專利名稱：由通關(guān)藤、人參和黃芪制成的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種由人參或其提取物、黃芪或其提取物、通關(guān)藤或其提取物制成的藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
癌癥是一類嚴(yán)重威脅人類生命和健康的疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國每年新發(fā)現(xiàn)的癌癥病人約100萬左右，而全球每年奪去大約600萬人生命，并把1000萬人置于死亡邊緣，隨著人類生存環(huán)境的日益惡化，癌癥的發(fā)生率呈逐年上升趨勢。世界衛(wèi)生組織預(yù)測21世紀(jì)癌癥將成為人類的“第一殺手”。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對癌癥的治療主要是手術(shù)治療配合放、化療，手術(shù)雖能去除原發(fā)病灶，但不能從根本上杜絕癌細(xì)胞的再生與繁殖；放、化療雖能殺滅癌細(xì)胞，但同時(shí)也使大量的正常組織細(xì)胞受到損害，誘發(fā)胃腸反應(yīng)、骨髓抑制和肝腎、心臟功能損害，使病人的身體更加虛弱，難以進(jìn)一步治療。而中醫(yī)治療癌癥有悠久的歷史，形成了自己獨(dú)特的理論體系和治療法則。近年來經(jīng)過廣大醫(yī)療工作者的工作已證實(shí)中醫(yī)藥治療癌癥具有突出的作用，特別是對癌癥手術(shù)后的康復(fù)以及對放化療的增效減毒方面發(fā)揮了重要的作用。
人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根，性甘、微苦，平，歸脾、肺、心經(jīng)，具有大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津、安神之功效。人參是長白山區(qū)盛產(chǎn)的道地藥材之一，以其根部入藥，是著名的珍貴藥材。主要含有人參多糖、人參皂苷、人參多肽及揮發(fā)油、多種氨基酸、脂肪酸及維生素、微量元素等有效成分。主要成分為人參皂苷，量約4％，目前分離得人參皂苷有Ra1～6、Rb1～3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1～3、Rh1～2、Ro等20余種。人參可全面增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，其活性成分主要是皂苷和多糖。人參皂苷對多種動物均能增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對碳粒、細(xì)菌、雞紅細(xì)胞等的吞噬廓清能力，人參多糖在體外可增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞活性，人參多糖和皂苷還可使環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞數(shù)減少，巨噬細(xì)胞及體液免疫和細(xì)胞免疫功能抑制等恢復(fù)正常；人參皂苷和人參多糖均有抗實(shí)驗(yàn)性腫瘤作用，人參皂苷的抗腫瘤作用與其誘導(dǎo)癌細(xì)胞的再分化作用有關(guān)，人參多糖具有直接或間接的抗腫瘤活性，體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)試驗(yàn)證明人參多糖致敏血清對人和鼠的腫瘤細(xì)胞株均有不同程度的殺傷和抑制作用，對體內(nèi)移植腫瘤也可使其發(fā)生明顯的出血性壞死，認(rèn)為其抗腫瘤機(jī)制可能是誘生了腫瘤壞死因數(shù)TNF-N。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌之功效，主要用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，癰疽難潰，久潰不斂，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴；慢性腎炎蛋白病，糖尿病。主要含有黃芪多糖、黃芪皂苷、黃酮類、生物堿、葡萄糖醛酸及微量元素硒等成分?，F(xiàn)藥理試驗(yàn)表明黃芪可促進(jìn)免疫功能，主要有效成分為多糖和皂苷，能顯著增加血液中的白細(xì)胞總數(shù)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的吞噬和殺菌能力，能明顯促進(jìn)細(xì)胞免疫，促進(jìn)PHA、ConA及商陸素(PWM)等引起的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高惡性腫瘤病人淋巴細(xì)胞引起的大鼠局部移植物抗宿主反應(yīng)。黃芪多糖能顯著增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞功能，促進(jìn)IgM形成，提高PFC的溶血能力，黃芪多糖還能顯著延長氫化可的松耗竭的小鼠游泳時(shí)間，增加其腎上腺的重量，對小鼠數(shù)種缺氧模型均具顯著改善作用；能使正常及虛弱小鼠抗寒生存時(shí)間延長；對輻射后小鼠的體重、血細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞結(jié)構(gòu)有明顯保護(hù)作用。
通關(guān)藤為蘿藦科植物通關(guān)藤M(fèi)arsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的干燥藤莖?？啵⒑?。其地方名為烏骨藤、通光散、下奶藤、大骨藤等，產(chǎn)于云南和貴州南部，藥用藤、葉、莖含甾體苦味酯苷、多糖類、生物堿等。具有抗癌散結(jié)，止咳平喘之功效，經(jīng)試驗(yàn)表明有抗癌作用，另外對肺炎雙球菌和流感桿菌有抑制作用。還有對抗組織胺的作用，能緩解因組織胺引起的哮喘。藥理研究表明通關(guān)藤具有平喘、降壓及抑菌等作用，能干擾癌細(xì)胞核糖核酸及DNA的合成，阻止癌細(xì)胞分裂、繁殖，對多種惡性腫瘤均有良好療效，尤其對肺癌、食管癌、胃癌、白血病、宮頸癌等多種惡性腫瘤有一定的療效，亦可配合放療、化療和手術(shù)后治療，對心、肝、腎及造血系統(tǒng)均無明顯毒副作用。
現(xiàn)代藥理學(xué)和藥效學(xué)研究表明通關(guān)藤在抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力方面具有很好的療效，目前已有單一有效成分的通關(guān)藤注射液(商品名消癌平)上市，但利用人參、黃芪和通關(guān)藤的相互作用，配伍組方用于抗腫瘤的應(yīng)用還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，本發(fā)明提供了一種新的主要用于抗腫瘤的藥物組合物，并提供了其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥為通關(guān)藤、人參、黃芪。經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出，各組分在下述重量份數(shù)范圍內(nèi)都具有較好療效通關(guān)藤2～100份、人參1～200份、黃芪1～200份；優(yōu)選份數(shù)為通關(guān)藤10～50份、人參5～100份、黃芪5～100份；最佳份數(shù)為通關(guān)藤20份、人參40份、黃芪10份。
以上組成是按重量份作為配比的，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上重量份數(shù)對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
上述藥物組合物中通關(guān)藤、人參、黃芪可以用適宜的溶劑分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物。適宜的溶劑是指中藥提取常用的溶劑，優(yōu)選水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中藥提取的一般方法，如浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。
