專利名稱：用于妊娠以及哺育牛的包括bhv－1(ibr)和/或bvdv的改性活疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過給予動物有效量的聯(lián)合疫苗安全地接種妊娠和妊娠母牛哺育的牛犢以預(yù)防疾病或病癥的方法，所述的疾病或病癥如由牛類病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)1型和2型、1型牛皰疹病毒(Bovine Herpes Virus Type-1，BHV-1)、牛呼吸道合胞病毒(BovineRespiratory Syncytial Virus，BRSV)、副流感3型病毒(ParainfluenzaVirus)(PIV3)、胎兒彎曲桿菌(Campylobacter fetus)、犬黃疸鉤端螺旋體(Leptospira canicola)、流感傷寒型鉤端螺旋體(Leptospira grippotyphosa)、Leptospira hardj-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體(Leptospiraicterohaemmorrhagiae)、牛哈德焦鉤端螺旋體(Leptospira hardjo-bovis)和Leptospira interrogans pomona引起感染導(dǎo)致的流產(chǎn)。本發(fā)明的方法采用完全或部分細胞無活性/或改良的活性制品的聯(lián)合疫苗。(BHV-1)(BRSV)，發(fā)明背景與牛呼吸道疾病(BRD)綜合征有關(guān)的五種病毒劑-1型牛皰疹病毒(BHV-1)，亦稱為牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)、牛類病毒性的腹瀉病毒(BVDV)1型和2型、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)和副流感3型病毒(PIV3)，導(dǎo)致對于世界牛肉和乳品工業(yè)有重要經(jīng)濟影響的呼吸和生殖系統(tǒng)感染。BRD導(dǎo)致包括急性發(fā)病的呼吸道疾病和流產(chǎn)的廣泛的一系列臨床綜合征。BRD的呼吸道形式特征在于呼吸道粘膜炎癥、腫脹、出血和壞死并且可能伴有高燒、厭食、抑郁、鼻涕流出、呼吸困難和鼻口發(fā)炎。IBRV和BVDV病毒誘導(dǎo)的流產(chǎn)能發(fā)生于所有的妊娠三月期，但主要在妊娠后半期，并且常常沒有其他的臨床征象證據(jù)(Ellis等(1996)JAVMA 208393-400；Ellsworth等(1994)InProceedings，74thConference of Research Workers ResearchWorkers in Animal Disease34)。
1型牛皰疹病毒(BHV-1)，是皰疹病毒亞科中的一員，并且產(chǎn)生多種牛類疾病臨床形式，包括呼吸和生殖器感染、結(jié)膜炎、腦炎和流產(chǎn)。以前試圖控制BHV-1感染已經(jīng)使用疫苗，所述的疫苗包括減活病毒(Gerber，J.D.，等，1978，Am.J.Vet.Res.39753-760；Mitchell，D.，1974，Can.Vet.Jour.15148151)，滅活病毒(Frerichs，G.N.，etal.，1982，Vet.Rec.111116-122)，以及病毒亞基如，例如，3個主要的已經(jīng)在本領(lǐng)域指定為gI、gIII和gIV的BHV-1糖蛋白中的一個(Babiuk，L.A.，等，1987，Virology 15957-66；vanDrunen，S.，等，1993，Vaccine 1125-35)。另外，重組的截斷型BHV-1gIV糖蛋白(在本領(lǐng)域指定為BHV-1 tgIV)誘導(dǎo)粘膜對BHV-1的免疫性能力已經(jīng)被證實(van Drunen，S.，等，1994 Vaccine 121295-1302)。然而，本領(lǐng)域公認的改良活BHV-1疫苗是禁忌用于妊娠牛，不論血清反應(yīng)陽性或血清反應(yīng)陰性的，并禁忌用于妊娠母牛哺育的牛犢。
多種臨床綜合征與BVDV 1型和2型有關(guān)。研究證實病毒導(dǎo)致嚴重的原發(fā)性呼吸道疾?。怀掷m(xù)感染(PI)牛對于易感的牛犢是主要的傳染源；而且BVDV感染白細胞蓄積，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)深入而廣泛的缺陷。Ellis等(1996)JAVMA 208393 400；Baum等(1993)The Compendium CollectionInfectiousDisease in Food Animal Practice.Trenton，NJ Veterinary LearningSystems-113-121；Meyling等(1987)Agric Pestivirus Infect Rumin 225-231。當妊娠牛被感染尤其在妊娠首三月期間時，能產(chǎn)生流產(chǎn)或干尸化。Bolin等(1989)Am J.Vet Res 521033 1037。粘膜疾病，牛類病毒腹瀉(BVD)的另外的經(jīng)常致死性表現(xiàn)，產(chǎn)生于非致細胞病變BVDV生物型的早期胎兒感染、對病毒的免疫耐受性發(fā)展、持續(xù)地染(PI)的牛犢的出生，以及繼后的致細胞病變的BVDV生物型超感染。Bolin等(1989)Am J.Vet Res 521033-1037。BVDV 2型，曾經(jīng)主要被認為是主要見于乳牛群的出血BVDV分離產(chǎn)物，已經(jīng)成為在美國大多數(shù)區(qū)域中從BVDV相關(guān)流產(chǎn)和呼吸病例中分離的主要菌株。Van Oirschot等(1999)Vet Micro 64169-183。
BVDV分類于鼠疫病毒屬和黃病毒科。其與導(dǎo)致羊邊緣疾病和典型豬瘟的病毒密切相關(guān)。感染的牛表現(xiàn)“粘膜疾病”，其特征在于升溫、腹瀉、咳嗽和營養(yǎng)粘膜的潰瘍(Olafson，等，Comell Vet.36205213(1946)；Ramsey，等，North Am.Vet.34629-633(1953)。BVD病毒能穿過妊娠牛的胎盤并可導(dǎo)致PI牛犢的出生(Malmquist，J.Am.Vet.Med.Assoc.152763-768(1968)；Ross，等，J.Am.Vet.Med.Assoc.188618-619(1986))。這些牛犢對病毒免疫耐受并且它們的余生持續(xù)地感染敗血病。它們提供爆發(fā)粘膜疾病的潛在感染源(Liess等，Dtsch.Tieraerztl.Wschr.81481-487(1974)并且對導(dǎo)致疾病如肺炎或傷寒病的微生物感染高度易感染(Barber，等，Vet.Rec.117459-464(1985)。
根據(jù)在培養(yǎng)的細胞中的BVDV病毒生長研究，二種病毒生物型已經(jīng)被分類在感染細胞中誘導(dǎo)致細胞病變效應(yīng)病毒(cp)和不誘導(dǎo)致細胞病變效應(yīng)病毒(ncp)(Lee等，Am.J.Vet.Res.18952-953；Gillespie等，Cornell Vet.5073-79，1960)。Cp變體能起于ncp病毒感染前的PI動物(Howard等，Vet.Microbiol.13361-369，1987；Corapi等，J.Virol.622823-2827，1988)?；?′非翻譯區(qū)(NTR)的遺傳多樣性和在BVD病毒的病毒粒子表面糖蛋白E2中的抗原差別，提出二個主要的基因型1型和2型。BVDV 1型表示在免疫活性的動物中通常僅產(chǎn)生輕微腹瀉的典型的或常規(guī)的病毒菌株，而BVDV 2型是新出現(xiàn)的高毒性病毒，其可產(chǎn)生血小板減少、出血和急性致死性疾病(Corapi等，J.Virol.633934-3943；Bolin等，Am.J.Vet.Res.532157-2163；Pellerin等，Virology 203260-268，1994；Ridpath等，Virology 20566-74，1994；Carman等，J.Vet.Diagn.Invest.1027-35，1998)。1型和2型BVDV病毒具有由一系列單克隆抗體(Mabs)和使用動物產(chǎn)生的病毒特異的抗血清交叉中和決定的截然不同的抗原性(Corapi等J.Vet.Res.511388-1394，1990)。兩者中任一種基因型的病毒均可以二種生物型cp或者ncp病毒之一存在。
BVD病毒感染動物的研究提示BVD病毒誘導(dǎo)動物中的B細胞和T細胞應(yīng)答(Donis等，Virology 158168-173，1987；Larsson等，Vet.Microbiol.31317-325，1992；Howard等，Vet.Immunol.Immunopathoi.32303-314，1992；Lambot等，J.Gen.Virol.781041-1047，1997；Beer等，Vet.Microbiology.589-22，1997)。
使用化學(xué)滅活的BVD病毒分離株開發(fā)了多種BVDV疫苗(Fernelius等，Am.J.Vet.Res.331421-1431，1972；Kolar等，Am.J.Vet.Res.331415-1420，1972；McClurkin等，Arch.Virol.58119，1978)。對于滅活病毒疫苗需要多劑量達到初次免疫。一些滅活BVDV疫苗只針對1型BVDV感染提供保護(Beer等，Vet.Microbiology.77195-208，2000)。由于免疫的短持續(xù)期和無效的交叉型的保護，用滅活BVDV疫苗不能實現(xiàn)胎兒保護(Bolin，Vet.Clin.North Food Anim.Pract.11615-625，1995)。
另一方面，改良的活病毒(MLV)疫苗提供高水平的保護。目前，批準的BVDV MLV疫苗使用通過在細胞培養(yǎng)中重復(fù)傳代得到的減毒病毒(Coggins等，Cornell Vet.51539-，1961；Philips等，Am.J.Vet.Res.36135-，1975)，或使用顯示溫度敏感表型的化學(xué)改良病毒生產(chǎn)(Lobmann等，Am.J.Vet.Res.452498-，1984；47557-561，1986)。單劑量的MLV疫苗足夠免疫并且接種牛的免疫持續(xù)期能夠持續(xù)幾年。然而，因為這些疫苗使用BVDV 1型病毒菌株開發(fā)，最大保護是針對1型病毒。此外，現(xiàn)有的改良活BVDV疫苗沒有被指出供妊娠?；蛉焉锱２溉榈呐偈褂谩?br> 當單獨起作用時PIV3病毒典型地僅產(chǎn)生輕微的疾??；然而，病毒使呼吸道易受更多致病生物包括IBRV病毒、BRSV和BVDV的繼發(fā)感染，導(dǎo)致典型的牛敗血病綜合征。在已知的導(dǎo)致牛呼吸道疾病的多種病毒中，PIV3病毒是最普遍的。Ellis等(1996)JAVMA 208393-400。
