專利名稱：糖尿病的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用胰島再生療法和免疫抑制劑治療糖尿病受試者的方法和組合物，用于局部輸送和組合物持續(xù)釋放的制劑和方法。
背景技術(shù)：
常見病糖尿病的嚴(yán)重類型是由于胰腺β細(xì)胞胰島素分泌的缺乏或相對不足所致。所以，糖尿病依賴注射外源胰島素以預(yù)防危害生命的高血液葡萄糖(高血糖)并發(fā)癥。除非受試者依賴于非常高的葡萄糖測試和胰島素治療(強(qiáng)化胰島素治療)的方案，否則胰島素治療不能防止高血糖所導(dǎo)致的器官損害的慢性長期并發(fā)癥。強(qiáng)化胰島素治療增加了由于胰島素過量引起的急性低血糖風(fēng)險(xiǎn)，伴有可能是致命的急性和嚴(yán)重的意識狀態(tài)改變。
在美國人口中大約一百萬人患有少年型或I型糖尿病，每年出現(xiàn)大約30,000個(gè)新發(fā)病例。此外，在流行病比例的水平上，II型糖尿病(也稱為成年發(fā)病或胰島素抵抗性糖尿病)受試者的數(shù)量極端龐大并且迅速增加，一種可導(dǎo)致胰腺耗盡和胰島素不足的疾病。
異常高的血液葡萄糖(高血糖)是糖尿病的特點(diǎn)，如果放任不治療，將導(dǎo)致各種病理狀態(tài)，例如，不能治愈的外周血管潰瘍、導(dǎo)致失明的視網(wǎng)膜損害、以及腎衰竭。I型和II型糖尿病都用注射胰島素治療，對通過受試者葡萄糖自身監(jiān)控測定的血液葡萄糖水平產(chǎn)生應(yīng)答，盡管不是所有II型受試者都會進(jìn)展到需要胰島素治療。典型地，每天輸送受試者多倍劑量的胰島素。糖尿病的嚴(yán)重的病理結(jié)果與血液葡萄糖水平控制不嚴(yán)格有關(guān)。
糖尿病的可能治療將是恢復(fù)β細(xì)胞功能以便對血液葡萄糖水平的變化產(chǎn)生應(yīng)答而動態(tài)調(diào)節(jié)胰島素釋放。這可通過胰腺移植完成，但是這種方法典型地限于腎衰竭需要腎臟移植的糖尿病。同樣地，胰腺移植可能需要終生免疫抑制以防止同種異體移植物排異和移植胰腺的自身免疫破壞。
最近，分離的人胰島制品的移植物已經(jīng)在人類受試者中成功地長時(shí)間逆轉(zhuǎn)了胰島素糖尿病。然而，對每名受者來說需要大量供體胰島細(xì)胞材料，而胰島細(xì)胞材料的供應(yīng)不能足以滿足需要。
概述本發(fā)明的特色是治療糖尿病的方法，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的包括胃泌素/CCK受體配體和補(bǔ)充用于胰島再生治療的胃泌素的因子(FACGINT)的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。
如這里使用的術(shù)語，F(xiàn)ACGINT是選自下組中的至少一種胰高血糖素樣肽1受體配體；胰高血糖素樣肽2受體配體；腸抑胃肽(GIP)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體；二肽基肽酶IV抑制劑；REG蛋白受體配體；生長激素受體配體；催乳素(PRL)受體配體；胰島素樣生長因子(IGF)受體配體；PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體配體，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)受體配體；層粘連蛋白受體配體；血管活性腸肽(VIP)受體配體；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體配體；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體；活化素A受體配體；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體和促胰液素受體配體。
如這里使用的，術(shù)語“糖尿病”意思是胰島素短壽、產(chǎn)生抗胰島素抗體、或者血液糖過量的任何生理指示。糖尿病舉例說明，但不限于I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、以及前驅(qū)糖尿病狀態(tài)。如這里使用的，術(shù)語“哺乳動物”具有哺乳動物任何成員的通常含義，包括人。
在相關(guān)的實(shí)施方案中，F(xiàn)ACGINT是胰高血糖素樣肽1(GLP-1)受體配體；胰高血糖素樣肽2(GLP-2)受體配體；或者生長激素受體配體家族成員，可以是生長激素，如人生長激素(HGH)、胎盤催乳素(PL)、或者催乳素(PRL)、或者exendin，如exendin-4。
本發(fā)明的另一個(gè)特色是提供治療糖尿病的方法，該方法包括將大量細(xì)胞與具有FACGINT和胃泌素/CCK受體配體中的至少一種的組合物離體接觸，只要FACGINT不是EGF受體配體；將該細(xì)胞施用于需要進(jìn)行施用的哺乳動物，因而治療糖尿病。在該方法的一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞是自體的，即，來自受試者?？晒┻x擇地，細(xì)胞是來自相同物種中的另一個(gè)體，或者甚至來自另一個(gè)物種。在離體使用細(xì)胞的方法中，細(xì)胞可以是胰腺導(dǎo)管細(xì)胞。胰腺細(xì)胞是胰島前體細(xì)胞的來源。這種方法的另一個(gè)實(shí)施方案包括，在移植步驟前，用該組合物離體處理細(xì)胞。相關(guān)的方法進(jìn)一步包括，接觸步驟前，離體培養(yǎng)該細(xì)胞。
通常，術(shù)語“給藥”或“接觸”意思是向方法的使用者提供提高哺乳動物中胰島素分泌細(xì)胞量的有效量的組合物。
通常在這些方法中，組合物是全身給藥。此外，組合物中FACGINT的量基本上小于在缺乏胃泌素/CCK受體配體時(shí)減少糖尿病哺乳動物中血液葡萄糖所需FACGINT的最小有效量。該方法可進(jìn)一步包括測量選自下組的參數(shù)血液葡萄糖、血清葡萄糖、血液糖基化的血紅蛋白、胰腺β細(xì)胞團(tuán)、血清胰島素、胰腺胰島素含量、以及形態(tài)度量測定的β細(xì)胞團(tuán)?？偟膩碚f，糖尿病診斷領(lǐng)域的技術(shù)人員將在禁食后測量血液或血清中的葡萄糖水平，即，在受試者或受試者未進(jìn)食期間，這種診斷的典型持續(xù)時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)測量是測定空腹血液葡萄糖，或FBG。
體內(nèi)方法這里可進(jìn)一步包括測量選自下組的參數(shù)胰島素分泌細(xì)胞的量、胰島素分泌細(xì)胞的葡萄糖反應(yīng)性、胰島前體細(xì)胞增殖的量、以及成熟胰島素分泌細(xì)胞的量，這些測量在哺乳動物中進(jìn)行，其中該哺乳動物是實(shí)驗(yàn)動物如遺傳性糖尿病小鼠(NOD小鼠)或者被誘導(dǎo)(用鏈脲佐菌素(streptozoticin)或STZ)患糖尿病的嚙齒動物。
這里另一個(gè)實(shí)施方案是在哺乳動物中誘導(dǎo)胰腺胰島再生的方法，其中給哺乳動物施用包括FACGINT和胃泌素/CCK受體配體組合的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體，給予足以提高胰腺組織中胰島前體細(xì)胞增殖的量，因此誘導(dǎo)胰腺胰島再生。
這里另一個(gè)實(shí)施方案是誘導(dǎo)哺乳動物中胰腺胰島再生的方法，該方法包括給予包含F(xiàn)ACGINT和胃泌素/CCK受體配體組合的組合物，其中FACGINT不是EGF受體配體，給予足以提高哺乳動物中胰腺胰島分泌β細(xì)胞數(shù)量的量。
因此，本發(fā)明的實(shí)施方案是包括胃泌素/CCK受體配體和FACGINT的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。在一些實(shí)施方案中提供誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞增殖形成成熟胰島素分泌細(xì)胞數(shù)量增加的有效劑量的組合物。類似地，在一些實(shí)施方案中提供誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化形成成熟胰島素分泌細(xì)胞的有效劑量的組合物。
可提供含有藥學(xué)可接受載體的組合物。
這里也提供治療糖尿病的試劑盒，含有包括胃泌素/CCK受體配體和FACGINT的組合物、容器、以及使用說明，只要FACGINT不是EGF受體配體?？商峁┖幸粋€(gè)或多個(gè)單位劑量的少量組合物。試劑盒的組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)可接受的載體。
本發(fā)明這里的另一個(gè)特色是在植入細(xì)胞的糖尿病受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞的方法，其包括在受體中植入干細(xì)胞，以及給受體施用含有有效劑量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT中的每一種的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。在這個(gè)方法中，例如可從人或豬中獲得細(xì)胞。此外，從胰島、臍帶、胚胎、或干細(xì)胞系中獲得植入的細(xì)胞?？晒┻x擇地，在細(xì)胞的糖尿病受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞的方法是在受體中植入細(xì)胞；以及給予包括有效劑量的胃泌素/CCK受體配體、以及FACGINT或EGF受體配體中的每一種的持續(xù)釋放組合物。
總的來說根據(jù)這些方法，胃泌素/CCK受體配體是胃泌素。在相關(guān)的實(shí)施方案中，胃泌素是胃泌素-17，例如，胃泌素是人胃泌素1-17Leu15。
此外，根據(jù)這些方法，在受體中植入細(xì)胞是使用如直接注射到器官以及靜脈內(nèi)給藥的途徑。注射細(xì)胞局部輸送到器官中，例如，胰腺、腎臟、以及肝臟。此外，注射細(xì)胞經(jīng)皮或穿肝輸送到門靜脈。在這些方法的任何一種中，可將導(dǎo)管插入到來自或通往器官的靜脈或動脈中，在操作期間使用成像技術(shù)，如超聲或MRI。
局部輸送細(xì)胞可選自幾種技術(shù)，包括經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針輸送(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)。在這些技術(shù)中，在操作期間使用者可通過包括超聲或MRI的幾種成像技術(shù)中的一種引導(dǎo)。
本發(fā)明提供的另一個(gè)特色是減少治療人糖尿病所需移植干細(xì)胞量的方法，該方法包括給受體施用有效劑量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT中的每一種，與在缺乏給予其它相同受體有效劑量時(shí)植入細(xì)胞相比，細(xì)胞的量減少，只要FACGINT不是EGF受體配體。
在本發(fā)明的相關(guān)實(shí)施方案中，發(fā)明提供包括胃泌素/CCK受體配體和至少一種FACGINT的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。提供含有有效誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化形成成熟胰島素分泌細(xì)胞劑量的組合物。可進(jìn)一步提供含有藥學(xué)可接受載體的組合物。
提供治療糖尿病的試劑盒，該試劑盒含有包括至少一種FACGINT的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體，以及胃泌素/CCK受體配體、容器、和使用說明。
上述方法中的任何一種可進(jìn)一步包括給受試者施用抑制免疫反應(yīng)的試劑。在上述方法中的任何一種中，組合的組分可同時(shí)輸送，例如，在1小時(shí)內(nèi)或在一天內(nèi)，或者可循序輸送，例如，以超過一天、超過兩天或者更多天、超過一周的間隔。
抑制免疫反應(yīng)的示范性的試劑是藥物，例如，是下組中的至少一種雷帕霉素；皮質(zhì)類甾醇；硫唑嘌呤；霉酚酸酯；環(huán)孢菌素；環(huán)磷酰胺；氨甲蝶呤；6-巰基嘌呤；FK506；15-去氧精胍菌素；FTY 720；米托蒽醌；2-氨基-1，3-丙二醇；2-氨基-2[2-(4-辛基苯基)乙基]丙烷-1，3-二醇鹽酸；6-(3-二甲基-氨基丙酰)弗司扣林；以及demethimmunomycin。
可供選擇地，抑制免疫反應(yīng)的示范性試劑是蛋白質(zhì)，例如，該蛋白包含抗體的氨基酸序列。因此，抑制免疫反應(yīng)的試劑是下列中的至少一種hul 124；BTI-322；allotrap-HLA-B270；OKT4A；Enlimomab；ABX-CBL；OKT3；ATGAM；巴利昔單抗；達(dá)克珠單抗；即復(fù)寧(thymoglobulin)；ISAtx247；Medi-500；Medi-507；Alefacept；依利佐單抗；英夫利昔單抗；以及干擾素。循序地給予胰島再生治療組合物和抑制免疫反應(yīng)的試劑或者可同時(shí)給藥。
在某些實(shí)施方案中，全身給予胰島再生治療組合物和抑制免疫反應(yīng)的試劑中的至少一種。例如，胰島再生治療組合物作為丸劑施用。因此，通過靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、或者肌內(nèi)途徑給予胰島再生治療組合物和抑制免疫反應(yīng)的試劑中的至少一種。此外，在某些實(shí)施方案中，口服給予抑制免疫反應(yīng)的試劑。通常，抑制免疫反應(yīng)的試劑是FK506、雷帕霉素、和達(dá)克珠單抗中的至少一種。此外，根據(jù)這里不同于那些要求測量某些實(shí)驗(yàn)參數(shù)方法中的任何一種的實(shí)施方案，受試者是人。
這里的用于治療糖尿病受試者的試劑盒也是一種特色，試劑盒包括容器、免疫抑制劑以及包含F(xiàn)ACGINT的INT組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。
這里也提供I.N.T.TM治療組合物的持續(xù)釋放的藥物組合物，該組合物包括胃泌素受體配體；和EGF受體配體或FACGINT；其中胃泌素受體配體、或者EGF受體配體或FACGINT中的至少一種是持續(xù)釋放制劑。
這種組合物可進(jìn)一步包括免疫抑制劑。持續(xù)釋放制劑的示范性實(shí)施方案是至少一種組合物組分的聚乙二醇化，以及至少一種組分處于基于多泡脂質(zhì)的脂質(zhì)體中的制劑。EGF受體配體的實(shí)例是選自EGF和TGFα。FACGINT的實(shí)例是選自下組中的至少一種胰高血糖素樣肽1受體配體；胰高血糖素樣肽2受體配體；腸抑胃多肽(GIP)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體；二肽基肽酶IV抑制劑；REG蛋白受體配體；生長激素受體配體；催乳素(PRL)受體配體；胰島素樣生長因子(IGF)受體配體；PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體配體，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)受體配體；層粘連蛋白受體配體；血管活性腸肽(VIP)受體配體；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體配體；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體；活化素A受體配體；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體；以及促胰液素受體配體?？晒┻x擇地，EGF受體配體是低分子量藥物。組合物可被配制成用于腸胃外給藥?？晒┻x擇地，組合物可被配制成用于口服給藥。