本發(fā)明組合物中以總酚酸為主要有效成分的通關(guān)藤提取物的制備工藝如下取通關(guān)藤藥材，加水煎煮三次，第一次1.5小時(shí)，第二、三次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02～1.06，放冷，加85％乙醇8倍量，攪勻，在4℃放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濾過，加乙醇8倍量，攪勻，在4℃放置48小時(shí)，濾過，濾液同收乙醇至無醇味，在4℃放置48小時(shí)，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.09～1.12，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的通關(guān)藤提取物中總酚酸的含量不低于20％，提取物得率為0.5～2％。
除采用上述方法外，還可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取通關(guān)藤藥材，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.08～1.11，真空干燥即得。通過本工藝制備的通關(guān)藤提取物得率為5～8％，總酚酸的含量不低于10％。
方法二取通關(guān)藤藥材，加水煎煮三次，第一次1.5小時(shí)，第二、三次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02～1.06，放冷，加70％乙醇10倍量，攪勻，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濾過，加80％乙醇8倍量，攪勻，冷藏放置48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.12，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的通關(guān)藤提取物得率為2～5％，總酚酸的含量不低于15％。
本發(fā)明組合物中以總皂苷為主要有效成分的人參提取物的制備工藝如下取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備得到的人參總皂苷提取物得率為0.5～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于30％。
除采用上述方法外，也可通過文獻(xiàn)方法制備，也可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取二次，每次4小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水稀釋至相對密度為1.15～1.20，加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物得率為4～5％，人參總皂苷含量不低于35％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法二取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次為8、8倍量，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量，攪勻，冷藏，濾過，濾液加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次減壓濃縮，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物得率為3～5％，人參總皂苷含量為不低于40％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不少于20％。
本發(fā)明組合物中以多糖為主要有效成分的人參提取物的制備工藝如下取生曬參，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時(shí)，濾過，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過夜，濾過，濾液過樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。通過本工藝制備的人參多糖提取物中人參多糖的含量不低于50％，提取物得率為0.5～2％。
除采用上述方法外，也可通過文獻(xiàn)方法(如CN200410000209)制備，還可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取人參，切碎，加水回流提取3次，每次2小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次為8、8倍量，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.6～1.24，過大孔樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮至稠膏狀，真空干燥，即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為4～6％，人參多糖的含量不低于40％。
方法二取人參，切碎，用80％乙醇，回流提取3小時(shí)，濾過，藥渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，加水10倍量，合并煎煮液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20，過大孔樹脂，流出液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為2～4％，人參多糖含量不低于45％。
本發(fā)明組合物中以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物的制備工藝加下取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
除采用上述方法外，也可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，黃芪甲苷含量不低于1％。
本發(fā)明組合物中以多糖為主要有效成分的黃芪提取物的制備工藝加下取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物中黃芪總多糖的含量不低于50％，提取物得率為0.5～2％。
除采用上述方法外，也可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時(shí)，濾過，沉淀加水溶解，濾過，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)，濾過，收集沉淀，真空干燥即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，黃芪多糖含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，提取液合并，過濾，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，過濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為3～4％，黃芪多糖含量不低于35％。
本發(fā)明組合物除可用上述的藥材為原料制得外，還可由通關(guān)藤、人參、黃芪的提取物直接投料制成，其主要有效成分分別為通關(guān)藤總酚酸、人參多糖或皂苷、黃芪多糖或皂苷，其中的通關(guān)藤提取物含通關(guān)藤總酚酸不低于20％；人參提取物含人參多糖最好不低于50％，或者含人參總皂苷最好不低于50％，其中的人參皂苷Re和人參皂苷Rg1的總含量不低于30％；黃芪提取物含黃芪多糖最好不低于50％，或者含黃芪總皂苷最好不低于50％，黃芪總皂苷中黃芪甲苷含量不低于2.0％。按照提取物相對于藥材的得率計(jì)算，本發(fā)明組合物可以有以下4種不同配比，按重量份數(shù)比分別為配比1通關(guān)藤提取物1～200份、人參多糖1～400份、黃芪多糖1～400份，優(yōu)選份數(shù)為5～100份、2～200份、2～200份，最優(yōu)份數(shù)為10～40份、10～100份、10～100份；配比2通關(guān)藤提取物1～200份、人參皂苷1～400份、黃芪多糖1～400份，優(yōu)選份數(shù)為5～100份、2～200份、2～200份，最優(yōu)份數(shù)為10～40份、10～100份、10～100份；配比3通關(guān)藤提取物1～200份、人參多糖1～400份、黃芪皂苷1～400份，優(yōu)選份數(shù)為5～100份、2～200份、2～200份，最優(yōu)份數(shù)為10～40份、10～100份、10～100份；配比4通關(guān)藤提取物1～200份、人參皂苷1～400份、黃芪皂苷1～400份，優(yōu)選份數(shù)為5～100份、2～200份、2～200份，最優(yōu)份數(shù)為10～40份、10～100份、10～100份。