BRSV首選下呼吸道，并且感染的嚴重性主要通過對關(guān)鍵病毒蛋白的免疫系統(tǒng)應(yīng)答決定。Bolin等(1990)Am J Vet Res 51703。受到感染的牛通常顯示非特異性的體征，包括漿液鼻和眼的排出物，輕微的通常雙相性發(fā)熱和干咳。更嚴重感染的牛發(fā)展為刺耳的咳嗽、顯示吃力的、張口呼吸以及嘴周圍泡沫狀的唾液，并且可停止進食和飲水。Ellis等(1996)JAVMA 208393-400。
牛鉤端螺旋體病，由鉤端螺旋體屬的螺旋菌引起，是家畜的有重大經(jīng)濟影響的動物傳染病感染。Leptospira borgpetersenii serovar hardjo(L.hardjo)和L.interrogans serovar pomona(L.pomona)是通常最與世界范圍的牛鉤端螺旋體病有關(guān)的兩種血清型。在美國牛的一次調(diào)查中，29％與L.hardjo血清學(xué)反應(yīng)，并且23％與L.pomona血清學(xué)反應(yīng)。鉤端螺旋體經(jīng)由粘膜或破損的皮膚侵犯身體，并且經(jīng)血液擴散。它們顯示對腎和產(chǎn)道的趨向性，并且通常較少趨向眼睛玻璃體液和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。感染最常見的方式為直接或間接接觸感染的尿、乳汁或胎盤液體，但經(jīng)性交和經(jīng)卵巢的傳染也是已知的。牛的鉤端螺旋體感染可導(dǎo)致急性發(fā)熱、泌乳缺乏、流產(chǎn)或早產(chǎn)兒出生和虛弱感染的牛犢，并且可導(dǎo)致生育失敗和低受孕率。感染可用抗菌素治療，但其對于不授乳或妊娠?？赡懿伙@著。在這種牛中，它們形成急性或慢性的腎感染，導(dǎo)致從而可感染其他動物或處理它們的人的含有病毒的有機體的排尿。對鉤端螺旋體的免疫是血清型特異的，而且雖然疫苗已存在很多年，大多數(shù)僅導(dǎo)致弱并且短期的免疫。
因此需要安全地接種妊娠牛并在接種疫苗之后對抗大量的抗原保護妊娠牛免于從其哺育的后代傳染的方法。也需要對動物如母牛和牛犢的呼吸和生殖疾病的主要的感染原因治療和預(yù)防。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種治療或預(yù)防動物的疾病或病癥的方法，所述的疾病或病癥由感染BVDV 1型或2型、BHV-1、PIV3、BRSV、胎兒彎曲桿菌、犬鉤端螺旋體、感冒傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpeterseniihardj-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis和Leptospira interrogans pomona中至少一種所導(dǎo)致，包括給予動物有效量的聯(lián)合疫苗。
本方法對動物如牛類提供保護，具體針對全身感染和生殖疾病。本方法對動物如妊娠母牛提供保護免于BHV-1(IBRV)和BVDV引起的流產(chǎn)和BVDV 1型和2型引起的持續(xù)的胎兒感染。本方法也對動物如授乳牛和妊娠牛哺育的牛犢提供保護免于BVDV 1和2型引起的感染。本方法也對育齡動物、妊娠的動物和授乳動物的提供保護。因此，本方法對生育前和妊娠期間的動物提供保護。本方法更進一步地對有每年接種疫苗史的動物提供保護使其免于IBRV、BVDV、PIV3、BRSV、胎兒彎曲桿菌及/或鉤端螺旋體屬引起的感染或疾病。
本方法采用的聯(lián)合疫苗能是整體或部分細胞制品及/或改良活病毒制品。本發(fā)明給藥的單價或聯(lián)合疫苗可包括另外的組成，如佐劑和任選的第二種或更多抗原。第二種抗原選自下列，包括但不限于1型牛皰疹病毒(BHV-1)、牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV 1或2型)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)、副流感3型病毒(PIV3)、犬黃疸鉤端螺旋體、感冒傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardj-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospirainterrogans pomona、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供一種通過給予動物有效量的聯(lián)合疫苗治療或預(yù)防由IBRV、BVDV、PIV3、BRSV、胎兒彎曲桿菌和/或鉤端螺旋體屬的感染所引起的動物疾病或病癥。在一種實施方案中，本發(fā)明提供接種妊娠母牛和妊娠牛哺育的牛犢的方法以預(yù)防全身性疾病或病癥如IBRV、BVDV、PIV3、BRSV、胎兒彎曲桿菌及/或鉤端螺旋體屬所引起的流產(chǎn)。
在某些實施方案中，本發(fā)明的方法中使用的疫苗包括改良的活疫苗和可藥用的載體，或改良的活疫苗和佐劑。
為了清楚的公開，但不作為限制，發(fā)明詳述被分成下列描述或說明本發(fā)明一些特征、實施方案或應(yīng)用的小節(jié)。
定義和縮寫此處使用的關(guān)于疾病或病癥的術(shù)語“治療或預(yù)防”表示減少或消除病毒BVDV 1型和2型；IBRV；PIV3；BRSV；彎曲桿菌屬；及/或鉤端螺旋體屬抗原感染的危險，改善或減輕感染的癥狀，或促進從感染中的恢復(fù)。如果病毒或細菌滴度降低、肺感染減少、直腸溫度降低及/或食物攝取及/或生長增加，處理被認為是治療性的。如果胎兒感染和由于例如Leptospiraserovars hardjo和pomona感染的排尿減少，處理也被認為是治療性的?！案腥尽北硎景Y狀的全身性表現(xiàn)，包括但不限于增加直腸溫度、食物攝取及/或生長減少。感染也被理解包括呼吸、腸內(nèi)、肺部和生殖亞型。
本發(fā)明的方法對例如預(yù)防或減少由IBRV引起流產(chǎn)和由BVDV 1型和2型引起的感染以及降低直腸溫度是有效的。因此本發(fā)明包括為胎兒提供保護免于BHV-1(IBRV)和BVDV 1型和2型所引起的感染以及使胎兒免于牛皰疹和牛瘟病毒。本發(fā)明也包括對持續(xù)的胎兒感染，如持續(xù)的BVDV感染提供保護?！俺掷m(xù)的胎兒感染”表示發(fā)生在胎兒發(fā)育早期(例如，妊娠的45-125天)的感染，其導(dǎo)致對BVDV免疫耐受的動物出生并保持活性BVDV復(fù)制和高速率倍增幾個月或幾年，成為牧群中BVDV的持久的來源。如果雙重感染致細胞病變的病毒生物型，這些持續(xù)感染的動物也有發(fā)展為致命的粘膜疾病的風險。
術(shù)語“聯(lián)合疫苗”表示包括改良的活抗原的二價或多價抗原聯(lián)用。根據(jù)本發(fā)明，聯(lián)合疫苗能包括改良活的傳染性的IBRV、PIV3、BRSV和BVDV1型和2型，一種或多種抗原如但不限于犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardi-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌，可獸用的載體和佐劑。在一種實施方案中，改良的活的IBRV組分不是溫度敏感的IBRV。在優(yōu)選的實施方案中，BVDV 1型組分是致細胞病變的(cpBVD-1 strain NADL-National AnimalDisease Center，United States，Dep.of Agriculture，Ames，lowa)。在另外的優(yōu)選方案中，BVDV 2型組分是改良的活的致細胞病變的(cp BVD-2 strain53637，ATCC No.PTA-4859)。在另外的優(yōu)選方案中，改良的活抗原是干粉的、凍干的或玻璃化的。
根據(jù)本發(fā)明，聯(lián)合疫苗可包括改良的活的BHV-1、BVDV 1型和2型，一種或多種抗原例如但不限于BRSV、PIV3、犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌、可獸用的載體和佐劑。此處使用的術(shù)語“聯(lián)合疫苗”也指預(yù)防或減少感染危險及/或改善感染的癥狀的多組分的組合物，包含至少一種改良的活抗原、至少一種第二種抗原和佐劑(佐劑是任選的)。在優(yōu)選方案中，聯(lián)合疫苗的來源為Bovi-ShieldFPTM4+VL5或Bovi-ShieldFPTM5(Pfizer，Inc.)。
聯(lián)合疫苗組合物抗病原體的保護效應(yīng)正常地是通過在對象中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答得到的，免疫應(yīng)答為細胞介導(dǎo)的或由體液免疫應(yīng)答或兩者相結(jié)合。一般而言，聯(lián)合疫苗組合物的保護效應(yīng)表現(xiàn)在消除或減少BVDV、IBRV及/或PIV3感染的發(fā)病率，改善癥狀或促進感染的對象清除病毒。本發(fā)明的方法對由BVD病毒1型和2型之一或兩者所引起的感染以及BHV-1(IBRV)導(dǎo)致的感染或者流產(chǎn)和由PIV3和BRSV導(dǎo)致的呼吸道感染提供保護。
通過給予聯(lián)合疫苗治療或預(yù)防由IBRV、BVDV、PIV3、BRSV、胎兒彎曲桿菌及/或Leptospirae引起的感染的疾病或病癥的本方法在此也涉及接種疫苗方法。
可用于本方法的術(shù)語“聯(lián)合疫苗”，能包括例如，滅活的整體或部分C.fetus及/或Leptospira細胞制劑，改良的活BVDV 1型和2型及/或一種或多種改良的活抗原如BHV-1、PIV3及/或BRSV。
在一種實施方案中，本發(fā)明的疫苗組合物包括有效量的一種或更多種上述BVDV病毒，優(yōu)選地為cpBVD-1 strain NADL(cpBDV-1 strainNADL-National Animal Disease Center，United States Department ofAgriculture，Ames，lowa)；cpBVD-2 strain 53637(ATCC No.PTA-4859)，IBRVstrain C-13(Cutter Laboratories)；PIV3 strain Reisinger(Univ.Nebraska)；BRSVstrain 375(Veterinary Medical Research Institute，Ames，Iowa)。純化的BVDV病毒能被直接地用于疫苗組合物，或優(yōu)選地，BVD病毒可通過體外連續(xù)傳代更進一步地改良。典型地，疫苗包含大約1×102和大約1×1010之間噬斑形成或TCID50單位的病毒以及可獸用的載體和任選的佐劑，體積為0.1和5ml之間并且優(yōu)選地大約2ml。疫苗組合物中有效提供保護效應(yīng)的病毒精確的的量可由本領(lǐng)域的獸醫(yī)決定。適用于疫苗組合物的可獸用的載體能為下列描述的任何一種。
