專利名稱：一種收集鼻咽細(xì)胞和分泌物用于診斷病毒性上呼吸道感染和篩查鼻咽癌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)要求2003年8月26日申請(qǐng)的序列號(hào)為60/497801的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)作為優(yōu)先權(quán)。
侵入性醫(yī)療診斷包括將醫(yī)療器械通過(guò)自然開(kāi)口或皮膚或粘膜插入到病人體內(nèi)，帶有或不帶有體液、脫落的細(xì)胞、血液或組織的獲取。
本發(fā)明包括非侵入性的細(xì)胞獲取，例如脫落的上呼吸道上皮細(xì)胞，或者外來(lái)的或宿主的，良性的或惡性的其它類型的細(xì)胞，這些細(xì)胞存在于上呼吸道分泌物中，包括用于醫(yī)療診斷和科學(xué)研究的病毒、分子和大分子。本發(fā)明進(jìn)一步提供了將生物活性劑輸送到鼻、鼻咽和口咽部位的有效方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)地，上呼吸道病毒感染的診斷基于臨床病史和檢查，并不包括實(shí)驗(yàn)室研究，因?yàn)檫@種研究具有很長(zhǎng)的轉(zhuǎn)變(turn-around)時(shí)間，對(duì)病人的處理幾乎不產(chǎn)生影響。
然而近來(lái)，基于抗體和核酸的實(shí)驗(yàn)室研究已經(jīng)顯著地縮短了實(shí)驗(yàn)室研究的轉(zhuǎn)變時(shí)間，由此能夠積極地影響臨床處理，尤其是對(duì)檢疫和分組病人的決定。近來(lái)的SARS(嚴(yán)重急性呼吸道綜合征)的流行加強(qiáng)了對(duì)快速診斷方法的需要。
大多數(shù)病毒上呼吸道疾病的侵入點(diǎn)是眼、鼻和口；病毒經(jīng)常在鼻咽，有時(shí)候在結(jié)膜或可能在鼻淚系統(tǒng)獲得最初的立足點(diǎn)。隨著易受感染的宿主被感染，病毒的復(fù)制在宿主的上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)生，從而導(dǎo)致在分泌物中釋放出更多的有傳染性的病毒顆粒。被感染的上皮細(xì)胞常常從上皮層分離，并能夠被收集，以用于病毒的鑒定。通過(guò)活性分泌物或排泄物或由于病毒感染細(xì)胞的死亡，病毒顆粒也分散到細(xì)胞外空間。用于檢測(cè)病毒或被病毒感染的細(xì)胞的方法包括病毒培養(yǎng)、直接免疫熒光顯微鏡檢術(shù)、各種免疫測(cè)定和基于核酸的診斷測(cè)試。
盡管在那些采取有效的宮頸細(xì)胞學(xué)篩選程序的國(guó)家，宮頸癌的發(fā)生率大大減小，但鼻咽癌的發(fā)生率并沒(méi)有受到影響，這是因?yàn)闆](méi)有有效的方法，非侵入性或最小侵入性獲取用于剝脫性細(xì)胞學(xué)癌癥篩選的細(xì)胞。
現(xiàn)有技術(shù)當(dāng)前獲取病毒感染的上呼吸道上皮細(xì)胞的金標(biāo)準(zhǔn)方法是通過(guò)鼻咽吸引術(shù)。該方法包括將無(wú)菌電解溶液通過(guò)塑料插管輸注到鼻咽部，并且使用負(fù)壓通過(guò)抽吸液體回收到存水瓶(trap bottle)中。由于這個(gè)過(guò)程不舒服或疼痛，因此病人不喜歡該過(guò)程，由于它導(dǎo)致打噴嚏和咳嗽，從而引起感染疾病的危險(xiǎn)，所以工作人員不喜歡它。該技術(shù)的變化包括無(wú)電解溶液輸注的抽吸，和用專有的鼻咽洗滌收集裝置沖洗。
例如，美國(guó)專利5643202描述了一種用于灌洗和收集鼻咽分泌物的獨(dú)立的人工裝置。該裝置價(jià)格昂貴，并且該方法產(chǎn)生刺激打噴嚏和咳嗽的風(fēng)險(xiǎn)。
在一些不使用上述裝置的設(shè)施中使用的類似方法包括將10-15ml的生理鹽水推注到一個(gè)鼻孔中和收集從另一個(gè)鼻孔中出來(lái)的液體。對(duì)病人來(lái)說(shuō)感到不舒適，并且對(duì)工作人員有潛在的危險(xiǎn)，如上文所述。
其它獲取鼻咽樣品的更低效的方法包括將棉球藥簽通過(guò)鼻插入到鼻咽部(鼻咽藥簽取樣)，鼻藥簽取樣(nose swab)，鼻灌洗，咽喉藥簽取樣，漱口和唾液收集。
因此所有的上述方法都有缺點(diǎn)，這些缺點(diǎn)導(dǎo)致臨床樣品不適當(dāng)(inadequate)，病人不舒服或?qū)︶t(yī)療人員產(chǎn)生危險(xiǎn)，這將在下文詳細(xì)描述。
不適當(dāng)?shù)呐R床樣品由于實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果對(duì)臨床醫(yī)生有用，測(cè)試的靈敏性(疾病存在時(shí)為陽(yáng)性)和特異性(疾病不存在時(shí)為陰性)必須很高。該標(biāo)準(zhǔn)受一些因素的影響，這些因素包括獲取典型樣品的能力和所使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。因此不適當(dāng)?shù)呐R床樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的總靈敏性和特異性造成危害。
在病毒性上呼吸道感染的情況下，診斷材料常常被病毒感染，例如脫落的上呼吸道纖毛柱狀上皮細(xì)胞，或細(xì)胞外病毒顆粒，殼體蛋白質(zhì)或核酸。由于通過(guò)放置在鼻咽表面的插管沖洗而直接獲取這種細(xì)胞，因此用于收集該類型樣品的金標(biāo)準(zhǔn)過(guò)程是鼻咽抽吸。
鼻咽藥簽取樣也直接從鼻咽獲取物質(zhì)。然而附著在藥簽上和可以隨后回收用于診斷測(cè)試的細(xì)胞數(shù)量是有限的。