上述不同配比的組合物，總提取物中主要有效成分的總含量最好不低于50％。
上述藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，如注射劑、口服常釋劑型、緩釋控釋劑型、顆粒劑、丸劑、口服液體劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、吸入劑、栓劑、軟膏劑等。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選劑型為注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發(fā)明在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸納、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
上述藥物組合物，具有抗肝損害、抗感染、抗腫瘤、解毒、抗菌和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1.提供了一種新的抗癌中藥復(fù)方，滿足了臨床急需。
2.對通關(guān)藤、人參和黃芪的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥理學(xué)研究，結(jié)果表明本發(fā)明組合物對氣虛型大鼠肝腫瘤有明顯的抑制作用并可顯著延長大鼠的生存天數(shù)，對SGC-7901胃癌細(xì)胞的生長也有明顯的抑制作用，可明顯降低小鼠U14腹水癌細(xì)胞體積和數(shù)目，且其作用與單用通關(guān)藤、人參和黃芪相比效果極為顯著(p＜0.01)，表明通關(guān)藤、人參和黃芪三者有協(xié)同增效的作用。同時(shí)，三者配伍用藥可以減輕化學(xué)用藥后劇烈的毒副反應(yīng)，提高了病人的生存質(zhì)量。
3.通過本發(fā)明組合物不同配比對小鼠S180腫瘤生長抑制作用的藥效學(xué)研究，篩選出了本發(fā)明組合物的優(yōu)選配比。
4.本發(fā)明組合物既可由通關(guān)藤、人參和黃芪藥材投料制得，也可由通關(guān)藤提取物、人參提取物和黃芪提取物直接投料，滿足了大生產(chǎn)的需要。
5.對本發(fā)明組合物提取物主要有效成分的含量和總含量分別進(jìn)行了限定，便于控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
6.對本發(fā)明組合物進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明組合物毒性小，安全范圍大。
7.對本發(fā)明藥物組合物進(jìn)行的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全。
8.通關(guān)藤、人參和黃芪臨床用藥療效確切，三者合并用藥后用藥量減少，具有廣闊的應(yīng)用前景。
以下試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)試驗(yàn)，本發(fā)明藥物組合物以下簡稱組合物。以下試驗(yàn)例中通關(guān)藤根據(jù)實(shí)施例1制得通關(guān)藤提取物，人參根據(jù)實(shí)施例2制得人參總皂苷和和人參多糖，黃芪根據(jù)實(shí)施例3制得黃芪總皂苷和黃芪多糖。通關(guān)藤提取物、人參多糖和黃芪多糖組合物簡稱TRH1組，通關(guān)藤提取物、人參皂苷和黃芪多糖組合物簡稱TRH2組，通關(guān)藤提取物、人參多糖和黃芪皂苷組合物簡稱TRH3組，通關(guān)藤提取物、人參皂苷和黃芪皂苷組合物簡稱TRH4組。
試驗(yàn)例1 藥效學(xué)試驗(yàn)—組合物對小鼠S180腫瘤生長抑制作用供試品 對照組氯化鈉注射液(山東長富潔晶藥業(yè)有限公司)通關(guān)藤組消癌平注射液(通化神源藥業(yè)有限公司)2ml相當(dāng)于通關(guān)藤藥材10g。
人參總皂苷組人參總皂苷注射液，自制，2ml相當(dāng)于人參藥材1g。
人參多糖組人參多糖注射液，自制，2ml相當(dāng)于人參藥材4g。
黃芪總皂苷組黃芪總皂苷注射液，自制，2ml相當(dāng)于黃芪藥材3g。
黃芪多糖組黃芪多糖注射液，自制，2ml相當(dāng)于黃芪藥材4g組合物組
TRH1組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方1的制備)；TRH2組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方2的制備)；TRH3組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方3的制備)；TRH4組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方4的制備)。
受試動物 健康小鼠260只，體重16～20g，雌雄各半，每組10只。
瘤株 小鼠S180試驗(yàn)方法 取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小時(shí)稱重，小鼠每日灌胃給藥一次，給藥容積相同(0.5ml/只)，共7天。停藥次日處死小鼠，稱體重并細(xì)心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱取瘤重，并計(jì)算抑瘤率。
表1 組合物對小鼠S180腫瘤生長抑制作用(x±s，n＝10)
注與生理鹽水對照組相比*p＜0.05，**p＜0.01；與通關(guān)藤組相比，#p＜0.01
試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由表1結(jié)果可以看出，與生理鹽水對照組相比TRH1(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪多糖)組、TRH2(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪多糖)組、TRH3(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪皂苷)組、TRH4(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪皂苷)組、消癌平注射液對小鼠S180瘤體均有顯著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)，人參總皂苷組、人參多糖組、黃芪皂苷組和黃芪多糖組雖然對小鼠S180瘤體也有抑制作用，但效果不明顯。與通關(guān)藤組相比，組合物中通關(guān)藤、人參、黃芪的配比在(1～5g)∶(0.5～10g)∶(0.5～10g)時(shí)作用差異極為顯著(p＜0.01)，其中通關(guān)藤2g∶人參4g∶黃芪1g時(shí)效果最好。
試驗(yàn)例2 組合物對氣虛型大鼠肝腫瘤抑制作用供試品 對照組氯化鈉注射液(山東長富潔晶藥業(yè)有限公司)通關(guān)藤組消癌平注射液(通化神源藥業(yè)有限公司)2ml相當(dāng)于通關(guān)藤藥材10g組合物組TRH1組、TRH2組、TRH3組、TRH4組，自制，制備方法分別參見實(shí)施例5水針劑處方1、2、3、4的制備。
受試動物 大鼠140只，體重150～180g，每組10只，制成氣虛模型。
方法 取大鼠作W256的肝內(nèi)接種，接種7天后，用戊巴比妥鈉按35mg/kg的劑量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，測量肝上腫瘤表面最大徑(a)和最小徑(b)，按(a×b2)/2＝V(腫瘤體積)。分離胃、十二指腸動脈、肝總動脈和肝固有動脈，結(jié)扎胃、十二指腸動脈遠(yuǎn)程，以銀夾阻斷肝總動脈，于手術(shù)放大鏡下在胃、十二指腸動脈上切口并插入外徑0.3mm導(dǎo)管后再送入肝固有動脈，然后按試驗(yàn)分組分別注入受試藥物，術(shù)后拔管結(jié)扎胃、十二指腸動脈，放開肝總動脈銀夾，再縫合切口，將大鼠置于動物室待蘇醒，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，手術(shù)后8天，按上法檢測腫瘤體積。
