專利名稱：密脈鵝掌柴提取物及在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的有效部位提取物，以及所述的有效部位提取物的制備方法和在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
密脈鵝掌柴Schefflera venulosa Wight et Arn.為一種五加科鵝掌柴屬植物。常綠小喬木，高5-7米，掌狀復(fù)葉，小葉5-7片，橢圓形，長5-10厘米，寬2.5-4厘米，先端短漸尖，基部圓形至微心形，全緣，小葉柄長2-4厘米。圓錐花序長約15厘米；花白色，芳香，花梗明顯。漿果球形，成熟時暗紫色。收載于《云南藥品標(biāo)準(zhǔn)1974年版》。具有止痛消腫，舒筋活絡(luò)的功效，用于風(fēng)濕骨痛，頭痛。分布于云南中部、西南部、東南部、南部及西北部，貴州、湖南西部等。中國有鵝掌柴屬植物37種，常作為藥用的有十余種。該屬植物大部分未進(jìn)行過化學(xué)成分研究或研究得不夠系統(tǒng)，有效成分也不明確。以漢桃葉作為處方藥物的成方制劑包括2個藥典品種(收載于1977年版藥典)和2個部頒標(biāo)準(zhǔn)品種，以七葉蓮(S.arboricola)作為處方藥物的成方制劑包括6個部頒標(biāo)準(zhǔn)品種，以鴨腳木皮作為處方藥物的成方制劑包括4個部頒標(biāo)準(zhǔn)品種，均用于祛風(fēng)除濕、舒經(jīng)活絡(luò)、強身壯骨、消腫止痛。現(xiàn)有的同屬其它種的藥物制劑主要為粗提物制備的制劑，化學(xué)成分研究不系統(tǒng)，起到療效的成分也不明確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的即是通過對密脈鵝掌柴(Schefflera venulosa Wight etArn.)的研究提供一種成分明確、質(zhì)量可控、安全有效的藥用提取物及制劑，并提供該提取物在制藥中的新用途。
本發(fā)明的發(fā)明思路基于在深入研究密脈鵝掌柴化學(xué)成分和活性成分過程中，發(fā)現(xiàn)密脈鵝掌柴中含有咖啡酰酸類、槲皮素配糖體、齊墩果酸配糖體，是其重要活性成分。因此，提供了一種成分明確的有效部位提取物，其特征在于該提取物活性成分含有5-40％主要為綠原酸、異綠原酸C、茉莉素的咖啡酰酸類；15-55％主要為蘆丁、槲皮素-7-O-glc、槲皮素-3-O-glc、槲皮素-3-O-glc(6-1)xly、槲皮素-3-O-glcUA的槲皮素配糖體、15-45％齊墩果酸配糖體?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)示意圖見附圖1。附圖2是本發(fā)明提取物的HPLC圖譜，直觀地反映了本提取物的化學(xué)組成概況。
本發(fā)明有效部位提取物可通過如下技術(shù)方案來制備工藝路線如附圖3所示，取密脈鵝掌柴的全株或根、莖、葉，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取2-4次，合并提取液，減壓濃縮，濃縮液加酸調(diào)pH值至3-5，上大孔吸附樹脂層析，先用水洗脫，再用55-70％乙醇洗脫，收集55-70％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，殘留物干燥即得。
本技術(shù)的一個重要特征是應(yīng)用大孔吸附樹脂層析進(jìn)行粗提物的精制，以除去糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高了活性成分的含量。
本提取物與現(xiàn)有的同屬其它種的藥物制劑有顯著區(qū)別，現(xiàn)有的同屬其它種的藥物制劑主要為粗提物制備的制劑，化學(xué)成分研究不系統(tǒng)，有效成分也不明確。本發(fā)明提取物有效成分全面，化學(xué)組成清晰，并且質(zhì)量可控，具有較好的藥效和更廣的適應(yīng)癥群。
本發(fā)明提供了有效部位提取物的含量測定方法，應(yīng)用HPLC法控制咖啡酰酸類主要成分綠原酸的含量、槲皮素配糖體水解產(chǎn)物槲皮素的含量及齊墩果酸配糖體水解產(chǎn)物齊墩果酸的含量；UV法控制槲皮素配糖體及齊墩果酸配糖體含量，含量測定方法如下
綠原酸 高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑；以乙晴—0.4％磷酸溶液(13∶87)為流動相；檢測波長為327nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算不得低于2500。
對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含綠原酸0.04mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取本品5mg于25ml容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算綠原酸的含量。