鼻藥簽取樣包括前鼻腔的擦拭，鼻咽較短，表明只能損害樣品質(zhì)量以減少病人的不舒服。常常這僅僅是用于兒童的選擇，除非大量服用鎮(zhèn)靜劑，否則這些兒童將不會(huì)充分配合鼻咽抽吸或擦洗。
唾液和咽喉藥簽取樣代表相似的折衷方案。如果操作適當(dāng)，咽喉藥簽取樣可以允許少量的鼻咽細(xì)胞回收。這是因?yàn)槊撀涞谋茄始?xì)胞逐漸通過(guò)咽喉進(jìn)入胃腸道。然而唾液是不能令人滿意的，因?yàn)槎鄶?shù)的唾液來(lái)自三對(duì)唾腺(腮腺，下頜下腺和舌下腺)，它們將內(nèi)容物排入前口腔。人吐出的唾液不與咽喉后部的分泌物接觸。來(lái)自咽喉后部的痰和分泌物與唾液不同，通常不能出現(xiàn)，除非病人有過(guò)多的來(lái)自下呼吸道或鼻咽和咽喉后部的分泌物。咽喉漱洗可以使漱液接觸咽喉后部的分泌物。然而，軟腭在多數(shù)個(gè)體中是有作用的，由此防止漱液回流到鼻咽。漱洗也可以導(dǎo)致咳嗽(見(jiàn)下文)。通過(guò)漱洗回收的細(xì)胞數(shù)量因此受到限制，并進(jìn)一步通過(guò)漱液稀釋。
近來(lái)，導(dǎo)致嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的SARS-CoV冠狀病毒已經(jīng)從淚腺分泌物(眼淚)中被收集。然而，不同的機(jī)構(gòu)報(bào)告不能將病毒從包括眼淚的各種來(lái)自眼睛的樣品中分離，這表明眼科醫(yī)生進(jìn)行眼淚的獲取不是一種病毒學(xué)診斷的有效方法。另外，獲取眼淚用于SARS的診斷需要眼科醫(yī)生的服務(wù)和暴露于潛在的感染病人，并需要使用在許多健康護(hù)理中心不能獲得的特別裝置。
病人的不舒服除了唾液收集之外，所有的現(xiàn)有方法包括病人輕微到顯著的不舒服，從輕微的刺激到疼痛。一些方法，例如鼻咽抽吸，不能在兒童或不合作的不鎮(zhèn)靜的病人中實(shí)施。
對(duì)醫(yī)療人員的產(chǎn)生的危險(xiǎn)上述的許多方法導(dǎo)致鼻部的刺痛，從而導(dǎo)致打噴嚏。由于突然將液體抽吸到喉部，漱洗常常導(dǎo)致咳嗽。噴嚏和咳嗽通過(guò)有害的刺激物的強(qiáng)力噴出保護(hù)病人。然而，這些活動(dòng)也產(chǎn)生了帶有傳染性有機(jī)體的氣溶膠，其對(duì)收集這些樣品的醫(yī)療人員產(chǎn)生真正的威脅。甚至眼淚的獲取也包括潛在的感染源病人和實(shí)施該過(guò)程的醫(yī)療人員之間的密切接觸。盡管類似流感A的疾病能夠通過(guò)醫(yī)療人員的免疫而在一定程度被防止，但是像SARS這樣的疾病和其它突發(fā)傳染疾病，其沒(méi)有可獲得的疫苗并導(dǎo)致高死亡率，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的風(fēng)險(xiǎn)。
鼻咽癌沒(méi)有可獲得的細(xì)胞或分子的篩選，因?yàn)殡y以獲得或索取鼻咽樣品用于癌癥篩選。診斷通過(guò)使用內(nèi)窺鏡顯像和活組織檢查而實(shí)施。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明允許通過(guò)將生理標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液引進(jìn)到結(jié)膜囊而獲取脫落的鼻咽細(xì)胞和分泌物，然后收集沖洗液和通過(guò)鼻淚腺管、鼻和鼻咽排入口咽中的再水合分泌物。通常，病人能夠收集咽部的沖洗液并將它吐入樣品容器中，而不吞進(jìn)去。然后該樣品可以進(jìn)行處理，以用于臨床實(shí)驗(yàn)診斷或科學(xué)研究。
本發(fā)明集中了幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，例如對(duì)所有三個(gè)上呼吸道病毒病原體進(jìn)入的入口進(jìn)行取樣(眼，鼻和口)，自身獲取而不威脅醫(yī)療人員；通過(guò)污染的氣溶膠污染醫(yī)院或門(mén)診環(huán)境或醫(yī)院其它病人或工作人員的風(fēng)險(xiǎn)減??；病人的不舒服減輕；鼻咽物質(zhì)的合適產(chǎn)量；并且不會(huì)由于沖洗液而產(chǎn)生過(guò)分分泌物稀釋。當(dāng)作為試劑盒的一部分使用時(shí)，該方法可以在病人自己家里或在隔離或檢疫機(jī)構(gòu)中執(zhí)行。由于本發(fā)明沒(méi)有不舒服或副作用，因此可以更容易地重復(fù)，或者立刻收集更多的樣品以用于其它研究，或者在以后的時(shí)間，用于長(zhǎng)期研究，例如研究在疾病發(fā)展或響應(yīng)治療期間病毒負(fù)荷的變化。
本發(fā)明也提供了啟動(dòng)程序以用于篩選流行鼻咽癌的地方的鼻咽癌的方法。本發(fā)明也提供了作為整體將生物活性劑通過(guò)胃腸系統(tǒng)輸送到眼睛、上呼吸道和身體的有效方法。
定義“核糖核酸酶”表示任何一種廣泛分布的切割RNA的類型的酶。
“脫氧核糖核酸酶”表示關(guān)于DNA的核酸內(nèi)切酶。核酸內(nèi)切酶是在特定位置通過(guò)切斷鏈而切割核酸的酶。一些對(duì)RNA和DNA都起作用。
“醫(yī)院傳染”表示在醫(yī)院或健康護(hù)理機(jī)構(gòu)中傳染病從一個(gè)病人傳染到另一個(gè)病人。
“聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)”表示用于制備多拷貝DNA序列的體外技術(shù)。它使用重復(fù)的熱循環(huán)，其包括雙鏈DNA的變性，適當(dāng)?shù)墓押塑找锏耐嘶穑ㄟ^(guò)聚合酶引物的延伸。
“RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng))”是PCR的一種類型，其中初始的模板是RNA，反轉(zhuǎn)錄酶用于制造DNA模板。一些熱穩(wěn)定聚合酶具有明顯的反轉(zhuǎn)錄酶活動(dòng)；然而，更普通的是執(zhí)行明確的反轉(zhuǎn)錄，使反轉(zhuǎn)錄酶失活或提純產(chǎn)物，然后分別進(jìn)行傳統(tǒng)的PCR。
“酶免疫測(cè)定(EIA)”表示基于抗原-抗體反應(yīng)特異性的診斷系統(tǒng)(常常包裝成可攜帶的試劑盒)，使用酶對(duì)底物的催化活性作為信號(hào)放大和檢測(cè)抗原-抗體反應(yīng)的方法。
“微衛(wèi)星”是廣泛分布于整個(gè)基因組的可變長(zhǎng)度的二或三核苷酸的重復(fù)短序列。
“端?！笔侨旧w的末端。
“端粒酶”是一種DNA聚合酶，其帶有選擇性從端粒延長(zhǎng)寡核苷酸的異常能力。該酶包含基本的159個(gè)殘基的RNA序列，其提供用于復(fù)制富含G的端粒序列的模板。
“啟動(dòng)子”是DNA區(qū)域，在開(kāi)始將DNA轉(zhuǎn)錄到RNA之前RNA聚合酶結(jié)合到該區(qū)域。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明在附圖中

圖1描述了從眼睛到鼻的灌洗液的流動(dòng)方向。
圖2描述了液體進(jìn)入淚囊的入口部位。
圖3描述了鼻腔和鼻淚管的下部開(kāi)口的內(nèi)部解剖。
圖4描述了用于收集CURTI樣品的英文版本的病人說(shuō)明圖表。
圖5列出了在一系列感染流感A的病人中的CURTI結(jié)果。
附圖的詳細(xì)描述圖1描述了生理鹽水從結(jié)膜囊排到鼻腔的路徑。
圖2顯示了右眼的圖像。眼瞼打開(kāi)以顯示正常朝內(nèi)的淚腺孔，其中每個(gè)眼瞼上有一個(gè)淚腺孔。它們位于眼瞼(實(shí)箭頭)的中間方向(靠近鼻梁)的小乳突的頂部(類似乳頭的突出)。
圖3顯示了鼻腔和鼻淚腺管的開(kāi)口處的內(nèi)部解剖。結(jié)膜囊中的過(guò)量液體(眼淚或沖洗液)通過(guò)鼻淚管排出，而不會(huì)溢出，除非它超出導(dǎo)流能力。通過(guò)眼瞼中(內(nèi))端的淚腺乳突頂部的雙向成對(duì)(上部和下部)的淚腺孔，眨眼將灌洗液泵送到淚囊中，進(jìn)入與淚囊相連的短淚腺小管(cannaliculi)。然后液體進(jìn)入單通道鼻淚管和向下通過(guò)該管道的下部開(kāi)口，并進(jìn)入鼻腔，在下管道的底部，鼻孔后部?jī)衫迕滋?。隨著病人半傾斜，液體回流到后鼻腔，進(jìn)入鼻咽和濕潤(rùn)鼻咽粘膜，從而釋放分泌物。然后鼻咽分泌物和眼淚或沖洗液向下進(jìn)入口咽，引起咽喉后部的液體感覺(jué)。當(dāng)這發(fā)生時(shí)，病人將產(chǎn)生吞咽液體的欲望。引導(dǎo)病人將液體吐到樣品容器中而不是吞咽它。對(duì)咸味有完整感覺(jué)的病人，在沒(méi)有其它最近攝取的物質(zhì)的優(yōu)勢(shì)味覺(jué)的情況下，當(dāng)它被吐出時(shí)通常能夠鑒別液體(如果生理鹽水用作沖洗液)的咸味。
圖4是給病人的英文版本的說(shuō)明注解，以幫助它們收集CURTI樣品。
洗手，半斜靠在長(zhǎng)椅或床上。
輕輕地按摩兩個(gè)淚囊(見(jiàn)圖中由“x”表示的位置)。
使用一滴無(wú)菌的標(biāo)準(zhǔn)鹽眼藥水(假設(shè))滴入每個(gè)淚囊(眼睛)，就像使用眼藥水一樣。由于其會(huì)溢出，不要使用太多。你可以輕輕地再次按摩淚囊。眨眼將幫助液體進(jìn)入你的淚囊。不要強(qiáng)制閉上你的眼瞼，因?yàn)檫@將導(dǎo)致液體溢出。
應(yīng)用的鹽溶液將通過(guò)鼻淚管到達(dá)鼻(由圖中的虛箭頭表示)，然后通過(guò)鼻和鼻咽進(jìn)入口咽。不要吞咽該液體。在咽喉中收集該液體。最好不立即把它吐出，而是繼續(xù)應(yīng)用更多眼藥水，直到吞咽的欲望不可抗拒。這保證了樣品不混合太多的唾液。
輕輕地將它吐到預(yù)備的樣品瓶中，你的唾液應(yīng)當(dāng)嘗起來(lái)是咸的。
多次重復(fù)步驟3-5直到它提供2ml的樣品，或直到眼藥水被用完。關(guān)閉樣品瓶上的蓋。
警告護(hù)理人員樣品收集完畢。
注意在眼藥水的應(yīng)用和液體集中在咽喉中的感覺(jué)之間有5分鐘的時(shí)間延遲。另外，當(dāng)用完眼藥水后，液體將繼續(xù)在咽喉中收集1-2分鐘。也請(qǐng)?jiān)跇悠啡萜髦惺占?br> 小結(jié)使用眼藥水，眨眼，將收集在咽喉中的液體吐到預(yù)備的容器中。
圖5A顯示了當(dāng)感染常見(jiàn)的流感A的病人在短的延遲時(shí)間(在24小時(shí)以內(nèi))之后進(jìn)行評(píng)價(jià)的CURTI表現(xiàn)(通過(guò)DIF)。CURTI的陽(yáng)性被定義成通過(guò)病毒培養(yǎng)的流感A病毒的陽(yáng)性鑒定或通過(guò)DIF的流感A感染的上皮細(xì)胞的陽(yáng)性鑒定。僅僅50％的病人CURTI是陽(yáng)性，因?yàn)椴⒎撬械臉悠范寂囵B(yǎng)出病毒；一些病人不能實(shí)施CURTI，也就是小于10歲的兒童(圖5B)；由病人的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的流感A的快速消滅是由于實(shí)施CURTI的延遲造成的。流感A爆發(fā)后，許多或多數(shù)由于患流感A而住院的病人是年幼的兒童或年老的病人。由于判斷和接收的延遲，一些病人接近于要清除這些病毒，或者隨著流感A感染的診斷已經(jīng)開(kāi)始產(chǎn)生抗病毒劑。在CURTI的實(shí)施中的進(jìn)一步延遲可以解釋一些CURTI的“假陰性”結(jié)果。其它可能的原因包括阻止結(jié)膜灌洗液進(jìn)入鼻的解剖學(xué)異常，細(xì)節(jié)的疏忽，或?qū)ΜF(xiàn)有的病毒鑒定的實(shí)驗(yàn)方法不敏感。
