專利名稱：生產(chǎn)血纖蛋白膠的方法和裝置以及制得的血纖蛋白膠及其醫(yī)學(xué)用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由血漿制備血纖蛋白原的工藝和裝置。尤其是，涉及一種新裝置，采用新的制備工藝由血漿生產(chǎn)血纖蛋白膠。該制備工藝可在完全密閉和無(wú)菌系統(tǒng)中進(jìn)行的，以避免制備物暴露空氣而污染。此外，本發(fā)明還涉及一種恒溫雙注射器，用于維持血纖蛋白膠呈液體狀，且與凝血酶混合形成一種均一的液體，以獲得止血和組織粘合的效果。
本發(fā)明還涉及溶血栓試劑漢防己堿及預(yù)防心導(dǎo)管手術(shù)后復(fù)發(fā)的新溶血栓膜。上述工藝也可用動(dòng)物血來(lái)完成。
背景技術(shù)：
雖然血纖蛋白膠常用于外科的創(chuàng)傷修復(fù)和其它臨床治療，但血纖蛋白膠的有效用途仍受到一些困難的阻礙。尤其是，生產(chǎn)高濃度血纖蛋白膠通常需要長(zhǎng)時(shí)間及收集大量血漿等繁瑣的工藝過(guò)程。這種耗時(shí)、麻煩的工藝及引起污染限制了實(shí)際應(yīng)用，特別是緊急用途?；瘜W(xué)試劑會(huì)引起血纖蛋白膠變性的事實(shí)也限制了一些生產(chǎn)工藝。通常收集大量血漿及在血漿暴露空氣和環(huán)境的生產(chǎn)工藝中，艾滋病毒及肝炎病毒等可進(jìn)入血漿混合液內(nèi)引起傳染。不相容的血液還可產(chǎn)生免疫反應(yīng)。這些危險(xiǎn)進(jìn)一步限制了這種工藝的實(shí)際用途和安全性。雖然目前美國(guó)采用洗滌劑等消毒血漿，但肝炎病毒仍能繼續(xù)傳染，所以混合血漿生產(chǎn)仍是一個(gè)大問(wèn)題。
由基本的生理功能生產(chǎn)的血纖蛋白膠用于各種外科手術(shù)愈來(lái)愈普遍。在有鈣離子的情況下，血纖蛋白原、凝血酶和XIII因子被激活時(shí)，產(chǎn)生了一種穩(wěn)定的血纖蛋白膠。血纖蛋白膠用于創(chuàng)傷部位可恢復(fù)創(chuàng)傷的結(jié)構(gòu)特性。而且，血纖蛋白膠含有可刺激修復(fù)或治愈傷創(chuàng)的成分。
Rose等在題為“作為一種由單一供體新鮮凍干血漿的濃縮液制備血纖蛋白粘合劑”的美國(guó)專利4,627,879中，披露了制備含血纖蛋白原和XIII因子的冷凍沉淀懸浮液的方法。此方法包括的步驟是(1)來(lái)源于單一供體，如人或其它動(dòng)物的新鮮冰凍血漿于-80℃冷凍至少6～12小時(shí)；(2)將凍干的血漿溫度提高到室溫，以便形成一種上清液和含血纖蛋白原和XIII因子的冷凍沉淀的懸浮液；(3)回收冷凍沉淀的懸浮液。冷凍沉淀的懸浮液可用作制備血纖蛋白膠的中間體。但Rose等的發(fā)明未能提供足夠的高濃度血纖蛋白膠，所以其膠的粘合特性及穩(wěn)定性不能保證臨床和外科的需要。此外，耗時(shí)長(zhǎng)的血纖蛋白膠的制備工藝也限制了其實(shí)際的用途。
Galanakis在題為“制備自身血漿血纖蛋白的方法和裝置”的美國(guó)專利5,185,001(1993年2月9日公布)中，披露了一種制備自身血漿血纖蛋白在手術(shù)期間引起局部止血的方法。自身血漿與一種生理上可接受的凝血酶溶液同時(shí)噴在治療部位上，在部位上引起止血。Galanakis還披露了同時(shí)噴容器內(nèi)含物的裝置，該容器分別含有自身血漿血纖蛋白和凝血酶溶液。
在Galanakis的專利中，進(jìn)一步披露了一種藥盒，內(nèi)有血樣、血漿血纖蛋白及所有必需的注射器、針頭和試劑。在Galanakis專利中披露的制備自身血漿血纖蛋白的裝置和方法，這是一種低濃度血漿血纖蛋白，該血漿血纖蛋白適用于引起局部止血，可用于較小的創(chuàng)傷。但添加凝血酶后的血漿血纖蛋白不能用于外科手術(shù)粘合，特別是涉及較大的外科創(chuàng)傷。