表2 組合物對大鼠肝腫瘤的影響(x±s，n＝10)
注與生理鹽水對照組相比*p＜0.05，**p＜0.01；與通關(guān)藤組相比，#p＜0.01
按上述方法，再進(jìn)行試驗(yàn)，觀察大鼠存活天數(shù)。
表3 大鼠存活天數(shù)比較
注與生理鹽水對照組相比*p＜0.05，**p＜0.01；與通關(guān)藤組相比，#p＜0.01試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由表2結(jié)果可以看出，與生理鹽水對照組相比給藥后各組肝腫瘤體積明顯降低，體積變化率增大(p＜0.05，p＜0.01)；表3結(jié)果表明給藥后存活天數(shù)變長(p＜0.05，p＜0.01)。且TRH1(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪多糖)組、TRH2(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪多糖)組、TRH3(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪皂苷)組、TRH4(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪皂苷)組效果均顯著優(yōu)于通關(guān)藤組(p＜0.01)，提示三藥有協(xié)同增效的作用。
試驗(yàn)例3 組合物對SGC-7901胃癌細(xì)胞的生長抑制作用供試品 對照組氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司通關(guān)藤組消癌平注射液(通化神源藥業(yè)有限公司)2ml相當(dāng)于通關(guān)藤藥材10g組合物組TRH1組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方1的制備)；TRH2組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方2的制備)；TRH3組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方3的制備)；TRH4組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方4的制備)。
細(xì)胞 人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞培養(yǎng) 取對數(shù)生長期SGC-7901細(xì)胞，以0.25％的胰蛋白酶消化后用PBS(pH7.2)洗滌3次，在用含體積份數(shù)為10.00％的小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞終濃度調(diào)至2×108/L，接種到96孔或6孔板中。隨機(jī)分為對照組加等劑量的無血清的RPMI-1640培養(yǎng)液；通關(guān)藤組終濃度為10mmol/L；TRH1、TRH2、TRH3、TRH4組終濃度均為10mmol/L。
方法 選擇對數(shù)生長期胃癌細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為2×108/L接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100ul，另設(shè)不加細(xì)胞的培養(yǎng)液為本底，24h后，試驗(yàn)組分別給予終濃度為通關(guān)藤組400mg/ml，TRH1、TRH2、TRH3、TRH4組500mg/ml，未加藥物的細(xì)胞作為空白對照。每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，于24、48、72和96小時(shí)后，每孔分別加入5g/L的MTT20ul，37℃孵育4h，棄上清，每孔加入150ulDMSO，振蕩，使結(jié)晶溶解。平板搖床微振蕩20min后，用酶標(biāo)儀在波長490nm處測每孔吸光度(A)重復(fù)3次，計(jì)算細(xì)胞生長抑制率(％)＝〔1-(藥物組-本底值)/(對照組A-本底值)〕×100.00％表4 組合物對SGC-7901胃癌細(xì)胞的生長抑制作用
注與生理鹽水對照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01；與通關(guān)藤組相比，#p＜0.01試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由表4結(jié)果可知，與生理鹽水對照組相比通關(guān)藤組和TRH1(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪多糖)組、TRH2(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪多糖)組、TRH3(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪皂苷)組、TRH4(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪皂苷)各組注射液對SGC-7901胃癌細(xì)胞的生長均有抑制作用，而TRH1、TRH2、TRH3、TRH4注射液組與通關(guān)藤組相比作用更為顯著(p＜0.01)，提示三藥有協(xié)同增效的作用。
試驗(yàn)例4 組合物對小鼠U14腹水癌細(xì)胞增殖的影響供試品 對照組氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司通關(guān)藤組消癌平注射液(通化神源藥業(yè)有限公司)2ml相當(dāng)于通關(guān)藤藥材10g組合物組TRH1組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方1的制備)；TRH2組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方2的制備)；TRH3組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方3的制備)；TRH4組自制(制備方法參見實(shí)施例5水針劑處方4的制備)。
受試動物 小鼠140只，體重22～28g，隨即分為5組，每組10只癌株 U14腹水癌細(xì)胞株方法 小鼠腹腔一次接種1×107細(xì)胞/只，于接種后第3天隨機(jī)分成5組，即對照組、通關(guān)藤組、RHT1三個(gè)劑量組、RHT2三個(gè)劑量組、RHT3三個(gè)劑量組、RHT4三個(gè)劑量組，并開始腹腔注射給藥或等體積的生理鹽水0.2ml只，每天一次，連續(xù)3天。于給藥第3天9小時(shí)、4天9小時(shí)、5天9小時(shí)分別將動物放血處死.剪開腹腔以生理鹽水沖洗收集腹水癌細(xì)胞洗液約5ml左右。以1200轉(zhuǎn)/分低溫離心洗滌二次，計(jì)癌細(xì)胞體積；然后用冷生理鹽水定容至5rrd。取20ul稀釋進(jìn)行癌細(xì)胞計(jì)數(shù)。
表5 組合物對小鼠U14腹水癌細(xì)胞增殖的影響
結(jié)果及結(jié)論由表5結(jié)果可知，與生理鹽水對照組相比給藥后各組小鼠的癌細(xì)胞體積和數(shù)量均降低。表明TRH1(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪多糖)組、TRH2(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪多糖)組、TRH3(通關(guān)藤提取物+人參多糖+黃芪皂苷)組、TRH4(通關(guān)藤提取物+人參皂苷+黃芪皂苷)組、三個(gè)劑量組和通關(guān)藤組均能抑制小鼠U14腹水癌細(xì)胞的增殖，而TRH1、TRH2、TRH3、TRH4組療消明顯優(yōu)于單用通關(guān)藤，提示三藥有協(xié)同增效的作用。
試驗(yàn)例5 小鼠注射給藥急性毒性試驗(yàn)(1)試驗(yàn)方法供試品組合物注射液，來源于實(shí)施例5，規(guī)格2ml。
