專利名稱：一種治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物及其制備方法，具體地，是以中藥材野菊花為原料制備而成的眼用藥物組合物及其制備方法，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
結(jié)膜炎是眼科的多發(fā)病，占結(jié)膜病的首位。其病因不外乎微生物性與非微生物性兩大類。就微生物性而言，細菌、病毒、寄生蟲等均可引起結(jié)膜炎癥，而且來源甚為廣泛，可直接來自外界，也可來自自身，而自身感染又可能通過血流或淋巴液轉(zhuǎn)移至結(jié)膜(結(jié)核等)；或由鄰近組織，如眼球本身(角膜、鞏膜)、眼眶、鼻腔與副鼻竇、淚器、周圍的眼瞼皮膚直接蔓延而來。就非微生物病因而言，機械的、物理的(熱、放射、電)、化學(xué)的、以至全身過敏狀態(tài)和一些全身代謝性障礙(如風(fēng)濕、痛風(fēng))皆可成為致病因素?？傊?，結(jié)膜炎的病因極其復(fù)雜，因此，一般通行的結(jié)膜炎臨床分類也是多種多樣的，有的從病因上分類(如過敏性結(jié)膜炎)，有的則以臨床表現(xiàn)分類，按起病急緩、病程長短又可有急、慢性之分。不同病因有時可有同樣的臨床表現(xiàn)(如各種病因都可造成慢性卡他性結(jié)膜炎)，或同一病因有時又可引起不同的臨床癥狀(如溶血性金黃色葡萄球菌感染時，可表現(xiàn)為急性卡他性結(jié)膜炎或假膜性結(jié)膜炎)，由于上述諸多原因，這就決定結(jié)膜炎的臨床表現(xiàn)常常是多種多樣、錯綜復(fù)雜的。本病屬于中醫(yī)“紅眼”、“火眼”、“天行赤眼”、“目中赤痛”等范疇。
目前治療結(jié)膜炎的藥物主要為抗菌藥，然而抗菌藥的副作用很大，如氯霉素會造成再生障礙性貧血和灰嬰綜合癥；紅霉素有很強烈的胃腸道反應(yīng)等。并且長期使用易產(chǎn)生耐藥性。
野菊花是菊科植物野菊Chrysnathemum indicum的干燥頭狀花序或全草。味苦、性微寒、歸肺、肝經(jīng)。具有清熱解毒之功效，主治癰疽癤疔、瘰疬、眼痛等癥。藥理研究對金黃色葡萄球菌、結(jié)核菌及卡介菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌均有明顯的抑菌作用，水劑對大鼠靜脈注入，對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有明顯的抑制作用。臨床作用對高脂血癥、急性支氣管炎、頸淋巴結(jié)核、流行性腮腺炎、口腔潰瘍、菌痢、腸炎、前列腺炎、盆腔炎、肛竇炎、肛乳頭炎等均有良好療效。(見劉國應(yīng)，野菊花的藥理研究及臨床應(yīng)用進展，山東中醫(yī)雜志，1990，9(6)；劉國立，野菊花的藥理研究及臨床應(yīng)用概況，時珍國藥研究，1991，2(3))目前，野菊花為原料的制劑有口服制劑，野菊花注射液，具有解表解毒。用于外感熱病、目赤腫痛、器喉疼痛；上呼吸道感染、急性扁桃體炎屬熱毒上攻者。沈麗珍，菊花在眼科的臨床應(yīng)用，中國中醫(yī)眼科雜志，2001，11(2)，報道了菊花(白菊、黃菊、野菊)，治療外眼熱性疾病，如急、慢性結(jié)膜炎，其中野菊多種于各種化學(xué)傷、熱燒傷等熱毒壅盛之疾病，但沒有報道具體的藥材提取方法，其具體的藥效是不可預(yù)知的。雖然野菊花注射劑亦有報道用于眼科疾病，但由于原料提取方法不同，注射劑與滴眼液的質(zhì)量要求不同，附加劑的選擇不同，針對眼用環(huán)境的特殊性，不能將注射劑直接用于滴眼液，目前尚無野菊花為原料制備眼用制劑的報道，亦沒有形成相關(guān)的產(chǎn)品的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的解決方案是提供了一種治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明提供了一種治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，它是由中藥野菊花Chrysanthemum indicum L.的提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的眼用制劑，其中，每制劑單位中含總黃酮以蘆丁C27H30O16計，不得少于0.5mg；每1ml含綠原酸C16H18O9應(yīng)不得少于30μg。所述的每制劑單位是指液體制劑的每ml；固體制劑的每g。
其中，所述的野菊花提取物是由如下方法提取將野菊花加水，二次蒸餾，收集重蒸餾液；藥渣加水煎煮，50％～80％乙醇精制，回收乙醇，與重蒸餾液混合，即為野菊花提取物。
所述的制劑是液體制劑、半固體制劑。
進一步地，所述的半固體制劑是眼膏劑、眼用膜劑、眼用凝膠劑。
進一步地，所述的液體制劑為滴眼液、緩釋滴眼液。