在另外的實施方案中，本發(fā)明疫苗組合物包括有效量的一種或更多種上述BHV-1(IBRV)病毒，優(yōu)選地為IBRV strain C-13(Cutter Laboratories)；典型地，疫苗包含在大約1×102和大約1×1010的噬斑或菌落形成單位之間的病毒以及的可獸用的載體和佐劑，體積為0.1和5ml之間并且優(yōu)選地為大約2ml。疫苗組合物中有效提供保護效應(yīng)的病毒精確的的量可由本領(lǐng)域的獸醫(yī)決定。適用于疫苗組合物的可獸用的載體可為在下文描述的任何一種。典型給藥途徑將大約0.1和大約5ml之間的疫苗經(jīng)肌肉或皮下注射劑。本發(fā)明的疫苗組合物也能包括另外的活性成分如針對BVDV的其他的疫苗組合物，例如在WO 95/12682、WO 99/55366、U.S.6,060,457、U.S.6,015,795、U.S.6,001,613，和U.S.5,593,873中描述的那些。
接種疫苗可通過單一接種或多重接種完成。如果需要，能從接種的動物收集血清并檢測BVD病毒和IBRV病毒的抗體存在。
在本發(fā)明的另外的實施方案中，疫苗組合物用于治療BVDV感染。因此，本發(fā)明通過給予動物治療有效量的本發(fā)明的BVD病毒提供治療由BVD病毒1型或2型、或1型和2型聯(lián)合所引起的動物對象感染的方法。在另外的實施方案中，本發(fā)明的疫苗組合物對于改善牧群生育力，和對于降低從牛到放牧人疾病傳染的危險是有效的。
“動物對象”表示包括易于感染BVDV、BHV、PIV3、BRSV或Leptospira的任何動物，例如牛、羊和豬。在一種實施方案中，動物對象是母牛、牛犢或未生育的小母牛。在優(yōu)選方案中，動物對象是授乳母牛。在另外的優(yōu)選方案中，動物對象是生育前母牛、妊娠母牛或妊娠牛哺育的牛犢。
在實施本方法中，本發(fā)明的疫苗組合物優(yōu)選地經(jīng)肌內(nèi)的或皮下的途徑給予牛，盡管其他的給藥途徑也能被使用，如例如，口服、鼻內(nèi)(例如氣霧劑或其他非針劑給藥)、淋巴節(jié)內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、直腸或陰道給藥，或通過聯(lián)用的途徑。在動物的頸部肌內(nèi)的給藥是優(yōu)選的。可采用加速方案(boosting regimens)并能將給藥方案調(diào)節(jié)為提供最佳免疫。
“致免疫的”表示BVD病毒在動物體內(nèi)針對1型或2型BVD病毒或針對1型和2型BVD病毒兩者引起的免疫應(yīng)答的能力。免疫應(yīng)答能為主要地由細胞毒性的T細胞介導(dǎo)的細胞免疫應(yīng)答或主要地通過輔助T細胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答，從而活化B細胞導(dǎo)致抗體產(chǎn)生。
根據(jù)本發(fā)明，在用于致免疫的組合物前，病毒優(yōu)選地通過在細胞培養(yǎng)中連續(xù)傳代被減毒。改良的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的。
包含于本發(fā)明方法中的致免疫組合物的優(yōu)選病毒是BVDV cpBVDVNADL(1型)。包含于本發(fā)明的致免疫的組合物的另外優(yōu)選的病毒是cp53637(ATCC No.PTA-4859)。包含于本發(fā)明的致免疫的組合物的更進一步優(yōu)選的病毒是IBRV strain C-13。包含于本發(fā)明的致免疫的組合物另外的優(yōu)選的病毒是PIV3 strain Reisinger。還有另一種包含于本發(fā)明的致免疫的組合物的優(yōu)選的病毒是BRSV strain 375。
用于本發(fā)明方法的致免疫組合物也能包括另外的活性成分如針對BVDV的其他的致免疫的組合物，例如在共同在審申請序號08/107,908，WO 95/107,908、WO 99/55366、U.S.6,060,457、U.S.6,015,795、U.S.6,001,613和U.S.5,593,873中描述的那些。
此外，本發(fā)明方法采用的致免疫和疫苗組合物能包括一種或多種可獸用的載體。用于此處時，“可獸用的載體”包括任何和所有的溶劑、分散劑、包衣劑、佐劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑、吸附延遲劑等等。稀釋劑可包括水、鹽水、葡萄糖、乙醇、甘油等等。其中等滲劑可包括氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇和乳糖。其中穩(wěn)定劑包括白蛋白等。其中，佐劑包括但不限于RIBI佐劑體系(Ribi Inc.)、明礬、氫氧化鋁凝膠、膽固醇、水包油乳劑、油包水乳劑如，例如弗氏完全的和不完全佐劑、Block Co-polymer(CytRx，Atlanta GA)、SAF-M(Chiron，Emeryville CA)、AMPHIGEN佐劑、皂角苷、Quil A、QS-21(CambridgeBiotech Inc.，Cambridge MA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals，Inc.，Birmingham，AL)或其他的皂角苷級份、單磷酸脂A、阿夫立定脂-胺佐劑(Avridine lipid-amine adjuvant)、大腸桿菌熱不穩(wěn)定毒素(重組體或者其他)、霍亂菌毒素或胞壁酰二肽。致免疫的組合物能更進一步地包括一種或多種其他免疫調(diào)節(jié)劑如，例如白細胞介素、干擾素或其他的細胞因子。本發(fā)明的方法中采用的致免疫的組合物也能包括慶大霉素和硫柳汞。盡管本發(fā)明上下文中使用的佐劑和添加劑的量和濃度能由熟練的技術(shù)人員輕易地決定，本發(fā)明預(yù)期組合物包括從50ug到大約2000ug的佐劑和優(yōu)選的大約500ug/2ml劑量的疫苗組合物。在另外的優(yōu)選方案中，本發(fā)明的疫苗組合物包括從大約1ug/ml到大約60ug/ml的抗生素以及更優(yōu)選地小于大約30ug/ml的抗生素。
本發(fā)明方法中采用的致免疫的組合物能根據(jù)給藥途徑以多種的形式生產(chǎn)。例如，致免疫的組合物能生產(chǎn)成適于注射使用的無菌水溶液或分散體形式，或使用凍干技術(shù)以凍干的形式生產(chǎn)。凍干的致免疫的組合物典型地在大約4℃保持，并且能在例如鹽水或和HEPES的穩(wěn)定溶液中重構(gòu)，在含有或者不含有佐劑的情況下。
能將本發(fā)明的致免疫的組合物給予動物對象以導(dǎo)致針對1型或2型BVD病毒或針對1型和2型BVD病毒兩者的免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明的另外的實施方案提供促進針對BVD病毒1型或2型、或1型和2型BVD病毒聯(lián)合刺激免疫應(yīng)答的方法，通過給予動物對象有效量的上述本發(fā)明的致免疫組合物。動物對象指包括任何對BVDV感染敏感的動物，如牛、羊和豬。
根據(jù)本發(fā)明的方法，給予動物對象的優(yōu)選的致免疫的組合物包括BVDVcpNADL病毒及/或BVDV cp53637病毒。包含BVDV病毒優(yōu)選地通過培養(yǎng)連續(xù)傳代改良活的病毒的致免疫的組合物，優(yōu)選地經(jīng)肌內(nèi)或皮下的途徑給予牛，盡管其他的給藥途徑也能被使用，如例如，口服、鼻內(nèi)、淋巴節(jié)內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、直腸或陰道給藥，或通過聯(lián)用的途徑。
免疫流程能用本領(lǐng)域熟知的方法優(yōu)化。將單劑量給予動物，或者，間隔二個到十個星期能進行兩次或多次接種。根據(jù)動物的年齡，致免疫的疫苗組合物能重復(fù)給藥。例如，本發(fā)明包括接種小于6月齡的健康牛并在6月齡再次接種。在另外的實例中，本發(fā)明包括在生育前大約5周(或給予牧群前)進行生育前牛的接種，并任選地再次在生育前大約2周或在妊娠期間接種疫苗以保護胎牛免于BVDV 1型和2型引起的感染。也可以在第一次劑量之后大約3到4周給與單劑量的本發(fā)明的組合物。用單劑量的聯(lián)合疫苗半年再接種也預(yù)期用來預(yù)防BVDV胎牛感染。
牛誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的程度和性質(zhì)能使用多種方法評價。例如，從接種的動物收集血清并檢測BVDV病毒特異抗體存在，例如常用的病毒中和實驗。
此處所用的術(shù)語“?！敝概ｎ悇游锇ǖ幌抻谑秤门！⒐?、未生育的小母牛、母牛和牛犢。此處所用的牛指妊娠的和授乳的牛類動物。優(yōu)選地，本發(fā)明方法被施用于非人的哺乳動物；優(yōu)選地，授乳或妊娠母牛及其胎?；虿溉榈呐?。
術(shù)語“治療有效量”或“有效量”指聯(lián)合疫苗的量足夠在給與藥物的動物上產(chǎn)生免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答，沒有限制性地，可包括細胞或體液免疫誘導(dǎo)的。治療有效的疫苗的量可根據(jù)使用的具體病毒、牛情況及/或感染程度而改變，并可由獸醫(yī)決定。
滅活的(部分或整體細胞)和改良的活疫苗本發(fā)明的方法使用的滅活或改良的活疫苗能用本領(lǐng)域熟知的多種方法制備。
例如，BVDV的分離株能夠使用已知的方法直接地從感染的母牛子宮中得到。
BVDV的分離株能夠使用多種的已知的方法包括例如連續(xù)傳代減毒。除改良的活病毒分離株外，本發(fā)明的方法中應(yīng)用的疫苗產(chǎn)品也能包括適量的一種或多種通常使用的佐劑。適當?shù)淖魟┛砂?，但不限于礦物的凝膠劑，例如氫氧化鋁；表面活性物質(zhì)如溶血卵磷脂；苷，例如皂角苷衍生物如Quil A或GPI-0100；pluronic多元醇；多聚陰離子；非離子嵌段聚合物，例如Pluronic F-127(B.A.S.F.，USA)；肽類；礦物油，例如MontanideISA-50(Seppic，Paris，F(xiàn)rance)，carbopol、Amphigen、AmphigenMarkII(Hydronics，USA)，鋁膠，油化乳劑，例如礦物油乳劑如BayoiF/ArlacelA和水，或植物油乳劑，水和乳化劑如卵磷脂；明礬；牛細胞因子；膽固醇；及佐劑的聯(lián)用。在優(yōu)選的方案中，含有皂角苷的水包油乳劑是常規(guī)微流化的。