槲皮素 高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑；以乙晴—0.4％磷酸溶液(36∶64)為流動相；檢測波長為254nm。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算不得低于2500。
對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的槲皮素對照品，加甲醇制成每1ml含槲皮素0.03mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取本品150mg，加甲醇20ml、25％鹽酸5ml，搖勻，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算槲皮素的含量。
齊墩果酸 高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑；以乙睛—水(84∶16)為流動相；檢測波長為203nm。理論塔板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于2500。
對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的齊墩果酸對照品，加甲醇制成每1ml含齊墩果酸0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取本品100mg，加10％硫酸溶液60ml，置水浴中加熱回流4小時，取出，放冷，濾過，殘渣用水洗至中性，并于60℃烘干。精密加入氯仿50ml，稱定重量超聲提取30分鐘后取出放冷，用氯仿補足原重，精密量取供試液25ml蒸干，殘渣加甲醇溶解，移入5ml量瓶中，加甲醇至刻度搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算齊墩果酸的含量。
槲皮素配糖體 分光光度法測定。
蘆丁對照品溶液制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含蘆丁0.2mg的溶液，作為對照品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取蘆丁對照液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置25ml量瓶中，加5％亞硝酸鈉試液1.0ml，搖勻后放置6min，加10％硝酸鋁溶液1.0ml搖勻，放置6min，加4％NaOH液10ml，振搖，加水至刻度，搖勻后放置15min，以第一瓶作為空白，在360-650nm范圍內(nèi)掃描，確定最佳檢測波長，在此波長處測定各標(biāo)品吸收度，得回歸方程。
樣品測定精密稱取樣品約10mg于10ml容量瓶中，加90％甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取上述溶液1ml，置25ml量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項下進(jìn)行操作，測定吸收度，根據(jù)吸收度從回歸方程求出相當(dāng)于蘆丁對照液的濃度，并求出各供試品中總的槲皮素配糖體的含量。
齊墩果酸配糖體 分光光度法測定。
齊墩果酸對照品溶液制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的齊墩果酸對照品，加甲醇制成每1ml含齊墩果酸0.4mg的溶液，作為對照品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取齊墩果酸對照液0、10、20、30、40、60ml，分別置具塞試管中，揮干，加入5％香草醛-冰乙酸液0.2ml，高氯酸0.8ml加塞搖勻，于70℃水浴中加熱20min，取出，冷卻至室溫后，加乙酸乙酯至5ml，搖勻，以第一瓶作為空白，在400-650nm范圍內(nèi)掃描，確定最佳檢測波長，在此波長處測定各標(biāo)品吸收度，得回歸方程。
樣品測定精密稱取樣品約10mg于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取上述溶液20μl，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項下進(jìn)行操作，測定吸收度，根據(jù)吸收度從回歸方程求出相當(dāng)于齊墩果酸對照液的濃度，并求出各供試品中總的齊墩果酸配糖體的含量。
本發(fā)明涉及密脈鵝掌柴有效部位提取物作為制備改善微循環(huán)的藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及密脈鵝掌柴有效部位提取物作為制備抗急性心肌缺血的藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及密脈鵝掌柴有效部位提取物作為制備用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、中風(fēng)后遺癥的藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及密脈鵝掌柴有效部位提取物作為制備用于治療急慢性腦缺血、腦梗塞、腦血栓的藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1、本發(fā)明提供了植物密脈鵝掌柴可作為藥物組分的有效部位提取物，該提取物可以單獨使用，也可以與其他植物提取物混合使用。