其中，所述的液體制劑中每1ml含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計，不得少于0.5mg；每1ml含綠原酸(C16H18O9)應(yīng)不得少于30μg。
其中，所述的液體制劑的pH值為7.0～7.4。
其中，所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料制備而成野菊花1200～800g、吐溫80 8～3ml、甘油10～6ml、硼酸10～6g，余量為水。
進一步地，所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料制備而成野菊花1000g、吐溫80 5ml、甘油8ml、硼酸8g，余量為水。
本發(fā)明還提供了該眼用藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟a、取藥材野菊花Chrysanthemum indicum L.的干燥頭狀花序或全草，加水浸泡、用水蒸氣蒸餾法經(jīng)蒸餾、重蒸餾，收集重蒸餾液，剩余藥渣；b、將a步驟的藥渣加水煎煮，過濾，濃縮，加乙醇使含醇量為50％～80％，靜置，過濾，回收乙醇，過濾，濾液備用；c、將a步驟的重蒸餾液與b步驟的濾液混合，加入藥學(xué)上可接受的眼用制劑的輔料或輔助性成分制備而成的藥學(xué)上常用的眼用制劑。
本發(fā)明眼用藥物組合物，藥物來源廣泛，療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定可控，副作用小，有效提取成分不易產(chǎn)生耐藥性，且通過藥效學(xué)試驗證明，采用本發(fā)明原料提取方法制備而成的眼用制劑比原注射劑在相同的原料用量下，藥效明顯優(yōu)于原注射劑，且滿足眼用制劑的質(zhì)量要求，為臨床提供了治療急、慢性結(jié)膜炎的藥物新選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1本發(fā)明藥物滴眼液的制備一、原料野菊花1000g、吐溫80 5ml、甘油8ml、硼酸8g、20％氫氧化鈉適量配制1000ml二、制備工藝1、取野菊花1000g，加10量水浸泡1小時，水蒸汽蒸餾，收集初餾液1000ml，再重蒸餾，收集重蒸餾液500ml，備用；2、收集藥渣中的煎煮液，濾過，藥渣加8量水，煎煮二次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.14～1.18(40～70℃)的清膏，加乙醇使含醇量達65％，冷藏，靜置12小時；
3、濾過，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.16～1.22(40～70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達85％，攪勻，冷藏放置20小時。濾過，濾液回收乙醇并濃縮至無醇味，加注射用水至500ml，冷藏12小時，濾過，濾液加熱至80～90℃，加入0.3％活性炭，攪拌均勻，保持80～90℃30分鐘；4、濾過，濾液用0.22μm精濾，加入吐溫后加熱至沸，冷至室溫，加入重蒸餾液500ml，混勻，加入其余附加劑，用20％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至7.0～7.4，加注射用水至1000ml，0.22μm濾過，無菌灌裝，即得。
上述制備工藝中，輔料的選擇和pH值的范圍是本發(fā)明制備方法的關(guān)鍵因素。
實驗例2本發(fā)明藥物滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量有變化野菊花1200g、吐溫80 8ml、甘油10ml、20％氫氧化鈉適量、硼酸10g；實驗例3本發(fā)明藥物滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量有變化野菊花800g、吐溫80 3ml、20％氫氧化鈉適量、硼酸6g；實驗例4本發(fā)明藥物滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量有變化野菊花1000g、吐溫80 6ml、20％氫氧化鈉適量、硼酸6g；實驗例5本發(fā)明藥物滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量有變化野菊花1000～800g、吐溫80 5ml、甘油7ml、20％氫氧化鈉適量、硼酸8g；實驗例6本發(fā)明藥物滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量和輔料有變化野菊花1000g、吐溫20 7ml、十二烷基硫酸鈉6ml、磷酸適量、硼酸7g；實驗例7本發(fā)明藥物滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量和輔料有變化野菊花1200～800g、十二烷基硫酸鈉4ml、甘油9ml、20％氫氧化鈉適量、氯化鈉7g、杜滅芬0.8ml；實驗例8本發(fā)明藥物緩釋滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量和輔料有變化野菊花1000g、卡波姆2.2g、羥丙甲基纖維素15.0g、磷酸氫二鈉2.5g、磷酸二氫鈉5.0g、氯化鈉5.0g、尼泊金乙酯0.3g、1M氫氧化鈉適量；