具體而言，本發(fā)明方法使用的優(yōu)選的BVDV 1型來源為Bovi-ShieldFPTM4+VL5(PFIZER INC)，包含BVDV strain NADL(得自the NationalAnimal Disease Center(NADC)，USDA，Ames，IA)。本發(fā)明方法中使用的BVDV 2型的優(yōu)選來源為cp BVDV菌株53637(Univ.Guelph，Guelph，Ont.)(ATCC No.PTA-4859)。
優(yōu)選地，菌株NADL和53637是改良的活菌株。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明菌株能使用市售的佐劑，優(yōu)選地，Quil A-Cholesterol-Amphigen(Hydronics，USA)。本發(fā)明的致免疫的疫苗組合物優(yōu)選的劑量大約為2.0ml。本發(fā)明的方法中使用的組合物能包括防腐劑。本發(fā)明期望的防腐劑包括慶大霉素和硫柳汞。也能加入載體，優(yōu)選地為PBS。改良的活疫苗的制備，如通過有毒菌株傳代培養(yǎng)減毒，在本領(lǐng)域是公知的。
改良的活BVDV分離株也能與下列細菌和病毒聯(lián)合，包括但不限于1型牛皰疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)、副流感病毒(PIV3)、胎兒彎曲桿菌、犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospiraborgpetersenii hardjo-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospiraborgpetersenii hardjo-bovis和Leptospira interrogans pomona。
給藥劑量和方式根據(jù)本發(fā)明，給予包括妊娠牛和妊娠牛哺乳的牛犢的有效量的聯(lián)合疫苗，針對與BHV-1和牛類腹瀉病毒(1型和2型)有關(guān)的疾病和胎兒感染提供有效免疫。在一種實施方案中，在大約3至4周的間隔將牛犢給予2次劑量的聯(lián)合疫苗。例如，當動物在大約1至3月齡時進行第一次給藥。在聯(lián)合疫苗的第一次給藥之后大約1至4周進行第二次給藥。
在優(yōu)選方案中，第一次給藥，例如初接種(pre-vaccination)在家畜生育之前4至5周進行。第二次給藥在家畜生育之后3至4周進行。繼后給藥的疫苗劑量優(yōu)選地按年度給予。在另外的優(yōu)選方案中，大約6月齡前接種過的動物應(yīng)該在6月齡之后再接種。繼后的疫苗給藥劑量優(yōu)選地按年度給予，盡管本發(fā)明也包括采用二年度和半年度的繼后疫苗劑量。
聯(lián)合疫苗的有效量取決于疫苗的成份和給藥的時間安排。典型地，當將改良的活牛類病毒性腹瀉病毒制品用于疫苗時，包含每劑量BVDV包含大約102至1010TCID50單位，并且優(yōu)選地每劑量BVDV(1型和2型)為大約105至大約108TCID50單位的疫苗量，是有效的(當在大約3至10周內(nèi)給與動物兩次時)。當在大約3至10周內(nèi)給予動物兩次時，優(yōu)選地，提供有效免疫的聯(lián)合疫苗包含大約105至108TCID50單位/劑量BVDV(1型和2型)，而且更優(yōu)選地，大約106TCID50/劑量。在動物生育前5周進行第一次給藥。第二次給藥在動物生育之后3至4周進行。繼后給藥的疫苗劑量優(yōu)選地按年度給予。在大約6月齡前接種的動物應(yīng)該在6月齡之后再接種。繼后給藥的疫苗劑量優(yōu)選地按年度給予。
根據(jù)本發(fā)明，當給予優(yōu)選的產(chǎn)品，Bovi-ShieldFPTM4+VL5(Pfizer，Inc.)時，產(chǎn)品優(yōu)選地給藥兩次，每次給予大約為0.1ml至大約5.0ml，優(yōu)選地大約1.5ml至大約2.5ml的量，而更優(yōu)選地大約2ml。在動物生育之前5周進行第一次給藥。第二次給藥在動物生育之后3至4周進行。繼后給藥的疫苗劑量優(yōu)選地按年度給予。在大約6月齡前的接種動物應(yīng)該在6月齡之后再接種。繼后給藥的疫苗劑量優(yōu)選地按年度給予。
根據(jù)本發(fā)明，給藥能夠通過已知的途徑實現(xiàn)，包括口服、鼻內(nèi)、局部的、經(jīng)皮的和腸胃外(例如，靜脈內(nèi)、腹內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下或肌內(nèi))給藥。優(yōu)選的給藥途徑是皮下或肌內(nèi)的給藥。
本發(fā)明也包括應(yīng)用單一初劑量然后每年再接種疫苗，排除了為產(chǎn)生及/或保持對感染的免疫而在每年的再接種疫苗之前給予牛犢額外劑量的必要性。
根據(jù)本發(fā)明給予的聯(lián)合疫苗能包含另外的組分，如佐劑(例如，礦物的凝膠劑，例如氫氧化鋁；表面活性物質(zhì)如膽固醇，溶血卵磷脂；苷，例如皂角苷衍生物如Quil A，QS-21或GPI-0100；pluronic多元醇；多聚陰離子；非離子嵌段聚合物，例如Pluronic F-127(B.A.S.F.，USA)；肽類；礦物油，例如Montanide ISA-50，carbopol、Amphigen、鋁膠，油乳劑，例如礦物油乳劑如Bayoi F/Arlacel A和水，或植物油乳劑，水和乳化劑如卵磷脂；明礬；牛細胞因子；膽固醇；和佐劑的聯(lián)用。
根據(jù)本發(fā)明，對大約3月齡的牛給予有效量的聯(lián)合疫苗提供針對呼吸道感染和生殖疾病有效免疫，并減少流產(chǎn)。
本發(fā)明也提供使牛免疫的方法，包括但不限于母牛、牛犢和生育前的母牛，針對由BHV-1和BVDV(1型和2型)引起的感染和流產(chǎn)，以及IBRV、BVDV(1型和2型)、PIV3、BRSV、彎曲桿菌病和鉤端螺旋體病引起的呼吸道疾病，通過給予動物至少一個劑量，優(yōu)選的二個劑量的聯(lián)合疫苗以免疫動物，抗針對由BVD(1型和2型)、IBRV、PIV3、BRSV、犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardjo-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpeterseniihardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌引起的感染。
在優(yōu)選方案中，疫苗皮下給藥。在另外的優(yōu)選方案中，疫苗肌內(nèi)給藥。此外，疫苗劑量包括大約1ml至大約7ml，并優(yōu)選地大約2ml，每ml包含大約102至1010TCID50單位/劑量的病毒。聯(lián)合疫苗理想地對動物給與兩次；一次在大約1至3月齡，一次在大約1至5周以后。本發(fā)明也包括使用單一劑量半年再接種疫苗以及生育之前再接種本發(fā)明也提供抗胎兒感染和持續(xù)的胎兒感染保護牛胎兒的方法，包括給予動物(例如母畜)至少一個劑量，優(yōu)選的二個劑量的聯(lián)合疫苗以免疫胎兒，抗由BHV-1和BVDV(1型和2型)，IBRV、PIV3、BRSV、犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardjo-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospiraborgpetersenii hardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌引起的感染。聯(lián)合疫苗理想的是給與動物兩次，一次在生育之前大約五周而一次在生育之后大約3至4周。
本發(fā)明也包括給予動物有效量的聯(lián)合疫苗的給藥，并且優(yōu)選的為牛，以治療或預(yù)防這種動物的疾病包括持續(xù)的胎兒感染和生殖病癥，如流產(chǎn)。
本發(fā)明更進一步地說明，但不限定于下列實施例。
實施例1深入的安全性研究旨在評價給予未接種和已接種的妊娠的牛包含10倍劑量的改良的活病毒(MLV)組分的牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3-呼吸道合胞改良活病毒/犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(Bovi-Shield4+L5)制劑的安全性。研究動物包括在妊娠大約160到220天范圍內(nèi)的20只未接種過的(治療組T1)和59只以前接過種的(治療組T2＝14，T3＝15，T4＝15，并且T5＝15)雜交肉牛。對于有生育前接種疫苗史的接種動物包括在生育前大約150天的T3和T5的每只動物給予的一劑量的牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒-呼吸道合胞病毒改良病毒疫苗(Bovi-Shield4)，以及在生育大約30天前所有T2、T3、T4和T5動物接受一劑量的牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒-呼吸道合胞改良-活病毒疫苗/胎兒彎曲桿菌-犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(PregGuard10)。在第0天，將79只妊娠的研究動物中的每一只給予一次肌內(nèi)劑量的包含10劑量MLV組分的Bovi-Shield4+L5制劑。在整個分娩期間每日觀察研究動物的健康狀態(tài)和流產(chǎn)，測定對接種的血清學(xué)應(yīng)答，在流產(chǎn)病例實施診斷檢測，并且測定每只牛犢的健康和血清的狀態(tài)?？傮w上，T1中15只妊娠牛受到在第0天接種疫苗的影響，由流產(chǎn)(6)或生出具有哺乳前BVDV中和抗體的牛犢(9)而證實。11只T1小母牛中的6只(55％)由于IBRV感染在25天至43天之間出現(xiàn)流產(chǎn)，在第0天對于IBRV中和抗體陰性(＜2)。剩余的T1小母牛(14)生產(chǎn)了健康的牛犢；然而，生出具有BVDV中和抗體的牛犢證明在第0天對于BVDV中和抗體陰性的12只小母牛中的9只(75％)在子宮內(nèi)發(fā)生感染。
為了比較，對T2、T3、T4、和T5中以前接種過的動物的妊娠沒有副作用。這些動物全部(59/59)生產(chǎn)了健康的牛犢并且58只牛犢(在采樣之前一只牛犢被哺乳了)對于IBRV和BVDV中和抗體是陰性的。
在生育之前接種過Bovi-Shield疫苗的妊娠小母牛在給予包含10劑量的MLV組分的實驗疫苗制劑時沒有不良的影響，證明了這些組分在接種妊娠牛中的安全性。研 究方 案