受試動物小鼠，每組雌雄各60只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察專案死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)試驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性試驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行日最大給藥量試驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.1ml/10g，腹腔注射0.1ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后2、4、6、8、10、12、14天測量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，組合物注射液對雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.2ml/10g，相當(dāng)于70kg體重人日最大用量10ml的140倍。表明本品低毒，安全性高。
試驗(yàn)例6 組合物注射液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品TRH注射液，來源于實(shí)施例5，規(guī)格2ml。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標(biāo)示含量；并在加速試驗(yàn)6個(gè)月和長期試驗(yàn)期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素試驗(yàn)強(qiáng)光照射試驗(yàn)取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內(nèi)放置10天。
高溫試驗(yàn)取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫試驗(yàn)取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述試驗(yàn)，分別于第5、10天取樣測定。比較性狀后測試各項(xiàng)指標(biāo)，并將結(jié)果與0天比較。
結(jié)果光照4500Lx條件下放置10天，除有關(guān)物質(zhì)略有升高外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化。高溫60℃條件下放置10天，各項(xiàng)指標(biāo)無明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項(xiàng)指標(biāo)無明顯變化。
2、加速試驗(yàn)方法置溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個(gè)月。在試驗(yàn)期間分別于第1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月末取樣，比較外觀后，測試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個(gè)月比較；并在6個(gè)月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個(gè)月，除有關(guān)物質(zhì)略有增加，標(biāo)示含量略有下降外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，加速試驗(yàn)6個(gè)月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
3、長期試驗(yàn)方法置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個(gè)月。分別于第3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月，比較外觀后，測試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個(gè)月比較；并在18個(gè)月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，長期試驗(yàn)18個(gè)月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，各項(xiàng)試驗(yàn)中，組合物注射液均比較穩(wěn)定。
綜上所述，本發(fā)明提供的通關(guān)藤、人參與黃芪組合物具有協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于通關(guān)藤、人參或黃芪單獨(dú)給藥的藥效。對組合物注射液進(jìn)行的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的組合物制成的注射劑的各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，可以用于放大生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實(shí)施例4～6中的通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷來源于實(shí)施例1、2、3中通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷三批提取物中的第三批。以下實(shí)施例7～11中的通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷來源于實(shí)施例1、2、3中通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷三批提取物中的第一批。
實(shí)施例1 通關(guān)藤提取物的制備取通關(guān)藤藥材30kg，加水煎煮三次，第一次1.5小時(shí)，第二、三次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02～1.06，放冷，加85％乙醇8倍量，攪勻，在4℃放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濾過，加乙醇8倍量，攪勻，在4℃放置48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，在4℃放置48小時(shí)，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.09～1.12，噴霧干燥，即得。
分別制備三批提取物，提取物得率和含量見下表6。
通關(guān)藤提取物的含量測定對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品50mg，加乙醇25ml，搖勻，取2ml，加乙醇至25ml，搖勻，即得。
測定法 精密吸取供試品溶液、對照品溶液、乙醇各2ml，分別置25ml具塞刻度試管中，加無水乙醇至5ml，再分別精密加入0.3％十二烷基硫酸鈉溶液2ml、0.5％鐵氰化鉀-1％三氯化鐵(1∶1)混合溶液2ml，搖勻，暗處放置5分鐘，加0.1mol/L鹽酸溶液至25ml，搖勻，暗處放置20分鐘，以上述乙醇管為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，分別在764nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
通關(guān)藤提取物的鑒別取本品50mg，加水20ml使溶解，加濃氨試液1ml，用氯仿振搖洗滌2次，每次20ml，棄去氯仿層，水層再用正丁醇振搖洗滌2次，每次15ml，棄去正丁醇層，取水層濃縮至干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，放置，取上清液作為供試品溶液。另取通關(guān)藤對照藥材2g，加水50ml，浸泡放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿—丙酮—甲酸(15∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
表6 三批通關(guān)藤提取物得率和含量測定結(jié)果