Epstein在題為“由全血制備血纖蛋白原粘合劑的方法和裝置”的美國(guó)專利5,226,877(1993年7月13日公布)中，披露了采用聚乙二醇沉淀血漿法，一步制備血纖蛋白原粘合劑的工藝和裝置。這些方法和裝置能在外科手術(shù)期間從患者自身制備血纖蛋白原粘合劑成份。在Epstein的發(fā)明中，還披露了制備由血纖蛋白原粘合劑成分構(gòu)成的一種密封膠的裝置和方法。根據(jù)Epstein介紹，血漿從紅血細(xì)胞分離后，直接在室溫中處理，無(wú)需先用一種生理上可接受的非毒性沉淀劑處理除去凝血酶。最佳沉淀劑是一種非毒性的聚合物，如聚乙烯醇和聚乙二醇。作為濃縮液提供的沉淀劑與血漿混合，產(chǎn)生一種有效沉淀粘合劑成份的濃縮液。
Epstein方法用于生產(chǎn)血纖蛋白原粘合劑，但該方法有一問(wèn)題，即沉淀劑(包括非毒性聚合物)加入血漿內(nèi)可引起未知的副作用。因?yàn)檫@些沉淀劑沒有從粘合劑中除去，而直接用于患者的血液中，未除去的添加劑可能引入未知的、有害的物質(zhì)，直到多年后才易被發(fā)現(xiàn)。Epstein方法還產(chǎn)生白蛋白沉淀和其它復(fù)合蛋白質(zhì)，它們會(huì)影響血纖蛋白膠的粘合和止血效果。
Sierra等在題為“外科粘合劑材料”的美國(guó)專利5,290,552(1994年3月1日公布)中，披露了一種外科粘合劑。由含有水、血纖蛋白原、膠原、凝血酶、鈣及任選的抗血纖蛋白溶解劑構(gòu)成。為了從患者自身血漿的粘合劑成分中提取血纖蛋白原，將血漿冷凍至-20℃來(lái)制備血漿冷凍沉淀物，然后，慢慢融化過(guò)夜。融化的血漿離心，收集血漿沉淀物。此工藝的缺點(diǎn)是，通過(guò)低溫工藝生產(chǎn)外科粘合劑所需的時(shí)間極長(zhǎng)。雖然血纖蛋白原是在密閉的系統(tǒng)中生產(chǎn)的，但添加膠原可能引起不良的免疫反應(yīng)及接觸空氣可能造成污染，故在制備過(guò)程中的危險(xiǎn)性較大。
Cochrum在題為“血漿和含外科用止血粘合劑的聚合物”的美國(guó)專利5,510,102(1996年4月23日公布)中，披露了一種富及血小板的血漿和一種含止血粘合劑的生物相容的聚合物。粘合劑用于傷口或脈管出血時(shí)具有強(qiáng)的止血特性。雖然Cochrum發(fā)明專利披露的方法可以生產(chǎn)富及血小板的血漿，但由于血漿中加入生物相容的聚合物，對(duì)人體產(chǎn)生未知的副作用的危險(xiǎn)性仍是令人擔(dān)憂的。尤其是在混合物直接用于脈管損傷時(shí)，這種血漿會(huì)被吸收，經(jīng)血管帶到全身的危險(xiǎn)性。
Coelho等在題為“血纖蛋白原加工裝置、方法和容器”的美國(guó)專利5,520,885中，披露了從血制品中冷凍沉淀制備血纖蛋白原的方法。在該發(fā)明專利中披露了方法、裝置和容器。如上所述，冷凍沉淀法需長(zhǎng)時(shí)間冷凍和融化，使這種方法和裝置不能有效地用于外科和臨床。因此，在血纖蛋白膠生產(chǎn)中仍需要提供一種新的、有效的工藝，這樣在短時(shí)間內(nèi)就可完成血纖蛋白膠粘合劑的生產(chǎn)。然而，血纖蛋白原粘合劑生產(chǎn)須無(wú)污染、無(wú)添加劑，這樣血纖蛋白膠在外科和臨床治療中可安全地在人體上應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述理由，本發(fā)明的目的是提供新的、簡(jiǎn)便、快速的方法生產(chǎn)血纖蛋白膠，克服以前工藝中遇到的困難和限制。尤其是，本發(fā)明的目的是提供一種從血漿中生產(chǎn)血纖蛋白膠的新技術(shù)和裝置，尤其可采用自身血漿生產(chǎn)血纖蛋白膠。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種從血漿中生產(chǎn)血纖蛋白膠的方法，其特征在于其包括下列步驟1)將血漿在-20℃～-80℃進(jìn)行冷凍沉淀20分鐘；2)將步驟1)所得的含沉淀的液體在0℃融化20分鐘；3)重復(fù)步驟1)和2)8-10次；4)將步驟3)所得物質(zhì)進(jìn)一步過(guò)濾分離得到的沉淀物即為本發(fā)明的血纖蛋白膠。
