專(zhuān)利名稱(chēng)：：精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于含有抗體的免疫血清，特別是含有針對(duì)兩種以上抗原的抗體的免疫血清。
背景技術(shù)：
：某種蛇毒制備的單價(jià)抗蛇毒血清，對(duì)用于制備本種抗血清的蛇毒中和的特異性最強(qiáng)，對(duì)屬于同一科屬的其他蛇毒次之，而對(duì)不同科蛇毒更差、甚至沒(méi)有。在臨床上應(yīng)用時(shí)，必須確診被咬的蛇種后，才能發(fā)揮顯著的療效。為了在未確定哪種毒蛇咬傷的情況下，用一種蛇毒血清能有效地中和同一科屬或不同科屬的蛇毒，科學(xué)工作者選擇多種蛇毒配制抗原給動(dòng)物免疫制備多價(jià)抗蛇毒血清。例如美國(guó)生產(chǎn)的多價(jià)抗響尾蛇毒血清，選用美國(guó)西部菱斑響尾蛇毒(Crotalusatrox)、東部菱斑響尾蛇毒(Crotalusadamanteus)、響尾蛇恐怖亞種蛇毒(Crotalusdurissusterrificus)和矛頭蝮蛇毒(Bothropsatrox)的混合抗原，用馬免疫，由馬血漿制備而成，由這四種蛇毒制成的多價(jià)抗蛇毒血清能中和響尾蛇科Crotalidae中的17種蛇毒。但是，該血清仍然局限于中和同一科屬蛇毒，而且，該血清只針對(duì)該地區(qū)響尾蛇咬傷具有療效。我國(guó)雖制備多種單價(jià)抗蛇毒血清，但對(duì)危害大的區(qū)域性的各種毒蛇所致的蛇傷，尚無(wú)多價(jià)血清。此前，發(fā)明人已提出申請(qǐng)?zhí)?00610010908.6"精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清的方法"專(zhuān)利申請(qǐng)，包括使用五步蛇、蝮蛇、烙鐵頭、竹葉青、蝰蛇、銀環(huán)蛇、金環(huán)蛇、眼鏡蛇、眼鏡王蛇毒液作為免疫抗原，用濾膜過(guò)濾除菌透析、脫毒后微量漸進(jìn)免疫動(dòng)物，經(jīng)胃酶消化一硫酸銨鹽析過(guò)柱層析純化后收集抗體，脫鹽、凍干；并以小鼠實(shí)驗(yàn)評(píng)估蛇毒毒力半數(shù)死亡量LDs。和抗蛇毒血清效價(jià)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是以達(dá)到一定純度抗原結(jié)合片段的多種蛇毒凍干抗血清配制多價(jià)抗蛇毒血清，并提出在臨床治療時(shí)使用該血清的方法。本發(fā)明多價(jià)抗血清具有特征是以F(ab)2抗原結(jié)合片段含量為60%-80%凍干疏松固體狀抗血清進(jìn)行組合配置，如表l:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>抗血清優(yōu)化組合配置為表2:表2<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>所述的血液循環(huán)蛇毒類(lèi)的蝮蛇、五步蛇、蝰蛇與神經(jīng)蛇毒類(lèi)的眼鏡王蛇、銀環(huán)蛇、金環(huán)蛇、眼鏡蛇抗血清分別裝量。精制抗蛇毒血清是由免疫動(dòng)物的血漿經(jīng)胃蛋白酶短時(shí)間消化，通過(guò)加熱使其變性沉淀除去不含抗體的Fc片段，收集能與抗原結(jié)合的F(ab)2片段而制成，F(xiàn)(ab)2片段與抗血清組合用量關(guān)系將確定在生產(chǎn)和檢驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)。上表中，以抗血清含有60%-80%F(ab)2片段作為中和九種蛇毒的生物量濃度，進(jìn)行配置。實(shí)驗(yàn)證明，七種蛇毒抗血清組合配置后，能夠中和九種毒蛇通常的排毒量。同時(shí)，在免疫學(xué)上，同一種屬蛇毒抗體-抗原交叉反應(yīng)較強(qiáng).因此，一方面，本發(fā)明抗蛇毒血清的每支裝量不但由抗體本身純度高低及各種毒蛇的排毒量確定，還須根據(jù)血清交叉中和每種蛇毒的量來(lái)計(jì)算裝量。另一方面，神經(jīng)毒類(lèi)與血液循環(huán)毒類(lèi)抗血清分別裝量，能確定蛇類(lèi)時(shí)，單獨(dú)使用；不能確定時(shí)，應(yīng)兩支同時(shí)使用，減少延誤。本發(fā)明多價(jià)抗血清使用方法對(duì)蛇毒已進(jìn)入機(jī)體者，用注射用水或生理鹽水稀釋抗蛇毒血清，肌肉或靜脈注射，同時(shí)一并注射抗過(guò)敏藥，如樸而敏、或笨海拉明、或非拉根、或地塞米松、或強(qiáng)化可地松。