組合物可被配制成用于選自皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)以及肌內(nèi)注射途徑給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，胃泌素受體配體、或者EGF受體配體或FACGINT中的至少一種被配制成用于全身給藥。
此外，上述組合物可被配制成用于局部輸送，例如，靶向胰腺的局部輸送。局部輸送的示范類型包括經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)。在操作期間，這些可結(jié)合成像技術(shù)如超聲或MRI進(jìn)行。
在一些實(shí)施方案中，組合物被配制成用于選自經(jīng)皮和粘膜輸送的給藥途徑。這些組合物中的任何一種可配制成用于通過機(jī)械裝置輸送，聯(lián)合持續(xù)釋放制劑，或者可供選擇地使用機(jī)械裝置在持續(xù)的時(shí)間輸送制劑。裝置是，例如，可降解的植入物；經(jīng)皮貼片；導(dǎo)管；可植入泵；經(jīng)皮泵；輸液泵；以及離子電滲療法裝置。
可將上述組合物以及藥物組合物配制成適于選自下列途徑給藥皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)以及胰內(nèi)。例如，靜脈內(nèi)途徑是注入到門靜脈?？墒褂醚b置，該裝置可以是泵。用持續(xù)釋放制劑和用上述方法和組合物中的一些，可局部給藥。例如，可通過選自下組的途徑輸送而局部給藥經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)?？晒┻x擇地用持續(xù)釋放制劑和裝置，可全身給藥。可提供含有有效劑量的藥物組合物。這里包括上述持續(xù)釋放制劑中的任何一種的組合物的至少一種劑量的試劑盒也是一種特色。
減少用I.N.T.TM組合物治療糖尿病受試者的頻率的方法也是一種特色，該方法包括將至少一種組合物的組分制備成持續(xù)釋放制劑；以及根據(jù)治療之間的時(shí)間間隔長于未如此配制和其它方面完全相同的組合物的方案給受試者施用組合物?？赏ㄟ^選自下列的途徑輸送給藥經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；或者注射到肝動脈內(nèi)。在這些操作期間可使用成像技術(shù)指導(dǎo)導(dǎo)管放到適當(dāng)?shù)奈恢谩?br> 提高糖尿病受試者中I.N.T.TM組合物功效的方法也是一種特色，該方法包括給受試者施用具有至少一種組合物的組分被配制成產(chǎn)生持續(xù)釋放的I.N.T.TM組合物；比較給予該組合物量治療受試者的功效與不具有這樣配制的組分和其它方面完全相同的組合物的功效，通過測定減少或消除受試者糖尿病癥狀所需的持續(xù)釋放配制試劑的量降低，使得具有持續(xù)釋放配制組合物的I.N.T.TM組合物的功效提高。在本方法的一個(gè)實(shí)施方案中，比較功效是進(jìn)一步分析組合物的毒性，使得與不具有這樣配制的組分和其它方面完全相同的I.N.T.TM組合物的毒性相比，給予組合物后較少的或較輕微的有害癥狀表明具有至少一種組分被配制產(chǎn)生持續(xù)釋放的組合物的毒性降低。在這些方法中的任何一種中，組分的示范性的持續(xù)釋放制劑是聚乙二醇化和基于多泡脂質(zhì)的脂質(zhì)體。
在這些提高I.N.T.TM組合物功效方法的任何一種中，具有持續(xù)釋放制劑的組分是選自EGF和TGFα的EGF受體配體?？晒┻x擇地，在這些方法的實(shí)施方案中，F(xiàn)ACGINT是選自下組中的至少一種胰高血糖素樣肽1受體配體；胰高血糖素樣肽2受體配體；腸抑胃多肽(GIP)受體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體；二肽基肽酶IV抑制劑；REG蛋白受體配體；生長激素受體配體；催乳素(PRL)受體配體；胰島素樣生長因子(IGF)受體配體；PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體配體，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)受體配體；層粘連蛋白受體配體；血管活性腸肽(VIP)受體配體；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體配體；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體；活化素A受體配體；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體；以及促胰液素受體配體。甚至進(jìn)一步作為替換物，組分是低分子量藥物。在這些任何一種方法中，給藥是通過選自下組中的途徑輸送腸胃外、口服、經(jīng)皮、皮下、粘膜、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、胰內(nèi)以及肌內(nèi)。
例如，給藥產(chǎn)生局部分布。此外，該方法包括給予有效劑量的組合物。甚至進(jìn)一步，該方法包括，在給藥前，將組合物配制成適于使用持續(xù)釋放裝置。例如，該裝置選自可降解的植入物；經(jīng)皮貼片；導(dǎo)管；可植入泵；經(jīng)皮泵；輸液泵；以及離子電滲療法裝置。例如，該裝置是泵。在這些方法中的任何一種中，給藥可以是通過靜脈內(nèi)途徑注射到門靜脈內(nèi)。
減少治療糖尿病受試者的頻率的方法也是一種特色，該方法包括制備通過長時(shí)間連續(xù)釋放給受試者施用I.N.T.TM組合物的裝置；向受試者提供裝置；以及通過替換或重新充填裝置反復(fù)治療受試者，例如，裝置是泵。泵可以是經(jīng)皮泵；碳氟(flurorcarbon)推進(jìn)劑泵；滲透泵；微滲透泵；可植入泵；或者輸液泵?？晒┻x擇地，裝置選自下組可降解的植入物；非降解的植入物；粘膜粘附植入物；經(jīng)皮貼片；導(dǎo)管；以及離子電滲療法裝置。示范性的非降解的植入物是硅橡膠。可降解的植入物的其它實(shí)例可以是選自下組材料中的至少一種淀粉；乙烯基淀粉；二丙二醇酯二丙烯酸酯(DPGDA)；三丙二醇酯二丙烯酸酯(TPGDA)；果膠；乙酰纖維素；丙酸纖維素；乙酸丁酸纖維素；乙酸丙酸纖維素(CAP)；羥丙基纖維素(HPC)；羥丙基纖維素/乙酸丙酸纖維素(HPC/CAP)；甲基丙烯酸甲酯(MMA)；甲基丙烯酸丁酯(BMA)；羥甲基丙烯酸甲酯(HEMA)；乙酸乙基己酯(EHA)；甲基丙烯酸十八酯(ODMA)；以及乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)。
在細(xì)胞的糖尿病受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞的方法也是一種特色，具有步驟在受體中植入細(xì)胞；和給予包括有效劑量的胃泌素/CCK受體配體；以及FACGINT或EGF受體配體中的每一種的持續(xù)釋放組合物，其中在受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞。
治療糖尿病的包括胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體配體和胃泌素/CCK受體配體的組合物也是一種特色。例如，GLP-1受體配體是GLP-1。治療糖尿病的包括生長激素(GH)受體配體和胃泌素/CCK受體配體的組合物也是一種特色。例如，GH是人生長激素(HGH)。治療糖尿病的包括催乳素(PL)受體配體和胃泌素/CCK受體配體的組合物也是一種特色。例如，PL是人PL。在這些組合物的任意一種中，示范性的胃泌素是第15位氨基酸是亮氨酸殘基的具有17個(gè)氨基酸的胃泌素I。這些組合物中的任何一種可進(jìn)一步具有免疫抑制劑。可將這些組合物中的任何一種進(jìn)一步配制成用于持續(xù)釋放。
給受試者施用包括胃泌素/CCK受體配體和胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體配體組合物的治療糖尿病受試者的方法也是一種特色。給受試者施用包括胃泌素/CCK受體配體和生長激素(GH)受體配體的組合物的治療糖尿病受試者的方法也是一種特色。給受試者施用包括胃泌素/CCK受體配體和催乳素(PL)受體配體的組合物的治療糖尿病受試者的方法也是一種特色。這些方法中的任何一種可包括給予免疫抑制劑。這些方法中的任何一種可進(jìn)一步包括使用持續(xù)釋放裝置給予受體配體或試劑中的至少一種。這些方法中的任何一種可進(jìn)一步包括將受體配體或試劑中的至少一種配制成持續(xù)釋放。這些方法中的任何一種可用于患I型糖尿病或II型糖尿病的糖尿病受試者。
在純化胰島的移植物的糖尿病受試者受體中擴(kuò)大胰島移植物的功能性β細(xì)胞團(tuán)的方法也是一種特色，該方法給予哺乳動物有效劑量的胃泌素CCK受體配體和FACGINT。
包括將胰島制品移植到糖尿病受試者中；以及給予受試者有效劑量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT的治療人糖尿病的方法也是一種特色。因此在這種方法中，F(xiàn)ACGINT包括其是催乳素的催乳素受體配體。
具體實(shí)施方案的詳細(xì)描述胰島再生治療的組合物(I.N.T.TM)包括胃泌素/CCK受體配體，以及EGF受體配體或補(bǔ)充胃泌素胰島再生治療因子(FACGINT)。
通過施用FACGINT和胃泌素/CCK受體配體，例如，胃泌素的組合，糖尿病的治療產(chǎn)生了超過單獨(dú)用任何單一組分治療的令人驚奇水平的效力、功效和效用的增加。由于這種原因，這里使用的術(shù)語FACGINT意思是對胃泌素給藥的“補(bǔ)充”。術(shù)語“補(bǔ)充”并不一定必須指隱含胃泌素和FACGINT之間的協(xié)同作用，相反該術(shù)語意思是與施用胃泌素和FACGINT相比，以組合中所用劑量的聯(lián)合給藥對于糾正糖尿病更有效。
這里使用的與特殊配體的受體有關(guān)的術(shù)語“受體配體”將意味著結(jié)合、相互作用、或刺激該受體的任何組合物或化合物。
術(shù)語“FACGINT”包括大量各種生長因子和生長激素、修飾因子激素中的一個(gè)或多個(gè)的試劑、在這些生長激素和生長因子的結(jié)合中所涉及的一個(gè)或多個(gè)受體的配體和效應(yīng)器，與這些術(shù)語通常理解的含義相同，舉例但不限于PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體如PTHrP(PTHrP；Garcia-Ocana，A.等，2001，J.clin.Endocrin.Metab.86984-988)；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體如HGF(HGF；Nielsen，J.等，1999，J Mol Med 7762-66)；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)如FGF，角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體如KGF；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體如NGF；腸抑胃多肽(GIP)受體如GIP；轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)受體配體如TGFβ(2002年6月13日公開的美國專利申請2002/0072115)，層粘連蛋白受體配體如層粘連蛋白-1；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體如INGAP；骨形態(tài)發(fā)生因子(BMP)受體配體如BMP-2；血管活性腸肽(VIP)受體配體如VIP；胰高血糖素樣肽-1受體配體如GLP-1和exendin-4，胰高血糖素樣肽2(GLP-2)受體配體如GLP-2，以及通過完全抑制所涉及的酶，間接影響GLP-1水平的二肽基肽酶IV抑制劑(Hughes，T.等，2002，Am Diabetes AssocAbstract 272-or)；REG受體配體如REG蛋白；生長激素(GH)受體配體如GH，催乳素(PRL)受體配體如PRL和胎盤催乳素(PL)；胰島素樣生長因子(1型和2型)受體配體如IGF1和IGF-2；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體如EPO(http∥www.drinet.org/html/august_2002._htm)；β細(xì)胞素(betacellulin)(也被認(rèn)為是EGF家族的成員)；活化素A受體配體如活化素-A；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體如VEGF；骨形態(tài)發(fā)生因子(BMP)受體配體如BMP-2；血管活性腸肽(VIP)受體配體如VIP；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體如VEGF；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體如PACAP；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體如G-CSF；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)受體配體如GM-CSH；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體如PDGF以及促胰液素受體配體如促胰液素。
對于這里被表示為是示范性FACGINT的生長因子、酶、酶抑制劑、肽、蛋白和激素化合物中的任何一種，所有已知類似物、變體、以及衍生物，無論天然發(fā)生的或者通過誘變或設(shè)計(jì)和合成制備的都應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是等同于FACGINT。偶聯(lián)物也被認(rèn)為在等同物中，即，通過添加一種或多種化學(xué)基團(tuán)衍生的組合物，及其混合物。可改變編碼基因，例如，通過寡核苷酸誘變產(chǎn)生FACGINT類似物，如人重組類似物。此外，可通過定向誘變改變一個(gè)或多于一個(gè)氨基酸殘基本身或位置。可通過偶聯(lián)物增加蛋白的一級氨基酸序列，如通過糖基化、?；?、或者通過添加任何其它補(bǔ)充分子，如一個(gè)或多個(gè)脂類、磷酸鹽、和/或乙?；?。此外，可通過氧化、還原、或者其它衍生化修飾鏈中的單個(gè)氨基酸殘基。可切割FACGINT獲得保留活性的任何片段。FACGINT的激動劑、前體藥物或者代謝產(chǎn)物等同于FACGINT?？蓪⒄麄€(gè)多肽或蛋白或者任何片段與任何其它肽或蛋白融合，如免疫球蛋白和其它細(xì)胞因子。性質(zhì)上是蛋白質(zhì)的FACGINTs的變體可由初級轉(zhuǎn)錄本的選擇性剪接、蛋白水解切割或其它翻譯后修飾產(chǎn)生，包括二聚作用、聚合作用、磷酸化、糖基化、硫酸化以及脫酰胺作用。偶聯(lián)物可包括，例如，包含偶聯(lián)到非天然發(fā)生的聚合物上的FACGINT的組合物，其中聚合物包含聚亞烷基二醇部分。該術(shù)語也包括通過化學(xué)方法修飾親代肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基獲得的衍生物，例如通過烷基化、?；⑿纬甚セ蛐纬甚０?。此外，誘導(dǎo)FACGINT合成或者模擬FACGINT作用的試劑被認(rèn)為是等同化合物。單數(shù)形式的“FACGINT”可以指這里所示的示范性FACGINTs中的任何一種或多種化合物。
這里在術(shù)語的幾個(gè)用法中，詳盡說明了術(shù)語FACGINT不包括EGF受體配體，同樣在上下文中也很清楚。然而，EGF受體配體如EGF和TGF能夠補(bǔ)充胃泌素用于糾正糖尿病狀態(tài)，而且因此是這里所定義的示范性FACGINTs，作為組分包含在這里的組合物、方法和試劑盒的其它實(shí)施方案中。以前描述了包括聯(lián)合胃泌素/CCK受體配體給予EFG受體配體的I.N.T.治療的某個(gè)實(shí)施方案(美國專利號5,885,956和6,288,301)，這些參考文獻(xiàn)不使用如這里所示的某些組合和制劑中的這些試劑。