2、本發(fā)明對已知植物密脈鵝掌柴發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。
3、本發(fā)明的密脈鵝掌柴有效部位提取物安全無毒，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前景。
4、本發(fā)明的密脈鵝掌柴有效部位提取物配制成的藥物可作為多種劑型，如口服膠囊、片劑、滴丸、顆粒劑、口服液、軟膠囊、針劑等。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用密脈鵝掌柴有效部位提取物的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥中的新用途。
一、毒性試驗結(jié)果表明密脈鵝掌柴有效部位提取物對ICR小鼠經(jīng)灌胃途徑急性毒性的LD50為19.48±2.73g/kg，95％的可信限為16.94～22.40g/kg。
二、抑制血小板聚集作用試驗用離體家兔血小板聚集實驗考察密脈鵝掌柴有效部位提取物對血小板最大聚集的抑制作用。結(jié)果表明密脈鵝掌柴有效部位提取物對血小板聚集均產(chǎn)生濃度相關(guān)性的抑制作用。
三、小鼠耳廓微循環(huán)試驗通過小鼠耳廓正常微循環(huán)及鹽酸腎上腺素所致小鼠實驗性微循環(huán)障礙模型觀察密脈鵝掌柴提取物對小鼠耳廓微循環(huán)有無影響。結(jié)果表明密脈鵝掌柴有效部位提取物具有明顯改善微循環(huán)的作用。
四、大鼠急性心肌缺血作用試驗采用大鼠冠脈前降支結(jié)扎法造成的急性心肌缺血模型，觀察密脈鵝掌柴有效部位提取物的抗心肌缺血作用。結(jié)果表明大鼠冠脈前降支結(jié)扎后，II導(dǎo)心電圖ST段明顯抬高，呈現(xiàn)明顯的缺血性損傷表現(xiàn)，大鼠口服密脈鵝掌柴有效部位提取物后ST段顯著降低；大鼠冠脈前降支結(jié)扎24小時后，血清AST、LDH、CK-MB均顯著升高，大鼠口服密脈鵝掌柴有效部位提取物后可使LDH、CK-MB水平顯著降低；大鼠冠脈前降支結(jié)扎24小時后，心肌組織出現(xiàn)明顯的缺血壞死病變區(qū)域，其梗死區(qū)體積約為129.8mm3，約占危險區(qū)體積的86.4％，約占左室總體積的34.5％。大鼠口服給予密脈鵝掌有效部位柴提取物后，可使梗死區(qū)/危險區(qū)體積百分比、梗死區(qū)/左室體積百分比顯著下降。
五、對大腦中動脈阻斷(MCAO)所致大鼠腦缺血模型的影響用FeCl3造成大鼠局灶性腦缺血，給模型大鼠口服密脈鵝掌柴有效部位提取物高、中、低劑量，每天1次，連續(xù)5天，可明顯改善大鼠行為障礙，縮小腦梗死范圍。
六、對麻醉犬腦血流量的影響麻醉犬十二指腸給予密脈鵝掌柴有效部位提取物高、中、低劑量，結(jié)果為可劑量依賴性降低椎動脈阻力，擴張椎動脈。高劑量還明顯增加腦血流量。
七、對麻醉開胸犬血流動力學(xué)的影響麻醉開胸犬給予密脈鵝掌柴有效部位提取物高、中、低劑量，對各項血流動力學(xué)指標(biāo)無明顯影響；可降低血壓、總外周阻力及冠脈阻力，增加心臟泵血功能，對其它血流動力學(xué)參數(shù)無明顯影響。
八、對高粘血癥大鼠血液黏度的影響大鼠口服給予密脈鵝掌柴有效部位提取物高、中、低劑量，每天1次，連續(xù)5天，能明顯降低高分子右旋糖苷引起的高黏度血癥大鼠的全血黏度，可能與紅細(xì)胞聚集抑制有關(guān)。


附圖1為本發(fā)明的密脈鵝掌柴8個化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)圖附圖2為本發(fā)明提取物的HPLC圖譜及主要成分附圖3為本發(fā)明以密脈鵝掌柴為原料制備本發(fā)明提取物的工藝流程下面以更具體的實施例對本發(fā)明有效部位提取物及其制劑的制備方法加以說明。
實施例1提取物制備取密脈鵝掌柴干燥全株1000克，粉碎成粗粉，加入10倍量75％乙醇回流提取三次，第一次3小時，第二次2小時，第三次2小時，過濾，濾液回收乙醇后，加酸調(diào)pH值至3-5，過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用55-70％乙醇洗脫，取醇洗脫部分，濃縮干燥，粉碎，即得黃棕色粉狀提取物。
實施例2片劑制備取本發(fā)明提取物100g、淀粉80g、糊精5g混合均勻，加入10％淀粉漿制軟材，用14目尼龍上網(wǎng)制粒，60-70℃通風(fēng)干燥，16目篩整粒，加硬脂酸鎂1.5g、羧甲基淀粉鈉5g混勻，壓制成1000片，包衣即得。每片含提取物100mg。成人口服每日2-5次，每次1-10片。
實施例3膠囊制備取本發(fā)明提取物100g，加入淀粉78g、硬脂酸鎂2g混勻，直接用全自動膠囊填充機填充成1000粒，拋光即得。每粒含提取物100mg。成人口服每日2-5次，每次1-10粒。
