專利名稱：經(jīng)加工的人參提取物及從中分離的皂角甙的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及經(jīng)加工的人參提取物及從中分離的皂角甙化合物在預(yù)防和治療人類或哺乳動(dòng)物腦中風(fēng)和腦部疾病中的新用途。本發(fā)明更特別地涉及藥理學(xué)功效增強(qiáng)的經(jīng)加工的人參制品的新用途，其中所述的藥理學(xué)功效的增強(qiáng)是由于一系列的處理方法帶來(lái)的，所述處理方法即酸處理和后續(xù)的生物轉(zhuǎn)化處理如乳酸發(fā)酵和腸道細(xì)菌發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
腦中風(fēng)由兩種類型組成，即缺血性中風(fēng)和出血性中風(fēng)，前者是由于供應(yīng)到腦部的血流受阻或減少造成腦組織缺血病癥而引發(fā)的，后者是由于腦部血管出血而引發(fā)的，其中前者占所有腦中風(fēng)患者中的大約80％。
已報(bào)道腦神經(jīng)細(xì)胞損傷的原因是興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的過(guò)量釋放、自由基的產(chǎn)生、蛋白合成的抑制、基因異常表達(dá)以及免疫反應(yīng)的激活等等，然而，目前還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出治療上有效的藥劑來(lái)避免腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷。
抑制環(huán)氧化酶-2(COX-2)可以保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞的活性，這是由通過(guò)抑制PGE2(前列腺素E2)的再生來(lái)抑制谷氨酸鹽的釋放而完成的。因此，由于許多患風(fēng)濕性疾病和疼痛癥的患者已經(jīng)服用了COX-2抑制劑，有關(guān)腦中風(fēng)發(fā)生率和服藥人群之間相關(guān)性的臨床研究結(jié)果就引起了人們的很大興趣，COX-2抑制劑可能成為研究預(yù)防或治療腦中風(fēng)的有效藥劑的新目標(biāo)(Iadecola，C.等，PNAS，30，pp1294-1299，2001)。
已知有許多隸屬于五加科(Araliaceae)的人參屬(Panax genus)植物，例如分布或栽培于以下地區(qū)和國(guó)家的人參亞洲遠(yuǎn)東地區(qū)的高麗參(Panax ginseng)，美國(guó)和加拿大的西洋參(Panax quinquefolia)，中國(guó)的三七(Panax notoginseng)，北美洲東部地區(qū)的三葉人參(Panax trifolia)，日本、中國(guó)和尼泊爾的竹節(jié)參(Panax japonica)，尼泊爾的假人參(Panaxpseudoginseng)，越南的越南人參(Panax vietnamensis)，Panax elegatior，大葉三七(Panax wangianus)和羽葉三七(Panax bipinratifidus)等。
至今，人參作為一種有代表性的營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)劑已經(jīng)廣為人知。最近，已經(jīng)有許多關(guān)于人參的化學(xué)組成和藥理功效的科學(xué)研究的報(bào)道，因此可以運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)手段來(lái)關(guān)注其神秘的藥理功效。直到現(xiàn)在，人參一直被認(rèn)為具有多種藥理功效，如防止衰老、抗動(dòng)脈硬化、治療高脂血、治療肝功能不全、改善肝功能、避免輻射傷害、提高免疫力、改善腦功能、抗血栓形成、抗應(yīng)激、抗糖尿病、抗高血壓、抗腫瘤的功效等等。
目前已知，人參屬植物的主要成分是達(dá)瑪烷骨架型皂角甙。人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1和Re是高麗參的主要皂角甙。根據(jù)它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)的不同，它們的生物活性互有不同。
已經(jīng)進(jìn)行了很多嘗試來(lái)對(duì)皂角甙的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改性，以便通過(guò)加工來(lái)提高它們的藥理學(xué)效能。