這里使用的術(shù)語“胰腺祖細(xì)胞”或者“β細(xì)胞祖先”或者“胰島前體細(xì)胞”是能夠分化形成胰腺β胰島細(xì)胞的前體細(xì)胞，其可能有或者可能沒有干細(xì)胞的能夠以無限方式自我復(fù)制的特性?！唉录?xì)胞再生”或者“胰島再生”意思是通過分化形成新的β細(xì)胞，其可能有或者可能沒有干細(xì)胞的能夠以無限方式自我復(fù)制的特性。以“葡萄糖反應(yīng)性”方式分泌胰島素意思是根據(jù)血液中的葡萄糖濃度分泌胰島素。在生理機(jī)能正常的哺乳動物中，隨著血液葡萄糖水平的提高，胰島的β細(xì)胞分泌胰島素，即，對血液葡萄糖水平產(chǎn)生應(yīng)答而誘導(dǎo)分泌胰島素。
受體“激動劑”是沒有限制的任何組合物，例如，在哺乳動物中內(nèi)源性發(fā)現(xiàn)的多肽生長因子或細(xì)胞因子、或者變體或其部分，或者類似物，或者任何擬肽(peptidomimetic)或低分子量藥物，其具有結(jié)合和活化內(nèi)源性發(fā)現(xiàn)的多肽因子的受體的能力。對于這里描述的生長因子或細(xì)胞因子中的任何一種，等同物被認(rèn)為是在氨基酸序列上基本相同的物質(zhì)，例如，與這里描述的天然存在的肽或蛋白有50％序列相同、有60％序列相同、有70％序列相同、或者有80％序列相同。在其它實(shí)施方案中，激動劑組合物這里包括激動劑誘導(dǎo)劑，其被想象為當(dāng)給予動物或提供給培養(yǎng)物中的細(xì)胞、器官或組織時(shí)，能夠增加動物、細(xì)胞、器官或組織所產(chǎn)生的激動劑的量的物質(zhì)。例如，催乳素釋放肽刺激催乳素的分泌。受體配體在定義的范圍內(nèi)包括受體激動劑，對任何特定FACGINT的受體，無論激動劑是否在結(jié)構(gòu)上與FACGINT有關(guān)。
本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中提供通過給予包含胃泌素/CCK受體配體，例如胃泌素，以及FACGINT，例如GLP-1、PRL或GH兩者的組合物治療糖尿病狀態(tài)如糖尿病的方法。不被任何特殊的機(jī)理所限制，以每種足以影響胰島前體細(xì)胞分化成成熟胰島素分泌細(xì)胞的量提供胃泌素/CCK受體配體和FACGINT。組合物中FACGINT和胃泌素/CCK受體配體的每一種都可以全身或者局部給藥?？晒┻x擇地，F(xiàn)ACGINT和胃泌素/CCK受體配體中的一種或者兩者，可被提供了含有核酸融合構(gòu)建體的表達(dá)載體的細(xì)胞原位表達(dá)。融合構(gòu)建體典型地包括前胃泌素原(preprogastrin)肽前體編碼序列，以及也包括FACGINT的編碼序列。
給予胃泌素/CCK受體配體和EGF受體配體可達(dá)到延長胰島細(xì)胞再生的功效，這樣治療的好處保持到治療停止后很久。見2002年7月18日公開的PCT申請PCT/US02/00685(WO 02/055152)。治療好處的持續(xù)時(shí)間長于給予組合物方案的持續(xù)時(shí)間。
用提供的治療糖尿病，特別是少年發(fā)病的糖尿病的組合物和方法，以及通過治療性給予因子的這種組合或者提供用于全身給藥，或用于在胰腺內(nèi)原位表達(dá)的組合物，獲得殘留多能胰腺導(dǎo)管細(xì)胞再生分化形成成熟的胰島素分泌細(xì)胞。
消除需要細(xì)胞移植的β細(xì)胞置換的方法是刺激β細(xì)胞再生。盡管早期研究提出β細(xì)胞具有有限的再生能力，現(xiàn)在已經(jīng)逐漸認(rèn)識到胰腺的胰島素分泌β細(xì)胞包括動態(tài)細(xì)胞群。β細(xì)胞團(tuán)可通過現(xiàn)存的β細(xì)胞的增殖(β細(xì)胞復(fù)制)而擴(kuò)大。在妊娠期間，催乳素、生長激素(Holstad，M.等，J.Endocrinol.163229-234)、以及胎盤催乳素(Nielsen，J.H.，等，J.Mol.Med.7762-66，1999)刺激β細(xì)胞的增殖增大細(xì)胞團(tuán)。然而，細(xì)胞團(tuán)的這種擴(kuò)大依賴持續(xù)的激素刺激。分娩后，對催乳素和胎盤催乳素的降低產(chǎn)生應(yīng)答導(dǎo)致擴(kuò)大的細(xì)胞團(tuán)減小到非妊娠水平(Logothetopoulos，J.，(Logothetopoulos，J.(1972)in Handbook ofPhysiology(Am.Physiol.Soc.，Washington，DC)，Section 7，Chapter3，pp67-76)。
從這個(gè)生理信息知道，在評價(jià)β細(xì)胞再生對給予胃泌素受體配體和EGF受體配體或者FACGINT產(chǎn)生應(yīng)答的一個(gè)重要方面是擴(kuò)大的β細(xì)胞團(tuán)是否在用生長因子的治療停止后可持續(xù)有效的時(shí)間。使用持續(xù)釋放制劑，聯(lián)合I.N.T.組合物，聯(lián)合或不聯(lián)合免疫抑制劑，可避免需要頻繁去醫(yī)療機(jī)構(gòu)，或者避免需要自我藥物治療。
根據(jù)細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞團(tuán)的增加測量β細(xì)胞的再生，導(dǎo)致血漿胰島素水平或者胰腺胰島素含量的增加。在糖尿病的治療中功效延長是I.N.T.的期望結(jié)果。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供使用FACGINT連同胃泌素/CCK受體配體治療糖尿病的改良的方法和組合物。本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中提供胃泌素和FACGINT的組合以獲得比單獨(dú)使用組分所獲得的更高的功效、效能、以及效用，導(dǎo)致組合的治療比提高。用胃泌素和FACGINT組合的治療使血液葡萄糖的減少高于單獨(dú)用組分治療后觀察到的血液葡萄糖的減少，在停止治療后血液葡萄糖長時(shí)間持續(xù)減少。這里使用的短語“FACGINT”也可意味著“一種和多種FACGINTs”或者“至少一種FACGINT”。
在患輕微糖尿病的部分胰切除模型中，β細(xì)胞刺激劑Exendin(GLP-1類似物)提高葡萄糖耐受并且增加β細(xì)胞團(tuán)(Xu，G.等，Diabetes482270-2276，1999)。然而，沒有結(jié)論性地得出提高的葡萄糖耐受和β細(xì)胞再生之間的因果關(guān)系。GLP-1，如這里所示是一種示范性的FACGINT，當(dāng)單獨(dú)給予時(shí)抑制食欲以及通過降低胰島素抵抗提高葡萄糖的清除率，一種可能與β細(xì)胞刺激無關(guān)的過程。因此，在Exendin治療組中血漿胰島素水平更低而不是更高的發(fā)現(xiàn)提示所觀察到的葡萄糖耐受的提高不是β細(xì)胞刺激的結(jié)果。此外，通過在這些研究中使用的糖尿病的胰切除模型來評價(jià)Exendin對β細(xì)胞生長影響是復(fù)雜的。由于胰腺的外科切除所致的炎癥導(dǎo)致作用于胰島的生長因子的表達(dá)，如胃泌素和TGFα，通過它們本身刺激胰島再生。實(shí)際上，已經(jīng)報(bào)道單純胰切除術(shù)后β細(xì)胞再生增加(Bonner-Weir，S.，Diabetes 421715-1720，1993；Sharma，A.，等，Diabetes 48507-513，1999)。因此，以前并不清楚在缺乏這些胰切除術(shù)誘導(dǎo)的生長因子時(shí)，Exendin可刺激β細(xì)胞再生增加。
這里使用的術(shù)語“糖尿病”意思是在任何哺乳動物中任何顯現(xiàn)的糖尿病癥狀，包括實(shí)驗(yàn)動物模型，以及包括人的各種類型，如I型和II型糖尿病、早期糖尿病、以及以胰島素輕微降低或者血液葡萄糖水平輕微升高為特點(diǎn)的前驅(qū)糖尿病狀態(tài)?！扒膀?qū)糖尿病狀態(tài)”描述了懷疑具有糖尿病或相關(guān)疾病的哺乳動物，例如，沒有正式診斷為糖尿病，但是在胰島素或葡萄糖水平方面表現(xiàn)出癥狀，由于家族史、遺傳素質(zhì)、或者II型糖尿病中的肥胖、或者以前患有糖尿病或相關(guān)疾病并有復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)導(dǎo)致易患糖尿病或者相關(guān)疾病。
如這里使用的，術(shù)語“胃泌素/CCK受體配體”包括任何結(jié)合、相互作用或刺激胃泌素/CCK受體的化合物。在2001年9月11日發(fā)表的美國專利6,288,301中給出了這種胃泌素/CCK受體配體的實(shí)例，包括胃泌素的各種形式，如胃泌素34(大胃泌素)、胃泌素17(小胃泌素)、以及胃泌素8(微小胃泌素)；各種形式的縮膽囊素如CCK 58、CCK33、CCK 22、CCK 12和CCK 8；以及其它胃泌素/CCK受體配體?？偟恼f來，胃泌素/CCK受體配體共有羧基端氨基酸序列Trp-Met-Asp-Phe-酰胺。也被考慮的是上述物質(zhì)的活性類似物、片段和其它修飾，包括肽和非肽激動劑或者胃泌素/CCK受體的部分激動劑，如A71378(Lin等，Am.J.Physiol.258(4Pt1)G648，1990)。
小型胃泌素如胃泌素17是通過肽合成經(jīng)濟(jì)地制備，合成的肽可商購。合成的人胃泌素17，如第15位氨基酸是蛋氨酸或者亮氨酸的人胃泌素17也可從Bachem AG，Bubendorf，Switzerland，和從Researchplus獲得。胃泌素/CCK受體配體也包括上述配體的活性類似物、片段和其它修飾，其例如與內(nèi)源哺乳動物胃泌素具有共同的氨基酸序列，例如具有60％序列相同、或者70％相同、或者80％相同。這樣的配體也包括增加從組織存儲部位分泌內(nèi)源胃泌素、縮膽囊素或者類似活性肽的化合物。這些化合物的實(shí)例是胃泌素釋放肽、抑制胃酸分泌的奧美拉唑(omeprazole)、以及增強(qiáng)CCK刺激的大豆胰蛋白酶抑制劑。
在需要施用的個(gè)體中，治療糖尿病的方法包括給予個(gè)體提供胃泌素/CCK受體配體和FACGINT兩者的組合物。不被任何特殊機(jī)制限制，以足以影響胰島前體細(xì)胞分化成成熟胰島素分泌細(xì)胞的劑量提供胃泌素/CCK受體配體和FACGINT。
這里使用的術(shù)語“治療”或“改善”意思是減少或消除糖尿病的一個(gè)或多個(gè)癥狀。這里提供的治療糖尿病的方法包括給予糖尿病哺乳動物，不受任何特殊機(jī)理限制，分化再生量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT，刺激胰島再生以增加胰腺中功能葡萄糖反應(yīng)性胰島素分泌β細(xì)胞的數(shù)量。該方法對糖尿病，通常包括I型或少年型糖尿病有效。胃泌素和FACGINT的組合將導(dǎo)致胰島再生反應(yīng)顯著提高，超過用單一組分所觀察到的胰島再生反應(yīng)。示范性的胃泌素/CCK受體配體是胃泌素，示范性的FACGINTs是GLP-1、PRL和GH。
這里本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是包括用胃泌素/CCK受體配體和FACGINT離體處理移植的哺乳動物的胰腺組織，以及將經(jīng)處理的胰腺組織輸入到哺乳動物中的方法。再次在這種方法中，示范性的胃泌素/CCK受體配體是胃泌素，示范性的FACGINTs是GLP-1、PRL和GH。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供胃泌素/CCK受體配體刺激的方法，該方法包括向胰腺細(xì)胞提供嵌合胰島素啟動子-胃泌素融合基因以及表達(dá)該基因。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供FACGINT刺激的方法，包括表達(dá)通過轉(zhuǎn)基因?qū)氩溉閯游锏腇ACGINT基因，例如，編碼FACGINT的基因，例如，GLP-1、PRL或GH?？深愃频赝ㄟ^轉(zhuǎn)基因提供胃泌素/CCK受體配體基因，優(yōu)選地如在美國專利號5,885,956中所示的人前胃泌素原肽前體基因。
如這里使用的術(shù)語哺乳動物應(yīng)當(dāng)無限制地包括哺乳類的任何成員，如人、無尾猿，嚙齒類如小鼠或大鼠，狗、貓，農(nóng)業(yè)上很重要的動物或者蛋白質(zhì)豬、山羊、綿羊、馬、或者無尾猿如大猩猩或黑猩猩。根據(jù)這里說明，單個(gè)哺乳動物可能是非糖尿病、糖尿病前期或者患糖尿病。
全身給藥的方式包括，但不限于，經(jīng)皮、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、以及口服途徑?？赏ㄟ^任何方便的途徑給予化合物，例如，通過輸液或單次注射、通過經(jīng)上皮或者粘膜皮膚襯(例如，口腔粘膜、直腸粘膜、陰道粘膜、鼻粘膜、以及腸粘膜，等)的吸收，以及可與其它生物活性試劑一起給藥。給藥的示范性途徑是全身給藥，例如通過皮下注射。
這里使用的術(shù)語“催乳素”意思是如這個(gè)術(shù)語在蛋白質(zhì)因子領(lǐng)域中公知，與內(nèi)源性哺乳動物的催乳素有基本序列相似性的任何多肽，例如，人催乳素，其具有催乳素的活性。內(nèi)源性人催乳素是垂體腺產(chǎn)生的199個(gè)氨基酸的多肽。該術(shù)語包括催乳素類似物，其是內(nèi)源催乳素的缺失、插入、或取代突變體，并且保留活性，包括其它物種的催乳素和天然發(fā)生的變體。催乳素的功能包括如在美國專利號6,333,031(活化氨基酸序列)和6,413,952(復(fù)合金屬的受體配體激動劑)中公開的，具有催乳素受體激動劑活性的成分，和G120RhGH，其是起催乳素激動劑作用的人生長激素類似物(Mode等，1966，Endocrinol.137(2)447-454)，以及如在美國專利5,506,107和5,837,460中描述的催乳素受體配體。也包括催乳素相關(guān)蛋白、S179D、人催乳素和胎盤催乳激素。
PRL、GH和PL是多肽激素家族的成員，具有共同的結(jié)構(gòu)、免疫學(xué)和生物學(xué)功能(綜述見，“Pancreatic Growth and Regeneration”，Ed.N.Sarvetnick，Ch.1.Brejie，T.等，1997)，因此這里稱作PRL/GH/PL家族。PRL和GH是通過脊椎動物的垂體前葉分泌。在包括滲透調(diào)節(jié)、生殖、哺乳、以及免疫調(diào)節(jié)的廣泛的生物學(xué)功能中涉及PRL。GH與生長和形態(tài)發(fā)生有關(guān)的生理過程相關(guān)。相關(guān)的受體配體被稱為“PRL/GH/PL”受體配體?；陔暮偷鞍椎慕Y(jié)構(gòu)相似性、胃泌素互補(bǔ)方面的功能相似性、一個(gè)或多個(gè)受體結(jié)合方面的功能相似性將FACGINTs分成各種不同的組，每一組都在本發(fā)明的各種實(shí)施方案的范圍之內(nèi)。催乳素受體配體包括PRL和PL，生長激素受體配體包括GH。
如這里使用的術(shù)語“GLP-1受體配體”包括結(jié)合、相互作用或者刺激GLP-1受體的任何化合物。GLP-1受體配體的實(shí)例包括GLP-1和exendin-4。胰高血糖素樣肽-1是在腸內(nèi)分泌細(xì)胞中以分子形式GLP-1(具有常規(guī)記作7-36位的殘基)合成的，其是一種酰胺，與GLP-1(7-37)類似。GLP-1生物學(xué)活性的最初研究利用GLP-1的全長N-末端延長型(1-37和1-36，后者是一種酰胺)。較大的GLP-1分子通常缺乏生物學(xué)活性。后來發(fā)現(xiàn)除去前六個(gè)氨基酸導(dǎo)致具有生物學(xué)活性大幅度增加的較短的GLP-1分子型。