*每2ml IM(肌內(nèi)的)劑量配制成包含10劑量的MLV組分。
步驟治療前階段基于產(chǎn)犢間隔最小化選擇動物用于本研究。沒有IBRV和BVDV疫苗接種史的妊娠的動物被分為治療組T1。使用完全隨機設(shè)計將動物分為治療組。總之，沒有IBRV和BVDV接種史的這些動物，在接種疫苗之前對于BVDV陰性并具有滴度＜4的IBRV和BVDV 1型和2型的血清中和抗體。在生育之前大約150天，分別給予T3和T5動物一次劑量的Bovi-Shield 4(牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3-呼吸道合胞改良活病毒疫苗)。在生育前大約30天，分別給予T2、T3、T4和T5中的每只動物一次Preg-Guard 10。本研究中的疫苗每2毫升劑量的IBRV包含37 log10TCID50和每2毫升劑量的BVDV包含2.7log10TCID50。
治療階段從第1天開始，在整個分娩期間每日觀察全部動物的一般健康狀態(tài)和流產(chǎn)。在第0天，確認各動物的妊娠狀況并從各動物收集2個血清分離管(SST)的血。制備Bovi Shield 4+L5疫苗并將包含10劑量的疫苗的4種MLV組分的2ml IM劑量給予79只研究動物中的每一只。接種后大約一小時全部動物被觀察到不良反應(yīng)。
識別全部流產(chǎn)動物并收集2個SST血樣(急性)、處理成血清、標記并冷凍儲存。流產(chǎn)胎樣品，6個流產(chǎn)中5個的可用樣品被送往診斷實驗室。大約2周以后，從母畜收集的另外的2個SST血樣(恢復(fù)期)、處理成血清、標記并冷凍儲存。
分娩階段在產(chǎn)犢的當天，測定各牛犢的健康和哺乳狀況，并從各牛犢收集血樣(2SST)。從3天齡的各牛犢收集哺乳后血樣(2-SSTs)。將從牛犢收集的血樣處理成血清、標記、冷凍儲存并檢測。
血清檢測對從小母牛和牛犢中獲得的血清中的對IBRV以及1型和2型BVDV的中和抗體進行檢測。如果牛犢沒有觀察到在采樣之前已經(jīng)哺乳，以及其哺乳前血清對于IBRV及/或BVDV中和抗體檢測陽性(≥4)，在哺乳前、后的血清中的總血清IgG濃度也被檢測。
結(jié)果表1實驗疫苗改良的活病毒組分表2第0天和第28天IBRV中和抗體滴度的幾何平均數(shù)和范圍表3第0天和第28天BVDV 1型中和抗體滴度幾何平均數(shù)和范圍表4第0天和第28天BVDV 2型中和抗體滴度幾何平均數(shù)和范圍表5第0天治療對妊娠的影響的總結(jié)表6治療組T1的個體結(jié)果總結(jié)實驗疫苗改良的活病毒組分如表1中總結(jié)，在第0天給予各研究動物的Bovi-Shield 4+L5制劑分別地包含7.0、5.5、7.5和5.7 log10TCID50的疫苗的改良的活I(lǐng)BRV、BVDV、PIB3和BRSV組分。
接種疫苗的血清學(xué)應(yīng)答表2、3和4分別包含各治療組的接種前(第0天)和接種疫苗后(第28天)IBRV、BVDV 1型和BVDV 2型的血清中和抗體滴度的幾何平均數(shù)和范圍。
對未接種過的(T1)動物接種前平均IBRV抗體滴度是2，而11/20 T1動物的IBRV中和抗體是陰性的(＜2)。接種動物(T2、T3、T4和T5)接種前平均IBRV抗體滴度(14、16、16和21)相似，無論生育前接種疫苗的方式(一次劑量或兩次劑量)和制劑(IBRV組分的最小免疫或釋放水平)如何。T1、T2、T3、T4和T5對接種疫苗應(yīng)答的平均抗體滴度基本上增加，并且接種的第28天平均數(shù)分別為86、130、94、106和97。20只未接種過的(T1)動物中的19只在第0天對1型和2型BVDV抗體是陰性的。接種(T2、T3、T4和T5)1型(223、215、315和250)和2型(44、57、84和58)BVDV平均中和抗體滴度相似，無論生育前接種的方式和制劑。到第28天，T1中的對1型BVDV平均滴度(181)和對2型BVDV的平均滴度(15)明顯增加，而T2、T3、T4和T5對1型BVDV的平均滴度(208、228、277和231)和2型BVDV(49、63、58和58)保持與接種前相當?shù)乃健?br> 治療第0天對妊娠的影響在表5中概括了各治療組妊娠中治療第0天對妊娠的影響。全部地，T1妊娠的15只受到接種的影響，證據(jù)為流產(chǎn)(6)或產(chǎn)下哺乳前具有BVDV中和抗體的牛犢(9)。相比較，對T2、T3、T4和T5中以前接種過的動物的妊娠沒有副作用。所有這些動物(59/59)產(chǎn)下健康的牛犢并且58只牛犢對IBRV和BVDV中和抗體是陰性的(一只牛犢在采樣之前哺乳)。
治療組T1的個體結(jié)果的總結(jié)未接種過的動物(T1)的個體流產(chǎn)和產(chǎn)犢結(jié)果總結(jié)于表6。在0天對IBRV中和抗體陰性的(＜2)的11只T1小母牛中的6只(55％)的歸因于IBRV感染的流產(chǎn)發(fā)生在第25天和第43天間。剩余的T1小母牛(14)產(chǎn)下健康的牛犢；然而，生出帶有BVDV中和抗體的牛犢表明在第0天對BVDV中和抗體陰性的12只小母牛中的9只在子宮中發(fā)生了感染。
結(jié)論在生育前接種BOVI-SHIELD疫苗的小母牛妊娠沒有受到給予包含10倍劑量BOVI-SHIELDMLV組分的實驗疫苗制劑的不利影響，證明這些病毒接種妊娠牛的安全性。
表1實驗疫苗的改良活病毒組分