本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述解剖學(xué)淚囊位于眼睛的中間眼角，中間眼瞼韌帶和一些閉合眼瞼的肌肉纖維(眼輪匝肌的眼瞼纖維)的深處。它是鼻淚管的平頭上端的擴(kuò)張，通過(guò)兩個(gè)短cannaliculi(小管)連接到結(jié)膜囊(眼瞼和眼睛之間的空間)。能夠容易地看到結(jié)膜囊中的淚腺cannaliculi的開(kāi)口或孔位于上下眼瞼的中間方向兩個(gè)小乳頭的頂部，被稱為淚腺乳頭(圖2)。淚囊的下端繼續(xù)作為帶有粘膜褶皺的厚壁管，從而允許眼淚單通道向下流入鼻部。該管是鼻淚管。它大約2cm長(zhǎng)，沿著前鼻腔的外壁向下和向外傾斜，通向被稱為下管道的凹穴。
當(dāng)過(guò)量的眼淚進(jìn)入結(jié)膜囊時(shí)，由于增加的分泌物，眼淚不會(huì)正常地溢出，這是因?yàn)檠鄄€邊緣，其由于邁博姆腺(Meibomian gland)的油性分泌物而阻止了水。作為代替，眨眼發(fā)生并幫助眼淚排入到淚囊中。這種情況的發(fā)生是因?yàn)樵谡Ｑ燮陂g，淚腺孔朝內(nèi)面對(duì)淚湖，該空間正好在該孔以內(nèi)。同時(shí)，閉合眼瞼的肌肉也拉開(kāi)由于其彈性而通常折疊的淚囊。眼淚通過(guò)該作用而被吸入淚囊。當(dāng)眼瞼打開(kāi)和肌肉放松時(shí)，淚囊返回到它的初始折疊狀態(tài)。它所容納的物質(zhì)被泵送到鼻淚管中，由此進(jìn)入鼻中。在淚囊管中的粘膜折疊起到閥的作用，阻止眼淚回流。這樣，閥和泵系統(tǒng)引導(dǎo)過(guò)量的眼淚從結(jié)膜囊經(jīng)過(guò)鼻淚囊和鼻淚管進(jìn)入鼻中。當(dāng)眼淚進(jìn)入鼻中時(shí)，它滴回到鼻咽，除非它從鼻中流出。進(jìn)入鼻咽之后，眼淚和鼻以及鼻咽中的分泌物混合并引起液體在咽喉中集中的感覺(jué)。兒童也許會(huì)本能地吞咽它。成人能夠被指導(dǎo)著避免吞咽它，而是把它吐出來(lái)。這些過(guò)程形成了本發(fā)明的解剖學(xué)基礎(chǔ)。
CURTI的方法(結(jié)膜-上呼吸道灌洗)為了收集鼻咽細(xì)胞(脫落的上皮細(xì)胞，和遷移到分泌物中的免疫細(xì)胞)，或其它存在于鼻咽中的物質(zhì)，例如病毒或癌細(xì)胞，本發(fā)明利用了前面描述的解剖學(xué)性質(zhì)。我們使用無(wú)菌生理鹽溶液來(lái)產(chǎn)生過(guò)量的人造眼淚，這些眼淚灌洗鼻咽，由此產(chǎn)生對(duì)能夠吐出的帶有混合細(xì)胞和分泌物的液體的收集。其它的方法包括通過(guò)局部的眼藥水、引發(fā)情緒和刺激性的煙或氣來(lái)刺激眼淚分泌物。在本發(fā)明的方法中，鹽水沒(méi)有產(chǎn)生不愉快的感覺(jué)，因?yàn)樗c眼睛一樣處于同樣的室溫，同樣的滲透度和PH值，并且不包含防腐劑和其它刺激眼睛的化學(xué)制品。由于這種原因，生理鹽水不會(huì)導(dǎo)致病人“弄糟”眼睛(強(qiáng)制閉上眼睛)，因此防止了沖洗液溢出到臉頰上。沖洗液的量也完全由病人來(lái)控制。
為了成功地實(shí)施本發(fā)明，病人需要如下理解該方法1.該方法能夠由病人自己實(shí)施。病人可以坐在或半斜躺在舒服和安全的椅子或床上，并且在天花板上沒(méi)有明亮的光線照射的房間中。
2.當(dāng)病人的臉朝著天花板坐著時(shí)，將預(yù)備的無(wú)菌生理鹽水滴注到雙眼中，以避免溢出。
3.一次一只眼睛只滴一滴。
4.然后病人應(yīng)當(dāng)保持他/她的頭部朝前(豎直或半豎直)以幫助液體排到淚囊中。
5.病人不應(yīng)當(dāng)強(qiáng)制閉上眼睛，因?yàn)槿绻鼈儚?qiáng)制閉上，溶液將從眼睛中淌出。
6.雙眼應(yīng)當(dāng)正常眨動(dòng)一小段時(shí)間，直到液體在眼中的感覺(jué)幾乎消失。
7.接著，病人應(yīng)當(dāng)重復(fù)生理鹽水眼藥水的使用和眨眼，直到2-5ml的生理鹽水被用完。
8.開(kāi)始使用眼藥水一或兩分鐘后，病人將感覺(jué)到液體進(jìn)入鼻中，該遲滯期是可預(yù)期的。
9.病人應(yīng)當(dāng)稍微向后傾斜頭部，以便于當(dāng)液體進(jìn)入鼻腔時(shí)液體能排入咽喉后部。
10.吸氣動(dòng)作將有助于液體回流。
11.當(dāng)足夠的液體已經(jīng)集中到咽喉后部，即并非液體一進(jìn)入咽喉的時(shí)候，病人應(yīng)當(dāng)將液體吐到預(yù)備的無(wú)菌、無(wú)RNAse(核糖核酸酶)和無(wú)DNAse(脫氧核糖核酸酶)的樣品容器中。該延遲的吐出保證了唾液對(duì)樣品的最小稀釋。
12.應(yīng)特別強(qiáng)調(diào)要求病人不要吞下液體。
13.當(dāng)用完預(yù)備的生理鹽水后，液體將繼續(xù)進(jìn)入鼻和咽喉后部一或兩分鐘。該液體也應(yīng)當(dāng)被收集到樣品容器中。
其它對(duì)病人的指導(dǎo)應(yīng)當(dāng)包括，在該程序之前避免強(qiáng)味覺(jué)的食物和飲料，同樣應(yīng)當(dāng)避免吸煙。這幫助病人感覺(jué)到唾液的咸味。另外，它要求病人首先用水漱口，徹底地洗手，從而它們能夠輕輕地按摩淚囊部位(眼睛的內(nèi)眼角)，以幫助它對(duì)液體開(kāi)放。