發(fā)現(xiàn)循環(huán)的有生物學(xué)活性的GLP-1的大部分是GLP-1(7-36)酰胺型，也可檢測到較少量的有生物活性的GLP-1(7-37)型。見Orskov，C.等，Diabetes 1994，43335-339。兩種肽都顯示大約相同量的生物學(xué)功能。GLP-1是對營養(yǎng)物消化產(chǎn)生應(yīng)答而從腸內(nèi)分泌細(xì)胞中分泌的，在營養(yǎng)吸收后的代謝穩(wěn)態(tài)中起著多種作用。通過由二肽基肽酶(DPP-IV)介導(dǎo)的在第2位丙氨酸殘基切割造成肽的N末端降解，發(fā)生GLP-1的調(diào)節(jié)。概述，見DPP-IV。GLP-1的生物學(xué)活性包括刺激葡萄糖依賴性胰島素分泌和胰島素生物合成、抑制胰高血糖素分泌和胃排空，以及抑制食物攝取量。GLP-1似乎在GI束和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有許多額外效應(yīng)，如在Drucker，D.，Endocrin 142521-527，2001中的回顧。示范性的GLP-1組合物包括BIM 51077(抗DPP-IV消化的GLP-1類似物，可從Beaufour Ipsen獲得)；AC2592(GLP-1，從Amylin，San DiegoCA獲得)；ThGLP-1(GLP-1，修飾的氨基酸和脂肪酸連接物，從Theratechnologies，Saint-Laurent，Quebec，Canada獲得)；CJC-1131也被稱作DACTMGLP-1(基因工程改造的共價(jià)偶聯(lián)到白蛋白上的GLP-1類似物，Conjuchem，Montreal，Quebec，Canada)，LY315902和持續(xù)釋放的LY315902(DDP-IV抵抗的GLP-1類似物，從Eli Lilly，Indianapolis，IN獲得)；低分子量GLP-1模擬物；Albugon(白蛋白GLP-1融合肽，從Human Genome Sciences，Rockville，MD獲得)；Liraglutide也稱為NN2211(通過GLP-1分子的?；@得的長效GLP-1衍生物，其一旦進(jìn)入血流，將廣泛結(jié)合到防止其被DPP-IV降解并減少腎臟清除的白蛋白上，可從Novo Nordisk，Denmark獲得；Elbrond等，Diabetes Care 2002 Aug 25(8)1398-404)。
Exendin-4，exendin的一個(gè)實(shí)例，是從希拉毒蜥(Helodermasuspectum(Gila monster))毒液中獲得的新肽，與GLP-1(7-36)酰胺有53％的同源性。其功能是作為胰高血糖素樣肽1(GLP-1)受體的長效激動劑，因?yàn)樗笵DP-IV的降解。Exendin-4具有類似GLP-1的性質(zhì)，調(diào)節(jié)胃排空、胰島素分泌、食物攝取量、以及胰高血糖素分泌。exendin-4的實(shí)例包括exenatide(合成型，也稱作AC2993，Amylin)；exenatide LAR(長效型)；ZP10(添加6個(gè)賴氨酸殘基的修飾的exendin-4，Aventis/Zealand Pharma)；以及AP10(長效制劑，Alkermes，Cambridge MA)。生理學(xué)研究顯示在轉(zhuǎn)基因哺乳動物中exendin-4的持續(xù)表達(dá)不擾亂葡萄糖穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞團(tuán)或者食物攝取量(Biaggio，L.等.J Biol Chem 27534472-34477，2000)，因此沒有完全理解exendin-4的生理學(xué)效應(yīng)。
二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制劑指抑制DPP-IV活性的化合物，在其底物中包括GLP-1、GLP-2和GIP的766個(gè)氨基酸的膜相關(guān)肽酶。DPP-IV介導(dǎo)的GLP-1的滅活是體內(nèi)GLP-1生物活性的決定因素。DPP-IV抑制劑的實(shí)例包括異亮氨酸四氫噻唑、纈氨酸-purrolidide、NVP-DPP738(Novartis，Cambridge，MA)、LAF237(Novartis)、P32/98(Probiodrug AG，Halle，Germany)、以及P93/01(Probiodrug)。
如這里使用的術(shù)語“EGF受體配體”包括刺激EGF受體的化合物，使得當(dāng)相同或相鄰組織或者相同個(gè)體中的胃泌素/CCK受體也被刺激時(shí)，誘導(dǎo)產(chǎn)生胰島素的胰島細(xì)胞再生。這種EGF受體配體的實(shí)例包括全長EGF，其是EGF1-53、進(jìn)一步包括EGF1-48、EGF1-49、EGF1-52，及其片段和活性類似物。EGF受體配體的其它實(shí)例是包括1-48、1-47、1-51的TGFα型，雙調(diào)蛋白(amphiregulin)和痘病毒生長因子以及證明與胃泌素/CCK受體配體有相同協(xié)同活性的任何EGF受體配體。這些包括上述物質(zhì)的活性類似物、片段和修飾。也見，Carpenter和Wahl，Chapter 4，in Peptide Growth Factors(Eds.Sporn andRoberts)，Springer Verlag，1990。
化合物組包括進(jìn)一步包括“修飾EGF”的EGF受體配體，其包括正?；蛞吧虴GF的變體。已經(jīng)證明該修飾影響一種或多種生物學(xué)活性，如EGF的清除率。該術(shù)語包括具有與人EGF的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列的肽，例如，在各種殘基位置上具有一個(gè)或幾個(gè)氨基酸取代。
重組EGF型已經(jīng)被遺傳改造在結(jié)構(gòu)和活性上有變化，例如，已經(jīng)描述了具有在21位上用亮氨酸取代蛋氨酸的EGF(美國專利號4,760,023)。具有51個(gè)殘基的重組人EGF(hEGF)，即，在hEGF的52位和53位上缺少兩個(gè)C-末端殘基，以及在51位上具有中性氨基酸取代，保留EGF活性，在微生物的生產(chǎn)過程期間和在給予受試者后更抵抗蛋白酶降解。已經(jīng)描述了一系列編碼與EGF和TGFα顯著相似的蛋白家族的核酸分子(WO 00/29438)。已經(jīng)描述了用中性或酸性氨基酸取代第16位殘基組氨酸的EGF突變蛋白(突變的EGF)(WO93/03757)，這種形式保留在低pH值時(shí)的活性。EGF和TGFα的化學(xué)類似物和片段保留結(jié)合EGF受體家族各種成員的能力(美國專利號4,686,283)。EGF或TGFα的各種修飾賦予有益性能，影響一個(gè)或多個(gè)重組蛋白產(chǎn)量、體外和體內(nèi)穩(wěn)定性、以及體內(nèi)活性。在這里的實(shí)施例中使用的示范性的重組修飾EGF受體配體是51個(gè)氨基酸長的人EGF的C末端缺失型，在51位上具有天冬酰胺(這里稱作EGF51N)，其基本上保留全部I.N.T.TM活性，具有體內(nèi)和/或體外穩(wěn)定性，穩(wěn)定性至少大約與正?；蛞吧蚳EGF同樣高或者比其更高(S.Magil等，2003年5月15日以PCT/US02/33907，這里結(jié)合其全部內(nèi)容作為參考)。
這里使用的術(shù)語“生長激素”包括與內(nèi)源性哺乳動物生長激素共有基本相同氨基酸序列并且具有哺乳動物生長激素生物活性的任何多肽。人生長激素是在單鏈中含有191個(gè)氨基酸以及分子量約22k Dal的多肽(Goeddel等，1979，Nature 281544-548；Gray等，1985，Gene39247-254)。該術(shù)語包括具有缺失、插入或取代的類似物以及其它物種的生長激素和天然發(fā)生的變體。見Cunningham等，1989，Science2431330-1336，和1989，Science 2441081-1085；以及WO 90/05185，和美國專利號5,506,107。
如這里使用的術(shù)語“紅細(xì)胞生成素”(EPO)是任何內(nèi)源性哺乳動物EPO或其變體，或者EPO受體激動劑，例如EPO模擬物EMP1(Johnson等，2000，Nephr Dial Tranpl 151274-1277)；或者描述的模擬物(Wrighton等，1996，Science 273458-464；美國專利號5,773,569；Kaushansky，2001，Ann NY Acad Sci938131-138)；具有EPO受體激動劑活性的抗體(見，例如，美國專利號5,885,574；WO96/40231)；以及在美國專利號6,333,031和6,413,952中描述的氨基酸序列。
這里描述的術(shù)語“PACAP”意思是內(nèi)源性產(chǎn)生的PACAP或者其類似物或變體，其中類似物或變體具有基本相同或相似氨基酸，或者具有PACAP受體激動劑如maxadilan的生物學(xué)活性(Moro等，1997，J Biol Chem 272966-970。有用的PACAP變體包括但不限于，如美國在專利號5,128,242；5,198,542；5,208,320；和6,242,563中公開的38個(gè)氨基酸和27個(gè)氨基酸的變體)。
藥物組合物本發(fā)明在各種實(shí)施方案中提供包括治療有效量的FACGINT和胃泌素/CCK受體配體組合的藥物組合物?？膳渲扑羞@里描述的藥物組合物，含有或不含免疫抑制劑，含有或不含用于持續(xù)釋放、局部或全身輸送的組分或裝置?？商砑铀帉W(xué)可接受的載體或賦形劑。這樣的載體包括但不限于鹽、緩沖鹽、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。制劑應(yīng)當(dāng)適合給藥方式。這里使用的術(shù)語“有效量”是足以達(dá)到公認(rèn)醫(yī)學(xué)終點(diǎn)的治療劑或試劑組合的量，在這個(gè)實(shí)例中，公認(rèn)醫(yī)學(xué)終點(diǎn)是糖尿病癥狀的糾正。熟練技術(shù)人員可根據(jù)這里描述的側(cè)定相關(guān)參數(shù)的公認(rèn)方法憑經(jīng)驗(yàn)確定有效量。
這里的組合物可進(jìn)一步包括濕潤或乳化劑，或者pH緩沖劑。組合物可以是液體溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、持續(xù)釋放制劑、或者粉劑。組合物可被配制成栓劑，含有傳統(tǒng)的粘結(jié)劑和載體如甘油三酯?？诜苿┛砂?biāo)準(zhǔn)的載體，如藥學(xué)級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂，等。各種輸送系統(tǒng)是已知的，并且可用于給予本發(fā)明的組合物，例如，包封脂質(zhì)體、微粒、微膠囊等。
在示范性的實(shí)施方案中，根據(jù)常規(guī)步驟將這里的組合物配制成適于，例如，適于皮下給予人的藥物組合物。典型地，皮下給藥的組合物是溶于無菌等張水性緩沖液中的溶液。如果必要，組合物也可包括增溶劑以及改善注射部位疼痛的局麻藥。通常，組分是獨(dú)立地或者混合在一起以單位劑量形式提供，例如，在密封容器如安瓿或sachette中的干燥、冷凍干燥的粉末或者無水濃縮物，例如，指示活性劑的量。通過輸液給予組合物時(shí)，其可用含有無菌藥學(xué)級的水、緩沖液、或者鹽水的注射瓶配藥。通過注射給予組合物時(shí)，可提供用于注射的無菌水或鹽水的安瓿，以便給藥前可將組分混合?？蓪⑦@里含有其各種組分的組合物配制成栓劑，其含有約0.5％到約10％重量范圍的活性組分；口服制劑優(yōu)選地含有約10％到約95％重量的活性組分。
每日劑量以單一劑量給藥，或者被分成許多較小的分次劑量，在一天內(nèi)幾次給藥。
可將本發(fā)明的組合物配制成中性或者鹽形式。藥學(xué)可接受的鹽包括與游離氨基形成的那些鹽，如那些衍生于鹽酸、磷酸、乙酸、酒石酸等的鹽，以及那些與游離羧基形成的鹽，如那些衍生于氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙胺乙醇、組氨酸、普魯卡因等的鹽。
將在特定紊亂或病情的治療中有效的本發(fā)明的治療量將視紊亂或病情的性質(zhì)而定，可通過標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)測定。在制劑中使用的精確劑量也將視給藥途徑以及疾病或紊亂的嚴(yán)重性而定，并且應(yīng)當(dāng)根據(jù)醫(yī)師的判斷和每名受試者的情況決定。血液胰島素或C肽水平，以及禁食葡萄糖水平或葡萄糖誘發(fā)水平的常規(guī)測定，是通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來測定?？赏ㄟ^藥理學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員，從來源于體外或動物模型實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的劑量-反應(yīng)曲線推斷有效劑量。給藥的適當(dāng)劑量范圍通常是每種活性I.N.T.TM化合物每天每公斤體重約0.01微克到約10,000微克，例如，每天每公斤體重約0.01微克到約1微克、約0.1微克到約10微克、約1微克到約500微克、或者約10微克到約10毫克。給藥的適當(dāng)劑量范圍因此通常是約0.01微克/kg體重/天到10毫克/kg體重/天。
本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供包括一個(gè)或多個(gè)容器的藥物包或試劑盒，其中容器填充有一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明藥物組合物的組分。在這樣的包或試劑盒中可發(fā)現(xiàn)含有單位劑量的胃泌素/CCK受體配體和/或一種或多種FACGINT、或者EGF受體配體中的每種或兩者、以及一種或多種免疫抑制劑的容器。藥物包或試劑盒的這些組分中的一種或多種可被配制成用于持續(xù)釋放或者用于插入到持續(xù)釋放裝置中作為替換物，或者可被配制成用于局部輸送。與這些容器聯(lián)合的可以是各種書面材料，如使用說明，或者以管理藥品或生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)所規(guī)定形式的通知，該通知反映經(jīng)管理用于給予人的藥物生產(chǎn)、使用或者銷售的機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)。在一些實(shí)施方案中試劑盒或藥物包可與嵌在計(jì)算機(jī)可讀格式中的軟件聯(lián)合。
在一個(gè)方面本發(fā)明的特點(diǎn)是胰島再生治療(I.N.T.TM)組合物和方法，例如，胃泌素和FACGINT，結(jié)合免疫抑制劑，刺激體內(nèi)新β細(xì)胞的生長，增加胰島團(tuán)，導(dǎo)致糖尿病受試者中葡萄糖耐受改善，例如，在患糖尿病的人和動物中。
胃泌素/CCK受體配體和EGF受體配體或FACGINT，可以單一聯(lián)合劑量給予，或者以任何順序分別給藥。這些組合物的“有效聯(lián)合劑量”是引起禁食血液葡萄糖降低、或者胰島素分泌細(xì)胞量增加、或者血液胰島素水平增加、或者β細(xì)胞團(tuán)增加的劑量。胃泌素/CCK受體配體，在一個(gè)實(shí)施方案中，是17個(gè)氨基酸殘基長的人胃泌素、15位上的殘基是亮氨酸(1-17Leu15，這里稱作胃泌素17Leu15)；此外，EGF受體配體是人EGF51N(S.Magil等，2003年5月12日公開的PCT/US02/33907，這里結(jié)合其全部內(nèi)容作為參考)。有效劑量可包含胃泌素/CCK受體配體對EGF受體配體的比例大于1，例如，有效劑量包含胃泌素/CCK受體配體對EGF受體配體的比例大于10。給予該劑量的方便途徑是全身注射，例如，用皮下單次給藥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，給受體受試者施用抑制免疫系統(tǒng)的試劑。例如，該試劑是低分子量有機(jī)化合物，例如，是藤霉素、昔羅莫司，環(huán)胞菌素A、和可的松以及表1中所示其它藥物中的至少一種。在供選擇的實(shí)施方案中，該試劑是抗體，例如，抗體是抗-CD11a抗體和也在表1中所示的其它抗體。在另一個(gè)供選擇的實(shí)施方案中，免疫抑制劑可以是免疫方案后受試者產(chǎn)生的抗體，例如，抗GFAP或者抗S100β。受試者可能患糖尿病，例如，受試者是非肥胖型糖尿病小鼠(NOD小鼠)或者鏈脲佐菌素處理的小鼠。受試者可以是人，例如，患有I型或II型糖尿病的糖尿病受試者，或者患有前驅(qū)糖尿病狀態(tài)、或者患有妊娠糖尿病、或者過去患有糖尿病，例如，在過去的妊娠中患有妊娠糖尿病。