*各研究動物接受另外的1.0log10TCID50各病毒組分，當每2ml劑量實驗疫苗配制成含有10劑量的改良活病毒組分。
表2第0天和第28天IBRV的中和抗體滴度的幾何平均值以及范圍

**在對測定GMT(幾何平均數(shù)滴度)作對數(shù)log2轉(zhuǎn)化之前，＜2的滴度計算為1.0。
***20只T1動物的11只對于IBRV中和抗體是陰性的(＜2)。
表3第0天和第28天的BVDV 1型的中和抗體滴度的幾何平均數(shù)和范圍

*在對測定GMT(幾何平均數(shù)滴度)作對數(shù)log2轉(zhuǎn)化之前，＜2的滴度計算為1.0。
***20只T1動物中的19只對于IBRV1型中和抗體是陰性的。
表4第0天和第28天的BVDV 2型的中和抗體幾何平均數(shù)和范圍

**在對測定GMT(幾何平均數(shù)滴度)作對數(shù)log2轉(zhuǎn)化之前，＜2的滴度計算為1.0。
***20只T1動物中的19只對于IBRV 2型的中和抗體是陰性的。
表5歸因于第0天治療對妊娠的影響的概述

**所有牛犢在第47天和第123天之間出生。流產(chǎn)出現(xiàn)在第25天和第43天之間。
***哺乳前血樣不從一只T1牛犢(#315)和一只T4牛犢(#92)沒有得到。有哺乳前抗體的T1牛犢具有對于BVDV-1(BVDV 1型)≥23的滴度和對于BVDV-2(BVDV 2型)≥19的滴度。從T2、T3、T4和T5牛犢收集的所有58個哺乳前血清樣品對中和抗體是陰性的(＜2)。
表6治療組1的個體結(jié)果總結(jié)

實施例2進行安全性范圍研究旨在評價Bovi-Shield產(chǎn)品系列的效力。通過第78天的研究此實施例總結(jié)了其中的結(jié)果。此研究比較了對生育前接種過牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3、改良活病毒-胎兒彎曲桿菌-犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(PregGuardTMFP 9)的妊娠首三月的、雜交肉牛給予安慰劑(無菌水稀釋劑)或3個批次的牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3-呼吸道合胞體改良活病毒疫苗/犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(Bovi-ShieldFP 4+L5)之一的安全性。
在第0天，從各動物收集血樣，并且所有動物通過超聲檢查確定妊娠狀況。在第0天，給予隨機分到治療組T1的304只對照動物中的每一只一次肌內(nèi)(IM)劑量的安慰劑。分配到三個疫苗處理組T2(n＝106)、T3(n＝01)和T4(n＝96)中的303只動物中的每一只接受IM劑量的它們的給定批次的Bovi-ShieldFP 4+L5。接種后沒有觀察到局部或全身性的不良反應(yīng)。每周觀察動物健康狀態(tài)。302只對照牛(T1)中的一只沒有懷孕，而所有接種Bovi-Shield FP 4+L5[T2(n＝102)、T3(n＝100)和T4(n＝95)]的牛被確定懷孕。對照動物(T1)和接種(T2到T4)動物的流產(chǎn)率很相似，分別為0.3％和0.0％。無孕的T1母牛(#286)的血清實驗結(jié)果表明任何級份從第0天滴度基本上沒有變化。
安全性領(lǐng)域研究的結(jié)果表明給予Bovi-Shield FP 4+L5疫苗的預(yù)先接種的大約妊娠首三月的動物經(jīng)過第78天的流產(chǎn)比率不高于給予安慰劑的動物，證明這些疫苗組分在接種懷孕的動物中安全性。
研究方案

治療階段每周觀察動物的一般健康狀態(tài)。在第0天，觀察動物的一般健康狀態(tài)，確定它們的妊娠狀態(tài)，并從各動物收集2個血清分離管(SST)的血。制備安慰劑(無菌稀釋劑)和BOVI SHIELD FP 4+L5疫苗，并通過頸部肌內(nèi)(IM)途徑給予合適的動物1劑量(2ml)。治療組T1中的各動物接受一次劑量的安慰劑而治療組T2、T3和T4動物接受一次劑量的它們各批的BOVI-SHIELD4+L5。接種疫苗后大約1小時觀察不利的全身性反應(yīng)。將血樣處理成血清，標記并冷凍存儲。
在第77天，對所有動物進行第二次妊娠檢測。任何沒有妊娠的動物(開放)，記錄為流產(chǎn)。從動物收集兩個SST血樣(急性的)。將樣品治療成血清，標記并冷凍存儲。大約2周以后，從流產(chǎn)動物收集兩個另外的SST血樣(恢復(fù)期)，并將樣品加工成血清、標記并冷凍存儲。第0天、急性期和恢復(fù)期血清樣品被送往Venterinary Diagnostic Laboratory進行牛流產(chǎn)的血清學(xué)評價。
結(jié)果表7改良的活病毒組分的劑量和接種后反應(yīng)的總結(jié)表8治療產(chǎn)生的流產(chǎn)的總結(jié)表9血清學(xué)檢測的結(jié)果實驗疫苗的效價和接種后反應(yīng)在第0天給予各批Bovi-Shield FP 4+L5的改良的活I(lǐng)BRV、BVDV、PIV3和BRSV組分的效價超過釋放需要，如表7詳述。商業(yè)分銷投放需要的全部附加試驗是滿意的。在第0天接種后沒有觀察到不良的局部或全身性反應(yīng)。
流產(chǎn)結(jié)果的總結(jié)如表8中總結(jié)，對照和疫苗治療組在第77天收集的流產(chǎn)數(shù)據(jù)相似。303對照動物(T1)中的僅僅一只(0.3％)和297只已接種動物(T2到T4)中沒有一只(0.0％)在研究期間流產(chǎn)。
流產(chǎn)的(動物號碼286)對照母牛(T1)血清檢測的結(jié)果如表9所示。
結(jié)論安全性領(lǐng)域研究的結(jié)果證明預(yù)先已接種、妊娠首三月的給予Bovi-ShieldE FP 4+L5疫苗的動物通過78天的流產(chǎn)率不高于給與安慰劑的動物，證明這些疫苗組分在已接種妊娠的動物上的安全性。
表7改良的活病毒組分效價和接種后反應(yīng)總結(jié)

表8由于治療而流產(chǎn)的結(jié)果的總結(jié)