實(shí)施例2 人參提取物的制備人參總皂苷的制備取人參藥材40kg，粉碎成細(xì)粒，加8倍量乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
分別制得三批人參總皂苷提取物，提取物得率和含量見下表7。
人參總皂苷的含量測定對照品溶液制備取人參皂甙Rg1對照品約10mg，經(jīng)60℃真空干燥2小時(shí)，精密稱定，置100ml量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1ml含Rg1對照品0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液制備精密稱取本品50mg，置50ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取供試品溶液和對照品溶液各1ml，分別置10ml具塞試管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保溫15分鐘，冷卻至室溫，加冰醋酸5ml，搖勻；同時(shí)作空白對照。照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VB)，在560nm波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(22∶78)為流動相；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、Re對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供試品溶液的制備 取本品0.2g，精密稱定，精密加入水飽和正丁醇30ml，密塞，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
測定法 分別精密吸取對照品和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
人參總皂苷的鑒別取本品0.5g，加水0.5ml攪拌潤濕，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
表7 三批人參總皂苷提取物得率和含量測定結(jié)果
人參多糖的制備取生曬參10kg，切碎，用75％乙醇，回流提取4°小時(shí)，濾過，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過夜，濾過，濾液過樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。
分別制得三批人參多糖提取物，提取物得濾和含量見下表8。
人參多糖的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸約100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取對照品溶液、供試品溶液和水各1ml，分別精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加熱30分鐘，放冷，再分別精密加入0.125％咔唑無水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加熱10分鐘，放冷至室溫，照分光光度法試驗(yàn)，在530nm波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
人參多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
表8 人參多糖提取物得率和含量測定結(jié)果
實(shí)施例3 黃芪提取物的制備黃芪總皂苷的制備取黃芪40kg，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，用注射用水稀釋至每1ml相當(dāng)于原藥材1g，冷藏放置12小時(shí)，濾過，濾液減壓濃縮、真空干燥，即得。
分別制得三批黃芪總皂苷提取物，提取物得率和含量結(jié)果見下表9。
黃芪總皂苷鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別試驗(yàn)二 取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振搖提取，分取乙酸乙脂液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋抑?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
黃芪總皂苷含量測定總皂苷的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷干品0.1mg)。
供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，移?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 精密量取對照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長處測定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(32∶68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對數(shù)方程計(jì)算，即得。
表9 三批黃芪總皂苷提取物含量和得率
黃芪多糖的制備取黃芪藥材30kg，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
分別制得三批黃芪多糖提取物，提取物得率和含量結(jié)果見下表10。
表10 三批黃芪多糖提取物含量和得率
黃芪多糖含量測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對照，在490nm波長處測定吸收值，計(jì)算回歸方程。
測定方法 取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
實(shí)施例4 本發(fā)明組合物粉針劑的制備處方
處方1通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g無菌注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為50.47％。
處方2通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g無菌注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為50.04％。
處方3通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.kg(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g無菌注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為53.38％。
處方4通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g無菌注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為51.42％。
制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖，或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖，或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷，或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷，和甘露醇加入配液量30％無菌注射用水中加熱攪拌溶解完全。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例5 本發(fā)明組合物水針劑的制備處方處方1通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為50.47％。
處方2通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為50.04％。
處方3通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為53.38％。
