專利名稱：扁核木提取物及其生物活性功能的制作方法
扁核木為薔薇科植物，又名梅花刺，俗名青刺尖，學(xué)名為Prinsepia utilis Royle.落葉灌木，高1~2米。枝具棱，灰綠色，常有白色粉霜，具枝刺，長8~20毫米。單葉互生或叢生，厚紙質(zhì)至革質(zhì)；狹卵形至披針形，長3~6.5厘米，寬1~2.2厘米，基部鈍圓或楔尖，先端漸尖或短尖，邊緣具細(xì)鋸齒，或幾為全緣，兩面無毛；葉柄長5~10毫米；托葉細(xì)小，宿存或脫落?？偁罨ㄐ蛞干蛏蓚?cè)枝頂端，有花3~8，白色，萼片5，近圓形；花瓣5，倒闊卵形或扁圓形；雄蕊多數(shù)多列；雌蕊1，子房在上位。核果橢圓形，成熟時暗紫紅色，有粉霜，基部有花后膨大的萼片。生于山坡或溪谷兩岸灌木叢中及洼地，路旁。分布云南，貴州，四川，臺灣等地。本植物的根(梅花刺根)，果實(梅花刺果)亦供藥用。
高血脂癥作為動脈粥樣硬化，心腦血管病的重要危險因素之一。本發(fā)明在于將扁核木的花枝(莖)、葉、果實分別用現(xiàn)代科技手段提取其中的有效活性成分?，F(xiàn)將提取方法和動物實驗以及實施例列舉于后。
1.扁核木的果實、莖、葉的提取方法1.1扁核木果實的提取傳統(tǒng)的提取方法是蒸煮后進(jìn)行機械榨油，不但收率低，油榨不盡，殘渣不好利用?，F(xiàn)用下列溶劑萃取，不僅收率高殘渣中油已提盡。
1.1.1實施例1 將鮮或干青刺尖果粉碎后，取100g于索氏提取器中，于接收瓶加入200ml石油醚(30-60)在70℃水浴上回流2小時?；厥帐兔押螅帽夂四居?Prinsepia UtilisOil，縮寫PUO)28g，收率28％。殘渣留作以后綜合利用。(見附

圖1)1.1.2實施例2 將實施例1中石油醚用正己烷代替，其他一切操作同前。(見附圖2)1.1.3 PUO中含有的各類成分見表1.2-1所示。
表1.2-1
1.1.4實施例3 將上述72g果渣A于接收瓶中加入80％乙醇，仍在索氏提取器中回流4小時，回收乙醇后減壓濃縮成膏狀，烤干，粉碎，過100目篩后包裝，簡稱醇提扁核木(Prinsepia UtiliS Extract，縮寫PUE)。殘渣B繼續(xù)綜合利用。(見附圖3，有效成分見表1.2-2)表1.2-2
注[1]莊向平等中草藥1992年第23卷第3期122-124頁.莊向平等中成藥1991年第13卷第10期10-11頁1.1.5實施例4將4kg實施例3中的果渣B加入6升無離子水回流4小時后，過濾，濾液用無水乙醇調(diào)至酒精濃度為85％，出現(xiàn)白色絮狀沉淀，再過濾，抽干，得灰白色粉末，收率為18.5％，粗多糖(Prinsepia UtiliS Polysaccharides，縮寫PUP)，產(chǎn)量0.74kg。(見附圖4，成分見表1.2-2)1.2扁核木莖(花枝)的提取方法1.2.1實施例5將干莖粉碎后，取4kg按實施例3操作提取，得PUE 0.048kg，收率1.2％。莖渣C繼續(xù)綜合利用(見附圖3，有效成分見表1.2-2)1.2.2實施例6將實施例5莖渣C3.8kg按實施例4操作提取，得PUP 0.2964kg，收率7.8％。(見附圖4，有效成分見表1.2-2)
1.3扁核木葉的提取方法1.3.1實施例7 將干葉4kg按實施例3操作提取，得PUE 0.06kg，收率1.5％。葉渣D繼續(xù)提取(見附圖3，成分見表1.2-2)1.3.2實施例8將葉渣D3.94kg按實施例5操作提取，得PUP 0.453kg，收率11.5％。(見附圖4)2、動物實驗PUO、PUE.、PUP的毒性試驗以下動物來源均北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部取體重18-22g ICR小鼠150只，分成三組，每組50只，按常規(guī)方法進(jìn)行LD50測定(腹腔給藥)，結(jié)果均為967.00±143.15mg/kg.。取健康狗4只，體重約為10kg左右，分對照和給藥兩組，靜脈注射給藥。結(jié)果表明給藥前后，狗體重、食欲、精神以及肝腎功能、血象均正常。主要臟器(心、肝、脾、腎、肺、胃、腸、胰和腎上腺等樣品)外表無損傷，組織切片均未見有由于藥物引起的病變和中毒現(xiàn)象，說明PUO、PUE、PUP基本無毒。
3、PUO、PUE、PUP的生物活性功能3.1 PUO、PUE、PUP對免疫的促進(jìn)作用3.1.1 PUO、PUE、PUP對免疫器官重量的影響取體重16g左右的ICR小鼠44只，分對照和給藥兩組，雌雄各半。給藥組腹腔注射PUO、PUE、PUP，每只2mg×7d，對照組給等量生理鹽水，給藥結(jié)束后次日解剖，用眼眶放血法將小鼠處死。取出脾臟和胸腺并稱重，結(jié)果見表3.1-1表3.1.1-1對小鼠脾臟和胸腺重量的影響
*p＜0.01，**p＞0.05由表3.1.1-1可見，PUO、PUE、PUP可明顯增加小鼠脾臟重量，與對照組比較，脾指數(shù)增加0.46倍，但對胸腺的影響不明顯。