此外，評價(jià)最近產(chǎn)生的β胰島素分泌細(xì)胞或胰島的大小和功能是測量標(biāo)準(zhǔn)生理學(xué)或診斷參數(shù)，包括胰島β細(xì)胞團(tuán)、胰島β細(xì)胞數(shù)量、胰島β細(xì)胞百分率、血液葡萄糖、血清葡萄糖、血液糖基化血紅蛋白、胰腺細(xì)胞團(tuán)、胰腺β細(xì)胞數(shù)量、禁食血漿C肽含量、血清胰島素、以及胰腺胰島素含量。
由于糖尿病在某些病例中是自體免疫疾病，I.N.T.TM的實(shí)施方案是向也用一種或多種抑制免疫系統(tǒng)的試劑，即，免疫抑制劑治療的受試者或受試者，全身給予治療有效劑量的，例如，EGF和胃泌素/CCK中的每一種或者FACGINT和胃泌素/CCK中的每一種的受體配體，如胃泌素和EGF的組合或者FACGINT和胃泌素/CCK的組合。
可使用許多不同終點(diǎn)測定胃泌素和EGF或FACGINT的治療，或者用胃泌素和EGF或FACGINT的組合以及免疫抑制劑的治療是否改善糖尿病，例如，改善胰島移植物中功能性β細(xì)胞團(tuán)。這些包括在用β細(xì)胞刺激劑如葡萄糖或精氨酸注射小鼠后，測量循環(huán)的人C肽和人胰島素的血漿水平的增高；通過增加的人胰島素免疫反應(yīng)性或者從胰島移植物中提取的mRNA水平證明的對胃泌素/EGF治療的反應(yīng)；以及通過治療動物中胰島的形態(tài)測量所測定的β細(xì)胞數(shù)量的增加。
這里使用的術(shù)語“移植”意思是通過現(xiàn)有技術(shù)中任何公認(rèn)的方法，或者根據(jù)這里指出的方法，將細(xì)胞、組織或器官成分引入到哺乳動物體內(nèi)。該成分是“移植物”，哺乳動物是受體。移植物和受體可以是同源的、同種異體、或者異種的。這里使用的術(shù)語“自體”意思是移植物來自受體的細(xì)胞、組織或者器官。
也可通過在患有鏈脲佐菌素(streptozotocin)誘導(dǎo)的或遺傳性(使用稱作非肥胖糖尿病或NOD的小鼠品系)糖尿病受體小鼠中，高血糖的逆轉(zhuǎn)證明人胰島β細(xì)胞功能增強(qiáng)。用胃泌素、用EGF或FACGINT和用一種或多種免疫抑制劑治療糖尿病受體受試者后，通過撤消胰島素之后存活率的改善，以及通過糾正由禁食血液葡萄糖水平所顯示的高血糖，證明β細(xì)胞功能增強(qiáng)。此外，觀察到胰腺胰島素和血漿C肽兩者都增加。
表1.示范性的免疫抑制試劑、以及商業(yè)來源
如這里使用的術(shù)語“免疫抑制劑”或“用于免疫抑制的試劑”意思是任何抑制免疫反應(yīng)的試劑。示范性的免疫抑制劑顯示在表1中，那些試劑的任何衍生物或者功能等同物被認(rèn)為適合這里和在權(quán)利要求中描述的本發(fā)明的實(shí)施方案。
如這里使用的，劑量表指給予這里所提供的組合物中的任何一種的方案，例如，構(gòu)成I.N.T.TM組合物的組分或者FACGINT和胃泌素/CCK受體配體的組合，以及一種或多種免疫抑制劑，每種含有有效劑量，同時(shí)給藥或者在彼此之間特定時(shí)間間隔內(nèi)給藥，例如，在彼此之間一天的時(shí)間間隔內(nèi)，或者作為組合制品，或者獨(dú)立地，包括每單位時(shí)間如每天輸送的組合物的量，以及每種組合物給藥的持續(xù)時(shí)間或時(shí)間周期。
絕大多數(shù)胰島素依賴糖尿病受試者需要至少每天注射胰島素。在某種疾病的情況或者在糖尿病管理的飲食下，需要胰島素每日劑量的幾倍，通過經(jīng)常的葡萄糖監(jiān)控的結(jié)果指示胰島素給藥，另一個(gè)活動需要糖尿病受試者對疾病的最佳管理，例如每日進(jìn)行5次。
通過禁食血液葡萄糖水平降低，以及通過對飲食糖消耗挑戰(zhàn)產(chǎn)生應(yīng)答使血液葡萄糖增高的水平和持續(xù)時(shí)間降低，表明由于聯(lián)合免疫抑制劑的成功的胰島再生治療導(dǎo)致糖尿病的緩解。一旦獲得成功的胰島再生，胰島素給藥減少，例如，從每天5次注射減少到2次注射；從每天2次注射減少到1次注射；以及從1次到不需要注射，根據(jù)從監(jiān)控的血液葡萄糖水平中獲得的數(shù)據(jù)指示。當(dāng)治療糖尿病受試者時(shí)，糖尿病領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，熟知禁食后和在其它生理情況下根據(jù)血液葡萄糖水平調(diào)整胰島素劑量。
針對在標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)中物種與物種之間的已知差異，調(diào)整給予受試者的組合物的劑量，標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)包括吸收、分配、循環(huán)的半衰期動力學(xué)、代謝、分泌、以及這里實(shí)施方案中的受體配體的毒理學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)，例如，對每種靈長類和嚙齒類物種。通常，將劑量調(diào)整到給予嚙齒類物種的量高于給予靈長類物種量的約6倍到約100倍。
給予根據(jù)生產(chǎn)商提供的表1中的免疫抑制劑或者其它等同試劑，根據(jù)藥理學(xué)領(lǐng)域中技術(shù)人員公知的方法對受試者的體重標(biāo)準(zhǔn)化。例如，通常通過注射和口服給予藤霉素，通?？诜o予昔羅莫司。
受體配體組合物和免疫抑制劑的給藥方式包括但不限于皮下、經(jīng)皮、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、以及口服途徑?？赏ㄟ^任何常規(guī)途徑給予化合物，例如，通過輸液或單次注射、通過泵、通過經(jīng)上皮或粘膜皮膚襯(例如，口腔粘膜、直腸和腸粘膜，等)的吸收?？陕?lián)合一種或多種其它生物活性試劑給予這里的受體配體。例如，如果存在細(xì)菌感染，可給予這里的組合物和方法的接受者一種或多種抗生素，或者如果存在頭痛可給予阿司匹林。優(yōu)選通過全身途徑給予這里的受體配體。
本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中提供通過給予持續(xù)釋放制劑的組合物治療糖尿病的方法，其中組合物包括胃泌素/CCK受體配體，例如，胃泌素，以及EGF受體配體，或者FACGINT，例如，GLP-1、GH、或催乳素，以影響胰島前體細(xì)胞分化成成熟的胰島素分泌細(xì)胞。可全身或局部給予組合物中的FACGINT和胃泌素/CCK受體配體。
不受任何特殊機(jī)理限制，給予胃泌素/CCK受體配體，如胃泌素，以及EGF受體配體或者這里所定義的FACGINT組中的一個(gè)或多個(gè)成員，如GLP-1，GH，或催乳素，單獨(dú)或聯(lián)合免疫抑制劑后獲得有效的胰島細(xì)胞再生時(shí)間延長，根據(jù)這里所描述的方法或者通過已知的同等方法或藥理學(xué)領(lǐng)域中普通技術(shù)人員已知的方法，將這些受體配體或者因子或試劑中的任何一種或多種配制成持續(xù)釋放。
本發(fā)明在總的實(shí)施方案中提供預(yù)防或治療糖尿病的方法，該方法包括給需要其的哺乳動物施用組合物，其中該組合物包括EGF受體配體或FACGINT，如GLP-1、exending-4、生長激素、催乳素中至少一種的持續(xù)釋放制劑，聯(lián)合胃泌素/CCK受體配體，EGF受體配體或FACGINT和胃泌素/CCK受體配體中的每一種以足以增加哺乳動物中胰腺胰島素分泌β細(xì)胞數(shù)量的量，因而治療或預(yù)防糖尿病。含有FACGINT的持續(xù)釋放制劑的治療糖尿病受試者和受試者的組合物包括PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體如PTHrP(PTHrP；Garcia-Ocana，A.等，2001，J.clin.Endocrin.Metab.86984-988)；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體如HGF(HGF；Nielsen，J.等，1999，J MolMed 7762-66)；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)如FGF，膠質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體如KGF；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體如NGF；腸抑胃肽(GIP)受體配體如GIP；轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)受體配體如TGFβ(2002年6月13日公開的美國專利申請2002/0072115)，層粘連蛋白受體配體如層粘連蛋白-1；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體如INGAP；骨形態(tài)發(fā)生因子(BMP)受體配體如BMP-2；血管活性腸肽(VIP)受體配體如VIP；胰高血糖素樣肽1受體配體如GLP-1和exendin-4，胰高血糖素樣肽2(GLP-2)受體配體如GLP-2，以及通過抑制在其完整性中所涉及的酶間接影響GLP-1水平的二肽基肽酶IV抑制劑(Hughes，T.deng，2002，AmDiabetes Assoc Abstract 272-或者)；REG受體配體如REG蛋白；生長激素(GH)受體配體如GH，催乳素(PRL)受體配體如PRL和胎盤催乳激素(PL)；胰島素樣生長因子(1型和2型)受體配體如IGF1和IGF-2；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體如EPO(http∥www.drinet.org/html/august_2002_.htm)；β細(xì)胞素(也被認(rèn)為是EGF家族的成員)；活化素A受體配體如活化素A；血管活化素A；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體如VEGF；骨形態(tài)發(fā)生因子(BMP)受體配體如BMP-2；血管活性腸肽(VIP)受體配體如VIP；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體如VEGF；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體如PACAP；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體如G-CSF；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)受體配體如GM-CSH；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體如PDGF以及腸促胰液素受體配體如腸促胰液素。這些持續(xù)釋放制劑也可包括免疫抑制劑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，全身給予組合物的持續(xù)釋放制劑?？晒┻x擇地，局部，或用于局部輸送的裝置或方法給予組合物。哺乳動物是糖尿病哺乳動物，例如，哺乳動物患糖尿病已經(jīng)至少約為哺乳動物壽命的1％。通常，組合物中胃泌素/CCK受體配體、FACGINT或EGF受體配體的持續(xù)釋放制劑的量基本上低于這些物質(zhì)中的任何一種單獨(dú)降低糖尿病哺乳動物中血液葡萄糖所需的最小有效量。以組合起來足以長時(shí)間誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化形成葡萄糖應(yīng)答的胰島素分泌胰島細(xì)胞的量提供FACGINT或EGF受體配體和胃泌素/CCK受體配體。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供預(yù)防或治療糖尿病的方法，該方法包括以足以在胰腺組織中提高胰島前體細(xì)胞增殖的量，給需要施用的哺乳動物施用包括聯(lián)合FACGINT或EGF受體配體，以及胃泌素/CCK受體配體的組合物的持續(xù)釋放制劑，因而治療或預(yù)防糖尿病。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供預(yù)防或治療糖尿病的方法，該方法包括給需要施用的哺乳動物施用包含聯(lián)合FACGINT或EGF受體配體，以及胃泌素/CCK受體配體的組合物的持續(xù)釋放制劑，每種以足以增加哺乳動物中胰腺胰島素分泌β細(xì)胞數(shù)量的量；以及測定胰島再生的量，因而治療或預(yù)防糖尿病。與給予該組合物前測定的血液葡萄糖相比，給予該組合物降低了血液葡萄糖，例如，與給予該組合物前測定的血液葡萄糖相比，給予該組合物降低血液葡萄糖約50％，或者約70％。與給予該組合物前測定的哺乳動物中糖基化血紅蛋白濃度相比，糖基化血紅蛋白濃度降低。與給予該組合物前測定的哺乳動物中血清胰島素濃度相比，血清胰島素濃度增加。與給予該組合物前測定的哺乳動物中胰腺胰島素濃度相比，胰腺胰島素濃度增加。
在另一方面，本發(fā)明提供誘導(dǎo)哺乳動物中胰島再生的方法，該方法包括給哺乳動物施用包含聯(lián)合FACGINT或EGF受體配體以及胃泌素/CCK受體配體的組合物的持續(xù)釋放制劑，每種以足以增加胰腺組織中胰島前體細(xì)胞增殖的量，因而誘導(dǎo)胰島再生。
在另一方面，本發(fā)明提供在哺乳動物中誘導(dǎo)胰島再生的方法，該方法包括給予包含聯(lián)合FACGINT或EGF受體配體以及胃泌素/CCK受體配體的持續(xù)釋放制劑的組合物，每種以足以增加哺乳動物中胰腺胰島素分泌β細(xì)胞數(shù)量的量。
在另一方面，本發(fā)明的特色是包括胃泌素/CCK受體配體，以及FACGINT或EGF受體配體的組合物，將這些試劑中的任何一種配制成持續(xù)釋放制劑。該組合物含有有效誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞增殖形成成熟胰島素分泌細(xì)胞量增加的劑量。此外，組合物含有有效誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化形成成熟胰島素分泌細(xì)胞的量。該組合物可含有藥學(xué)可接受的載體。組合物可包括抑制免疫反應(yīng)的試劑。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防糖尿病的試劑盒，含有包括胃泌素/CCK受體配體和FACGINT或EGF受體配體的組合物，其中的任何一種都以持續(xù)釋放制劑形式存在，容器，以及使用說明。組合物可包括免疫抑制劑。試劑盒的組合物可進(jìn)一步包括藥學(xué)可接受的載體。試劑盒的組合物可以單位劑量形式存在。
這里提供的本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是擴(kuò)增和分化細(xì)胞的糖尿病受體中的干細(xì)胞成為胰島素分泌細(xì)胞的方法，包括在受體中移植細(xì)胞，以及給予含有有效劑量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT或EGF受體配體中的每一種的組合物，其中的一種或多種以持續(xù)釋放制劑形式存在。例如，移植細(xì)胞是從人獲得。此外，移植細(xì)胞是從胰島、臍帶、胚胎、或者干細(xì)胞系中獲得。通常，胃泌素/CCK受體配體是人胃泌素1-17Leu15。通常，EGF受體配體是EGF或TGFα，或者是結(jié)構(gòu)上分別與EGF或TGFα基本上相同的多肽，具有與EGF或TGFα基本上相同的生物學(xué)功能。在相關(guān)的實(shí)施方案中，通過選自下列的途徑移植細(xì)胞，例如，干細(xì)胞直接注射到器官中，以及通過靜脈內(nèi)給藥。例如，將細(xì)胞注射到選自胰腺、腎臟、以及肝臟的器官中?？晒┻x擇地，使用經(jīng)皮或經(jīng)肝途徑將細(xì)胞輸送到門靜脈中。在另一個(gè)實(shí)例中，在移植前，可用組合物離體處理細(xì)胞。