一種為實(shí)施上述方法而專門設(shè)計(jì)的密閉裝置，其包括一個(gè)接受血液的接受裝置，該接受裝置依次通過(guò)第一、第二傳遞裝置分別連接有一個(gè)提供適當(dāng)抗凝血?jiǎng)┑牡谝谎簝?chǔ)器及一個(gè)從血液中將不需要的組份分離開、制得血漿的分離裝置；一個(gè)用于從血漿的各種組份中分離血纖蛋白膠的分離裝置，該分離裝置一端與血漿的分離裝置相連通，其間還設(shè)有一紅細(xì)胞和血紅蛋白檢測(cè)器；一個(gè)用于收集分離所得沉淀物的血纖蛋白膠收集器，其通過(guò)一血纖蛋白膠傳遞裝置與該血纖蛋白膠的分離裝置另一端相連通；其中，該血纖蛋白膠的分離裝置、血纖蛋白膠收集器及其之間的傳遞裝置均設(shè)于一個(gè)可調(diào)節(jié)溫度的冰箱內(nèi)，組成一個(gè)用于快速冷凍、快速融化的血纖蛋白膠制備及溫控裝置。
其中，該密閉裝置還包括一用于自動(dòng)將不需要的血液成份回輸?shù)难b置，該裝置包括一個(gè)再輸注儲(chǔ)器，其一端通過(guò)第三傳遞裝置與接受裝置相連通，該第三傳遞裝置位于第一傳遞裝置與接受裝置相接的接點(diǎn)之后，該再輸注儲(chǔ)器另一端通過(guò)第二傳遞裝置與血漿的分離裝置相連通；一個(gè)第二血液儲(chǔ)器，與血漿的分離裝置的另一端相連通，用于收集血液分離后的不需要成份；該第二血液儲(chǔ)器連接于第三傳遞裝置與再輸注儲(chǔ)器之間的通路上，分別與接受裝置和再輸注儲(chǔ)器相連通，該再輸注儲(chǔ)器與第二血液儲(chǔ)器的連接通路上設(shè)有兩閥門，用于控制回輸過(guò)程。
利用本發(fā)明的方法，無(wú)需使用沉淀劑。此血纖蛋白膠可在數(shù)小時(shí)內(nèi)制備，可實(shí)際和安全使用。
而且，利用本發(fā)明的密閉裝置，制備血纖蛋白膠可在密閉、無(wú)菌的系統(tǒng)中進(jìn)行的。這樣，可避免在開放系統(tǒng)中，血液傳染病(如艾滋病或肝炎病毒)的傳染；特別地是，還可從自身血漿中獲得生物相容性更佳的血纖蛋白膠。
另外，由于不使用任何沉淀劑，故在以前工藝中存在的化學(xué)或生物相容的添加劑引起的蛋白質(zhì)變性而產(chǎn)生的副作用可以排除。
因此，利用本發(fā)明的方法和裝置可生產(chǎn)不含任何沉淀劑、含高濃度的血纖蛋白原，具有高粘合強(qiáng)度和止血效果的血纖蛋白膠。這種血纖蛋白膠還有助于實(shí)際應(yīng)用，因它可冷藏，可在0℃達(dá)兩個(gè)月到一年仍能保持其質(zhì)量特征。
本發(fā)明的另一目的是提供一種血纖蛋白膠的使用裝置，其為雙注射器混合器，包括兩個(gè)用于分別容納血纖蛋白膠和其他凝血?jiǎng)?，如的注射器、一個(gè)自動(dòng)推動(dòng)器及一個(gè)混合器，該兩個(gè)注射器的后端平行安裝于自動(dòng)推動(dòng)器上，前端分別連接于混合器的后端；其特征在于該雙注射器混合器還具有一個(gè)恒溫裝置，該兩個(gè)注射器及混合器置于該恒溫裝置內(nèi)。其為新的恒溫(0℃～37℃)注射器混合器，用于混合血纖蛋白膠和其他凝血?jiǎng)?、如凝血酶和鈣，形成均一的粘合劑，以提高治療效果。
本發(fā)明的另一目的是提供一種由血纖蛋白膠與抗凝血?jiǎng)┲频玫目寡?，特別是一種含新的抗血栓劑-漢防己堿的FB膜(血纖蛋白膠-漢防己堿膜)，在心導(dǎo)管手術(shù)期間溶解血栓形成和防止血栓形成，以預(yù)防心導(dǎo)管手術(shù)后的復(fù)發(fā)。