因?yàn)橥ǔＰ枰仁褂醚鬯幩景l(fā)明被推薦用于成人和兒童。沒(méi)有事先經(jīng)歷的年幼兒童在該程序之前需要重復(fù)練習(xí)和訓(xùn)練。對(duì)于多數(shù)的病人，以病人的語(yǔ)言作詳細(xì)的文字說(shuō)明就足夠了(圖4)。
樣品容器，樣品保存和運(yùn)輸用于收集樣品的容器最好是無(wú)菌廣口瓶，蓋上帶有O形圈以使它在擰上之后防止?jié)B漏。它應(yīng)當(dāng)不含有RNAse和DNAse。瓶上靠近底部的線或刻紋表示樣品量，當(dāng)收集液體的彎月形液面到達(dá)所述線或刻紋時(shí)，樣品就足夠了。
取決于找到的分析物、細(xì)胞或病原體，在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理之前，樣品最好保持在室溫或4℃。為了包括細(xì)胞培養(yǎng)物中的病毒培養(yǎng)在內(nèi)的病毒研究，重要的是通過(guò)將一小部分試樣(大約200微升)轉(zhuǎn)移到病毒轉(zhuǎn)運(yùn)介質(zhì)中，從而適當(dāng)?shù)乇４娌《竞头乐辜?xì)菌的繁殖。為了提取不穩(wěn)定的分子，例如mRNA(信使RNA)，溶解緩沖液應(yīng)當(dāng)在最早的合適時(shí)間加入到試樣中，一般在收集迅速地放置到4℃的冰箱隔間中的樣品幾小時(shí)之內(nèi)。為了防止將培育出細(xì)菌的試樣中口內(nèi)共生有機(jī)體生長(zhǎng)過(guò)度，其它的化學(xué)制劑，例如抗生素，可以添加到其中。如果樣品將要用于細(xì)胞學(xué)檢查，例如酒精或福爾馬林這樣的固定劑可以添加到其中。
還應(yīng)當(dāng)遵守通常的預(yù)防措施，這些措施包括擰緊帽蓋、裝入袋中以防止泄漏和郵遞員以及實(shí)驗(yàn)室工作人員的損壞，正確的鑒定和給樣品瓶貼標(biāo)簽。
質(zhì)量的控制和保證因?yàn)樗c唾液混合，因此樣品與唾液類似，是發(fā)白且多泡沫的。對(duì)于鼻腔和鼻咽化膿感染的病人，樣品呈微黃色或淡綠色。血液污染一般不會(huì)出現(xiàn)，如果它存在，應(yīng)當(dāng)注意。對(duì)于對(duì)咸味有完整感覺(jué)的病人，和那些在該程序之前用水漱口的病人，唾液應(yīng)當(dāng)有一些咸味。實(shí)際上，鼻咽有咸味的味蕾(個(gè)人的觀察)。嘗到唾液中的鹽分是保證質(zhì)量的觀察結(jié)果，應(yīng)當(dāng)詢問(wèn)每一個(gè)病人，盡管它不存在并不必然表示樣品的不適當(dāng)。表明樣品適當(dāng)?shù)钠渌^察結(jié)果包括病人敘述液體進(jìn)入鼻和咽喉，以及液體成功地吐到容器中。其它保證質(zhì)量的方法在下面列出。
因此確保樣品適當(dāng)?shù)姆椒ò?.報(bào)告咽喉或唾液中的咸味，或感覺(jué)到液體通過(guò)鼻進(jìn)入咽喉，這是樣品適當(dāng)?shù)谋硎?。用于CURTI的眼藥水中如果含有防腐劑或指示劑(例如熒光素)，它們通常將產(chǎn)生苦味。如果用葡萄糖水代替生理鹽水，病人將感受到甜味。然而包含代謝碳水化合物的溶液應(yīng)當(dāng)避免，因?yàn)樗鼈兛赡芤鸺?xì)菌生長(zhǎng)。這些味覺(jué)感受能夠用于保證質(zhì)量的觀察結(jié)果。
2.眼藥水中指示劑溶液的內(nèi)含物。一個(gè)例子是熒光素，通過(guò)在Wood’s光線下(長(zhǎng)紫外線或紫外線A，波長(zhǎng)320-380nm)觀察樣品，它的存在能夠容易地被發(fā)覺(jué)。眼科醫(yī)生常規(guī)地在病人的眼睛上使用熒光素(眼藥水或帶)，以探測(cè)角膜潰瘍。
3.測(cè)量唾液的PH值。在健康人體中，唾液的PH值與細(xì)胞外液體相同，都大約為7.4。標(biāo)準(zhǔn)鹽水的PH值為7.0(中性)。然而，它能夠被牙齲齒、食物和飲料、藥物和其它因素影響。測(cè)量該程序之前和之后的PH值能夠表示是否存在由于生理鹽水的滴注導(dǎo)致病人唾液的pH任何變化，一個(gè)可測(cè)量的變化，例如從7.4到7.1的變化，這就說(shuō)明樣品適當(dāng)。
4.在實(shí)驗(yàn)室中，診斷材料的存在表明樣品是適當(dāng)?shù)?。?dāng)染色適當(dāng)?shù)臒晒鈽?biāo)記的抗體時(shí)，診斷材料可以是包含熒光細(xì)胞核的柱狀細(xì)胞。診斷材料也可以是癌癥的分子標(biāo)記或細(xì)胞學(xué)非典型癌細(xì)胞。鱗狀細(xì)胞將大量存在，因?yàn)樗鼈兺ǔ４嬖谟谕僖褐?，但并不重要。另一方面，柱狀?xì)胞通常很稀少，它們的缺少并不證明樣品的不適當(dāng)。
CURTI的改進(jìn)一些病人也許不能自己實(shí)施整個(gè)CURTI程序。這些病人將需要醫(yī)療或護(hù)理人員的幫助。這通常意味著當(dāng)需要時(shí)為他們握住容納生理鹽水的注射器(或瓶)和/或樣品瓶，為他們使用眼藥水，幫助他們坐起來(lái)吐出液體，將樣品容器放置靠近病人的口，確保病人正確地進(jìn)行該程序，確保足夠的樣品被收集，確保樣品不溢出，和確保樣品容器在該程序之后完全封閉。需要這些形式的幫助的病人包括輕微精神缺陷的病人和臥床的年老病人。其它可能需要這些幫助的病人可能包括年幼的兒童，視覺(jué)損失的病人，嚴(yán)重受傷或生病的病人，或者那些不能完全使用一個(gè)或兩個(gè)上肢的病人。
甚至在這些情況下，只要有可能，即使需要幫助，CURTI也勝過(guò)鼻咽沖洗或其它方法，因?yàn)椴∪税l(fā)現(xiàn)它比鼻咽抽吸更溫和。病人也不打噴嚏和咳嗽，并且更可能同意重復(fù)另外的收集或接下來(lái)的研究。