注射抗過(guò)敏藥是由于動(dòng)物血清制備的抗蛇毒血清含蛋白量10%以上，該蛋白對(duì)人體是異種蛋白當(dāng)靜脈注射量高達(dá)10ml時(shí)，過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生率并未完全消除。分別裝量的神經(jīng)毒類(lèi)與血液循環(huán)毒類(lèi)抗血清，當(dāng)能確定蛇種時(shí)，羊獨(dú)使用；不能確定時(shí)，應(yīng)兩支同時(shí)使用。而抗蛇毒血清的穩(wěn)定性與保存溫度是密切相關(guān)。凍干抗蛇毒血清即使保存在37匸，溫度對(duì)效價(jià)的影響也不明顯，保存于41C以下能延長(zhǎng)抗血清的穩(wěn)定性。本發(fā)明僅使用七種抗蛇毒血清制備的多價(jià)抗蛇毒血清，能在未確定哪種毒蛇咬傷的情況下注射抗過(guò)敏藥物后直接注射，及時(shí)地、有效地治療我國(guó)地域內(nèi)各種毒蛇所致蛇傷。為此，使我國(guó)的抗蛇毒血清質(zhì)量達(dá)到了國(guó)際水平。具體實(shí)施方式(一)抗蛇毒血清的裝量及穩(wěn)定性用含量601-8(W抗原結(jié)合片段F(ab)2的五步蛇、蝮蛇、蝰蛇、銀環(huán)蛇、金環(huán)蛇、目艮鏡蛇、眼鏡王蛇抗血清的凍千抗血清進(jìn)行組合，該組合能夠中和九種毒蛇通常排毒量。如表3:表3:抗蛇毒血清裝量與排毒鼉的關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>按表1將稱(chēng)量的凍干抗血清分，艮成神經(jīng)毒類(lèi)和血液循環(huán)毒類(lèi)兩支，保存i14x:以下。(二)本發(fā)明多價(jià)抗蛇毒凍干血清對(duì)小鼠中和九種蛇毒作用及量效關(guān)系受試小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和多價(jià)血清給藥組，每組6只以上。對(duì)照組中，九種蛇毒分別按1^),,蛇毒量注射小鼠腹腔，注射后觀(guān)察72小時(shí)。給藥組中，不同抗血清劑量用0.2ml硼酸鹽緩沖液溶解，再分別中和九種1^),,蛇毒量，37TC水浴30min后，注射小鼠腹腔，注射后觀(guān)察72小時(shí)小鼠死亡情況。如表4,以不同劑量的多價(jià)抗血清對(duì)九種蛇毒中和后，對(duì)照組死亡率100%，最高劑量組之死亡率為0%。表4:多價(jià)抗蛇毒血淸對(duì)九種蛇毒中和小鼠實(shí)驗(yàn)及影響<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>(三)本發(fā)明抗蛇毒血清的臨床使用方法對(duì)分別裝量的神經(jīng)毒類(lèi)與血液循環(huán)毒類(lèi)抗血清，當(dāng)能確定蛇種時(shí)，單獨(dú)使用；不能確定時(shí)，應(yīng)兩支同時(shí)使用。為了爭(zhēng)取治療時(shí)間，使用抗蛇毒血清時(shí)不必作皮試。先肌肉注射抗過(guò)敏藥物如苯海拉明20mg并將2支抗蛇毒血清稀釋于200ml生理鹽水中，每分鐘15滴作靜脈滴注，15分鐘后如無(wú)反應(yīng)，再加入余下全部抗蛇毒血清搖勻后作快速滴注。如有反應(yīng)可調(diào)節(jié)滴注速度以達(dá)脫敏效果。對(duì)重危病人應(yīng)比一般劑量大3-6倍或更大。權(quán)利要求1、精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清，其特征是以F(ab)2抗原結(jié)合片段含量為60％-80％凍干疏松固體狀抗血清進(jìn)行組合配置，如下表<tablesid="tabl0001"num="0001"><table><tgroupcols="8"><colspeccolname="c001"colwidth="17%"/><colspeccolname="c002"colwidth="14%"/><colspeccolname="c003"colwidth="12%"/><colspeccolname="c004"colwidth="10%"/><colspeccolname="c005"colwidth="12%"/><colspeccolname="c006"colwidth="10%"/><colspeccolname="c007"colwidth="11%"/><colspeccolname="c008"colwidth="13%"/><thead></