圖1是按照本發(fā)明說(shuō)明裝置實(shí)施例的透視圖。
圖2是按照本發(fā)明說(shuō)明恒溫雙注射器混合器的透視圖。
圖3是按照本發(fā)明說(shuō)明采用乙醚系列試劑或乙醇系列試劑提取生產(chǎn)血纖蛋白膠的示意圖。
圖4是按照本發(fā)明說(shuō)明不用乙醚提取生產(chǎn)血纖蛋白膠的示意圖。
圖5是F-B溶血栓膜制備工藝流程。
圖1列出制備血纖蛋白膠的裝置的部件100-裝置控制板 101-轉(zhuǎn)移管道102-從供體中抽血的針 104-蠕動(dòng)泵105-閥門 106-再輸注儲(chǔ)器108-蠕動(dòng)泵 110-離心機(jī)或膜分離裝置112-蠕動(dòng)泵 114-血漿袋115-乙醚或R-OH溶劑，包括乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇和戊醇116-血漿袋 117-閥門119-紅細(xì)胞和血紅蛋白檢測(cè)器 120-血漿袋容器120a-血漿袋或塑料帽120b-具有泵的能開的進(jìn)口122-轉(zhuǎn)盤 122a-連接桿125-可調(diào)節(jié)溫度的冰箱 126-轉(zhuǎn)移管127-夾鉗 128-蠕動(dòng)泵130-離心機(jī)或膜分離裝置 131-上清液管
140-真空泵 145-無(wú)菌過(guò)濾器155-旋轉(zhuǎn)的筒形容器 160-血纖蛋白膠收集器165-蠕動(dòng)泵 170-注射器出口177-血纖蛋白膠圖2列出恒溫雙注射器混合器的部件170-注射器1含血纖蛋白膠171-注射器2含凝血酶和鈣172-混合器 173-自動(dòng)推進(jìn)器174-溫控裝置 175-熱絕緣蓋具體實(shí)施方式
最佳實(shí)施例參閱圖1所示，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)，采用裝置100生產(chǎn)高濃度、高粘合強(qiáng)度、高止血效果的血纖蛋白原。
首先從針102抽得患者的血。通過(guò)蠕動(dòng)泵112作用，血立即與從血漿袋114中抽出的抗凝血?jiǎng)┗旌?，此袋用作抗凝血?jiǎng)┑膬?chǔ)器。再通過(guò)蠕動(dòng)泵104將患者的血抽到再輸注儲(chǔ)器106，然后通過(guò)蠕動(dòng)泵108轉(zhuǎn)移到膜或離心分裝置110，在那里進(jìn)行自動(dòng)血液成份輸血過(guò)程。從患者血液中抽出的紅細(xì)胞通過(guò)自動(dòng)血液成份輸血過(guò)程，被轉(zhuǎn)移到第二個(gè)血漿袋116，接著再輸注回到患者。血漿膜分離裝置110可能是膜或是離心機(jī)。采用蠕動(dòng)泵108，經(jīng)轉(zhuǎn)移管道101將由血漿膜分離裝置110提取的血漿轉(zhuǎn)移到第三個(gè)血漿袋或固定在血漿容器120內(nèi)的一個(gè)塑料帽120a。紅細(xì)胞和血紅蛋白檢測(cè)器119置于血漿膜分離裝置110和第三個(gè)血漿袋或塑料帽120a之間的轉(zhuǎn)移管道101上，以檢測(cè)進(jìn)入第三個(gè)血漿袋或塑料帽120a的血漿的紅細(xì)胞和血紅蛋白的計(jì)數(shù)。適量的乙醚系列試劑或其它含OH基的合適試劑及抗凝血?jiǎng)┩ㄟ^(guò)可開啟的進(jìn)口120b可引入第三個(gè)血漿袋或塑料帽120a中，典型地用于一種血漿袋，從血漿中傳送或抽出物質(zhì)。血漿容器120經(jīng)連接桿122a與轉(zhuǎn)盤122連接。采用轉(zhuǎn)盤122，搖動(dòng)容器120 4-5分鐘，使血漿與乙醚和抗凝血?jiǎng)┏浞只旌?。血漿容器120置于冰箱125中，溫度控制在0℃。在一個(gè)最佳實(shí)施例中，血漿量約250～300cc(約含8％乙醚)?；旌弦杭s含3.6～4.5％抗凝血?jiǎng)幟仕徕c和無(wú)菌水。振搖和充分混合后，冰箱溫度調(diào)節(jié)至約-20℃。含血漿混合液的容器120的溫度維持在-20℃約2-3小時(shí)。然后冰箱溫度調(diào)節(jié)到約0℃。
