。
而氧自由基的危害就在于能與堿基或五碳糖發(fā)生反應，生成堿基自由基或在DNA的脫氧核糖部分形成自由基，最終使DNA鏈斷裂或堿基破壞、缺失，造成遺傳信息改變，使生物體發(fā)生突變或產(chǎn)生病變；嚴重損傷的DNA無法修復，以致造成細胞死亡。輻射作用于核酸環(huán)境中的水分子，使其電解產(chǎn)生羥基自由基和超氧化物自由基，大劑量的輻射可造成DNA斷裂，小劑量輻射可使DNA主鏈斷裂、堿基降解和氫鍵破壞。
2、自由基對蛋白質(zhì)的損害自由基可直接作用于蛋白質(zhì)，或者通過脂質(zhì)過氧化物間接作用于蛋白質(zhì)，使蛋白質(zhì)的多肽鏈斷裂或個別氨基酸發(fā)生變化或使蛋白質(zhì)交聯(lián)而發(fā)生聚合作用，從而使蛋白質(zhì)的結構發(fā)生變化，導致細胞功能紊亂。如老年人皮膚起皺、骨骼變脆等都與膠原蛋白破壞和功能改變有關。
3、自由基對碳水化合物的損害碳水化合物(糖類)是動物體內(nèi)的主要能源和碳源，在正常情況下，生物體內(nèi)70％的能量主要來自碳水化合物的分解；同時它們也是一些重要結構的組成成分，如組成DNA及膜多糖，因此糖是生命活動所必須的。自由基可使組成核酸的核糖、脫氧核糖形成脫氫自由基，從而造成DNA主鏈斷裂或堿基破壞；自由基可使細胞膜中的糖分子羥基化，破壞細胞膜上的多糖結構，影響細胞功能的發(fā)揮；還可通過氧化降解使多糖破壞，影響組織功能，譬如腦組織中的多糖遭到破壞就會影響大腦的正常功能。
4、自由基對脂類的損害多不飽和脂肪酸最易受到自由基的破壞發(fā)生過氧化反應，生成脂質(zhì)過氧化物，脂質(zhì)過氧化物進一步分解產(chǎn)生醛類，尤其是丙二醛可與一些蛋白質(zhì)、核酸等反應，導致分子間的交聯(lián)聚合，結果生成大分子的難溶物(即脂褐素)沉積在細胞內(nèi)，該色素在皮膚細胞堆積就形成老年斑，在腦組織中堆積會導致記憶力減退或智力障礙，因此，日本的著名醫(yī)學博士丹羽靳負認為活性氧對生物體的真正危害可能并非活性氧本身，而是活性氧與脂質(zhì)反應后生成的脂質(zhì)過氧化物。另外，富含多不飽和脂肪酸的磷脂是構成多種生物膜的重要成分，如果這些膜脂發(fā)生過氧化反應，將導致膜中蛋白質(zhì)及酶的交聯(lián)和失活，使膜的通透性改變，從而影響細胞膜的生理功能，如線粒體膜受損將導致能量生成減少。
蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和核酸是組成生物體的基本而重要的化合物，這些物質(zhì)一旦受損，生命活動將受到威脅，自由基對生物體的危害就在于能破壞這些生物大分子，使生物體患病、加速衰老，這已被越來越多的研究所證實。
近幾十年來，隨著生活水平的提高，人們越來越關注健康，并逐漸認識到核苷酸在生命中的重要作用。眾所周知，人體大約由60萬億個細胞組成，細胞中有細胞核和細胞質(zhì)，細胞內(nèi)的物質(zhì)之一核酸，它由四種單核苷酸組成，核苷酸作為機體的必要營養(yǎng)素，它調(diào)控生命體的生長、發(fā)育、衰老，使機體不斷地進行新陳代謝，維持生理狀態(tài)的平衡。市場上以核苷酸為功效成分的保健品，例如武漢生科的核苷酸膠囊，主要具有調(diào)節(jié)免疫力和輔助肝損傷的功能。到目前為止，核苷酸的抗輻射作用機理及動物實驗研究，在國內(nèi)外報道并不多見[1-4]，第四軍醫(yī)大學周元愷等作過核酸及其降解物的動物抗輻射實驗[1]。結果表明單獨一種嘌呤類或嘧啶類核苷酸、核苷和堿基，與小牛胸腺DNA一樣，同樣具有提高照射后腸腺存活率的作用。