實驗例9本發(fā)明藥物緩釋滴眼液的制備制備工藝同實施例1，只是用量和輔料有變化野菊花1000g；卡波姆5g、羥丙甲基纖維素10g、磷酸氫二鈉2.5g、磷酸二氫鈉2.5g、氯化鈉3.0g、尼泊金乙酯0.3g、1M氫氧化鈉適量；實驗例10本發(fā)明藥物眼用凝膠的制備制備工藝同實施例1，只是用量和輔料有變化野菊花1000g；玻璃酸鈉5.2g、羥丙甲基纖維素10g、硼酸2.5g、氯化鈉3.0g、尼泊金乙酯0.3g、1M氫氧化鈉適量；苯乙醇1.5ml實驗例11本發(fā)明藥物眼用凝膠的制備制備工藝同實施例1，只是用量和輔料有變化野菊花1000g；玻璃酸鈉5.2g、羥丙甲基纖維素10g、卡波姆3.5g；硼酸2.5g、氯化鈉3.0g、尼泊金乙酯0.6g實驗例12本發(fā)明藥物眼用制劑中附加劑選擇的實驗依據(jù)附加劑的篩選依據(jù)1、助溶輔料的選擇本品含揮發(fā)油，在水中溶解度小。為防止揮發(fā)油析出，參照野菊花注射劑原工藝進行了預(yù)試，選用0.5％聚山梨酯80增加揮發(fā)油的溶解度，增加制劑的穩(wěn)定性。試驗結(jié)果表明，其增溶效果較好。
2、pH調(diào)整劑的選擇pH值對滴眼液有重要的影響。人體正常淚液的pH值為7.4，當pH值為6～8時無不舒適感受。確定滴眼液的pH值，主要從藥物的溶解度、穩(wěn)定性、刺激性等方面考慮。野菊花重蒸餾液的pH值常為4.0左右，必須添加適量堿性pH調(diào)節(jié)劑。常用的堿性pH調(diào)節(jié)劑有氫氧化鈉(鉀)溶液、枸櫞酸鈉溶液、磷酸鹽緩沖液等?？紤]到本品中含黃酮類成分，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH可增加其溶解度，并參照野菊花注射劑原工藝，選用20％氫氧化鈉溶液作為本品的pH調(diào)節(jié)劑，并對pH調(diào)節(jié)范圍進行了選擇。
pH值調(diào)節(jié)前后變化結(jié)果見表1。
表1本發(fā)明藥物滴眼液pH值調(diào)節(jié)前后變化結(jié)果表 由上表可知，pH調(diào)節(jié)后，貯藏過程中pH值均有所下降，但不同的pH值對本發(fā)明藥物滴眼液的穩(wěn)定性影響較大，貯藏過程中指標成分和有效成分均有所下降，因調(diào)pH值至7.0～7.5時下降較小，6.0～6.5時藥液澄明度較差，總黃酮含量下降也較多，結(jié)合穩(wěn)定性和刺激性等方面進行考慮，選擇調(diào)pH值至7.0～7.5較適宜。
3、抑菌劑的選擇滴眼液是多劑量制劑，原則上需要加入抑菌劑?？紤]到本品所含有效成分本身具有良好的抑菌效果，同時對常用的抑菌劑進行初步篩選，尼泊金類抑菌劑與本品中聚山梨酯80有配伍禁忌，苯扎溴銨與本品有配伍禁忌，山梨酸不穩(wěn)定易氧化，而硫柳汞等則考慮其毒性較大。而硼酸水溶液，即有緩沖，增加主藥溶解度，調(diào)節(jié)滲透壓等作用。又有抑制細菌和霉菌作用，增加本品的療效。故選用1％硼酸為本品的抑菌劑，并對其抑菌效果進行了考察。
試驗方法取200g藥材，按以上工藝操作，將藥液加入注射用水至200ml，0.22μm微孔濾膜濾過；取100ml，加入10g硼酸，使溶解，0.22μm微孔濾膜濾過，裝入輸液瓶中，不加蓋，溶液暴露于空氣中兩小時后，封好瓶蓋，振搖0.5小時后，按照《中國藥典》2000版一部附錄XIIIC微生物限度檢查法檢查細菌數(shù)、霉菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。實驗結(jié)果見表2。
表2抑菌劑考察

結(jié)論本滴眼液加硼酸后的抑菌效果能夠達到要求。且樣品經(jīng)過常溫留樣考察，微生物限度符合滴眼劑規(guī)定。
4、黏度調(diào)整劑的選擇適當增加滴眼液的黏度，可使藥物在眼內(nèi)停留時間延長，有利于增強藥物的療效，同時黏度增加后亦可減少刺激性。照黏度測定法(《中國藥典》2000年版二部附錄VIG)第二法對滴眼液黏度進行測定，結(jié)果為4.0cPa·s。綜合考慮，本品滴眼液具有較為合適的黏度，可不加增黏劑。
5、滲透壓調(diào)整劑的選擇滴眼劑的滲透壓應(yīng)與人的淚液(正常淚液的滲透壓值為290m0sm·L)等滲。人眼通?？赡褪艿臐B透壓范圍相當于0.8％～1.2％的氯化鈉溶液，低于或高于此濃度均會產(chǎn)生不適感。
試驗方法按制備工藝制成藥液，測定滲透壓。試驗結(jié)果見表3。
表3滲透壓考察