通過(guò)管子126和血纖蛋白膠夾鉗127，用第一個(gè)血纖蛋白膠泵128，將血漿混合液從第三個(gè)血漿袋120a轉(zhuǎn)移到血纖蛋白膠膜分離裝置130。血纖蛋白膠膜分離裝置130可以是一種過(guò)濾裝置、一種膜，最好是一種離心裝置。從血漿內(nèi)的其它組份中離心分離血纖蛋白膠。離心裝置由一個(gè)旋轉(zhuǎn)的筒形容器155構(gòu)成，包括許多膜層。離心轉(zhuǎn)速為300～4000轉(zhuǎn)/分。在這種離心分離過(guò)程下，從血纖蛋白原中分離出血漿混合液的上清液，在筒形容器155的底部收集上層血纖蛋白原。然后，經(jīng)一根管子，用第二個(gè)血纖蛋白膠泵165將血纖蛋白原轉(zhuǎn)移到血纖蛋白原收集器160和注射器170，備用于外科或其它治療上。真空泵140與血纖蛋白原收集器160連接，在血纖蛋白膠轉(zhuǎn)移到血纖蛋白原收集器160以后立即通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾器145除去在血纖蛋白原收集器中含有的乙醚及酒精系列試劑。
應(yīng)該注意的是，振搖和離心過(guò)程結(jié)合一起作為一個(gè)單元可以明顯簡(jiǎn)化前述的裝置和工藝。參閱圖1，如最佳實(shí)施例所述，用具有旋轉(zhuǎn)的筒形容器155來(lái)代替可以省去第三個(gè)血漿袋120a、及其容器、血漿容器120。采用蠕動(dòng)泵108，通過(guò)轉(zhuǎn)移管101將由血漿膜分離裝置110提取的血漿轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)的筒形容器155，血漿混合液可同時(shí)采用離心裝置和轉(zhuǎn)盤122振動(dòng)，這樣可同時(shí)進(jìn)行血漿混合和分離過(guò)程。此外，真空泵140可直接與旋轉(zhuǎn)的筒形容器155連接，而不是連接血纖蛋白原收集器160，在離心分離操作時(shí)，通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾器145將血漿混合液中含有的乙醚除去。
顯而易見的是，這里所述的簡(jiǎn)化方法不需轉(zhuǎn)盤122，連接桿122a、第三個(gè)血漿袋120a、血漿容器120和至少一個(gè)泵，不需考慮其由病人自身血液生產(chǎn)血纖蛋白原的功效。應(yīng)進(jìn)一步注意的是，為了方便的目的，本發(fā)明中所述的所有泵(除真空泵外)均指明它們各自的功能。但正如本發(fā)明所要求的那樣，最好是在密閉、無(wú)菌的系統(tǒng)內(nèi)用蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)移血液和血漿。
參閱圖2所示，本發(fā)明提供一種恒溫的雙注射器混合器。如上所述，血纖蛋白原一旦轉(zhuǎn)移到血纖蛋白原收集器160和注射器170，它就可備用于外科或其它治療上。但已知血纖蛋白膠在物理上作為一種半固體物質(zhì)在室溫中存在，如果血纖蛋白膠在與凝血酶充分混合或應(yīng)用于創(chuàng)傷之前過(guò)早地凝固，那么會(huì)嚴(yán)重地阻礙它在外科或其它治療上的應(yīng)用。為了解決這一問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種恒溫雙注射器混合器。