全套試劑盒因此本發(fā)明最好以試劑盒的形式來(lái)進(jìn)行實(shí)施，該試劑盒包括帶有或不帶有指示劑的瓶裝的眼藥水(有有效期)，帶有表示足夠容量的標(biāo)記和印有病人姓名的標(biāo)簽的防漏樣品容器，容納樣品和任何泄漏的防漏塑料袋，說(shuō)明手冊(cè)，和適當(dāng)?shù)奶砑觿?收集之后加入其中)。如果該試劑盒在病人家中使用，詢問(wèn)姓名和聯(lián)系信息、簡(jiǎn)單的病歷、病人是否嘗到咸味(如果用于質(zhì)量保證測(cè)量)以及收集的時(shí)間和日期這些問(wèn)題的適當(dāng)調(diào)查表；也包括關(guān)于怎樣和在什么地方提交樣品，以及返回地址等更多的說(shuō)明。
實(shí)施例1.用于SARS診斷的鼻咽樣品的收集在2003的春天，香港發(fā)生了SARS的爆發(fā)，在爆發(fā)的末期，本發(fā)明第一次測(cè)試了四個(gè)最近住院的SARS病人。
所有這四個(gè)病人都用藥簽進(jìn)行鼻和咽喉的取樣，以通過(guò)RT-PCR進(jìn)行SARS的分子診斷。因?yàn)楹ε聫牟∪烁腥維ARS，所以沒(méi)有實(shí)施鼻咽抽吸。通過(guò)后來(lái)的血清轉(zhuǎn)化成SARS冠狀病毒或通過(guò)肝組織活檢(RT-PCR)該病毒呈陽(yáng)性，這些病人被確認(rèn)感染了SARS。
這些鼻和咽喉的藥簽取樣中沒(méi)有任何一個(gè)呈陽(yáng)性。另外大便也被收集用于RT-PCR，因?yàn)橐呀?jīng)開(kāi)始知道相當(dāng)數(shù)量的SARS病人在大便中分泌SARS冠狀病毒。然而，在這四個(gè)人中沒(méi)有一例呈陽(yáng)性。
在這四個(gè)病人中實(shí)施了CURTI。兩個(gè)病人呈陽(yáng)性。因此本發(fā)明與咽喉和鼻的藥簽取樣相比提供了更好的樣品。它不會(huì)使醫(yī)療人員面對(duì)感染致命病毒的額外風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)橛刹∪俗约簩?shí)施整個(gè)程序。與血清轉(zhuǎn)化相比，通過(guò)RT-PCR的SARS的分子診斷提供了更早期的SARS特異診斷。
2.用于流感診斷的鼻咽樣品的收集流感A病毒是RNA病毒，其自然宿主是水禽。當(dāng)它感染雞時(shí)，死亡率極高。人類和豬也容易受到感染。豬作為鳥(niǎo)類和人類流感A病毒種類之間的病毒重組的“混合載體”是公知的。重組產(chǎn)生了新的抗原變化的流感A病毒。當(dāng)人類遭遇它們時(shí)，它們的免疫系統(tǒng)記憶不會(huì)認(rèn)出這些新的病毒，因此花更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)響應(yīng)和給了病毒足夠的時(shí)間導(dǎo)致臨床疾病，并自身傳播到更多的易感宿主。由于流感A傳染性很高，只需要少到僅僅三個(gè)病毒顆粒就可以導(dǎo)致感染，并且由于它常常通過(guò)液滴和氣溶膠傳播，因此經(jīng)常在公共機(jī)構(gòu)和醫(yī)院中爆發(fā)?？焖俚脑\斷，從而導(dǎo)致感染病人的檢疫和隔離，依賴于可靠地收集臨床樣品。
本發(fā)明提供了一種高產(chǎn)量、舒適和安全(對(duì)于醫(yī)療人員來(lái)說(shuō))的樣品收集方法，以用于流感A傳染病的實(shí)驗(yàn)室診斷。收集的樣品能夠被任何通常使用的方法檢驗(yàn)，包括護(hù)理點(diǎn)的酶免疫測(cè)定(EIA)，BD DirectigenTMFluA，比較慢但可廣泛獲得的直接熒光免疫顯微鏡法(DIF)，病毒培養(yǎng)，和日益快速且到目前為止最靈敏和特異的RT-PCR方法。
在部分公布的通過(guò)DIF診斷感染了流感A的52個(gè)病人的分組中(參考文獻(xiàn)11)，在24小時(shí)內(nèi)通過(guò)相同的DIF實(shí)驗(yàn)方法對(duì)CURTI樣品重新檢驗(yàn)，26個(gè)被發(fā)現(xiàn)呈陽(yáng)性(圖5)。
在熒光顯微鏡下，已與熒光素標(biāo)記的流感A特異抗體進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)的樣品條帶顯示了亮綠熒光的細(xì)胞核和有纖毛的柱狀上皮細(xì)胞的被感染細(xì)胞質(zhì)。細(xì)胞核是橢圓形的并且位于細(xì)胞的底部。在上述兩種情況下，這些細(xì)胞存在足夠的數(shù)量，以允許在雜質(zhì)和更大的無(wú)自身熒光的鱗狀細(xì)胞中容易地辨認(rèn)。另外，細(xì)胞殘骸不會(huì)過(guò)多到足夠使病毒感染細(xì)胞難以辨認(rèn)。
3.用于其它上呼吸道病毒性疾病診斷的鼻咽樣品的收集，例如流感B、副流感、肺炎病毒、鼻病毒、冠狀病毒、呼吸性合胞病毒、單純皰疹病毒和腺病毒。
DirectigenTMFlu B測(cè)試是類似于DirectigenTMFlu A測(cè)試的護(hù)理點(diǎn)(point-of-care)抗原測(cè)定系統(tǒng)。它特異地鑒定流感B，并且作為DirectigenTMFluA+B與DirectigenTMFlu A一起銷售。DirectigenTMRSV測(cè)試鑒定呼吸性合胞病毒。其它上呼吸病毒的類似測(cè)試正在發(fā)展或處于計(jì)劃階段。所有這些能容易地結(jié)合到本發(fā)明中，以最大化病人的舒適感、樣品質(zhì)量和對(duì)工作人員的安全性。
4.將本發(fā)明試劑盒與核酸擴(kuò)增組合，例如PCR-EIA或RT-PCR。
核酸擴(kuò)增很快成為擴(kuò)增病毒“特征”而不產(chǎn)生完全傳染病毒的附加風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)選方法。另外，它與其它任何基于抗原的測(cè)試相比具有顯著的靈敏度。由于實(shí)時(shí)定量PCR提供的自動(dòng)控制，核酸擴(kuò)增的整個(gè)過(guò)程不超過(guò)一小時(shí)。另外，該技術(shù)允許測(cè)量在樣品中病毒的濃度。