column></row><row><column><entrymorerows="1">蛇毒種類(lèi)</entry><entrymorerows="1">蝮蛇</entry><entrymorerows="1">五步蛇</entry><entrymorerows="1">蛙蛇</entry><entrymorerows="1">眼鏡王蛇</entry><entrymorerows="1">銀環(huán)蛇</entry><entrymorerows="1">金環(huán)蛇</entry><entrymorerows="1">眼鏡蛇</entry></column></row></thead><tbody></column></row><row><column><entrymorerows="1">抗血清用量(mg/人份)</entry><entrymorerows="1">342.5-1035</entry><entrymorerows="1">1177-3182</entry><entrymorerows="1">456-666</entry><entrymorerows="1">1419-2128</entry><entrymorerows="1">220-331</entry><entrymorerows="1">880-1320</entry><entrymorerows="1">3188-4782</entry></column></row></tbody></tgroup></column></row><table></tables>2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清，其特征是抗血清優(yōu)化組合配置為下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清，其特征是蝮蛇、五步蛇、蝰蛇血液循環(huán)毒類(lèi)與眼鏡王蛇、銀環(huán)蛇、金環(huán)蛇、眼鏡蛇神經(jīng)毒類(lèi)抗血清分別裝量。4、精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清的使用方法，其特征是肌肉或靜脈注射經(jīng)生理鹽水稀釋的多價(jià)抗蛇毒血清和抗過(guò)敏藥，如樸而敏、或苯海拉明、或非拉根、或地塞米松、或強(qiáng)化可地松。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清的使用方法，其特征是對(duì)分別裝量的神經(jīng)毒類(lèi)與血液循環(huán)毒類(lèi)抗血清，當(dāng)能確定蛇種時(shí)，單獨(dú)使用；不能確定時(shí)，應(yīng)兩支同時(shí)使用。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的精制多價(jià)抗蛇毒凍千血清的使用方法，其特征是多價(jià)抗蛇毒凍干血清保存于4"C以下。全文摘要精制多價(jià)抗蛇毒凍干血清及使用方法，屬于含有針對(duì)兩種以上抗原的抗體免疫血清。本發(fā)明目的是以多種凍干抗蛇毒血清配制多價(jià)抗蛇毒血清及用法。其特征是抗原結(jié)合片段F(ab)₂含量為60％-80％凍干抗血清，以mg/人份為單位，蝮蛇342.5-1035、五步蛇1177-3182、蝰蛇456-666、眼鏡王蛇1419-2128、銀環(huán)蛇220-331、金環(huán)蛇880-1320、眼鏡蛇3188-4782組合配置；其優(yōu)化組合配置蝮蛇635、五步蛇1959、蝰蛇561、眼鏡王蛇1774、銀環(huán)蛇276、金環(huán)蛇1100、眼鏡蛇3985。所述血液循環(huán)蛇毒類(lèi)與神經(jīng)蛇毒類(lèi)抗血清分別裝量。用法肌肉或靜脈注射經(jīng)生理鹽水稀釋的抗蛇毒血清及抗過(guò)敏藥，如撲而敏。本發(fā)明僅使用七種抗蛇毒血清制備，在未確定哪種毒蛇咬傷的情況下直接注射，能及時(shí)有效地治療我國(guó)地域內(nèi)各種毒蛇所致蛇傷，達(dá)到了抗蛇毒血清的國(guó)際先進(jìn)水平。文檔編號(hào)A61K39/395GK101347617SQ20061001093公開(kāi)日2009年1月21日申請(qǐng)日期2006年6月2日優(yōu)先權(quán)日2006年6月2日發(fā)明者馮子良,尹惠瓊,李作生,楊美峰,王雙印,范泉水,薇邱,穎鄭申請(qǐng)人:成都軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心軍事醫(yī)學(xué)研究所