如圖2所示，含血纖蛋白膠的注射器170與第二個(gè)注射器171平行裝到自動(dòng)推進(jìn)器173上。第二個(gè)注射器含凝血酶和鈣。注射器170和注射器171的一端與混合器172連接。開電源開關(guān)啟動(dòng)自動(dòng)推進(jìn)器，同時(shí)產(chǎn)生一種與注射器170和注射器171一樣的向下力，從兩個(gè)注射器中將血纖蛋白膠和凝血酶推入混合器172中，在混合器中血纖蛋白膠和凝血酶及鈣混合形成一種均一的混合液。注射器170和注射器171安裝在溫度控制裝置內(nèi)，受到熱絕緣蓋175的覆蓋和保護(hù)，以確保注射器可達(dá)到37℃恒溫。
由于已知血纖蛋白膠在物理上以液體形式在37℃存在，因此它易與凝血酶和鈣混合，產(chǎn)生具有足夠粘合強(qiáng)度的均一的血纖蛋白膠，更適宜于外科或其它治療用途。
示意圖3是生產(chǎn)血纖蛋白膠的工藝流程圖。在具有總體積約300cc與8％乙醚混合的血漿容器120中，從患者中提取的血漿用3.6-3.8％檸檬酸鈉和無(wú)菌水混合?；旌弦赫袷?0分鐘?；旌系难獫{調(diào)節(jié)到0℃，經(jīng)離心(3300rpm)約20分鐘，或通過(guò)膜過(guò)濾分離上清液和血纖蛋白膠。在離心期間同時(shí)用真空泵140除去乙醚。然后，混和血纖蛋白膠至室溫約37℃，備用于治療患者的創(chuàng)傷。在血纖蛋白膠生產(chǎn)的實(shí)際工藝中，整個(gè)步驟不超過(guò)4～5小時(shí)。如表1所示，上述裝置和步驟重復(fù)于生產(chǎn)血纖蛋白膠，收率為70％～95％，平均收率為82％，血纖蛋白原濃度在6000mg/dl以上，抗豬皮粘合強(qiáng)度試驗(yàn)測(cè)定其粘合強(qiáng)度至少為400kg/cm。
如圖4、圖1所示，在根據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)血纖蛋白膠的另一特例中，從患者中提取的血漿不與任何數(shù)量的乙醚或其它R-OH溶劑混合。血漿在血漿容器120的第三個(gè)血漿袋或塑料帽120a中與3.6～3.8％檸檬酸鈉和無(wú)菌水混合后，血漿置于溫度控制的冰箱125，-20℃～-80℃，20分鐘。然后，溫度調(diào)節(jié)到0℃，20分鐘。冰箱的循環(huán)和融化反復(fù)8-10次，接著是將血漿轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)的筒形容器155，該容器由溫度控制的冰箱控制，于37℃融化血纖蛋白膠。注射器170用來(lái)收集血纖蛋白膠。因?yàn)榇斯に嚺懦诵枰颐鸦蚱渌黂-OH溶劑，故真空泵140和無(wú)菌過(guò)濾器145可進(jìn)一步從裝置中排除，使裝置再得到簡(jiǎn)化。此外，按照FDA標(biāo)準(zhǔn)采用病人自身的血漿，整個(gè)過(guò)程是在一個(gè)密閉的操作系統(tǒng)中進(jìn)行，避免了任何種類的傳染病。用上述工藝制備血纖蛋白膠僅需5-7小時(shí)，濃度為6000mg/dl-8000mg/dl。根據(jù)此方法，血纖蛋白原的產(chǎn)量在80％以上。
在另一特列中，本發(fā)明還提供了采用外包漢防己堿的血纖蛋白膠制備抗血栓膜作為醫(yī)用，例如在導(dǎo)管支撐物上形成一種抗血栓膜。尤其是導(dǎo)管支撐物浸在一系列的試管中，如圖5所示，每個(gè)試管浸泡2-3分鐘操作如下(1)試管#1 3-4cc卵白蛋白；(2)試管#2 3-4cc血纖蛋白膠；(3)試管#3 3-4cc凝血酶和鈣；(4)試管#4 3-4cc無(wú)菌水；(5)試管#5 3-4cc無(wú)菌水；(6)試管#6 3-4cc漢防己堿或其它抗血栓劑。應(yīng)注意的是，上述順序可根據(jù)情況而改變。表2、3、4、5、6表示根據(jù)本發(fā)明抗血栓膜有預(yù)防心導(dǎo)管手術(shù)的血栓復(fù)發(fā)的作用。