這里提供的本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是通過將量降低的干細(xì)胞移植到糖尿病受體中治療人糖尿病的方法，該方法包括給受體施用有效劑量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT或EGF受體配體的持續(xù)釋放制劑中的每一種，與在缺乏給予有效劑量時(shí)，將細(xì)胞移植到其它方面完全相同的受體相比，細(xì)胞的量減少?？蛇M(jìn)一步給予受體抑制免疫系統(tǒng)的試劑。例如，試劑是選自FK506、雷帕霉素(rapamycin)、環(huán)孢菌素以及可的松的化學(xué)藥品。可供選擇地，試劑是抗體，例如，抗體是抗CD4。在所提供的涉及干細(xì)胞的任何一種方法中，移植前細(xì)胞可從家族成員中獲得并貯藏用于以后使用。
本發(fā)明的實(shí)施方案提供使用與胃泌素/CCK配體一起給予的FACGINT或EGF受體配體的改進(jìn)的方法和組合物，將這些試劑中的任何一種或多種配制成持續(xù)釋放，用于治療糖尿病。本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中提供下列任何一種的持續(xù)釋放制劑胃泌素，聯(lián)合FACGINT或EGF受體配體，以獲得比單獨(dú)用ACGINT或EGF受體配體所獲得的更大的功效、效能、以及效用，或者聯(lián)合所給予的這些試劑中的任何一種以提供全部制劑的直接的生物可利用率。本發(fā)明提供與直接生物可利用的制劑相比，改進(jìn)的持續(xù)釋放制劑的治療比。
使用持續(xù)釋放制劑可使血糖的降低持續(xù)甚至更長的時(shí)間。
在持續(xù)釋放制劑中胃泌素/CCK受體配體和EGF受體配體或FACGINT的組合，全身給藥，比當(dāng)以非持續(xù)釋放直接制劑給藥時(shí)具有更大的功效。用胃泌素/FACGINT組合或胃泌素/EGF受體配體組合的持續(xù)釋放制劑觀察到葡萄糖耐受的改善和胰腺胰島素水平的增加。
在需要其的個(gè)體中治療糖尿病的方法包括給個(gè)體施用組合物的持續(xù)釋放制劑，其中該組合物提供了胃泌素/CCK受體配體和FACGINT，或胃泌素/CCK受體配體和EGF受體配體，組合物含有足以影響胰島前體細(xì)胞分化形成成熟胰島素分泌細(xì)胞的劑量。分化的細(xì)胞是胰腺導(dǎo)管中殘存的潛伏的胰島前體細(xì)胞。治療胰島素依賴糖尿病，特別是I型或少年型糖尿病的方法，包括優(yōu)選全身給予糖尿病哺乳動物分化再生量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT或者胃泌素/CCK受體配體和EGF受體配體，其中一種試劑或兩種試劑都是以持續(xù)釋放制劑形式，刺激胰島再生以增加胰腺中功能性葡萄糖反應(yīng)性胰島素分泌β細(xì)胞的數(shù)量。胃泌素和FACGINT或者EGF受體配體的組合，其中的任何一種是以持續(xù)釋放制劑形式，將導(dǎo)致胰島再生反應(yīng)顯著高于用相同試劑但以非持續(xù)釋放直接制劑所觀察到再生反應(yīng)。示范性的胃泌素/CCK受體配體是胃泌素或如這里所述的其合成的胃泌素衍生物，示范性的FACGINTs是GLP-1、GH和催乳素。示范性的EGF受體配體是重組人EGF，例如，EGF51N，一種在C端具有缺失和51位是天冬酰胺的51個(gè)氨基酸長的人重組突變體EGF。
可供選擇地，使用經(jīng)皮或經(jīng)肝途徑將細(xì)胞輸送到門靜脈中。在另一種情況下，移植前，可用組合物離體處理細(xì)胞。
持續(xù)釋放制劑和局部輸送以及給藥的方法將胃泌素/CCK受體配體、或EGF受體配體或FACGINT試劑中的至少一種配制成通過持續(xù)釋放或控制釋放給藥。這里和在權(quán)利要求中使用的“持續(xù)釋放”指材料、裝置、制劑、和/或給予至少一種I.N.T.TM治療劑的組合，隨時(shí)間對受體產(chǎn)生連續(xù)或不連續(xù)地，如周期性地提供一定量的組合物或者至少一種I.N.T.試劑，或免疫抑制劑?？沙掷m(xù)釋放的時(shí)間周期是幾分鐘、幾小時(shí)、幾天、幾周、或者甚至是幾個(gè)月。活性試劑的釋放可以長時(shí)間不變，或者釋放可以是長時(shí)間周期性釋放。釋放可以與病情無關(guān)，或者對反應(yīng)環(huán)境中的成分或?qū)ζ渌獠渴录a(chǎn)生應(yīng)答可觸發(fā)釋放。例如，釋放可被內(nèi)源成分如胰島素或葡萄糖觸發(fā)，或者釋放可被外部補(bǔ)充的成分如對給藥起反應(yīng)而觸發(fā)。
持續(xù)釋放是與非持續(xù)釋放制劑相對，其中非持續(xù)釋放制劑是瞬間或非常迅速地給予整個(gè)治療試劑的劑量，或者是在給藥后非常短的時(shí)間內(nèi)組合物的全部都是可生物利用的，使得試劑的大部分在非常短的時(shí)間到達(dá)受體?；旧纤查g生物可利用的劑量實(shí)例包括腸胃外給藥的試劑的水溶液，例如通過單次腹膜內(nèi)注射，或口服，或者甚至通過靜脈滴注幾個(gè)小時(shí)給藥。因此，心血管成像劑的靜脈內(nèi)給藥在15秒內(nèi)循環(huán)遍及整個(gè)動脈系統(tǒng)；抗腫瘤試劑的靜脈滴注給藥在滴注結(jié)束的幾秒內(nèi)是完全可生物利用的。相反，持續(xù)釋放制劑通過提供長期生物可利用率，以及通過避免可能由于試劑的最初的高水平所導(dǎo)致的潛在的副作用而有益于受體受試者。見Mathiowitz，E.，Encyclopedia ofControlled Drug Delivery.1999.New YorkJohn Wiley。
已經(jīng)將持續(xù)釋放制劑發(fā)展成提供試劑的全身以及局部(或者靶向)輸送。這里回顧的各種材料、裝置以及輸送途徑與L.N.T.TM試劑如胃泌素/CCK受體配體，以及EGF受體配體或FACGINT一起使用。
已經(jīng)獲得了口服持續(xù)釋放系統(tǒng)，例如，含有許多類型小丸的硬明膠膠囊，每一種類型具有不同的厚度的包衣，這樣一些小丸不被包被更迅速釋放。見Banga，A.，Bus.Brief.Pharmatech 2002151-154。在口服滲透系統(tǒng)中，通過半滲透膜進(jìn)入片劑的液體產(chǎn)生核心組分的滲透壓，其不依賴于胃腸道中的變化。為了保護(hù)高分子試劑，例如蛋白如生長因子，方法包括使用部位特異性輸送、蛋白酶抑制劑、載體系統(tǒng)、或者制劑如含有聚丙烯酸主鏈和生物粘附性能的水凝膠。
絕大多數(shù)蛋白質(zhì)試劑是通過腸胃外輸送，控制蛋白質(zhì)腸胃外輸送的方法包括使用基于乳酸的聚合物如聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯；PLGA)，其形成核心含有該試劑的生物可降解的微球體，其在超過約1個(gè)月的時(shí)間釋放該試劑。此外，可通過共價(jià)添加聚乙二醇(PEG)使蛋白或者含有蛋白的脂質(zhì)體(見下面)聚乙二醇化。
經(jīng)皮輸送可用于全身輸送和局部輸送。下述的滲透增強(qiáng)劑可與經(jīng)皮的貼片聯(lián)合使用以改善輸送，或者與用于離子電滲療法(iontophoresis)、超聲波導(dǎo)入(phonophoresis)、機(jī)械滲透法(microporation)的裝置、或者帶有可穿電裝置的電穿孔聯(lián)合。
這里使用的術(shù)語“局部輸送”指通過途徑以及制劑或裝置或者兩者給藥，使得基本上治療特定的靶器官或組織，而其它器官和組織不被這樣治療，或者靶組織或器官的治療范圍接受比非靶組織或器官接受的劑量高至少兩倍、至少5倍、或者至少10倍。這里通常，靶器官是胰腺。如這里所示，通過注射到門靜脈內(nèi)可向胰腺局部輸送移植的細(xì)胞或多細(xì)胞移植物；可通過注射到胰動脈、肝動脈、門靜脈、或者胰腺導(dǎo)管中輸送藥物?？墒褂貌槐恢踩氲谋?，即，保留外部，通過將泵連接到器官上的導(dǎo)管將組合物輸送到靶器官如胰腺。也可能使用可植入的泵局部輸送組合物。
局部輸送的其它方法包括不限于經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引活檢(EUS-FNAD)，其適合輸送這里提供的藥物組合物，而不是用于取樣。見例如，Wang等，Transpl.Int 1995，8268-272。盡管這些技術(shù)被設(shè)計(jì)成用于診斷或用于預(yù)后的目的，可將它們修改適于輸送這里的組合物，其可能是這里所描述的I.N.T.TM組合物，與免疫抑制劑聯(lián)合，以及或者作為持續(xù)釋放制劑。也見，Yano等，1994，Transpl Int 7 Suppl 1S187-193；Ricordi等，1994，Transpl Proc 263479；和Munoz-Acedo等，1995，J Endocrin145227-234。
使用用于給藥的泵治療幾種疾病，例如，用于癌癥和糖尿病，其中泵可以是可植入的或非可植入(外面)的泵。泵可以是蠕動泵、碳氟推進(jìn)泵、或者包括微型滲透泵的滲透泵(Blanchard，S.，1996Biomedical Engineering Applications，North Carolina StateUniversity)。蠕動泵隨著驅(qū)動泵最前部的每一次電脈沖輸送一系列量藥。泵、電子設(shè)備和電源位于覆蓋硅橡膠的鈦殼中。藥物貯存器是可經(jīng)得起巨大壓力，例如60psi的硅氧烷橡膠囊?？赏ㄟ^聚丙烯口經(jīng)皮重新注滿藥物貯存器。碳氟泵使用碳氟液體驅(qū)動泵。滲透泵使用滲透壓以恒定速率釋放藥物。示范性的泵是MiniMed MicroMed 407C泵(Medtronic，Inc.，Northridge，CA)。此外，可使用鞘內(nèi)給藥系統(tǒng)(Medronic)，其包括兩個(gè)可植入的元件、一個(gè)輸液泵、以及一個(gè)脊柱內(nèi)導(dǎo)管。將泵在腹部插入到皮下囊中，而將導(dǎo)管插入到脊柱的鞘內(nèi)間隙，在皮下做隧道，連接到泵上。然后以恒定或可變的流速給藥。此外，可使用腹膜內(nèi)泵，例如可植入的泵，局部，例如通過導(dǎo)管，或者全身輸送這里的組合物。
粘膜給藥到維持濕性狀態(tài)并且靠近下面的脈管系統(tǒng)的上皮區(qū)可能比經(jīng)皮穿過是干燥的表皮表面的組織效率更高。粘膜表面包括鼻、肺、直腸、頰、眼、以及生殖器粘膜表面。示范性的粘膜表面是鼻和肺粘膜表面。
用于持續(xù)釋放的微球體的材料主要是聚合物，包括PEG，也稱作聚環(huán)氧乙烷(PEO)，以及所述的PGLA。聚合物賦形劑可直接注射，允許在受試者體內(nèi)逐漸水解或降解以釋放治療劑。可改變聚合物，例如，PEG的分子量控制釋放率。PEG對蛋白治療劑的聚乙二醇化或共價(jià)附著保護(hù)蛋白不受在清除機(jī)制中所涉及的受體的影響，如網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的受體。或者，可使用多糖將試劑靶向RES(1996年9月10日發(fā)表的美國專利5,554,386)。RES的器官包括肝、脾、以及骨髓。
均聚物或共聚物，如聚(乳酸-co-乙二醇)或者PLA-PEG，可形成與治療性蛋白劑混合的粘性液體。通過PLA-PEG的分子量改變粘度。在某種情況下，一旦注射到受試者體內(nèi)，治療劑與聚合物共沉淀，并且通過擴(kuò)散喪失溶劑，這樣形成具有有利的釋放動力學(xué)的貯存(Whitaker，M.，等Bus.BriefPharnaatech 20021-5)。
由將治療劑裝入膠囊的聚合微球體形成微粒。在微球體中使用的聚合物包括聚(乳酸)或者PLA；聚(乙醇酸)或者PGA；以及共聚物PLA-PGA。治療劑如本發(fā)明的蛋白的量，是以階段釋放，如與顆粒的外部非特異性結(jié)合的蛋白的初步爆發(fā)、通過擴(kuò)散的隨后階段，以及通過腐蝕的最后階段，可通過聚合物組成、分子量、微粒的大小，以及生理?xiàng)l件如pH控制。如果蛋白是以固體形式，如冷凍干燥粉末，微球體生產(chǎn)期間的蛋白穩(wěn)定性提高，其是用溶劑或者通過冷凍噴霧方法或者超聲處理方法乳化，然后在液氮中冷凍懸浮液進(jìn)一步提取溶劑。微球體可從臨界液體，例如，臨界二氧化碳(scCO2)中制備。
Kumar，N.等，Adv.Drug Deliv.Rev.53(2001)23-44描述了適于給藥的可降解的大塊聚合物以及合成方法。共聚物可以是隨機(jī)的、交替的，或者塊狀(雙聚或者三聚型)，以及構(gòu)型可以是線性，或者星型或嫁接(graft)(梳形)。聚合物可形成水凝膠，其是含有大量水性液體的三維親水聚合網(wǎng)絡(luò)。通過交聯(lián)或者其它化學(xué)加合物使得水凝膠中使用的聚合物不溶解。
可從如選自下組中的至少一種材料制備生物可降解的植入物淀粉；乙烯基淀粉；二丙二醇酯二丙烯酸酯(DPGDA)；三丙二醇酯二丙烯酸酯(TPGDA)；果膠；乙酰纖維素；丙酸纖維素；乙酸丁酸纖維素；乙酸丙酸纖維素(CAP)；羥丙基纖維素(HPC)；羥丙基纖維素/乙酸丙酸纖維素(HPC/CAP)；甲基丙烯酸甲酯(MMA)；甲基丙烯酸丁酯(BMA)；羥甲基丙烯酸甲酯(HEMA)；乙酸乙基己酯(EHA)；甲基丙烯酸十八酯(ODMA)；以及乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)。見Gil，M.等，Boletim de Biotecnologia 2002，7213-19。
除了聚合物，天然存在的和合成的脂質(zhì)可用于持續(xù)釋放制劑。DepoFoamTM(Skye Pharma，倫敦，英國)形成將治療劑裝入膠囊中的基于多泡脂質(zhì)的顆粒(脂質(zhì)體)(見美國專利5,993,850；和Ye，Q.等，2000J.Controlled Rel.64155-166)。脂質(zhì)具有兩親性，帶有凈負(fù)電荷，固醇，或者兼性離子脂質(zhì)、以及制備脂質(zhì)體的方法是非酸性的。也提供將活性治療試劑摻入到脂質(zhì)體的方法。治療試劑可以是胃泌素/CCK受體配體、EGF受體配體和FACGINT中的一種或多種。
脂質(zhì)體的其它脂質(zhì)是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。植物極性脂質(zhì)體，例如神經(jīng)酰胺如小麥神經(jīng)酰胺，用于與蛋白如醇溶蛋白形成凝膠，可將其中的一種或多種治療劑置于其中，用于經(jīng)皮或經(jīng)粘膜給藥。見2002年6月25日發(fā)表的美國專利6,410,048。示范性的醇溶蛋白包括小麥麥膠蛋白，以及玉米醇溶蛋白。在持續(xù)釋放藥物制劑中使用的其它天然發(fā)生的聚合物以及裝置包括膠原(EP-A-O 621 044)、殼多糖(美國專利4,393,373)，以及脫乙酰殼多糖、殼多糖的脫酰型。
滲透增強(qiáng)劑，例如，糖脂、非酯化脂肪酸、脂族醇、脂族醇的脂肪酸酯、環(huán)己醇、脂肪酸、甘油的酯、乙二醇、或者脂族醇酯或乙二醇，是典型的滲透增強(qiáng)劑，在經(jīng)皮裝置中可存在其它組分如穩(wěn)定劑、加溶劑、表面活性劑以及成形劑。見2002年9月12日公開的美國專利申請20020127254。
使用脂質(zhì)和各種類型的聚合物形成用于給藥的“納米?！?，綜述見M.Kumar，2002，J.Pharm.Pharmaceut.Sci.3234-258。發(fā)現(xiàn)填充到這些顆粒中的藥物最多的是最親脂性的治療劑。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用包括聚乳酸、卵磷脂、以及磷脂酰膽堿或膽固醇的脂質(zhì)體長期持久釋放。
通過這里描述的方法獲得局部(靶向)持續(xù)釋放，例如，使用由設(shè)計(jì)靶向RES的材料，或由避免RES的細(xì)胞的不同材料構(gòu)成的脂質(zhì)體。另外的靶向方法包括使用抗體或結(jié)合脂質(zhì)體或微球體外表面的可溶重組受體。此外，可用這里所描述的任何裝置，如泵，進(jìn)一步調(diào)整使用這里描述的持續(xù)釋放制劑，用于向特定的靶器官局部給藥。
本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供包括治療有效量的FACGINT或EGF受體配體，以及胃泌素/CCK受體配體組合的持續(xù)釋放藥物組合物?？商砑铀帉W(xué)可接受的載體或者賦形劑。這樣的載體包括但不限于鹽水、緩沖鹽、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。制劑應(yīng)當(dāng)適合給藥方式。
除非有其它定義，這里所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。在本發(fā)明的實(shí)踐中可使用與這里所描述的那些相似或等同的方法和材料?，F(xiàn)在在各種實(shí)施方案中已經(jīng)全面描述了本發(fā)明，通過下列實(shí)施例和權(quán)利要求舉例說明額外的實(shí)施方案，這并不打算用于解釋成進(jìn)一步限定。因此這里結(jié)合所有引用的參考資料的全部內(nèi)容作為參考。