3.1.2 PUO、PUE、PUP對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響取體重18-22g ICR小鼠20只，用爬片法觀察PUO、PUE、PUP對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表3.1.2-1表3.1.2-1PUO、PUE、PUP對腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
*p＜0.01**p＜0.001由表3.2-1可見，PUO、PUE、PUP可明顯增強小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，與對照組比較，吞噬指數(shù)增加了3.17倍，吞噬百分?jǐn)?shù)增加1.57倍。
3.1.3 PUO、PUE、PUP對體液免疫的影響取體重18-22gIRC小鼠40只，按文獻(xiàn)方法測定PUO、PUE、PUP對血清溶血素產(chǎn)生的影響，結(jié)果見表3.1.3-1。
表3.1.3-1PUO、PUE、PUP對溶血素產(chǎn)生的影響
*p＜0.01
由表3.3-1可見，PUO、PUE、PUP有增加半數(shù)溶血值的作用，與對照比較，半數(shù)溶血值(HC50)約增加0.56倍。
3.1.4 PUO、PUE、PUP對細(xì)胞免疫的影響3.1.4.1 E玫瑰花結(jié)實驗取離心管40支，給藥管加0.2ml(25μg/ml)PUO、PUE、PUP，對照管加0.2ml Hank′s液，按文獻(xiàn)方法胸腺素注射暫行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。觀察了PUO、PUE、PUP對E玫瑰花結(jié)形成的影響，結(jié)果見表3.1.4-1。
表3.1.4-1 PUO、PUE、PUP對E玫瑰花結(jié)形成的影響 *p＜0.01由表3.4-1可見，PUO、PUE、PUP可明顯增加E玫瑰花結(jié)的形成率，與對照組比較，形成率可增加0.80倍。
3.1.4.2淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗取新鮮正常人全血(肝素抗凝)0.2ml，加入含有2ml培養(yǎng)液(內(nèi)含RPMI 1640，青鏈霉素各100μ/ml，加小牛血清使成濃度為20％，用NaHCO3調(diào)pH7.4)的試管中，分三組即對照組(生理鹽水)，PUO、PUE、PUP各50μg，37℃孵育56h后每管加入5μci3H-UR，搖勻后繼續(xù)孵育至72h，用49型玻璃纖維濾片收獲細(xì)胞，計數(shù)用FJ-2105液閃儀計數(shù)器計數(shù)DPM，結(jié)果見表3.1.4-2。
表3.1.4-2 PUO、PUE、PUP對正常人全血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響 *P＜0.01
由表3.1.4-2可見，PUO、PUE、PUP組摻入量與對照增加1.11倍，比較說明三者均具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用，彼此并無明顯的差異。
3.1.5 PUO、PUE、PUP對大鼠紅細(xì)胞的凝集作用取SD種大鼠，心臟穿刺取血，肝素抗凝，按文獻(xiàn)方法進(jìn)行實驗，結(jié)果見表3.1.5-1表3.1.5-1 PUO、PUE、PUP對大數(shù)紅細(xì)胞凝集作用的影響
*P＜0.01由表3.1.5-1可知，PUO、PUE、PUP有凝集紅細(xì)胞的作用，說明它具有凝集素樣的作用，參與吞噬細(xì)胞的活化和生物防御。
4、PUO、PUE、PUP對機體損傷的修復(fù)和保護(hù)作用4.1 PUO、PUE、PUP對60Coγ射線輻射的保護(hù)作用取體重22gIRC小鼠50只，給藥后對小鼠進(jìn)行照射，總劑量為800倫琴，照射三天后，小鼠出現(xiàn)少食、少飲、稀便、皮毛松散無澤以及體重減輕等癥狀，觀察一個月，結(jié)果見表4.1-1。
表4.1-1PUO、PUE、PUP對60Coγ射線輻射的保護(hù)作用
*P＜0.01(ip為腹腔注射)由表4.1-1可見，PUO、PUE、PUP對輻射有一定的保護(hù)作用，與對照組比較，平均存活時間提高0.80倍。
4.2 PUO、PUE、PUP對抗環(huán)磷酰銨所致的白細(xì)胞下降的作用取體重22gIRC小鼠40只，給藥組腹腔注射PUO、PUE、PUP至第7天，另注射環(huán)磷酰銨2mg，然后繼續(xù)給藥兩天，給藥前后按常規(guī)檢查白細(xì)胞數(shù)，結(jié)果見表4.1-2。