結(jié)論經(jīng)測定0.8％～1.2％氯化鈉溶液的滲透壓為235～393mOsM，可見本品的滲透壓在人正常限的耐受范圍內(nèi)，不需加滲透壓調(diào)節(jié)劑。
上述附加劑的選擇可知，本發(fā)明藥物附加劑雖然是常規(guī)用眼用制劑輔料，但并非簡單的組合，而是經(jīng)過創(chuàng)造性的篩選、分析、比較，選擇的附加劑及其用量均是不可預(yù)知的，附加劑的選擇有效的保證的本發(fā)明藥物的質(zhì)量。
實施例12本發(fā)明藥物的質(zhì)量控制方法總黃酮照紫外分光光度法(中國藥典2000版一部附錄V)測定。
對照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品200mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微熱使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，分別置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法(附錄VB)，在500nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法 取本品溶液1ml，置25ml量瓶中，照標準曲線的制備項下的方法，自“加水至6ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計算，即得。
本品每1ml含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計，不得少于0.5mg。
綠原酸照高效液相色譜法(《中國藥典》二000年版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.4％磷酸溶液(13∶87)為流動相；檢測波長為327nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色容量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
供試品溶液的制備取本品作為供試品。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每1ml含綠原酸(C16H18O9)應(yīng)不得少于30μg。
野菊花中主要含有總黃酮和綠原酸，綠原酸不穩(wěn)定，僅以綠原酸為質(zhì)量控制指標不能有效達到質(zhì)量控制的目的，因此，同時選擇總黃酮為質(zhì)量控制的指標成分，總黃酮是野菊花中的主要活性成分，既達到質(zhì)量控制的目的，其量的多少又直接反映了藥物的藥效。
以下通過藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的有益效果。
試驗例1本發(fā)明藥物對家兔實驗性金黃色葡萄球菌感染性結(jié)膜炎的治療作用試驗材料1、試驗藥物(1)受試藥物本發(fā)明藥物滴眼液，5mL/支，藥物濃度分別為2g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材2g)，批號040704；1g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材1g)，批號040703；0.5g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材0.5g)，批號040705。以上本發(fā)明藥物滴眼液各個濃度藥液由實施例1的方法制備，1g生藥/mL本發(fā)明藥物滴眼液為臨床劑量。
野菊花注射液1g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材1g)，由雅安三九藥業(yè)有限公司提供，批號040301。
(2)陽性對照藥物氯霉素滴眼液。8mL(20mg)/支。由四川泰華堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號040212。
2、細菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923，濃度為1×108個菌/mL。由成都中醫(yī)藥大學(xué)微生物學(xué)教研室進行細菌培養(yǎng)、制備和提供。
3、動物家兔，紅眼，白毛，一級，體重1.95～2.25kg，雌雄兼用。由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供，動物合格證號川實動管質(zhì)2004-14。