實(shí)施例實(shí)施例1.用GLP-1受體配體、胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)、以及胃泌素/CCK受體配體、胃泌素的治療，防止最近患糖尿病的NOD小鼠的疾病發(fā)展非肥胖性糖尿病(NOD)系小鼠具有與人類I型糖尿病共有許多疾病發(fā)病機(jī)制特征的表型。NOD小鼠典型地早在4周齡顯示破壞的自身免疫的胰腺胰島炎和β細(xì)胞破壞。糖尿病發(fā)病通常在這些小鼠的10-15周齡發(fā)生，觀察到典型的血液葡萄糖水平是在約7mM到約10mM之間(與正常小鼠的約3.0-6.6mM的范圍相比)，胰腺胰島素水平比正常小鼠降低約95％以上。隨著疾病的進(jìn)展，NOD小鼠顯示出越來越嚴(yán)重的慢性糖尿病征兆，血液葡萄糖水平達(dá)到約25到約30mM之間，胰腺胰島素水平下降到事實(shí)上不存在。在疾病的嚴(yán)重階段，超過約99％的β細(xì)胞已經(jīng)被破壞。
在這個(gè)實(shí)施例中，在新近患糖尿病的NOD小鼠中檢查用GLP-1和胃泌素聯(lián)合治療的效果，測定給予GLP-1和胃泌素是否將預(yù)防新近患糖尿病的NOD小鼠的嚴(yán)重高血糖、酮癥酸中毒和死亡以及提高胰腺胰島素含量。使用的I.N.T.TM組合物是胃泌素，如第15位氨基酸是亮氨酸的具有17個(gè)氨基酸殘基的合成的人胃泌素I。使用的GLP-1是GLP-1，其是人/小鼠GLP-1的生物活性片段(與該片段被加工的前體相比在7-36位置上具有殘基；從Bachem H6795獲得)。
監(jiān)測12-14周齡，非肥胖性糖尿病(NOD)雌性小鼠糖尿病發(fā)病的進(jìn)展(禁食血液葡萄糖＞8.0到15mmol/l)，在發(fā)生癥狀后的48小時(shí)內(nèi)，對兩組小鼠中每一組進(jìn)行下列治療一組僅用載體治療；另一組給予100μg/kg/天GLP-1，每個(gè)治療組通過腹膜內(nèi)途徑每天兩次給藥。
給予14天治療。每周監(jiān)測動物的禁食血液葡萄糖(FBG)水平。在撤除食物后大約12小時(shí)以及在上次肽或載體注射后24小時(shí)測量FBG水平。一旦治療停止，再監(jiān)測所有小鼠的FBG水平4周(2-6周)以便決定治療性處理結(jié)束后是否持續(xù)預(yù)防高血糖。治療在第14天停止，在第18天對小鼠進(jìn)行采樣以獲得FBG水平(如表2中所示)。
表2.胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)和胃泌素聯(lián)合療法治療新近患糖尿病的NOD小鼠
如上所示，通過腹膜內(nèi)注射，每天2次給予每組NOD雌性小鼠GLP-1(100μg/kg/天)和胃泌素(3μg/kg/天)。使用12-14周齡，在兩天內(nèi)開始患糖尿病(通常認(rèn)為FBG超過6.5mM)的糖尿病小鼠。
該方案包括在6周再次對這些小鼠進(jìn)行采樣用于采集數(shù)據(jù)，采集血液用于測定FBG和血漿C肽，以及處死小鼠測定胰腺胰島素和對胰島炎癥(胰島炎)評分。從治療的一開始，小鼠既不接受胰島素替代治療也不接受免疫抑制。評定下列參數(shù)存活率、胰腺胰島素水平、胰島炎癥的存在以及禁食血液葡萄糖水平。
結(jié)果顯示在載體治療的對照組(組1)的動物中，禁食血液葡萄糖(FBG)值在這種假治療期間逐漸增加，從第0天的11mM葡萄糖到第18天的24mM。
相反，在用GLP-1和胃泌素治療的小鼠中，與載體治療的小鼠(24.4mM)相比，F(xiàn)BG值(7.9mM葡萄糖)顯著降低，實(shí)際上減少到小于在載體治療小鼠中所產(chǎn)生水平的三分之一；表2)。最顯著和最令人驚訝地，GLP-1和胃泌素的組合在降低FBG水平中比單獨(dú)用胃泌素或者單獨(dú)用GLP-1(FBG水平分別是19.0mM和15.8mM)更有效。只有在用該組合治療的小鼠中，F(xiàn)BG降低到正常范圍的水平。在用GLP-1和胃泌素治療的小鼠中血液葡萄糖水平調(diào)節(jié)的改善被認(rèn)為可能與這些小鼠的胰腺中胰島素含量的顯著增加有關(guān)。
總之，在這個(gè)研究中結(jié)果顯示用GLP-1和胃泌素低劑量對新近患糖尿病的小鼠的短期治療防止疾病的進(jìn)展，逆轉(zhuǎn)疾病狀態(tài)產(chǎn)生約正常的血液葡萄糖水平。此外，在用胃泌素和GLP-1治療的小鼠中這種血液葡萄糖水平的顯著降低在治療停止后再持續(xù)一段時(shí)期。預(yù)計(jì)在這些動物中，數(shù)據(jù)將顯示胰腺胰島素含量增加，以及顯示這些影響將在治療終止后持續(xù)很長時(shí)間。
另外組的NOD雌性小鼠用催乳素受體配體、催乳素(PRL)、和胃泌素/CCK受體配體，以及用生長激素受體配體、生長激素(GH)，和胃泌素/CCK受體配體、胃泌素治療。預(yù)期數(shù)據(jù)將顯示這些治療對FBG和與這里用GLP-1治療所獲得的數(shù)據(jù)相似的其它參數(shù)產(chǎn)生影響。
實(shí)施例2.含有或不含有聚乙二醇化組合物的比較為了測定持續(xù)釋放制劑是否將提供比被配制成用于單次給藥或非持續(xù)釋放給藥，其它方面完全相同的制劑更好的功效，進(jìn)行對比用含有聚乙二醇化或者非聚乙二醇化的I.N.T.TM組合物治療NOD小鼠方案的研究。I.N.T.TM組合物中至少一種組分的聚乙二醇化可延長在體內(nèi)保持活性形式的治療試劑的時(shí)間。
研究顯示，與配制成直接，即，非持續(xù)釋放給藥的I.N.T.TM組合物相比，給予I.N.T.TM組合物中至少一種試劑的持續(xù)釋放制劑能夠改善NOD小鼠的糖尿病狀態(tài)。
實(shí)施例3.劑量組合物給藥頻率的比較為了測定持續(xù)釋放制劑是否將提供比非持續(xù)釋放直接制劑更好的功效，設(shè)計(jì)比較每天三次與每天一次給予NOD小鼠I.N.T.TM組合物方案的實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果顯示，I.N.T.TM組合物的生物可利用率延長，可與用I.N.T.TM組合物的持續(xù)釋放制劑獲得的生物可利用率相比，可提高功效，即，與I.N.T.TM組合物的直接或非持續(xù)釋放制劑相比，可更好地糾正NOD小鼠的糖尿病狀態(tài)的癥狀，以及可減少這樣糾正癥狀所需劑量的頻率。
權(quán)利要求
1.治療糖尿病的方法，該方法包括給需要施用的哺乳動物施用治療有效量的包含胃泌素/CCK受體配體和補(bǔ)充用于胰島再生治療的胃泌素的因子(FACGINT)的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中FACGINT是選自下組中的至少一種胰高血糖素樣肽1受體配體；胰高血糖素樣肽2受體配體；腸抑胃肽(GIP)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體；二肽基肽酶IV抑制劑；REG蛋白受體配體；生長激素受體配體；催乳素(PRL)受體配體；胰島素樣生長因子(IGF)受體配體；PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體配體，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)受體配體；層粘連蛋白受體配體；血管活性腸肽(VIP)受體配體；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體配體；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體；活化素A受體配體；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體；以及促胰液素受體配體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中FACGINT包括胰高血糖素樣肽受體配體，其是GLP-1或者exendin-4。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中FACGINT包括生長激素受體配體，該生長激素受體配體包括生長激素。
5.治療糖尿病的方法，該方法包括將大量細(xì)胞與包含至少一種FACGINT和胃泌素/CCK受體配體的組合物離體接觸，只要FACGINT不是EGF受體配體；以及給需要其的哺乳動物施用該細(xì)胞，因而治療糖尿病。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中細(xì)胞是自體的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5的方法，其中施用或接觸是提供有效增加哺乳動物中胰島素分泌細(xì)胞量的量的組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或5的方法，其中該組合物是全身給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或5的方法，其中組合物中FACGINT的量基本上小于在缺乏胃泌素/CCK受體配體時(shí)，降低糖尿病哺乳動物中血液葡萄糖所需FACGINT的最小有效劑量。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或5的方法，進(jìn)一步包括測量選自下組的參數(shù)血液葡萄糖、血清葡萄糖、血液糖基化血紅蛋白、胰腺β細(xì)胞團(tuán)、血清胰島素、胰腺胰島素含量以及形態(tài)度量測定的β細(xì)胞團(tuán)。
11.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中細(xì)胞是胰腺導(dǎo)管細(xì)胞。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括測量選自下組的參數(shù)胰島素分泌細(xì)胞的量、胰島素分泌細(xì)胞的葡萄糖反應(yīng)性、胰島前體細(xì)胞增殖的量、以及成熟胰島素分泌細(xì)胞的量。
13.在哺乳動物中誘導(dǎo)胰導(dǎo)再生的方法，該方法包括以足以增加胰腺組織中胰島前體細(xì)胞增殖的量，給哺乳動物施用包含F(xiàn)ACGINT和胃泌素/CCK受體配體的組合的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體，因而誘導(dǎo)胰島再生。
14.在哺乳動物中誘導(dǎo)胰島再生的方法，該方法包括以足以增加哺乳動物中胰腺胰島素分泌β細(xì)胞數(shù)量的量，給予包含F(xiàn)ACGINT和胃泌素/CCK受體配體的組合的組合物，其中FACGINT不是EGF受體配體。
15.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，進(jìn)一步包括接觸步驟前，離體培養(yǎng)該細(xì)胞。
16.包括胃泌素/CCK受體配體和FACGINT的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，含有效誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化形成成熟胰島素分泌細(xì)胞的劑量。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，含有藥學(xué)可接受的載體。
19.治療或預(yù)防糖尿病的試劑盒，含有包括胃泌素/CCK受體配體和FACGINT的組合物、容器、以及使用說明，只要FACGINT不是EGF受體配體。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的試劑盒，其中該組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)可接受的載體。
21.在移植細(xì)胞的糖尿病受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞的方法，包括在受體中移植干細(xì)胞，以及給受體施用含有有效劑量的胃泌素/CCK受體配體和至少一種FACGINT中的每一種的組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中該細(xì)胞是從人或豬中獲得。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中移植細(xì)胞是從胰島、臍帶、胚胎、或者干細(xì)胞系中獲得。
24.根據(jù)權(quán)利要求1，5，13，14和21中任何一項(xiàng)的方法，其中胃泌素/CCK受體配體是胃泌素。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中胃泌素是胃泌素-17。
26.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中胃泌素/CCK受體配體是人胃泌素-17Leul5。
27.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中在受體中植入細(xì)胞是使用選自直接注射到器官以及靜脈內(nèi)給藥的途徑。
28.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中給予該細(xì)胞是局部輸送到選自胰腺、腎、以及肝的器官。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中局部輸送細(xì)胞是選自下組中的步驟經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)。
30.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中注射細(xì)胞是經(jīng)皮或穿肝輸送到門靜脈。
31.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，進(jìn)一步包括在移植步驟前，用組合物離體處理細(xì)胞。
32.減少治療人糖尿病所需移植干細(xì)胞量的方法，該方法包括給受體施用有效劑量的受體胃泌素/CCK受體配體和FACGINT中的每一種，只要FACGINT不是EGF受體配體，其中與在缺乏給予其它相同受體有效劑量時(shí)所需的細(xì)胞量相比，所需細(xì)胞的量減少。
33.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，進(jìn)一步包括給受試者施用抑制免疫反應(yīng)的試劑。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中抑制免疫反應(yīng)的試劑是藥物。
35.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中抑制免疫反應(yīng)的試劑選自下組中的至少一種雷帕霉素；皮質(zhì)類甾醇；硫唑嘌呤；霉酚酸酯；環(huán)孢菌素；環(huán)磷酰胺；氨甲蝶呤；6-巰基嘌呤；FK506；15-去氧精胍菌素；FTY 720；米托蒽醌；2-氨基-1，3-丙二醇；2-氨基-2[2-(4-辛基苯基)乙基]丙烷-1，3-二醇鹽酸；6-(3-二甲基-氨基丙酰)弗司扣林；以及demethimmunomycin。
36.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中抑制免疫反應(yīng)的試劑是蛋白質(zhì)。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中蛋白質(zhì)包含抗體的氨基酸序列。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中抑制免疫反應(yīng)的試劑選自下組中的至少一種hul 124；BTI-322；allotrap-HLA-B270；OKT4A；Enlimomab；ABX-CBL；OKT3；ATGAM；巴利昔單抗；達(dá)克珠單抗；即復(fù)寧；1SAtx247；Medi-500；Medi-507；Alefacept；依利佐單抗(efalizumab)；英夫利昔單抗；以及干擾素。