在1997年1月21號(hào)公開(kāi)的韓國(guó)專利申請(qǐng)No.10-1997-000239中，公開(kāi)了用于制備經(jīng)加工的人參的方法，其通過(guò)對(duì)含有高含量人參皂甙Rg3和Rg5的人參進(jìn)行高溫處理，由此獲得效能提高而不同于人參原始形態(tài)的經(jīng)加工人參。
在1997年9月12號(hào)公開(kāi)的韓國(guó)專利申請(qǐng)No.10-1997-061909中，公開(kāi)了使用腸道細(xì)菌從人參皂甙生產(chǎn)皂角甙代謝物如化合物K的方法。
然而，還沒(méi)有公開(kāi)或提示采用一系列以下處理方法來(lái)制備經(jīng)加工的人參屬植物的方法，所述處理方法包括酸處理和后續(xù)的使用乳酸菌或腸道細(xì)菌發(fā)酵的發(fā)酵處理。
本發(fā)明的發(fā)明人對(duì)人參的化學(xué)成分和藥理功效進(jìn)行了深入的科學(xué)研究，特別是對(duì)人參的加工方法和經(jīng)加工人參的生理學(xué)活性進(jìn)行了深入的研究。作為研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過(guò)使用以下系列處理方法，即包括酸處理和后續(xù)的使用乳酸菌或腸道細(xì)菌對(duì)人參提取物的發(fā)酵處理，經(jīng)加工的人參提取物顯示出顯著提高的藥理學(xué)功效，尤其是它們對(duì)腦中風(fēng)的預(yù)防或治療活性，由此發(fā)明人最終完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供經(jīng)加工的人參提取物及從中分離出的皂角甙化合物在制備預(yù)防或治療腦中風(fēng)疾病的藥物中的用途，其中獲得該經(jīng)加工人參提取物的方法包括以下必要步驟對(duì)人參提取物進(jìn)行酸處理以及用乳酸菌或腸道細(xì)菌進(jìn)行隨后的發(fā)酵處理。
同時(shí)，本發(fā)明的另一目的是提供治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)疾病的方法，該方法包括將有效量的上述提取物和從中提取的皂角甙化合物與可藥用的載體一起施用于所述哺乳動(dòng)物。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明提供了含有作為活性成分的經(jīng)加工的人參提取物以及可藥用的載體的藥物組合物，其中所述經(jīng)加工的人參提取物的含量為治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的有效量，其中獲得該經(jīng)加工人參提取物的方法包括以下必要步驟對(duì)人參提取物進(jìn)行酸處理及用乳酸菌或腸道細(xì)菌進(jìn)行隨后的發(fā)酵處理。
本發(fā)明還提供了人參提取物在制備預(yù)防或治療腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物中的用途，其中獲得該經(jīng)加工人參提取物的方法包括以下必要步驟對(duì)人參提取物進(jìn)行酸處理及用乳酸菌或腸道細(xì)菌進(jìn)行隨后的發(fā)酵處理。
此外，本發(fā)明還提供治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物腦中風(fēng)疾病的方法，該包括將有效量的上述提取物與可藥用的載體一起施用于所述哺乳動(dòng)物。
上述提取物可以用下列步驟制備1.步驟1如下所述，步驟1是對(duì)植物原料進(jìn)行以下酸處理的步驟。
(1)酸處理步驟特別的是，在步驟1中，對(duì)人參屬的干植物原料，如高麗參的根，進(jìn)行以下的酸處理；如，在植物原料中加入大約1到50倍、優(yōu)選5到20倍的0.01％到50％、優(yōu)選0.1％到10％的酸性組分(優(yōu)選醋酸、檸檬酸、乳酸或含酸的食物如五味子(Schizandra chinensis)的果實(shí))，然后在20℃到80℃、優(yōu)選40℃到70℃的溫度范圍內(nèi)，溫育1到48小時(shí)，優(yōu)選溫育3到12小時(shí)。在其中加入有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙醚和乙酸乙酯，然后進(jìn)行抽提，以獲得可溶于有機(jī)溶劑的提取物；最后用堿中和該提取物，以獲得化學(xué)加工的人參提取物。