處方4通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為51.42％。
制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將通關(guān)藤提取物、人參多糖和黃芪多糖加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加熱攪拌溶解完全；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷和黃芪多糖加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加熱攪拌溶解完全；或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖和黃芪皂苷加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加熱攪拌溶解完全；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷和黃芪皂苷加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加熱攪拌溶解完全。
3)補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例6 本發(fā)明組合物輸液的制備氯化鈉輸液處方處方1通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯 8050g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為50.47％。
處方2通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯 8050g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為50.04％。
處方3通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯80 50g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為53.38％。
處方4通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯80 50g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為51.42％。
制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液；或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
葡萄糖輸液處方
處方1通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為50.47％。
處方2通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 18.7g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為50.04％。
處方3通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 75.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為53.38％。
處方4通關(guān)藤提取物 23.4g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 78.8g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 5.4g(相當(dāng)于黃芪1kg)聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為51.42％。
制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘；或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例7 本發(fā)明組合物片劑的制備處方處方1通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)預(yù)膠化淀粉 40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片注總提取物中主要有效成分的總含量為52.31％。
處方2通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)預(yù)膠化淀粉 40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片注總提取物中主要有效成分的總含量為50.23％。
處方3通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)預(yù)膠化淀粉 40.0g微晶纖維素 40.0g
2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片注總提取物中主要有效成分的總含量為55.61％。
處方4通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)預(yù)膠化淀粉 40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000瓶注總提取物中主要有效成分的總含量為50.31％。
制備工藝1)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例8 本發(fā)明組合物膠囊劑的制備處方
處方1通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為52.31％。
處方2通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為50.23％。
處方3通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為55.61％。
處方4通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為50.31％。
制備工藝1)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷粉碎過100目篩備用。。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將通關(guān)藤取物、人參多糖、黃芪多糖、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤取物、人參皂苷、黃芪多糖、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤取物、人參多糖、黃芪皂苷、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤取物、人參皂苷、黃芪皂苷、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例9 本發(fā)明組合物顆粒劑的制備處方處方1通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包注總提取物中主要有效成分的總含量為52.31％。
處方2通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包注總提取物中主要有效成分的總含量為50.23％。
處方3通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包注總提取物中主要有效成分的總含量為55.61％。
處方4通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包注總提取物中主要有效成分的總含量為50.31％。