4、試驗方法(1)結(jié)膜炎模型的復(fù)制方法按照文獻介紹的方法，對家兔雙眼的下眼臉與球結(jié)膜交界處注射金黃色葡萄球菌的混懸液(濃度為1×108個菌/mL)0.1mL/眼，造成金黃色葡萄球菌感染性結(jié)膜炎模型；(2)分組與藥物劑量注射金黃色葡萄球菌造成結(jié)膜炎模型24小時后(第2天)根據(jù)病情輕重程度將家兔40只按性別均勻搭配分成8組，每組5只(雌雄兼用)共10只眼用于實驗。分別作為①正常對照組生理鹽水等體積滴眼；②模型對照組生理鹽水等體積滴眼；③氯霉素滴眼液(陽性對照藥物)組0.24mg/kg(濃度為2.5mg/mL，兩眼滴藥，24μL/眼/次，4次/天)；④～⑥本發(fā)明藥物滴眼液高、中、低三種劑量組0.192、0.096、0.048g生藥/kg(兩眼滴藥，24μL/眼/次，4次/天。)；⑦～⑧原劑型野菊花注射液高、低劑量組0.096、0.048g生藥/kg(兩眼滴藥，24μL/眼/次，高劑量4次/天，低劑量2次/天。)。
(3)給藥途經(jīng)與方法在注射金黃色葡萄球菌造成結(jié)膜炎模型24小時后(第2天)根據(jù)病情輕重程度均勻分組，然后開始用生理鹽水、本發(fā)明藥物滴眼液、原劑型野菊花注射液和氯霉素滴眼液滴眼，連續(xù)7日。
(4).觀察指標每天上午第1次滴眼藥液之前，先按眼刺激綜合評分標準進行觀察和記錄結(jié)膜炎程度后再分別給予滴眼液。
結(jié)膜炎程度分級評分標準①充血血管正常0分；血管充血呈鮮紅色1分；血管充血呈深紅色，血管不易分辨2分；彌漫性充血呈紫紅色3分。
②水腫無水腫0分；輕微水腫1分；明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻2分；水腫至眼瞼近半閉合3分；水腫至眼瞼超過半閉合4分。
③分泌物無分泌物0分；少量分泌物1分；分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著2分；分泌物使整個眼區(qū)和睫毛潮濕或粘著3分。
(5)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用x±S表示，兩組之間的比較用Dunnett t檢驗。
(6)試驗結(jié)果結(jié)果見表4，從表4及試驗中可見，對家兔兩只眼睛的下眼臉與球結(jié)膜交界處注射金黃色葡萄球菌的混懸液(濃度為1×108個菌/mL)0.1mL/眼，造成金黃色葡萄球菌感染性結(jié)膜炎模型。致炎24小時后，可見球結(jié)膜和瞼結(jié)膜彌漫性充血呈紫紅色，水腫異常嚴重(模型對照組7天后與正常對照組比較病變?nèi)悦黠@)，眼睛充血，炎癥分泌物多(尤其感染后1～3天)。本發(fā)明藥物滴眼液及陽性對照藥物氯霉素滴眼液具有顯著的治療作用。本發(fā)明藥物滴眼液高劑量組(0.192g生藥/kg)治療3天后即可使結(jié)膜炎充血、水腫、分泌物等癥狀顯著減輕(P＜0.05)；本發(fā)明藥物滴眼液中(臨床劑量)、低劑量組(0.096、0.048g生藥/kg)和原劑型野菊花注射液(0.096、0.048g生藥/kg)治療5天后可使結(jié)膜炎充血、水腫、分泌物等癥狀顯著減輕(P＜0.05)。說明本發(fā)明藥物滴眼液與原劑型注射液對金黃色葡萄球菌感染所致家兔結(jié)膜炎均具有治療作用，治療7天后可治愈(與正常對照組比較，P＞0.05)。
實驗例2本發(fā)明藥物滴眼液對家兔病毒性結(jié)膜炎的作用1、試驗材料(1)受試藥物本發(fā)明藥物滴眼液，5mL/支，藥物濃度分別為2g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材2g)，批號040704；1g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材1g)，批號040703；0.5g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材0.5g)，批號040705。以上本發(fā)明藥物滴眼液各個濃度藥液由實施例1的方法制備，1g生藥/mL本發(fā)明藥物滴眼液為臨床劑量。
野菊花注射液1g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材1g)，批號040301，由雅安三九藥業(yè)有限公司提供。
(2)陽性對照藥物阿昔洛韋滴眼液，8ml∶8mg，本品為無色的澄明液體。批號20030509，由湖北潛江制藥廠生產(chǎn)。
(3).病毒株單純皰疹病毒I型(HSV-I)，TCID50為10-9，由北京藥品生物制品檢定所提供。
(4)動物家兔，紅眼，白毛，一級，體重2.25～2.50kg，雌雄兼用。由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供，動物合格證號川實動管質(zhì)2004-14。
2、試驗方法(1)結(jié)膜炎模型的復(fù)制方法按照文獻介紹的方法，對家兔兩只眼的下眼臉與球結(jié)膜交界處注射單純皰疹病毒I型的混懸液(TCID50為10-9)0.1mL/眼，造成感染性單純皰疹病毒I型結(jié)膜炎模型。