在比加工過(guò)程中加熱溫度低的溫度即在常溫至80℃溫度下，使用已知方法對(duì)由此加工的人參進(jìn)行干燥，以獲得干燥的加工人參，或者如果需要，進(jìn)一步加工制成人參粉。
作為選擇，可以用已知方法抽提經(jīng)加工的人參，以獲得經(jīng)加工的人參提取物。特別是，使用溶劑抽提經(jīng)加工的人參，然后在真空中或凍干機(jī)中除去該溶劑，以獲得干粉形式的經(jīng)加工的人參提取物。
可在此使用的溶劑包括水、諸如甲醇、乙醇等的低級(jí)醇、諸如丙酮、甲基乙基酮等的低級(jí)酮、超臨界流體或它們的混合溶劑。
可使用的植物原料包括并不限于人參屬植物本身，如鮮人參、紅白參、人參細(xì)根或人參葉或其提取物，在使用時(shí)可以用其原本形式、將其切細(xì)或研成粉末、其加工產(chǎn)品和它們包含達(dá)瑪烷型皂角甙的副產(chǎn)品，優(yōu)選以下人參的根、莖、花、葉和果，和它們的組織培養(yǎng)物及其提取物高麗參、西洋參、三七、三葉人參、竹節(jié)參、假人參、越南人參、Panaxelegatior、大葉三七、羽葉三七和Panax angustifolium。
可在對(duì)植物原料進(jìn)行上述步驟(1)的處理后進(jìn)行以下的步驟2。
2.步驟2發(fā)酵步驟隨后，如下所述，對(duì)上述步驟1獲得的提取物進(jìn)行以下的生物轉(zhuǎn)化法處理如用乳酸或腸道細(xì)菌進(jìn)行發(fā)酵例如，在步驟1獲得的提取物中加入乳酸菌或腸道細(xì)菌，并在20℃到50℃、優(yōu)選25℃到40℃的溫度范圍，溫育8小時(shí)到8天、優(yōu)選24小時(shí)到3天，以獲得用細(xì)菌發(fā)酵的提取物。
溫育時(shí)間可根據(jù)所使用的細(xì)菌屬的不同而改變。
可采用的乳酸菌包括能將人參皂甙Rg3代謝為人參皂甙Rh2的任何一種乳酸菌，優(yōu)選雙岐桿菌屬的乳酸菌，更優(yōu)選從下列菌種中選出的至少一種菌或混合菌嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、雙岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)、乳酸乳桿菌(Lactobacillus lactis)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、雙歧桿菌K-103(Bifidobacterium K-103)、雙歧桿菌K-506、雙歧桿菌K-513、雙歧桿菌K-525、雙歧桿菌KK-1和KK-2(發(fā)表于《藥學(xué)研究檔案(Arch.Pharm.Res.)》，21，p54-61，1988)。
可采用的腸道細(xì)菌包括可將人參皂甙Rg3代謝為人參皂甙Rh2的任何一種腸道細(xì)菌，優(yōu)選以下屬的腸道細(xì)菌擬桿菌屬(Bacterioides)、梭桿菌屬(Fusobacterium)或真細(xì)菌屬(Eubacterium)，更優(yōu)選從下列菌種中選出的至少一種菌或混合菌擬桿菌JY-6(發(fā)表于《生物制藥通報(bào)(Biol.Pharm.Bull.)》，23，pp1481-1485，2000)、糞便擬桿菌(Bacteriodesstercoris)、梭桿菌K-60(Fusobacterium K-60)(發(fā)表于《生物制藥通報(bào)》，同上)和真細(xì)菌L-8(Eubacterium L-8)(發(fā)表于《生物制藥通報(bào)》，同上)。
為了從上述步驟2獲得的提取物中分離皂角甙組分或皂角甙化合物，可在上述步驟基礎(chǔ)上進(jìn)行下列步驟。
3.步驟3分離步驟為了從步驟2中制備的提取物中分離具有藥理活性的組分或皂角甙化合物，可使用下列物質(zhì)作為合適的溶劑從步驟2中制備的提取物中萃取或分離上述的組分或化合物水、諸如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等的低級(jí)醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、己烷、乙醚或它們的混合溶劑。
作為選擇，可以用特殊的提取方法抽提或分離活性成分，如用超臨界流體提取方法(SFE)來(lái)獲得部分純化的皂角甙組分，并進(jìn)一步用硅膠柱色譜法從中分離單一的皂角甙。
在上述步驟之后，如有必要，除上述步驟之外還可以采用下列步驟如通過(guò)凍干法進(jìn)行的干燥步驟、攪拌或稀釋步驟。
根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)品的最終形式，可選擇下列步驟中的任一種或兩種。
4.步驟4干燥步驟(1)將步驟2或3中獲得的上述人參提取物經(jīng)真空濃縮后，用凍干法或噴霧干燥法進(jìn)行干燥。