制備工藝1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將通關(guān)藤提取物、人參多糖、人參總皂苷和黃芪多糖、黃芪總皂苷粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例10 本發(fā)明組合物軟膠囊劑的制備處方處方1通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂 500g蜂蠟 500g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為52.31％。
處方2通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蠟500g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為50.23％。
處方3通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蠟500g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為55.61％。
處方4通關(guān)藤提取物40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蠟500g共制備 1000粒注總提取物中主要有效成分的總含量為50.31％。
制備工藝1)將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，2)加入通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖研勻，壓制成軟膠囊即可；或者加入通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖研勻，壓制成軟膠囊即可；或者加入通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷研勻，壓制成軟膠囊即可；或者加入通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例11 本發(fā)明組合物口服液的制備處方處方1通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 10g純化水 加至10000ml共制備 1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為52.31％。
處方2通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪多糖 5.5g(相當(dāng)于黃芪1kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 10g純化水 加至10000ml共制備 1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為50.23％。
處方3通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參多糖 48.4g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)尼泊金甲酯1.0g甜菊甙10g純化水加至10000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為55.61％。
處方4通關(guān)藤提取物 40.2g(相當(dāng)于通關(guān)藤2kg)人參皂苷 19.6g(相當(dāng)于人參4kg)黃芪皂苷 20.2g(相當(dāng)于黃芪1kg)尼泊金甲酯1.0g甜菊甙10g純化水加至10000ml共制備1000支注總提取物中主要有效成分的總含量為50.31％。
制備工藝1)將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪多糖加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪多糖加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全；或者將通關(guān)藤提取物、人參多糖、黃芪皂苷加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全；或者將通關(guān)藤提取物、人參皂苷、黃芪皂苷加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全；2)將尼泊金甲酯和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加純化水水至全量。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該組合物由下列原料藥制成通關(guān)藤2～100份，人參1～200份，黃芪1～200份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其重量份數(shù)為通關(guān)藤10～50份、人參5～100份、黃芪5～100份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于其重量份數(shù)為通關(guān)藤20份、人參40份、黃芪10份。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其中的原料藥可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中所含的主要有效成分為通關(guān)藤總酚酸、人參多糖或總皂苷、黃芪多糖或總皂苷。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中的主要有效成分的總含量不低于50％。
7.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，該組合物還可以由下列原料藥制成通關(guān)藤、人參、黃芪的提取物，其主要有效成分分別為通關(guān)藤總酚酸、人參多糖或總皂苷、黃芪多糖或總皂苷；其重量配比為以總酚酸為主要有效成分的通關(guān)藤提取物1～200份、人參多糖1～400份、黃芪多糖1～400份；或者為以總酚酸為主要有效成分的通關(guān)藤提取物1～200份、人參皂苷1～400份、黃芪多糖1～400份；或者為以總酚酸為主要有效成分的通關(guān)藤提取物1～200份、人參多糖1～400份、黃芪皂苷1～400份；或者為以總酚酸為主要有效成分的通關(guān)藤提取物1～200份、人參皂苷1～400份、黃芪皂苷1～400份。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于所述的通關(guān)藤提取物含通關(guān)藤總酚酸不低于20％；人參提取物含人參多糖不低于50％或者含人參總皂苷不低于50％，人參總皂苷中人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量不低于30％；黃芪提取物含黃芪多糖不低于50％或者含黃芪總皂苷不低于50％，黃芪總皂苷中黃芪甲苷含量不低于2.0％。
9.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述的各提取物中的主要有效成分的總含量不低于總提取物重量的50％。
10.如權(quán)利要求1、2、3、7、8、9所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
11.如權(quán)利要求10所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可以制成注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種藥物組合物及其制備方法和用途，包括通關(guān)藤或其提取物、人參或其提取物、黃芪或其提取物，其重量份數(shù)為通關(guān)藤2～100份或其提取物1～200份、人參1～200份或其提取物1～400份、黃芪1～200份或其提取物1～400份；該藥物組合物可以原藥材或提取物投料制成各種藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑和口服制劑；具有抗腫瘤、抗肝損害、抗感染、解毒、抗菌和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。
文檔編號A61K31/27GK1954839SQ20051010435
公開日2007年5月2日 申請日期2005年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月26日
發(fā)明者黃振華 申請人:黃振華