這一事實提示，外源核苷酸對輻射損傷細胞或機體的恢復效應，并非由于其高聚狀態(tài)，而是其酶解產(chǎn)物作用所致。核苷酸是多不飽和脂肪酸合成的主要調(diào)節(jié)物。它可以提高血液中的多不飽和脂肪酸的含量，而長鏈不飽和脂肪酸就能夠增強肌體的抗氧化能力。核苷酸、堿基的氮原子能捕獲亞油酸氧化過程中形成的自由基。核苷酸及其相關物質(zhì)均可以作為內(nèi)源自由基清除劑和抗氧化劑。而腺苷酸和烏苷酸的代謝產(chǎn)物尿酸清除內(nèi)源自由基和抗氧化能最強。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種含有單核苷酸的抗輻射組合物，用于清除體內(nèi)自由基，從而降低輻射對人體的損傷。
本發(fā)明所述的組合物含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸10-30％，維生素c5-15％，大豆低聚糖20-40％。
優(yōu)選為，5’-核苷酸15-20％，維生素c5-10％，大豆低聚糖30-40％。
進一步優(yōu)選的為，5’-核苷酸17％，維生素c8％，大豆低聚糖35％。
本發(fā)明所述的主要原料為5’-核苷酸，它可以作為內(nèi)源自由基清除劑和抗氧化劑，它也是合成生命大分子核酸的基本原料。本發(fā)明所述的5’-核苷酸可以是5’-腺嘌呤核苷一磷酸，5’-鳥嘌呤核苷一磷酸，5’-胞嘧啶核苷一磷酸，5’-尿嘧啶核苷一磷酸；或它們的任意組合，也可以為，5’-腺嘌呤核苷一磷酸和/或5’-烏嘌呤核苷一磷酸。
維生素c作為功效成分也是人們熟悉的一種強抗氧化劑，試驗證明，添加了維生素c的DNA經(jīng)紫外輻射后幾乎沒有受到損傷[5]。維生素c能有效的捕獲單氧、超氧化物、過氧化氫和水溶性過氧化自由基，清除自由基并阻斷了自由基對DNA的損傷，起到了抗輻射的作用。
輻射對機體的損傷主要由于在照射過程中產(chǎn)生自由基，而服用大豆低聚糖可提高腸雙歧桿菌的數(shù)量。雙歧桿菌能明顯增加血中SOD活性和含量，SOD是抗氧化劑，自由基的清除主要靠抗氧化劑完成[6]。
還可以在本發(fā)明組合物中添加輔料，輔料可以是醫(yī)學上或者是食品中可接受的載體物質(zhì)。通過它們可以將本發(fā)明組合物制備成不同的劑型。
本發(fā)明組合物中含有的5’-核苷酸與維生素c、大豆低聚糖等組分，具有良好的互相促進和協(xié)同作用，對機體發(fā)揮出抗輻射的功能。
經(jīng)口給予小鼠不同劑量的本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，Co60-γ1Gy照射后經(jīng)過一定的時間測定血清溶血素HC50提高20-50％(p＜0.05)，Co60-γ7Gy照射后經(jīng)過一定的時間測定超氧化物歧化酶活性提高10-30％(p＜0.05)。小鼠體重無顯著性差異p＞0.05，其它各項指標無顯著性差異p＞0.05，按照《保健食品的功能檢驗與評價技術規(guī)范》規(guī)定，判定本發(fā)明組合物對輻射危害有輔助保護作用，使用安全。
具體實施例方式
下面實施例用于對本發(fā)明的進一步說明，但不用于限制本發(fā)明。
實施例1本發(fā)明組合物的組成表1是本發(fā)明組合物按重量百分比的配方，其中5’-核苷酸為可以為5’-腺嘌呤核苷一磷酸，5’-鳥嘌呤核苷一磷酸，5’-胞嘧啶核苷一磷酸，5’-尿嘧啶核苷一磷酸，或它們的任意組合。
表1本發(fā)明組合物的配方

所述組合物含上述重量百分比的三種成分，余下的為可以與醫(yī)學上或者是食品中可接受的載體物質(zhì)，并可混合在一起制備成各種劑型，如加入適量淀粉充分混合，制備成干粉劑。