(2)步驟2或3中獲得的上述人參提取物通過(guò)離心除去其中的雜質(zhì)和沉淀，將上清液經(jīng)真空濃縮后，用凍干法或噴霧干燥法進(jìn)行干燥。
在上述步驟1和步驟2的過(guò)程中，由于步驟1中的酸處理或熱處理，植物原料中含有的皂角甙如人參皂甙Rb1、Rb2、Rc等被轉(zhuǎn)化為經(jīng)化學(xué)改性的人參皂甙如Rg3，然后經(jīng)改性的皂角甙3位上的糖基進(jìn)一步被降解而形成含有降解的人參皂甙Rh2的經(jīng)進(jìn)一步改性的皂角甙。
本發(fā)明還提供含有作為活性成分的皂角甙化合物以及可藥用的載體的藥物組合物，其中所述皂角甙化合物的含量為治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的有效量，該皂角甙化合物選自下列物質(zhì)或其混合物人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、20-人參皂甙Rg3，優(yōu)選20-人參皂甙Rg3。
本發(fā)明還提供皂角甙化合物在制備治療或預(yù)防腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物中的用途，其中所述的皂角甙化合物選自下列物質(zhì)及其混合物人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、20-人參皂甙Rg3，優(yōu)選20-人參皂甙Rg3。
另外，本發(fā)明還提供治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的方法，該方法包括將有效量的皂角甙化合物連同可藥用的載體施用于上述哺乳動(dòng)物，所述皂角甙化合物選自下列物質(zhì)及其混合物人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、20-人參皂甙Rg3，優(yōu)選20-人參皂甙Rg3。
另外，根據(jù)所使用的方法，本發(fā)明的組合物可以含有傳統(tǒng)的載體、佐劑或稀釋劑。所用的上述載體優(yōu)選為適用于其用途和施用方法的適當(dāng)物質(zhì)，但這也不是限制性的。適用的稀釋劑在Remington的《制藥科學(xué)(Pharmaceutical Science)》(Mack出版公司Mack Publishing Co.，EastonPA)的書(shū)面版本中列出。
下文中，下面的配制方法和賦形劑只是作為示范，而決不是為了限制本發(fā)明。
如本發(fā)明所述的組合物可以作為一種藥物組合物提供，其中該藥物組合物包含可藥用的載體、佐劑或稀釋劑，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、白明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。另外，該制劑可以包含填充劑、抗凝劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、香味劑、乳化劑、防腐劑等等。本發(fā)明的組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法配制，使其在施用于患者后能快速、持續(xù)或延遲地釋放活性成分。
例如，本發(fā)明的組合物可以被溶解在油、丙二醇、或其他制備注射劑時(shí)普遍使用的溶劑中。適用的載體的例子包括但不限于生理鹽水、聚乙二醇、乙醇、植物油、異丙基肉豆蔻酸酯等。在局部施用時(shí)，本發(fā)明的化合物可被配制成軟膏和乳膏形式。
含有該組合物的藥物制劑可以用任何形式制備，如口服劑形式(粉劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、水性藥品、糖漿、酏劑、丸劑、粉劑、袋劑、粒劑)，或局部施用制劑(乳膏、軟膏、洗劑、凝膠劑、香膏、貼片、糊劑、噴霧劑、煙霧劑等等)，或可注射制劑(溶液、混懸液、乳劑)。
本發(fā)明的藥物制劑形式的組合物也可以以其可藥用鹽的形式使用，也可以單獨(dú)或以合適的聯(lián)合的形式使用，也可以與其它具有藥學(xué)活性的化合物聯(lián)合使用。