大多數(shù)收集鼻咽物質(zhì)的方法是使用大量的灌洗液，或取決于獲取藥簽取樣細(xì)胞的溶液。因此獲得病毒的數(shù)量不反映存在病毒的真實(shí)數(shù)量，盡管該技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化，但有意義的結(jié)果仍然通過(guò)病人之間的比較而形成。本發(fā)明提供了少量的灌洗液，其沖洗出病毒感染的細(xì)胞，導(dǎo)致預(yù)先存在的粘液(分泌物)的濕潤(rùn)或再水合以及它們引起的釋放。因此在CURTI樣品中探測(cè)到的病毒數(shù)量更接近于存在于鼻咽分泌物中的初始病毒負(fù)荷。
我們已經(jīng)發(fā)展了核酸擴(kuò)增的更靈敏的方法，PCR-EIA。該方法提供了使用酶免疫測(cè)定的PCR產(chǎn)品的進(jìn)一步的信號(hào)放大層。
5.用于篩選鼻咽癌的鼻咽分泌物的收集。
鼻咽癌在世界上的某些地方很普遍，包括中國(guó)南方。它是由轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細(xì)胞的無(wú)性繁殖引起的，這些細(xì)胞具有永生化、不受控制的細(xì)胞繁殖、入侵和能夠轉(zhuǎn)移到更遠(yuǎn)部位的能力。許多病例具有EBV(埃-巴二氏病毒)感染的殘留跡象，這表明該病毒是初始的轉(zhuǎn)化事件(transforming event)。因?yàn)楸茄饰挥陬^部的中央，病人難以看到和接觸到，起源于那里的腫瘤一開(kāi)始幾乎不產(chǎn)生不舒服的感覺(jué)。多數(shù)病例發(fā)展到后期，不能治療的階段。
直到現(xiàn)在，還沒(méi)有有效不采用侵入性和昂貴和鼻咽內(nèi)窺鏡檢查篩選這些病人的方法。本發(fā)明提供了一種舒適和可靠的方法，以收集脫落的鼻咽細(xì)胞或用于檢查的分子/病毒標(biāo)記。這些樣品將需要立刻處理或固定，以提供分子標(biāo)記或形態(tài)細(xì)節(jié)的最佳保存以用于顯微鏡觀察。
本發(fā)明也提供了樣品，以用于分子篩選以及鼻咽癌和其它影響鼻腔、鼻咽和口咽的惡性腫瘤的診斷，其使用微衛(wèi)星、端粒和端粒酶相關(guān)的標(biāo)記、啟動(dòng)子超甲基化作用、全基因組去甲基化作用、腫瘤抑制基因失活作用、腫瘤基因激活作用、基因和其它標(biāo)記的表達(dá)或抑制的不同模式、化學(xué)形狀、粘膜分泌物lgA特異性和病毒標(biāo)記(例如埃-巴二氏病毒抗原和核酸)。
6.CURTI作為疫苗輸送的方法。
一些疫苗通過(guò)腸胃外輸送(不通過(guò)口)。其它例如口服的脊髓灰質(zhì)炎疫苗(Sabine疫苗)，通過(guò)腸內(nèi)輸送(通過(guò)口)。該減活(削弱)口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗(OPV)由Dr.Albert Sabin在1961年研制。沙克疫苗是滅活的(死亡的)脊髓灰質(zhì)炎疫苗(IPV)-由Dr.Jonas Salk在1955年研制，OPV超越沙克疫苗的優(yōu)點(diǎn)在于IPV必須由受過(guò)訓(xùn)練的健康工作人員注射。OPV的其它好處包括更長(zhǎng)的持續(xù)免疫和粘膜免疫，因?yàn)榧顾杌屹|(zhì)炎病毒通過(guò)口進(jìn)入身體。
所以CURTI是給藥減活疫苗以針對(duì)上呼吸病毒性疾病的優(yōu)選方法，該疾病通常通過(guò)上呼吸道，包括眼睛，而進(jìn)入身體。輸送可以通過(guò)使病人處于臉朝上位置和將包含疫苗的液體滴入眼睛而執(zhí)行。
因此，盡管已經(jīng)顯示、描述和指出了本發(fā)明的基本的新特征，如優(yōu)選實(shí)施例中所述，應(yīng)當(dāng)理解列舉裝置和操作的形式和細(xì)節(jié)的各種省略、代替和變化可以由本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員完成而不超出本發(fā)明的精神。例如，可以顯而易見(jiàn)地將那些要素和/或方法步驟組合起來(lái)，以基本相同的方式執(zhí)行基本相同的功能，從而獲得基本相同的結(jié)果，這些也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。而且，應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，所示的和/或以本發(fā)明任何公開(kāi)的形式或?qū)嵤┓桨该枋龅姆椒ú襟E可以與任何其它公開(kāi)的、描述的或建議的形式或?qū)嵤┓桨附Y(jié)合，以作為一般的設(shè)計(jì)選擇。因此本發(fā)明的意圖僅僅受到附加的權(quán)利要求的范圍限定。
參考文獻(xiàn)McMinn，R.M.H.1994.Head and neck and spine，p.470-472 and p.506-508.In R.M.H.McMinn(ed.)，Last’s anatomy-regional and applied.Churchill Livingstone.New York，N.Y.Tong TR，Lam BH，Ng TK，Lai ST，Tong MK，Chau TN.Conjunctivo-upper respiratory tractirrigation(CURTI)for early SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome)diagnosis.Accepted for publication.