實施例4滴丸制備取本發(fā)明提取物12g，投入32g加熱熔融的聚乙二醇6000中，攪拌至溶解，轉(zhuǎn)移至貯液瓶中，密閉并保溫在80-90℃，調(diào)節(jié)滴丸機液滴定量閥門，由上往下滴入10-15℃的液狀石蠟中，共制成1000粒，將形成的滴丸瀝干并擦除液狀石蠟，干燥即得。每粒含提取物12mg。成人口服每日2-5次，每次10-80粒。
實施例5口服液制備取本發(fā)明提取物20g，與蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸鈉2g及蒸餾水300ml混合加熱至85-90℃，攪拌使溶解，保溫30min，濾過，濾液加水稀釋至1000ml，攪勻，灌封(每支10ml)，滅菌即得。成人口服每日2-5次，每次1-5支。
實施例6顆粒劑制備取本發(fā)明提取物1份、糊精2份、蔗糖粉10份及乙醇適量，混勻，過10目篩制成顆粒，于60-70℃干燥，整粒，分裝即得。每包重5g。成人口服每日2-5次，每次1-5包。
實施例7注射液制備取本發(fā)明提取物100g，加注射用水適量使溶解，加配制量的0.02％活性碳攪拌5-10min，濾過，濾液稀釋至10L左右，加氯化鈉調(diào)節(jié)滲透壓至等滲，調(diào)pH7.5-8.0，超濾，灌封成1000支(10ml/支)，100℃30min滅菌即得。成人靜脈或肌肉注射給藥，每日1-2次，每次1-5支。
實施例8粉針劑制備取本發(fā)明提取物100g，加注射用水及稀氫氧化鈉適量使溶解，加配制量的0.02％活性碳攪拌5-10min，濾過，濾液加水稀釋至1L左右，調(diào)pH6.5-7.8，超濾，噴霧干燥，干粉無菌分裝即得。每支100mg，臨用前加注射用水適量使溶解，用氯化鈉輸液250-500ml稀釋后緩慢靜脈滴注。成人每日1-2次，每次1-5支。
實施例9凍干粉針制備無菌條件下取本發(fā)明提取物100g，至于無菌容器內(nèi)，加注射用水至約950ml，攪拌使溶解，調(diào)pH6.5-7.5，加注射用水至1000ml，然后加配制量的0.02％活性碳攪拌5-10min，用無菌抽濾漏斗過濾，再用滅菌垂熔漏斗精濾或超濾，濾液檢驗合格后分裝于2ml安瓿中，低溫冷凍干燥，無菌熔封即得。每支100mg，臨用前加注射用水適量使溶解，用氯化鈉輸液250-500ml稀釋后緩慢靜脈滴注。成人每日1-2次，每次1-5支。
權(quán)利要求
1.一種密脈鵝掌柴有效部位提取物，其特征在于該提取物活性成分含有5-40％主要為綠原酸、異綠原酸C、茉莉素的咖啡酰酸類；15-55％主要為蘆丁、槲皮素-7-O-glc、槲皮素-3-O-glc、槲皮素-3-O-glc(6-1)xly、槲皮素-3-O-glcUA的槲皮素配糖體、15-45％齊墩果酸配糖體。
2.按照權(quán)利要求1所述的有效部位提取物，其特征在于制備方法為取密脈鵝掌柴的全株或根、莖、葉，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取2-4次，合并提取液，減壓濃縮，濃縮液加酸調(diào)pH值至3-5，上大孔吸附樹脂層析，先用水洗脫，再用55-70％乙醇洗脫，收集55-70％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，殘留物干燥即得。
3.權(quán)利要求1所述有效部位提取物作為制備改善微循環(huán)的藥中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述有效部位提取物作為制備抗急性心肌缺血的藥中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述有效部位提取物作為制備用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、中風(fēng)后遺癥的藥中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1所述有效部位提取物作為制備用于治療急慢性腦缺血、腦梗塞、腦血栓的藥中的應(yīng)用。
7.含權(quán)利要求1有效部位提取物以及可用載體或賦形劑的制劑。
3.按照權(quán)利要求7的制劑，其中所述制劑為片劑或膠囊劑或滴丸或顆粒劑或口服液。
9.按照權(quán)利要求7的制劑，其中所述制劑為注射劑。
10.按照權(quán)利要求9的制劑，其中所述制劑為粉針和水針形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種密脈鵝掌柴有效部位提取物，其制備方法及在制藥中的應(yīng)用，該提取物是從密脈鵝掌柴提取的有效部位，主要含有活性成分5－40％咖啡酰酸類、15－55％槲皮素配糖體、15－45％齊墩果酸配糖體。本發(fā)明同時提供有效部位的制備方法。該提取物可單獨或與其它藥用許可的輔料配合后制成口服或注射劑型，用于活血化淤、改善微循環(huán)、抗急性心肌缺血、冠心病、心絞痛、心肌梗塞、中風(fēng)后遺癥、急慢性腦缺血、腦梗塞、腦血栓的預(yù)防與治療。
文檔編號A61K31/366GK1899297SQ20061001103
公開日2007年1月24日 申請日期2006年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月11日
發(fā)明者朱兆云, 王京昆, 彭玲芳, 崔濤, 尚建華, 徐榕雪, 蘇敏, 孫敏 申請人:云南省藥物研究所