本發(fā)明中發(fā)明的提取物或化合物的合理劑量可根據(jù)患者病癥和體重、嚴(yán)重程度、藥物形式、施用的途徑和周期的不同而改變，并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇。然而，為了獲得理想的效果，一般來(lái)說(shuō)推薦本發(fā)明中發(fā)明的提取物或化合物的施用量的范圍以體重計(jì)是每天0.01g/kg～10g/kg，優(yōu)選1到5g/kg。這一劑量可以每天一次施用或分成幾次施用。使用組合物的話，復(fù)合草藥成分以重量計(jì)應(yīng)該占組合物總重的0.01％到80％，優(yōu)選0.5％到50％。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)多種途徑在受試動(dòng)物如哺乳動(dòng)物(大鼠、小鼠、家畜或人)上施用?？紤]到所有施用方法，如可以進(jìn)行口服、直腸給藥或通過(guò)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、胸腔內(nèi)、硬膜外或腦室內(nèi)注射進(jìn)行給藥。
通過(guò)完成本領(lǐng)域所熟知的體內(nèi)試驗(yàn)如中腦動(dòng)脈閉塞模型試驗(yàn)，本發(fā)明者證明了含有上述本發(fā)明的人參提取物或化合物的組合物具有預(yù)防或治療腦中風(fēng)的活性。其中所述的中腦動(dòng)脈閉塞模型試驗(yàn)包括下列步驟，即在頸內(nèi)動(dòng)脈中插入尼龍絲，使中腦動(dòng)脈堵塞，120分鐘后又移去尼龍絲使動(dòng)脈再灌注。
同樣，本發(fā)明的另一目的是提供一種健康保健食品來(lái)預(yù)防腦中風(fēng)和腦部疾病，其中該食品包含用上述步驟制備的本發(fā)明的上述提取物或化合物，及營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可用的添加劑。
其中可將上述組合物添加到食品、添加劑或飲品中來(lái)預(yù)防腦中風(fēng)疾病。其中，為了預(yù)防腦中風(fēng)疾病，在食品或飲品中，本發(fā)明的上述提取物或化合物的含量一般來(lái)說(shuō)可占健康食品組合物總重量的0.1重量％到15重量％之間，優(yōu)選1重量％到10重量％之間，在每100ml健康飲品組合物中占1到30g，優(yōu)選3到10g。
假如本發(fā)明的健康飲品組合物中包含作為必需成分并以所示的比例存在的本發(fā)明的上述提取物或化合物，那么對(duì)于其它的液體成分沒(méi)有特別的限制，其中所述的其它液體成分可以是各種芳香劑或天然碳水化合物等，如傳統(tǒng)飲品。前述天然碳水化合物的例子有單糖，如葡萄糖、果糖等；二糖，如麥芽糖、蔗糖等；傳統(tǒng)的糖，如糊精、環(huán)狀糊精；以及糖醇，如木糖醇、赤藻糖醇等。也可以根據(jù)喜好使用除前述芳香劑外的其它的芳香劑，其中包括天然芳香劑，如taumatin，甜菊提取物如levaudioside A、甘草甜素等，以及合成的芳香劑如糖精、阿斯巴甜等。上述的天然碳水化合物的含量一般來(lái)說(shuō)在100ml該飲品組合物中大約占1到20g，優(yōu)選5到12g。
除前述組合物外的其它成分可以是各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)或電解質(zhì)、合成的香味劑、著色劑和改進(jìn)劑(就干酪巧克力等而言)、果膠酸及其鹽、褐藻酸及其鹽、有機(jī)酸、防護(hù)性膠粘劑、pH控制劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、酒精、在碳酸飲品中使用的碳酸化劑等等。前述成分以外的其它成分可以是用于制造天然果汁、果汁飲品和蔬菜飲品的果汁，其中這些成分可以單獨(dú)使用或聯(lián)合使用。這些成分的比例并不太重要，但一般來(lái)說(shuō)在每100重量％的該組合物中大約占0到20重量％。
含有本發(fā)明前述的提取物或化合物的可添加食品的例子有各種食品、飲品、口香糖、維生素復(fù)合物、保健食品等等。
顯然對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明的組合物、應(yīng)用和制備中可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的前提下進(jìn)行多種改進(jìn)和變化。


通過(guò)下列與圖結(jié)合的詳細(xì)圖示將更清楚地了解本發(fā)明上述的和其它的目的、特征以及其它優(yōu)點(diǎn)。