抗血栓劑-漢防己堿(Tetrandrine)漢防己堿系一種從粉防己(Stephania tetrandra S.More)、防己料(Menispermaceae)中提取得到的生物堿化合物。分子式C38H42N2O6，分子量622.76，C 73.29％、H 6.8％、N 4.5％、O 15.41％，白色針狀，熔點(diǎn)217～218，[a]26D-278(于氯仿中)、UV[λ]0.01N HClMAX280nm，e 6897.39，IRVKBRmax 1500，1580，1605，3050，840，2800，1235，1215CM-1NMR CDCLTM5δ2.26，δ2.54，δ3.09，δ3.28，δ3.60，δ3.84

原始植物粉防己是一種傳統(tǒng)的中草藥。其中文名稱為漢防己。它用作關(guān)節(jié)炎、利尿劑和中風(fēng)及抗癌。
最近我們發(fā)現(xiàn)漢防己堿是一種抗血栓劑的新用途。許多實(shí)驗(yàn)表明，由于細(xì)胞從血管壁中脫落，人體靜脈中產(chǎn)生的凝塊、血栓形成，主要組份是血纖蛋白原和凝血酶。而在動(dòng)脈中，血液內(nèi)的凝塊、血栓形成的主要組份是血小板和凝血酶及高濃度鈣。但漢防己堿不但溶解由血纖蛋白原和凝血酶形成的血栓，且能溶解由血小板和凝血酶形成的血栓。它抑制由鈣和血漿形成的血栓。
表1.采用乙醚提取的血纖蛋白原濃度和產(chǎn)量

表2.

表3.

表4.

表2、3、4的數(shù)據(jù)表明，漢防己堿可抑制鈣和血漿的血栓形成。如果血漿含有漢防己堿，然后加鈣，5小時(shí)后不形成血栓。如果血漿不含漢防己堿，加鈣后立即形成血栓。
表5.漢防己堿抑制血漿和凝血酶的血栓形成

表6.

以上數(shù)據(jù)表明，漢防己堿抑制血漿和凝血酶形成血栓與漢防己堿的濃度有關(guān)。濃度較高，抑制作用較強(qiáng)。
表7.漢防己堿溶解血纖蛋白原和凝血酶的血栓形成。

注經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，本表P值均為P＜0.05。
表8.

表9.

注經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，本表P值均為＜0.05。
表8、9的數(shù)據(jù)表明，漢防己堿能防止或溶解血小板和凝血酶形成的血栓。
與其它現(xiàn)代的抗血栓劑比較，采用漢防己堿最重要的進(jìn)展是不損害血液凝集機(jī)制及不引起出血。
因此，本血纖蛋白膠發(fā)明提供了新技術(shù)，此技術(shù)的制備時(shí)間少，采用簡(jiǎn)便工藝，能使具有一般技能的人克服以前技術(shù)中所遇到的困難和局限。尤其是，披露的新技術(shù)和裝置采用乙醚作為可除去的沉淀劑。對(duì)血漿進(jìn)行6-8次20分鐘冷凍、20分鐘融化循環(huán)可得到血纖蛋白膠，以確保能在數(shù)小時(shí)內(nèi)制備血纖蛋白膠。生產(chǎn)周期實(shí)用、安全。
血纖蛋白膠的制備是在一個(gè)密閉和無(wú)菌系統(tǒng)中進(jìn)行的，可排除血制品輸血過(guò)程中引起的血液污染。另外，通過(guò)蒸發(fā)和真空泵可以完全除去用作沉淀劑的乙醚系列及乙醇無(wú)毒揮發(fā)性試劑及排除由血纖蛋白膠中的化學(xué)或生物相容的添加劑引起副作用的擔(dān)憂。最后，因?yàn)檠w蛋白膠含高濃度的血纖蛋白原，故采用本發(fā)明的技術(shù)生產(chǎn)具有高粘合強(qiáng)度、高效止血的血纖蛋白膠。
權(quán)利要求
1.一種從血漿中生產(chǎn)血纖蛋白膠的方法，其特征在于其包括下列步驟1)將血漿在-20℃～-80℃進(jìn)行冷凍沉淀20分鐘；2)將步驟1)所得的含沉淀的液體在0℃融化20分鐘；3)重復(fù)步驟1)和2)8-10次；4)將步驟3)所得物質(zhì)進(jìn)一步過(guò)濾分離得到的沉淀物即為本發(fā)明的血纖蛋白膠。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于該步驟1)中所述的血漿為動(dòng)物或人血漿。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于該步驟1)中所述的血漿為自體血漿。