39.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中循序給予胰島再生治療組合物和抑制免疫反應(yīng)的試劑。
40.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中全身給予胰島再生治療組合物和抑制免疫反應(yīng)試劑中的至少一種。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中作為丸劑給予胰島再生治療組合物。
42.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中通過選自靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)以及肌內(nèi)途徑給予胰島再生治療組合物和抑制免疫反應(yīng)的試劑中的至少一種。
43.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中口服給予抑制免疫反應(yīng)的試劑。
44.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中抑制免疫反應(yīng)的試劑選自FK506、雷帕霉素、和達(dá)克珠單抗中的至少一種。
45.根據(jù)權(quán)利要求1或32的方法，其中受試者是人。
46.治療糖尿病受試者的試劑盒，包括免疫抑制劑、包含F(xiàn)ACGINT的INT組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體，以及容器。
47.包括FACGINT和免疫抑制劑的藥物組合物，只要FACGINT不是EGF受體配體。
48.I.N.T.TM治療組合物的持續(xù)釋放的藥物組合物，該組合物包括胃泌素受體配體；和EGF受體配體或FACGINT；其中胃泌素受體配體、或者EGF受體配體或FACGINT中的至少一種是持續(xù)釋放制劑。
49.根據(jù)權(quán)利要求16或48的組合物，進(jìn)一步包括免疫抑制劑。
50.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，其中持續(xù)釋放制劑選自聚乙二醇化和基于多泡脂質(zhì)的脂質(zhì)體。
51.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，其中EGF受體配體選自EGF和TGFA。
52.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，其中FACGINT是選自下組中的至少一種胰高血糖素樣肽1受體配體；胰高血糖素樣肽2受體配體；腸抑胃肽(GIP)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體；二肽基肽酶IV抑制劑；REG蛋白受體配體；生長激素受體配體；催乳素(PRL)受體配體；胰島素樣生長因子(IGF)受體配體；PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體配體，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)受體配體；層粘連蛋白受體配體；血管活性腸肽(VIP)受體配體；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體配體；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體；活化素A受體配體；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體；以及促胰液素受體配體。
53.根據(jù)權(quán)利要求51的組合物，其中EGF受體配體是低分子量藥物。
54.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，配制成用于腸胃外給藥。
55.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，配制成用于口服給藥。
56.根據(jù)權(quán)利要求50的組合物，配制成用于選自皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、以及肌內(nèi)注射的給藥途徑。
57.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，其中將胃泌素受體配體、或者EGF受體配體或FACGINT中的至少一種配制成用于全身給藥。
58.根據(jù)權(quán)利要求16和48中任何一項(xiàng)的組合物，配制成用于局部給藥。
59.根據(jù)權(quán)利要求58的組合物，其中局部給藥是靶向胰腺。
60.根據(jù)權(quán)利要求58的組合物，其中選自下組的方法局部給藥經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)。
61.根據(jù)權(quán)利要求16和48中任何一項(xiàng)的組合物，配制成用于選自經(jīng)皮和粘膜給藥的給藥途徑。
62.根據(jù)權(quán)利要求48的藥物組合物，配制成用于通過機(jī)械裝置給藥。
63.根據(jù)權(quán)利要求16和48中任何一項(xiàng)的組合物，配制成用于用選自下列的裝置給藥可降解的植入物；經(jīng)皮貼片；導(dǎo)管；可植入泵；經(jīng)皮泵；輸液泵；以及離子電滲療法裝置。
64.根據(jù)權(quán)利要求48的藥物組合物，配制成用于選自皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)，以及胰內(nèi)的給藥途徑。
65.根據(jù)權(quán)利要求64的藥物組合物，其中靜脈內(nèi)途徑是輸送到門靜脈。
66.根據(jù)權(quán)利要求62的藥物組合物，其中裝置是泵。
67.根據(jù)權(quán)利要求62的藥物組合物，其中是局部給藥。
68.根據(jù)權(quán)利要求48的組合物，其中給藥是局部給藥并且通過選自下列的途徑給藥經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)。
69.根據(jù)權(quán)利要求62的藥物組合物，其中是全身給藥。
70.根據(jù)權(quán)利要求48的藥物組合物，含有有效劑量。
71.包括根據(jù)權(quán)利要求48的組合物的至少一種劑量的試劑盒。
72.減少用I.N.T.TM組合物治療糖尿病受試者的頻率的方法，該方法包括將組合物中的至少一種組分制成持續(xù)釋放制劑；以及根據(jù)方案給受試者施用該組合物，該方案比不是這樣配制以及其它方面完全相同的組合物在治療之間有更長的時(shí)間間隔。
73.根據(jù)權(quán)利要求72的方法，其中通過選自下組的途徑給藥經(jīng)內(nèi)窺鏡逆行膽胰管造影(ERCP)；超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針吸引給藥(EUS-FNAD)；注射到胰動脈內(nèi)；注射到門靜脈內(nèi)；胰內(nèi)注射；以及注射到肝動脈內(nèi)。
74.提高糖尿病受試者中I.N.T.TM組合物功效的方法，該方法包括給受試者施用組合物中的至少一種組分被配制成用于產(chǎn)生持續(xù)釋放的I.N.T.TM組合物；以及比較給予該組合物量治療受試者的功效與不具有這樣制備的組分和其它方面完全相同的組合物的功效，通過測定減少或消除受試者糖尿病癥狀所需持續(xù)釋放配制試劑的量降低，使得具有持續(xù)釋放配制組合物的I.N.T.TM組合物的功效提高。
75.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中比較功效是進(jìn)一步分析組合物的毒性，使得與不具有這樣配制的組分和其它方面完全相同的I.N.T.TM組合物的毒性相比，給予組合物后較少的或較輕微的有害癥狀表明，具有至少一種組分配制成產(chǎn)生持續(xù)釋放的組合物的毒性降低。
76.根據(jù)權(quán)利要求73-75中任何一項(xiàng)的方法，其中組分的持續(xù)釋放制劑選自聚乙二醇化和基于多泡脂質(zhì)的脂質(zhì)體。
77.根據(jù)權(quán)利要求73-76中任何一項(xiàng)的方法，其中具有持續(xù)釋放制劑的組分是選自EGF和TGFα的EGF受體配體。
78.根據(jù)權(quán)利要求73-76中任何一項(xiàng)的方法，其中FACGINT是選自下組中的至少一種胰高血糖素樣肽1受體配體；胰高血糖素樣肽2受體配體；腸抑胃肽(GIP)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)受體配體；二肽基肽酶IV抑制劑；REG蛋白受體配體；生長激素受體配體；催乳素(PRL)受體配體；胰島素樣生長因子(IGF)受體配體；PTH相關(guān)蛋白(PTHrP)受體配體；肝細(xì)胞生長因子(HGF)受體配體；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體配體，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)受體配體；層粘連蛋白受體配體；血管活性腸肽(VIP)受體配體；成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體配體；角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體配體；神經(jīng)生長因子(NGF)受體配體；胰島再生相關(guān)蛋白(INGAP)受體配體；活化素A受體配體；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受體配體；紅細(xì)胞生成素(EPO)受體配體；垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)受體配體；粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)受體配體；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)；血小板衍生生長因子(PDGF)受體配體；以及促胰液素受體配體。
79.根據(jù)權(quán)利要求78的方法，其中組分是低分子量藥物。
80.根據(jù)權(quán)利要求73-76中任何一項(xiàng)的方法，其中給藥是通過選自下組的途徑輸送腸胃外、口服、經(jīng)皮、皮下、粘膜、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、胰內(nèi)以及肌內(nèi)。
8l.根據(jù)權(quán)利要求80的方法，其中給藥產(chǎn)生局部分配。
82.根據(jù)權(quán)利要求82的方法，進(jìn)一步包括給予有效量的組合物。
83.根據(jù)權(quán)利要求80的方法，其中在給藥前，將組合物配制成適合使用持續(xù)釋放裝置。
84.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中裝置選自下組可降解的植入物；經(jīng)皮貼片；導(dǎo)管；可植入泵；經(jīng)皮泵；輸液泵；以及離子電滲療法裝置。
85.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中裝置是泵。
86.根據(jù)權(quán)利要求80的方法，其中通過靜脈內(nèi)途徑給藥是注射到門靜脈內(nèi)。
87.減少治療糖尿病受試者的頻率的方法，該方法包括制備通過長期連續(xù)釋放給受試者施用I.N.T.TM組合物的裝置；給受試者提供該裝置；以及通過置換或重新填充裝置反復(fù)治療受試者。
88.根據(jù)權(quán)利要求87的方法，其中裝置是泵。
89.根據(jù)權(quán)利要求88的方法，其中泵選自下組經(jīng)皮泵；碳氟(flurorcarbon)推進(jìn)劑泵；滲透泵；微滲透泵；可植入泵；和輸液泵。
90.根據(jù)權(quán)利要求87的方法，其中裝置是選自下組可降解的植入物；非降解的植入物；粘膜粘附植入物；經(jīng)皮貼片；導(dǎo)管；以及離子電滲療法裝置。
91.在細(xì)胞的糖尿病受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞的方法，包括在受體中移植細(xì)胞；以及給予包含有效劑量的胃泌素/CCK受體配體；和FACGINT或EGF受體配體中的每一種的持續(xù)釋放組合物，其中在受體中擴(kuò)增和分化干細(xì)胞形成胰島素分泌細(xì)胞。
92.治療糖尿病的組合物，包括胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體配體和胃泌素/CCK受體配體。
93.根據(jù)權(quán)利要求92的組合物，其中GLP-1受體配體是GLP-1。
94.治療糖尿病的組合物，包括生長激素(GH)受體配體和胃泌素/CCK受體配體。
95.根據(jù)權(quán)利要求94的組合物，其中GH是人生長激素(HGH)。
96.治療糖尿病的組合物，包括催乳素(PL)受體配體和胃泌素/CCK受體配體。
97.根據(jù)權(quán)利要求96的組合物，其中PL是人PL。
98.根據(jù)權(quán)利要求92-97中任何一項(xiàng)的組合物，其中胃泌素是第15位氨基酸是亮氨酸殘基的具有17個(gè)氨基酸的胃泌素。
99.根據(jù)權(quán)利要求92-98中任何一項(xiàng)的組合物，進(jìn)一步包括免疫抑制劑。
100.根據(jù)權(quán)利要求92-99中任何一項(xiàng)的組合物，進(jìn)一步配制成用于持續(xù)釋放。
101.治療糖尿病受試者的方法，包括給受試者施用包含胃泌素/CCK受體配體和胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體配體的組合物。
102.治療糖尿病受試者的方法，包括給受試者施用包含胃泌素/CCK受體配體和生長激素(GH)受體配體的組合物。
103.治療糖尿病受試者的方法，包括給受試者施用包含胃泌素/CCK受體配體和催乳素(PL)受體配體的組合物。
104.權(quán)利要求101-103中任何一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括給予免疫抑制劑。
105.權(quán)利要求101-104中任何一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括使用持續(xù)釋放裝置給予受體配體或試劑中的至少一種。
106.權(quán)利要求101-104中任何一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括將受體配體或試劑中的至少一種配制成用于持續(xù)釋放。
107.權(quán)利要求101-104中任何一項(xiàng)的方法，其中糖尿病受試者具有I型糖尿病或II型糖尿病。
108.在純化的胰島移植物的糖尿病受試者受體中擴(kuò)大胰島移植物的功能性β細(xì)胞團(tuán)的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效劑量的胃泌素CCK受體配體和FACGINT。
109.治療人糖尿病的方法，包括將胰島制品移植給糖尿病受試者；以及給受試者施用有效量的胃泌素/CCK受體配體和FACGINT。
110.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中FACGINT包括其是催乳素的催乳素受體配體。
全文摘要
提供胰島再生治療的組合物和方法，包括補(bǔ)充胃泌素/CCK受體配體的因子組的成員，向靶器官持續(xù)釋放輸送和局部輸送的制劑、裝置和方法。
文檔編號A61K38/26GK1729016SQ200380107284
公開日2006年2月1日 申請日期2003年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月22日
發(fā)明者S·J·布蘭德, A·科露茲, A·帕斯特拉克, Y·休 申請人:瓦拉塔藥品公司