(2)分組與藥物劑量在注射單純皰疹病毒I型造成結(jié)膜炎模型24小時后(第2天)根據(jù)病情輕重程度將家兔40只按性別均勻搭配分成8組，每組5只(雌雄兼用)共10只眼用于實驗。分別作為①正常對照組生理鹽水等體積滴眼；②模型對照組生理鹽水等體積滴眼；③阿昔洛韋滴眼液(陽性對照藥物)組0.096mg/kg(濃度為1mg/mL，兩眼滴藥，24μL/眼/次，4次/天)；④～⑥本發(fā)明藥物滴眼液高、中、低三種劑量組0.192、0.096、0.048g生藥/kg(兩眼滴藥，24μL/眼/次，4次/天。)；⑦～⑧原劑型野菊花注射液高、低劑量組0.096、0.048g生藥/kg(兩眼滴藥，24μL/眼/次，高劑量4次/天，低劑量2次/天。)。
(3)給藥途經(jīng)與方法在注射單純皰疹病毒I型造成結(jié)膜炎模型24小時后(第2天)根據(jù)病情輕重程度均勻搭配分組，然后開始用生理鹽水、本發(fā)明藥物滴眼液、原劑型野菊花注射液和阿昔洛韋滴眼液滴眼，連續(xù)7日。
(4).觀察指標每天上午第1次滴眼藥水之前，先按綜合評分方法觀察和記錄結(jié)膜炎癥程度分值后再分別滴眼藥液。
結(jié)膜炎程度分級評分標準①充血血管正常0分；血管充血呈鮮紅色1分；血管充血呈深紅色，血管不易分辨2分；彌漫性充血呈紫紅色3分。
②水腫無水腫0分；輕微水腫1分；明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻2分；水腫至眼瞼近半閉合3分；水腫至眼瞼超過半閉合4分。
③分泌物無分泌物0分；少量分泌物1分；分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著2分；分泌物使整個眼區(qū)和睫毛潮濕或粘著3分。
(5)統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用x±S表示，兩組之間的比較用Dunnett t檢驗。
(6)試驗結(jié)果結(jié)果見表5，從表5及試驗中可見，對家兔兩只眼睛的下眼臉與球結(jié)膜交界處注射單純皰疹病毒I型的混懸液(TCID50為10-9)0.1mL/眼，造成單純皰疹病毒I型感染性結(jié)膜炎模型。致炎24小時后，可見眼結(jié)膜充血，炎性分泌物多(尤其治療3～5天)。本發(fā)明藥物滴眼液及陽性對照藥物阿昔洛韋滴眼液具有顯著的治療作用。本發(fā)明藥物滴眼液高、中劑量(臨床劑量)組(0.192、0.096g生藥/kg)治療5天后即可使結(jié)膜炎充血、水腫、分泌物等癥狀顯著減輕(p＜0.05)；而原劑型野菊花注射液對單純皰疹病毒I型感染性家兔結(jié)膜炎模型無治療作用(p＞0.05)。說明在治療單純皰疹病毒I型感染所致家兔結(jié)膜炎上，本發(fā)明藥物滴眼液優(yōu)于原劑型野菊花注射液。
實驗例3本發(fā)明藥物滴眼液對家兔非細菌性結(jié)膜炎的作用1、試驗材料(1)受試藥物本發(fā)明藥物滴眼液，5mL/支，藥物濃度分別為2g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材2g)，批號040704；1g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材1g)，批號040703；0.5g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材0.5g)，批號040705。以上本發(fā)明藥物滴眼液各個濃度藥液均由實施例1的方法制備，1g生藥/mL本發(fā)明藥物滴眼液為臨床劑量。
野菊花注射液1g生藥/mL(每mL相當于含野菊花原生藥材1g)，由雅安三九藥業(yè)有限公司提供，批號040301。
(2)陽性對照藥物氯霉素滴眼液。8mL(20mg)/支。由四川泰華堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號040212。
(3)致炎劑巴豆油，由成都中醫(yī)藥大學(xué)炮制教研室提供，巴豆油與菜油按1∶20稀釋，備用。
(4)動物家兔，一級，體重1.90～2.20kg，雌雄兼用。由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供，動物合格證號川實動管質(zhì)2004-14。
2、試驗方法(1).結(jié)膜炎模型的復(fù)制方法按照文獻介紹的方法，實驗時每只家兔左右眼結(jié)膜囊內(nèi)分別滴入巴豆油0.05ml(巴豆油以菜油按1∶20稀釋)，閉合眼瞼，輕輕按摩10秒鐘，致炎。造成巴豆油性結(jié)膜炎模型。
(2)分組與藥物劑量在巴豆油造成結(jié)膜炎模型后30分鐘，根據(jù)病情輕重程度將家兔40只按性別、炎癥程度均勻搭配分成8組，每組5只(雌雄兼用)共10只眼用于實驗。分別作為①正常對照組生理鹽水等體積滴眼；②模型對照組生理鹽水等體積滴眼；③氯霉素滴眼液(陽性對照藥物)組0.24mg/kg(濃度為2.5mg/mL，兩眼滴藥，24μL/眼/次，4次/天)；④～⑥本發(fā)明藥物滴眼液高、中、低三種劑量組0.192、0.096、0.048g生藥/kg(兩眼滴藥，24μL/眼/次，4次/天。)；⑦～⑧原劑型野菊花注射液高、低劑量組0.096、0.048g生藥/kg(兩眼滴藥，24μL/眼/次，高劑量4次/天，低劑量2次/天。)。