實施例2功能鑒定1實驗操作步驟①抗輻射組合物配方為實施例1中的配方1。小鼠的使用低劑量組為200mg/kg.bw組合物，高劑量組為400mg/kg.bw。
②實驗動物選用中國軍事科學院實驗動物中心提供的昆明種1月齡二級雌性小鼠(SCXK(京)2002-001)體重18-22g共分二批，小鼠隨機分組。進行血清溶血素和超氧化物歧化酶活性兩項指標的實驗。
③試劑綿羊紅細胞(SRBC)，豚鼠血清，生理鹽水，SA緩沖液，乙醇，三氯甲烷，都氏試劑，超氧化物歧化酶試劑盒。
④輻射動物模型受試小鼠灌胃30天后，進行血清溶血素試驗的小鼠經(jīng)Co60-γ1Gy輻射，進行超氧化物歧化酶活性試驗的小鼠經(jīng)Co60-γ7Gy輻射。
⑤血清溶血素的測定按照《保健食品的功能檢驗與評價技術規(guī)范》規(guī)定的方法進行輻照后14天腹腔注射0.2ml 2％(v/v)SRBC免疫每只小鼠。4d后，眼眶取血于離心管內(nèi)，放置1h，3000r/min離心10min，收集血清。小鼠血清用SA液稀釋200倍，依次加入稀釋的小鼠血清1.00ml、10％(v/v)的SRBC 0.50ml，補體(用SA液1∶10稀釋)1.00ml。另設不加血清的對照管(用SA液替代)。置37.0℃水浴20min后冰水浴終止反應。3000r/min離心10min，取上清液1.00ml，都氏試劑3.00ml于試管內(nèi)，同時取10％(v/v)的SRBC 0.25ml加都氏試劑4.00ml作為半數(shù)溶血管。放置10min后，540nm波長處測定光密度值。試驗結果以半數(shù)溶血值(HC50)表示。
⑥小鼠超氧化物歧化酶活性實驗按照《保健食品的功能檢驗與評價技術規(guī)范》規(guī)定的方法進行輻照后7天后，眼眶取血20μl抽提紅細胞中的超氧化物岐化酶，眼眶取血10μl測定血紅蛋白。超氧化物岐化酶測定使用市售的南京建成生物技術有限公司生產(chǎn)的超氧化物岐化酶試劑盒(產(chǎn)品型號A001，采用亞硝酸鹽形成法)測定。各試劑及用量如表2所示表2超氧化物歧化酶活力測定所用試劑及用量


混勻，室溫放置10分鐘，于波長550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色。
血紅蛋白測定眼眶取血10μl加入到2.5ml都氏試劑，充分混合，靜置15分鐘。選用0.5cm光徑比色杯，于540nm波長下，用空白試劑調(diào)零點進行測定。

血紅蛋白濃度(g/100ml)＝A樣品*0.736*注實驗數(shù)據(jù)用微軟公司的Excel軟件進行方差分析統(tǒng)計。
2實驗結果①受試物對小鼠體重的影響表3受試物對小鼠體重的影響(X±SD)

由表3可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，與陰性對照組比較，各劑量組體重均無顯著性差異p＞0.05。
②受試物對小鼠血清溶血素的影響表4受試物對小鼠血清溶血素的影響(X±SD)

注*表不與陰性對照組比較，有顯著性差異p＜0.05。
由表4可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天，輻射14天后與陰性對照組比較，低劑量組的HC50有顯著性差異p＜0.05。
③受試物對小鼠超氧化物歧化酶活性的影響表5受試物對小鼠超氧化物歧化酶活性的影響(X±SD)

注*表不與陰性對照組比較，有顯著性差異p＜0.05。
由表5可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，與陰性對照組比較，低劑量組的小鼠超氧化物歧化酶活性有顯著性差異p＜0.05。