表9血清學(xué)檢測結(jié)果

實施例3對Bovi-Shield產(chǎn)品系列進行安全性領(lǐng)域研究。此研究比較了妊娠期中三月的生育前接種過Bovi-Shield4+L5的荷蘭母牛給予安慰劑(無菌水稀釋劑)或安慰劑(無菌水稀釋劑)或3個批次的牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3-呼吸道合胞體改良活病毒疫苗/犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗之一的安全性。在第1天，從各動物收集血樣，并且所有動物通過直腸觸診檢查確認妊娠狀態(tài)。在第0天，給予隨機分為治療組T1的238只對照動物各一次肌內(nèi)劑量(IM)的安慰劑。分配給3個疫苗治療組T2(n＝80)、T3(n＝79)和T4(n＝78)的237動物中的每只接受IM劑量的它們的指定批次的Bovi-Shield4+L5。各批疫苗均滿足商業(yè)分銷投放的檢測要求。接種后沒有觀察到不良的局部或全身性反應(yīng)。在整個分娩期間每日觀察動物健康狀態(tài)，并且測定各新生牛犢的健康狀況。從研究中除去4只動物，2只(1-T1和1-T2)受傷以及2只(1-T1和1-T4)具有不正確的生育日期。識別流產(chǎn)動物，可用的胎兒和胎盤樣品，以及接種疫苗前(第1天)、急性期和恢復(fù)期血清被測試以確定流產(chǎn)的可能原因。對照(T1)和已接種的(T2到T4)動物的流產(chǎn)和正常產(chǎn)犢率很相似。236只對照動物中的11只(4.7％)和235只已接種動物(T2到T4)中14只(6.0％)在研究期間流產(chǎn)。25只流產(chǎn)的動物中的一只(T4)歸因于IBRV感染。剩余的24只流產(chǎn)病例的病因?qū)W為Neospora感染、先天性缺陷和未知的原因，分別在9只動物(T1＝3、T2＝1、T3＝1、和T4＝4)，1只動物(T1)和14只動物(T1＝7、T2＝5、和T3＝2)中發(fā)生?？傮w正常產(chǎn)犢率，包括生產(chǎn)健康存活牛犢和在分娩期間死亡的正常牛犢的母畜百分比，對照組(T1)是95.3％(225/236)而已接種(T2到T4)組的百分比為93.6％(220/235)。
安全性領(lǐng)域研究的結(jié)果證明預(yù)先接種、大約妊娠期中三月的給予安慰劑或Bovi-Shield4+L5疫苗的動物具有相似的流產(chǎn)率和正常產(chǎn)犢率，證明這些疫苗組分在已接種的妊娠動物上的安全性。
研究方案

步驟治療前階段在研究開始之前提供生育前有Bovi-Shield4+L5接種史的健康的雜交奶牛的生育日期。將動物完全隨機地分配治療。在第-1天，從各動物收集2個血清分離管(SST)的血樣，并且所有動物通過直腸觸診檢查確認妊娠狀態(tài)。將血樣處理成血清、標記、并冷凍儲存。并且從第-1天到分娩每日評價動物的綜合健康狀態(tài)和流產(chǎn)情況。
治療階段在第0天，制備安慰劑和Bovi-Shield4+L5疫苗并將其經(jīng)頸部肌內(nèi)途徑(IM)給予適當?shù)膭游?。T1動物各接受一次劑量的安慰劑(無菌水稀釋劑)。T2、T3和T4動物被各給予一次劑量的Bovi-Shield4+L5。接種疫苗后大約一小時觀察全身性不良反應(yīng)。
在整個分娩期間每日觀察動物的一般健康狀態(tài)和流產(chǎn)。識別流產(chǎn)動物并收集2個SST血樣(急性)、處理成血清、標記并冷凍儲存。檢測可用的流產(chǎn)胎和胎盤樣品以確定流產(chǎn)的可能原因。流產(chǎn)后大約2周，從流產(chǎn)動物收集另外2個SST血樣(恢復(fù)期)，并將樣品處理成血清、標記并冷凍存儲。
分娩階段測定各牛犢的健康狀態(tài)。所有牛犢死亡率也被評價以確定死亡原因，3只難產(chǎn)死亡和死胎(fetotomies)除外。
結(jié)果表10改良的活病毒組分和接種后反應(yīng)總結(jié)表11由治療而流產(chǎn)的結(jié)果總結(jié)表12治療后的產(chǎn)犢結(jié)果概述實驗疫苗和接種后反應(yīng)在第0天給予的各批Bovi-Shield4+L5的改良的活I(lǐng)BRV、BVDV、PIV3和BRSV組分在表10中詳述。商業(yè)分銷投放需要的全部附加檢測是滿意的。在第0天接種后沒有觀察到不良的局部或全身性反應(yīng)。
流產(chǎn)結(jié)果的總結(jié)如表11總結(jié)，對照組和疫苗治療組的流產(chǎn)結(jié)果相似。236只對照(T1)動物中的11只(4.7％)和235只已接種動物(T2到T4)中14只(6.0％)在研究期間流產(chǎn)。25只流產(chǎn)動物中的1只(T4)歸因于IBRV。剩余的24只流產(chǎn)動物歸因于Neospora、先天性缺陷和未知的原因，分別在9只動物(T1＝3、T2＝1、T3＝1、和T4＝4)，1只動物(T1)和14只動物上(T1＝7、T2＝5、和T3＝2)發(fā)生了。
產(chǎn)犢結(jié)果的總結(jié)各治療組產(chǎn)犢結(jié)果列于表12中。總體正常產(chǎn)犢率，包括生產(chǎn)健康的存活的牛犢母畜和在分娩期間死亡的正常牛犢的百分比，對照組(T1)是95.3％(225/236)而已接種(T2到T4)組的百分比為93.6％(220/235)。在對照組(T1)內(nèi)，79.7％的牛犢是存活和健康的而20.3％死于分娩期間。相比較，已接種動物(T2到T4)產(chǎn)下的牛犢的78.4％是存活和健康的，而它們的牛犢的21.2％死于出生過程期間。一只T4動物產(chǎn)下由于感染Neospora而死的牛犢。
結(jié)論安全性領(lǐng)域研究的結(jié)果證明預(yù)先已接種、大約妊娠中三月給予安慰劑或Bovi-Shield4+L5疫苗的動物具有相似的流產(chǎn)率和正常產(chǎn)犢率，證明這些疫苗組分的在已接種妊娠的動物上安全性。
表10改良的活病毒組分效價和接種后反應(yīng)總結(jié)

如上所列的Bovi-4(Bovi-Shield 4)+L5的批次均滿足商業(yè)分銷投放的檢測需要。
**由于分別在第110天和第181天受傷動物#30075(T2)和動物#30400(T1)被從研究中去除。由于不正確的生育日期動物#19642(T4)和#30064(T1)被從研究中去除。此4只動物的數(shù)據(jù)被從所有總結(jié)和分析中排除。
表11治療后流產(chǎn)的結(jié)果總結(jié)

表12治療后產(chǎn)犢結(jié)果總結(jié)

*如果牛犢是存活和健康的，或牛犢被認為是正常但由于難產(chǎn)而死，母畜被認為懷有正常牛犢。
**比率包括T1組的2對雙胞胎和T3組的一對雙胞胎。
***T4中一只異常的牛犢死于Neospora感染。
實施例4進行安全性范圍研究，比較了妊娠末三月的生育前接種過牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3改良活病毒疫苗、胎兒彎曲桿菌-犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(PregGuardTMFP9)的雜交肉牛給予安慰劑(無菌水稀釋劑)或安慰劑(無菌水稀釋劑)或牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3-呼吸道合胞體改良活疫苗/犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(Bovi-Shield4+L5)3個批次之一的安全性。
從各動物收集血樣，并在第0天接種前通過直腸觸診確認妊娠狀態(tài)。將2ml的肌內(nèi)(IM)劑量無菌稀釋劑(安慰劑)給予隨機分配到治療組T1的150只對照動物中的每一只。分配到3個疫苗治療組T2(n＝66)、T3(n＝67)和T4(n＝65)的198只動物中的每一只接受2ml IM劑量的它們的指定批次的Bovi-Shield4+L5。各批疫苗均滿足商業(yè)分銷投放的檢測需要。接種疫苗后沒有觀察到不良的局部或全身性反應(yīng)。在整個分娩期間每日觀察動物健康狀態(tài)，并測定各新生的牛犢健康狀況。
總體正常產(chǎn)犢率，包括產(chǎn)下健康的存活的牛犢和在分娩期間(5)或由于復(fù)雜天氣條件(1)死亡的正常牛犢的母畜的百分比，對照組(T1)是99.3％(148/149)而已接種(T2到T4)組的百分比為99.5％(195/196)。安全性領(lǐng)域研究的結(jié)果證明預(yù)先已接種、大約妊娠末三月(third trimester)的給予安慰劑或Bovi-Shield4+L5疫苗的動物具有相似的流產(chǎn)率和正常產(chǎn)犢率，證明這些疫苗組分在已接種的妊娠動物上的安全性。
研究方案