(3).給藥途經(jīng)與方法在巴豆油造成結(jié)膜炎模型后30分鐘，根據(jù)病情輕重程度將家兔均勻分組，分別用生理鹽水、本發(fā)明藥物滴眼液、氯霉素滴眼液和原劑型野菊花注射液滴眼。
(4)觀察指標于第一次給藥后1小時、2小時、4小時、8小時、24小時、48小時檢查和記錄結(jié)膜炎癥程度并評分。
結(jié)膜炎程度分級評分標準①充血血管正常0分；血管充血呈鮮紅色1分；血管充血呈深紅色，血管不易分辨2分；彌漫性充血呈紫紅色3分。
②水腫無水腫0分；輕微水腫1分；明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻2分；水腫至眼瞼近半閉合3分；水腫至眼瞼超過半閉合4分。
③分泌物無分泌物0分；少量分泌物1分；分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著2分；分泌物使整個眼區(qū)和睫毛潮濕或粘著3分。
(5)統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用x±S表示，兩組之間的比較用Dunnett t檢驗。
(6)試驗結(jié)果評分結(jié)果見表6表6結(jié)果顯示，在巴豆油造成結(jié)膜炎模型30分鐘后，可見眼睛充血、水腫嚴重，分泌物多，以本發(fā)明藥物滴眼液(0.192g生藥/kg、0.096g生藥/kg、0.048g生藥/kg)和原劑型野菊花注射液(0.096g生藥/kg、0.048g生藥/kg)治療1小時后，與模型組比較，即可見充血、水腫癥狀明顯減輕，分泌物減少。說明本發(fā)明藥物滴眼液及原劑型野菊花注射液對巴豆油所致的家兔非細菌性結(jié)膜炎均有明顯的抑制作用(P＜0.05)。本發(fā)明藥物滴眼液臨床劑量治療后48h，基本治愈，與正常對照組相比較，P＞0.05，而原劑型野菊花注射液組與正常對照組相比較，仍有差異，P＜0.05，說明治療巴豆油所引起的家兔結(jié)膜炎，本發(fā)明藥物滴眼液比原劑型野菊花注射液優(yōu)。
上述藥效學(xué)試驗說明本發(fā)明藥物滴眼液對于治療急、慢性結(jié)膜炎有如下作用(一)對家兔實驗性金黃色葡萄球菌感染性結(jié)膜炎的治療作用在對家兔實驗性金黃色葡萄球菌感染性結(jié)膜炎的治療作用試驗中，本發(fā)明藥物滴眼液高劑量組(0.192g生藥/kg)治療3天后即可使結(jié)膜炎充血、水腫、分泌物等癥狀顯著減輕(P＜0.05)；本發(fā)明藥物滴眼液中(臨床劑量)、低劑量組(0.096、0.048g生藥/kg)和原劑型野菊花注射液(0.096、0.048g生藥/kg)治療5天后可使結(jié)膜炎充血、水腫、分泌物等癥狀顯著減輕(P＜0.05)。且治療7天后可治愈(與正常對照組比較，P＞0.05)。說明本發(fā)明藥物滴眼液與原劑型注射液對金黃色葡萄球菌感染所致家兔結(jié)膜炎均具有治療作用。
(二)本發(fā)明藥物滴眼液對家兔病毒性結(jié)膜炎的作用在本發(fā)明藥物滴眼液對家兔病毒性結(jié)膜炎的作用試驗中，本發(fā)明藥物滴眼液高、中劑量(臨床劑量)組(0.192、0.096g生藥/kg)治療5天后即可使結(jié)膜炎充血、水腫、分泌物等癥狀顯著減輕(p＜0.05)；而原劑型野菊花注射液對單純皰疹病毒I型感染性家兔結(jié)膜炎模型無治療作用(p＞0.05)。說明在治療單純皰疹病毒I型感染所致家兔結(jié)膜炎上，本發(fā)明藥物滴眼液優(yōu)于野菊花注射液。
(三)本發(fā)明藥物滴眼液對家兔非細菌性結(jié)膜炎的作用在對家兔非細菌性結(jié)膜炎的作用試驗中，以本發(fā)明藥物滴眼液(0.192g生藥/kg、0.096g生藥/kg、0.048g生藥/kg)和原劑型野菊花注射液(0.096g生藥/kg、0.048g生藥/kg)治療1小時后，與模型組比較，即可見充血、水腫癥狀明顯減輕，分泌物減少。說明本發(fā)明藥物滴眼液及原劑型野菊花注射液對巴豆油所致的家兔非細菌性結(jié)膜炎均有明顯的抑制作用(P＜0.05)。另外，在以本發(fā)明藥物滴眼液0.192g生藥/kg治療后24h，結(jié)膜炎基本治愈，與正常對照組相比較，P＞0.05；本發(fā)明藥物滴眼液0.096g生藥/kg(臨床劑量)治療后48h，基本治愈，與正常對照組相比較，P＞0.05，而原劑型野菊花注射液組與正常對照組相比較，仍有差異，P＜0.05，說明治療巴豆油所引起的家兔結(jié)膜炎，本發(fā)明藥物滴眼液比原劑型野菊花注射液優(yōu)。