4.一種為實(shí)施權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的方法而專門設(shè)計(jì)的密閉裝置，其包括一個(gè)接受血液的接受裝置(102)，該接受裝置(102)依次通過(guò)第一、第二傳遞裝置(112)、(108)分別連接有一個(gè)提供適當(dāng)抗凝血?jiǎng)┑牡谝谎簝?chǔ)器(114)及一個(gè)從血液中將不需要的組份分離開、制得血漿的分離裝置(110)；一個(gè)用于從血漿的各種組份中分離血纖蛋白膠的分離裝置，該分離裝置一端與血漿的分離裝置(110)相連通，其間還設(shè)有一紅細(xì)胞和血紅蛋白檢測(cè)器(119)；一個(gè)用于收集分離所得沉淀物的血纖蛋白膠收集器(160)，其通過(guò)一血纖蛋白膠傳遞裝置(165)與該血纖蛋白膠的分離裝置另一端相連通；其中，該血纖蛋白膠的分離裝置、血纖蛋白膠收集器(160)及其之間的傳遞裝置(165)均設(shè)于一個(gè)可調(diào)節(jié)溫度的冰箱(125)內(nèi)，組成一個(gè)用于快速冷凍、快速融化的血纖蛋白膠制備及溫控裝置。
5.一種如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的方法制備的血纖蛋白膠。
6.一種抗血栓膜，其包括血纖蛋白膠及抗凝血?jiǎng)?br> 7.如權(quán)利要求6所述的抗血栓膜，其特征在于該抗凝血?jiǎng)┻x自漢防己堿、肝素和溶栓酶。
8.漢防己堿在制備溶血栓藥物中的應(yīng)用。
9.一種血纖蛋白膠的使用裝置，其為雙注射器混合器，包括兩個(gè)用于分別容納血纖蛋白膠和其他凝血?jiǎng)┑淖⑸淦?、一個(gè)自動(dòng)推動(dòng)器及一個(gè)混合器，該兩個(gè)注射器的后端平行安裝于自動(dòng)推動(dòng)器上，前端分別連接于混合器的后端；其特征在于該雙注射器混合器還具有一個(gè)恒溫裝置，該兩個(gè)注射器及混合器置于該恒溫裝置內(nèi)。
10.如權(quán)利要求9所述的使用裝置，其特征在于該恒溫裝置包括一個(gè)溫度控制裝置及一個(gè)熱絕緣蓋，該兩個(gè)注射器及混合器位于該溫度控制裝置及熱絕緣蓋之間形成的腔內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及從血漿中生產(chǎn)血纖蛋白膠的工藝方法，其主要將血漿經(jīng)8－10次快速冷凍法進(jìn)行反復(fù)沉淀和溶解，并進(jìn)行過(guò)濾分離得到沉淀物。本發(fā)明還提供為實(shí)施上述方法而專門設(shè)計(jì)的裝置；以及利用本發(fā)明的工藝方法制得的血纖蛋白膠，其不含任何化學(xué)沉淀劑、含有高濃度的血纖蛋白原、具高粘合性和高止血效果，可結(jié)合抗凝血?jiǎng)┯糜谥苽淇寡?，該抗血栓膜可預(yù)防心導(dǎo)管手術(shù)后血栓的復(fù)發(fā)。本發(fā)明還提供一種血纖蛋白膠的使用裝置，其為具有一個(gè)恒溫裝置的雙注射器混合器。本發(fā)明還涉及漢防己堿作為一種新的溶血栓劑能防止或溶解靜脈和動(dòng)脈血管中的血栓，而不破壞其凝血機(jī)制。
文檔編號(hào)A61M5/00GK1820762SQ20061005992
公開日2006年8月23日 申請(qǐng)日期2000年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月10日
發(fā)明者黃潯陽(yáng), 梁鋼, 梁焰 申請(qǐng)人:梁華清