步驟治療前階段在研究開始之前提供生育前有接種牛鼻氣管炎-病毒腹瀉-副流感病毒3改良活病毒疫苗、胎兒彎曲桿菌-犬黃疸鉤端螺旋體-流感傷寒型-哈德焦-出血黃疸-波蒙娜菌苗(PregGuardTMFP 9)史的健康的雜交肉牛的生育日期。動物被完全隨機地分配到治療組。在不知治療分配的情況下評價接種疫苗后、每周的健康和新生牛犢的健康觀察結(jié)果。此外，實驗室人員不得接近實驗組分配。
治療階段在第-1天，從各動物收集2血清分離管(SST)的血樣，并且所有動物通過直腸觸診檢查確認妊娠狀態(tài)。將血樣處理成血清、標記、并冷凍儲存。安慰劑和Bovi-Shield FP 4+L5疫苗也被制備并經(jīng)右側(cè)頸區(qū)肌內(nèi)的(IM)途徑給予適當?shù)膭游铩1動物各接受2ml劑量的安慰劑(無菌稀釋劑)。T2、T3和T4動物各給予2ml劑量Bovi-Shield FP 4+L5。接種疫苗后大約1小時觀察不良的全身性反應(yīng)。
整個分娩期間每日觀察動物一般的健康狀態(tài)和流產(chǎn)。識別流產(chǎn)動物并收集2個SST血樣(急性)、將其處理成血清、標記并冷凍儲存。流產(chǎn)大約2周后，從流產(chǎn)動物收集另外的2個SST血樣(恢復(fù)期)，并將樣品處理成血清、標記并冷凍存儲。
分娩階段測定各牛犢的健康狀態(tài)。所有流產(chǎn)的牛犢(死亡)歸因于難產(chǎn)或不良天氣條件。
排除/停藥標準由于在第0天和第12天分別觀察到損傷，動物#71(T1)和動物#288(T3)從研究中去除。動物#237(T3)在第21天產(chǎn)下牛犢，但從第22天的研究中去除，因為不能決定牛犢處于健康狀態(tài)的位置。這3只動物的數(shù)據(jù)從總結(jié)和分析中排除。
結(jié)果表13改良的活病毒組分和接種后反應(yīng)總結(jié)表14由治療而流產(chǎn)的結(jié)果總結(jié)表15流產(chǎn)病例的診斷實驗室血清學(xué)檢測的結(jié)果表16治療后產(chǎn)犢結(jié)果的總結(jié)實驗疫苗和接種后反應(yīng)在第0天給予的各批Bovi-Shield FP 4+L5的改良的活I(lǐng)BRV、BVDV、PIV3和BRSV組分的滴度在表13中標明。接種后沒有觀察到不良的局部或全身性反應(yīng)。
流產(chǎn)結(jié)果的概述如表14中總結(jié)，149只對照動物(T1)中的僅僅1只(0.7％)和196只已接種動物(T2到T4)中的1只(0.5％)在研究期間流產(chǎn)。對胎兒及/或胎盤樣品的診斷實驗結(jié)果沒有確定這些流產(chǎn)的原因。2只流產(chǎn)病例的診斷血清學(xué)檢測結(jié)果在表15中所示。任一動物在接種疫苗前、急性期和恢復(fù)期水平的對波蒙娜鉤端螺旋體、犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體(grippo)、出血黃疸鉤端螺旋體(ictero)、L.哈德焦、IBRV和BVDV的血清抗體基本上沒有變化。
產(chǎn)犢結(jié)果的總結(jié)總體正常產(chǎn)犢率，包括生產(chǎn)健康的存活的牛犢和在分娩期間死亡的正常牛犢的母畜的百分比列于表16。對照組(T1)的正常產(chǎn)犢率是99.3％(148/149)而已接過種(T2到T4)組的百分比為99.5％(195/196)。除了6只外所有牛犢被存活和健康地產(chǎn)下。5只牛犢死于生產(chǎn)期間而1只死于不良天氣狀況。
結(jié)論安全性領(lǐng)域的研究結(jié)果證明對預(yù)先接過種、大約妊娠末三月的的動物給予安慰劑或Bovi-ShieldFP 4+L5疫苗具有相似的流產(chǎn)率和正常的產(chǎn)犢率，證明這些疫苗組分在已接種的妊娠的動物上的安全性。
表13改良的活病毒組分效價和接種后反應(yīng)總結(jié)

*列于表上的Bovi-Shield 4改良的活病毒組分和列于表上的各批Bovi-4(Bovi-Shield 4)FP+L5的L5組分滿足所有釋放和商業(yè)用途的測試要求。
表14由治療而流產(chǎn)的結(jié)果總結(jié)

*動物#332(T1)和動物#284(T3)分別在第26天和第13天流產(chǎn)表15流產(chǎn)病例的診斷實驗室血清學(xué)的檢測結(jié)果

表16治療后的產(chǎn)犢結(jié)果的總結(jié)

*如果牛犢是存活的和健康的，或牛犢被認為是正常但由于難產(chǎn)(5)或天氣狀況死亡(1)，母畜被認為懷有正常牛犢。
**T2動物產(chǎn)下一對雙胞胎
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防妊娠動物由BHV-1病毒引起的流產(chǎn)的方法，包括給予妊娠動物治療有效量的包含改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)的疫苗組合物，其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)的疫苗組合物。
2.一種預(yù)防妊娠動物哺乳的動物感染的方法，包括給予被哺乳的動物治療有效量的包含改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)的疫苗組合物，其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)的疫苗組合物。
3.一種預(yù)防妊娠動物由BHV-1病毒引起的流產(chǎn)的方法，包括給予妊娠動物治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)以及選自下列的至少一種抗原牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)；改良的活的副流感病毒3型(PIV3)；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira borgpeterseniihardio-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis、鉤端螺旋體屬和胎兒彎曲桿菌；其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)的疫苗組合物。
4.一種預(yù)防妊娠動物哺乳的動物感染的方法，包括給予被哺乳的動物治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)和至少一種選自下列的抗原牛類病毒腹瀉性病毒(BVDV)；改良的活的副流感病毒3型(PIV3)；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpeterseniihardio-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌，其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)的疫苗組合物。
5.一種預(yù)防妊娠動物由動物中的BVDV病毒引起的流產(chǎn)的方法，包括給予所述動物治療有效量的包含改良的活的牛類病毒腹瀉病毒(BVDV)的疫苗組合物，其中妊娠的動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)的疫苗組合物。
6.一種預(yù)防妊娠動物哺乳的動物感染方法，包括給予被哺乳的動物治療有效量的包含改良的活牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)的疫苗組合物，其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活牛類病毒性腹瀉病毒(1BVDV)的疫苗組合物。
7.一種預(yù)防妊娠動物由BHV-1病毒引起的流產(chǎn)的方法，包括給予妊娠動物治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括改良的活的牛類病毒腹瀉病毒(BHV-1)以及選自下列的至少一種抗原牛皰疹病毒(BHV-1)；改良的活的副流感病毒3型(PIV3)；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpeterseniihardio-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌；其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含改良的活的牛類病毒腹瀉病毒(BHV-1)的疫苗組合物。
8.一種預(yù)防妊娠動物哺乳的動物感染的方法，包括給予被哺乳的動物治療有效量的包含改良的活牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)的疫苗組合物，其中妊娠的動物在生育前接種了治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包含改良的活的牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)和至少一種選自下列的抗原牛皰疹病毒(BHV-1)；改良的活的副流感病毒3型(PIV3)；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardio-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospirainterrogans pomona，Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis，布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和和胎兒彎曲桿菌；其中妊娠動物已預(yù)先接種了治療有效量的包含改良的活牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)的疫苗組合物。
9.一種預(yù)防妊娠動物由BHV-1和BVDV病毒引起的流產(chǎn)的方法，包括給予妊娠動物治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括結(jié)合改良的活的副流感病毒3型(PIV3)的改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)與牛類病毒性腹瀉病毒；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardjo-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona和胎兒彎曲桿菌菌苗；其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含至少一種改良的活的牛類皰疹病毒(BHV-1)和至少一種改良的活的牛類病毒性腹瀉病毒的疫苗組合物。
10.一種預(yù)防妊娠動物哺乳的動物感染的方法，包括給予被哺乳的動物治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括結(jié)合改良的活的副流感病毒3型(PIV3)的改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)以及牛類病毒性腹瀉病毒(BVDV)；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardjo-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpeferseniihardjo-bovis和布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體，其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含至少一種改良的活的牛類病毒腹瀉病毒(BHV-1)和至少一種改良的活的牛類病毒腹瀉病毒的疫苗組合物。
11.一種預(yù)防妊娠動物由BHV-1和BVDV病毒引起的流產(chǎn)的方法，包括給予妊娠動物治療有效量的疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括結(jié)合改良的活的副流感病毒3型(PIV3)的改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)以及牛類病毒性腹瀉病毒；改良的活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)；犬黃疸鉤端螺旋體、流感傷寒型鉤端螺旋體、Leptospira borgpetersenii hardjo-prajitno、出血黃疸鉤端螺旋體、Leptospira interrogans pomona、Leptospira borgpeterseniihardjo-bovis、布拉迪斯拉發(fā)鉤端螺旋體和胎兒彎曲桿菌，其中妊娠動物預(yù)先接種過治療有效量的包含至少一種改良的活的牛皰疹病毒(BHV-1)和至少一種改良的活的牛類病毒性腹瀉病毒的疫苗組合物。
12.權(quán)利要求1-11中任一項的方法，其中所述疫苗更進一步地包括佐劑。
13.權(quán)利要求1-11中任一項的方法，其中所述動物是母牛或小母牛。
14.權(quán)利要求2、4、6或8中任一項的方法，其中所述動物是妊娠母牛哺乳的牛犢。
15.權(quán)利要求1-11中任一項的方法，其中給與的所述疫苗組合物的量為每劑量大約0.1至大約5.0ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療或預(yù)防妊娠母牛和哺育牛犢的妊娠母牛疾病或病癥的方法，所述的疾病或病癥由牛類病毒性的腹瀉病毒(BVDV)1型和2型、1型牛皰疹病毒(BHV－1)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)、副流感病毒(PIV
文檔編號A61P31/12GK1777442SQ200480010814
公開日2006年5月24日 申請日期2004年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月21日
發(fā)明者邁克爾·A·埃爾斯沃思, 馬丁·D·菲肯, 布賴恩·J·弗根, 卡修斯·M·塔克 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司