結論經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，與陰性對照組比較，低劑量組血清溶血素HC50提高30.69％(p＜0.05)，低劑量組超氧化物歧化酶活性提高16.84％(p＜0.05)。其它各項指標無顯著性差異p＞0.05，實驗前后小鼠體重無顯著性差異p＞0.05。依據(jù)《保健食品的功能檢驗與評價技術規(guī)范》規(guī)定，可判定本發(fā)明組合物對輻射危害有顯著的保護功能。
參考文獻1.周元愷等，核酸前體對小鼠腸腺輻射損傷的恢復作用，輻射研究與輻射工藝學報，1994，(2)96～992.Sulabha S.Kulkarni，F(xiàn)unctional Impairment of T-lymphocytes inMouse Radiation Chimeras by a Nucleotide-free Diet Exp.Hematol，1984，(12)694～6993蔡文杰等，外源核苷酸的營養(yǎng)作用及其研究進展，養(yǎng)殖與飼料，2005，(4)20～404.曾桂英等，四種核酸前體對小鼠小腸輻射損傷的恢復作用，輻射研究與輻射工藝學報，1998，16(4)231-2335.周殿風等，維生素c對紫外線誘發(fā)DNA損傷的保護作用，光學學報，2005，(5)643～6466.崔洪斌，大豆生物活性物質(zhì)的開發(fā)與應用，中國輕工業(yè)出版社，2001，86～87.
權利要求
1.一種抗輻射組合物，其含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸 10～30％維生素c 5～15％大豆低聚糖 20～40％
2.如權利要求1所述的組合物，其含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸 15-20％維生素c 5-10％大豆低聚糖 30-40％
3.如權利要求1或2所述的組合物，其含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸 17％維生素c 8％大豆低聚糖 35％
4.如權利要求1、2或3所述的組合物，其還含有按重量百分比為15～65％的輔料。
5.如權利要求4所述的組合物，其特征在于所述輔料按重量百分比為40％。
6.如權利要求1、2或5任一項所述的組合物，其特征在于所述的5’-核苷酸為5’-腺嘌呤核苷一磷酸，5’-鳥嘌呤核苷一磷酸，5’-胞嘧啶核苷一磷酸，5’-尿嘧啶核苷一磷酸，或它們的任意組合。
7.如權利要求6所述的組合物，其特征在于所述5’-核苷酸為任意兩種或三種5’-核苷酸的組合。
8.如權利要求1～7任一項所述的組合物，其為干粉劑、片劑、膠囊或口服液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗輻射的組合物，該組合物含有下列重量百分比的組分5′－核苷酸10－30％，維生素C5－15％，大豆低聚糖20－40％。受試者經(jīng)口服施用不同劑量的本發(fā)明組合物后，其血清溶血素HC50和超氧化物歧化酶活性均有顯著提高(p＜0.05)，另外，受試者的體重和其它各項指標無顯著性差異p＞0.05。本發(fā)明的抗輻射組合物對輻射危害有輔助保護作用，且使用安全。
文檔編號A61K9/20GK1961891SQ20061011473
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月22日 優(yōu)先權日2006年11月22日
發(fā)明者趙紅玲, 賈乃堃, 劉朵花, 黎高沃 申請人:北京燕京中科生物技術有限公司