上述藥效學(xué)試驗說明，在相同的原料用量下，本發(fā)明藥物滴眼液的藥效明顯優(yōu)于野菊花注射液，該效果的產(chǎn)生，并非是僅僅由于劑型的改變而產(chǎn)生的，它是由原料提取方法不同引起的，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，并非是顯而易見地，可推知的，因此，本發(fā)明眼用制劑為臨床提供了一種新的選擇。
表4本發(fā)明藥物滴眼液對金黃色葡萄球菌感染所致家兔結(jié)膜炎的治療作用(綜合評分x±S N＝10只眼)

注與模型對照組比較，*P＜0.05；與正常對照組比較，△P＜0.05
表5本發(fā)明藥物滴眼液對單純皰疹病毒I型感染所致家兔結(jié)膜炎的治療作用(綜合評分x±S N＝10只眼)

注與模型對照組比較，*P＜0.05；與正常對照組比較，△P＜0.05
表6本發(fā)明藥物滴眼液對巴豆油所致家兔急性結(jié)膜炎的影響(x±S N＝10只眼)

注與模型組比較，*P＜0.05，與正常對照組比較△P＜0.0權(quán)利要求
1.一種治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于它是由中藥野菊花Chrysanthemum indicum L.的提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的眼用制劑，其中，每制劑單位中含總黃酮以蘆丁C27H30O16計，不得少于0.5mg；每1ml含綠原酸C16H18O9應(yīng)不得少于30μg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的野菊花提取物是由如下方法提取將野菊花加水，二次蒸餾，收集重蒸餾液；藥渣加水煎煮、50％～80％乙醇精制，回收乙醇，與重蒸餾液混合，即為野菊花提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的制劑是液體制劑、半固體制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的半固體制劑是眼膏劑、眼用膜劑、眼用凝膠劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的液體制劑為滴眼液、緩釋滴眼液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的液體制劑中每1ml含總黃酮以蘆丁C27H30O16計，不得少于0.5mg；每1ml含綠原酸C16H18O9應(yīng)不得少于30μg。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的液體制劑的pH值為7.0～7.4。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料藥材及輔料制備而成野菊花1200～800g、吐溫808～3ml、甘油10～6ml、硼酸10～6g，余量為水。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，其特征在于所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料藥材及輔料制備而成野菊花1000g、吐溫805ml、甘油8ml、硼酸8g，余量為水。
10.一種制備權(quán)利要求1所述的治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取藥材野菊花Chrysanthemum indicum L.的干燥頭狀花序或全草，加水浸泡、用水蒸氣蒸餾法經(jīng)蒸餾、重蒸餾，收集重蒸餾液，剩余藥渣；b、將a步驟的藥渣加水煎煮，過濾，濃縮，加乙醇使含醇量為50％～80％，靜置，過濾，回收乙醇，過濾，濾液備用；c、將a步驟的重蒸餾液與b步驟的濾液混合，加入藥學(xué)上可接受的眼用制劑的輔料或輔助性成分制備而成的藥學(xué)上常用的眼用制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療急、慢性結(jié)膜炎的眼用藥物組合物，具體地，它是由中藥野菊花Chrysanthemum indicum L.的提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的眼用制劑，本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法。本發(fā)明眼用藥物組合物，藥物來源廣泛，療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定可控，副作用小，有效提取成分不易產(chǎn)生耐藥性。
文檔編號A61K9/08GK1813843SQ20051002028
公開日2006年8月9日 申請日期2005年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月31日
發(fā)明者陽向波, 謝永平, 張媛 申請人:成都三明藥物研究所