表4.1-2 PUO、PUE、PUP對抗由環(huán)磷酰銨引起的白細(xì)胞降低的作用 *P＜0.001由表4.1-2可見，PUO、PUE、PUP有明顯對抗由環(huán)磷酰銨引起的白細(xì)胞下降的作用。
5、PUO、PUE、PUP的抗炎作用取體重250-300gSD大白鼠10只，按文獻(xiàn)方法，大白鼠足趾腫脹法進(jìn)行試驗。用0.1ml10％的雞蛋清溶液致炎，結(jié)果見表5-1。
表5-1 PUO、PUE、PUP對抗炎癥的作用 P＜0.01由表5-1可見，PUO、PUE、PUP在致炎后1h即表現(xiàn)出較好的對抗炎癥的作用。
6、PUO、PUE、PUP對3H-亮氨酸摻入血清蛋白的影響取體重14-16gICR種小鼠40只，給藥組腹腔注射PUO、PUE、PUP100mg/kg×4d，摻入前禁食16h，實驗時每只鼠腹腔注射3H-亮氨酸400μci/kg(Oura H(1972)Effectof radix ginsing extract on serum protein synthsis，Chem Pharm Bull 21980-986.)結(jié)果見表6-1。
表6-1 PUO、PUE、PUP對3H-亮氨酸摻入小鼠血清蛋白質(zhì)的影響
P＜0.01由表6-1可見，PUO、PUE、PUP可促進(jìn)ICR小鼠血清蛋白的生物合成，與對照組比較，摻入量可平均增加65％。
7、PUO、PUE、PUP對降血脂的作用7.1 PUO、PUE、PUP對正常小鼠血清膽固醇的影響取雄性小鼠，隨機分組。連續(xù)給藥4d，末次給藥后4h取血，測血清膽固醇。對照組TG(mg/dl)為111.73±13.83，試驗組150-200mg/kg4d，TC值分別為107.71±12.5和103.24±15.55，P＞0.05(n＝10)，表明PUO、PUE、PUP對正常小鼠血清膽固醇含量無明顯影響。
7.2對預(yù)防高膽固醇血癥形成的作用取雄性小鼠，隨機分成高膽固醇血癥試驗對照組、正常對照組和高低劑量給藥組。禁食4h后，給藥組PO灌胃。2h后，給藥組和高膽固醇血癥組均靜脈注射75％蛋黃乳劑0.5ml。20h后尾靜脈取血測血清膽固醇含量。結(jié)果(見表7.1)表明，小鼠分別PO、PUO、PUE、PUP100、150、200、100mg/kg.血清膽固醇含量分別下降15％和23％(P＜0.05)表7.1 PUO、PUE、PUP對小鼠血清總膽固醇含量的影響(X±S)
P＜0.05與試驗對照組比較7.3對高脂血癥大鼠血脂影響取雄性大鼠，分成正常對照組、高脂對照組和高低劑量給藥組。后3組喂養(yǎng)高脂膽固醇飼料10d[3]，同時給藥組連續(xù)給藥10d，正常對照組和高脂對照組po等量生理鹽水。第10天禁食12h后，心臟穿刺取血，用高鐵-硫酸法測定血清總膽固醇(TC)；正庚烷-異丙醇混合液提取法測定血清甘油三酯(TG)；肝素-氯化錳比濁法則定血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)；磷鎢酸鈉-鎂沉淀法測定血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。結(jié)果(見表7.2)表明，大鼠po30mg/kg PUO、PUE、PUP，高脂血癥大鼠血清TC，TG和LDL-C分別降低29％，18％和22％；HDL-C/TC提高41％。
表7.2PUO、PUE、PUP對小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、HDL-C/TC的影響(X±S)
P＞0.05*P＜0.05**P＜0.01與陽性對照組比較
權(quán)利要求
1.本發(fā)明扁核木提取物分為水溶性的多糖PUP，油狀物的PUO，醇溶性的PUE均具有調(diào)節(jié)免疫、抗輻射、升白細(xì)胞、抗炎癥、降血脂等用途；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述，本發(fā)明為扁核木分離與提取方法；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述，服用的劑量的范圍30-200mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明的扁核木提取物有PUO、PUE、PUP，均具有調(diào)節(jié)免疫、抗輻射、升高白細(xì)胞、抗炎癥、降血脂等作用，本發(fā)明廣泛涉及保健食品、藥品、食品領(lǐng)域，該產(chǎn)品適用于藥廠、保健食品廠生產(chǎn)。
文檔編號A61P35/00GK1657090SQ20041003958
公開日2005年8月24日 申請日期2004年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月18日
發(fā)明者丁慶 申請人:丁慶