Peiris JS，Lai ST，Poon LL，Guan Y，Yam LY，Lim W，Nicholls J，Yee WK，Yan WW，Cheung MT，Cheng VC，Chan KH，Tsang DN，Yung RW，Ng TK，Yuen KY；SARS studygroup.Coronavirus as a possible cause of severe acute respiratory syndrome.Lancet.2003 Apr 19；361(9366)1319-25.
Kuiken T，F(xiàn)ouchier RA，Schutten M，Rimmelzwaan GF，van Amerongen G，van Riel D，Laman JD，de Jong T，van Doornum G，Lim W，Ling AE，Chan PK，Tam JS，Zambon MC，Gopal R，Drosten C，van der Werf S，Escriou N，Manuguerra JC，Stohr K，Peiris JS，Osterhaus AD.Newly discovered coronavirus as the primary cause of severe acuterespiratory syndrome.Lancet.2003 Jul26；362(9380)263-70.
Peiris JS，Chu CM，Cheng VC，Chan KS，Hung IF，Poon LL，Law KI，Tang BS，Hon TY，Chan CS，Chan KH，Ng JS，Zheng BJ，Ng WL，Lai RW，Guan Y，Yuen KY；HKU/UCHSARS Study Group.Clinical progression and viral load in a community outbreak ofcoronavirus-associated SARS pneumoniaa prospective study.Lancet.2003 May24；361(9371)1767-72.
Musher DM.How contagious are common respiratory tract infections？N Engl J Med.2003Mar 27；348(13)1256-66.
The Sabin Vaccine Institute.Accession date，13 August 2004.Polio vaccines.[Online.]http://www.sabin.org/vaccine％5Fscience％5Fpolio.htmChan WM，Yuen KS，F(xiàn)an DS，Lam DS，Char PK，Sung JJ.Tears and conjunctivalscrapings for coronavirus in patients with SARS.Br J Ophthalmol.2004 Jul；88(7)968-9.
Loon SC，Teoh SC，Oon LL，Se-Thoe SY，Ling AE，Leo YS，Leong HN.The severe acuterespiratory syndrome coronavirus in tears.Br J Ophthalmol.2004 Jul；88(7)861-3.
Tong TR，Lai TS.Accession date，13 August 2004.The severe acute respiratory syndromecoronavirus in tears.[Online.]http://bjo.bmjjournals.com/cgi/eletters/88/7/861.
Tong TR，Tang YW，Lai ST，Ng TK，Yu WC，Lam B，Wong TY，Tsang O.An alternativemethod of procuring nasopharyngeal specimens for SARS coronavirus and influenza virusdetection.Abstract.SARS-FP1.2.Hong Kong SARS Forum and Hospital AuthorityConvention 2004.8-11 May 2004.
權(quán)利要求
1.一種收集鼻咽樣品的方法，其包括以下步驟1)將病人定位使其臉朝上，2)每次將至少一滴無(wú)菌溶液滴入每只眼中，然后保持頭部豎直并眨眼幾次，3)重復(fù)步驟2)直到用完大約2-5mL溶液，和4)讓病人將咽喉后部收集的液體吐到樣品容器中。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所使用的無(wú)菌溶液是生理鹽水或其它等滲溶液。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述無(wú)菌溶液包括作為標(biāo)記的熒光素。
4.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括，通過(guò)詢問(wèn)病人是否嘗到該無(wú)菌溶液，如果使用熒光素作為標(biāo)記，在Wood’s光下觀察收集的液體，測(cè)試收集液體的鹽度，或測(cè)試收集液體的PH值，從而評(píng)估收集的液體是否包含所述無(wú)菌溶液的步驟。
5.一種用于權(quán)利要求1所述方法的試劑盒，包含含有無(wú)菌溶液的瓶或注射器，用于樣品收集的帶有封口的廣口容器，防止任何收集的液體從收集容器中泄漏的袋，和保存或處理收集液體的添加劑。
6.權(quán)利要求5的試劑盒，其中所述保存或處理收集液體的添加劑選自固定劑、抗生素、裂解緩沖物和病毒轉(zhuǎn)運(yùn)介質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種收集鼻咽細(xì)胞和分泌物的方法，以及該方法用于診斷病毒性呼吸道感染和檢查鼻咽癌的用途。
文檔編號(hào)A61B10/00GK1618405SQ20041008551
公開(kāi)日2005年5月25日 申請(qǐng)日期2004年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月26日
發(fā)明者唐舜榮, 湯一葦 申請(qǐng)人:偉勝科技有限公司