圖1顯示經(jīng)加工的人參提取物及從中得到的皂角甙化合物的功效。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明可以通過(guò)下列實(shí)施例得到更具體地解釋。然而，應(yīng)該理解，本發(fā)明決不是僅限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1經(jīng)加工的人參提取物(1)的制備從Kyung Dong市場(chǎng)(Kyung Dong Market)獲得500g六年生的高麗參根，將其切成片狀，用5L甲醇分五次抽提，然后濃縮得到25g未加工的人參提取物。將該提取物溶解到30ml的蒸餾水中，用1500ml的丁醇分四次萃取，然后濃縮得到10g丁醇組分。在其中加入10g雙歧桿菌KK-1(Bifidobacterium KK-1)(保藏編號(hào)KCCM 10364)和10g雙歧桿菌KK-2(保藏編號(hào)KCCM 10365)，然后于37℃溫育72小時(shí)，得到其培養(yǎng)產(chǎn)物。該培養(yǎng)產(chǎn)物用丁醇提取、濃縮并干燥，得到4g經(jīng)加工的人參提取物，下文中被稱為GBM。
實(shí)施例2經(jīng)加工的人參提取物(2)的制備將1kg六年生的高麗參根切成片狀，用10L甲醇分五次抽提，然后濃縮得到50g人參提取物。將該提取物溶解到50ml的蒸餾水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后濃縮得到20g丁醇組分，下文中被稱為GB。
實(shí)施例3經(jīng)加工的人參提取物(3)的制備將10g六年生的高麗參根切成片狀。在其中加入1L含0.1％乳酸的蒸餾水，在60℃溫育5小時(shí)。將培養(yǎng)物的pH調(diào)到6.8-7.0，用3L的丁醇分三次提取，得到6.5g經(jīng)加工的人參提取物，下文中被稱為GA。
實(shí)施例4經(jīng)加工的人參提取物(4)的制備將10g六年生的高麗參根切成片狀。在其中加入1L含0.1％乳酸的蒸餾水，在60℃溫育5小時(shí)。將培養(yǎng)物的pH調(diào)到6.8-7.0，用3L的丁醇分三次提取，得到6.5g經(jīng)加工的人參提取物。在其中加入5g(濕重)雙歧桿菌KK-1(保藏編號(hào)KCCM 10364)和雙歧桿菌KK-2(保藏編號(hào)KCCM 10365)，然后于37℃溫育72小時(shí)，得到其培養(yǎng)產(chǎn)物。該培養(yǎng)產(chǎn)物用丁醇提取、濃縮并干燥，得到3.5g經(jīng)加工的人參提取物，下文中被稱為GAM。
實(shí)施例5經(jīng)加工的人參提取物(5)的制備1kg切成片狀的高麗參用10L甲醇分五次提取，然后真空濃縮，得到50g提取物。將該提取物溶解到50ml的蒸餾水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后濃縮得到20g丁醇組分。進(jìn)一步對(duì)該組分進(jìn)行硅膠柱色譜法(柱尺寸3.5×60cm，展開(kāi)劑系統(tǒng)氯仿∶甲醇＝10∶1)分離，得到2g含有大量人參皂甙Re、Rf和Rg1的皂角甙組分，下文中被稱為GPT。
實(shí)施例6經(jīng)加工的人參提取物(6)的制備1kg切成片狀的高麗參用10L甲醇分五次提取，然后真空濃縮，得到50g提取物。將該提取物溶解到50ml的蒸餾水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后濃縮得到20g丁醇組分。進(jìn)一步對(duì)該組分進(jìn)行硅膠柱色譜法(柱尺寸3.5×60cm，展開(kāi)劑系統(tǒng)氯仿∶甲醇＝10∶1)分離，得到2g含有大量人參皂甙Re、Rf和Rg的皂角甙組分。在其中各加入3g(濕重)雙歧桿菌KK-1(保藏編號(hào)KCCM 10364)和雙歧桿菌KK-2(保藏編號(hào)KCCM 10365)，然后37℃溫育72小時(shí)，得到其培養(yǎng)產(chǎn)物。將該培養(yǎng)產(chǎn)物用丁醇提取、濃縮并干燥，得到1.2g經(jīng)加工的人參提取物，下文中被稱為GPTM。
實(shí)施例7經(jīng)加工的人參提取物(7)的制備將1kg切成片狀的六年生高麗參用10L甲醇分五次提取，然后真空濃縮得到50g提取物。將該提取物溶解到50ml的蒸餾水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后濃縮得到20g丁醇組分。進(jìn)一步對(duì)該組分進(jìn)行硅膠柱色譜法(柱尺寸3.5×60cm，展開(kāi)劑系統(tǒng)氯仿∶甲醇＝10∶1)，分離，得到2.5g含有大量人參皂甙Rb1、Rb2、Rc和Rd的皂角甙組分，下文中被稱為GPD。
實(shí)施例8經(jīng)加工的人參提取物(8)的制備將1kg切成片狀的六年生的高麗參用10L甲醇分五次提取，然后真空濃縮，得到50g提取物。將該提取物溶解到50ml的蒸餾水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后濃縮得到20g丁醇組分。進(jìn)一步對(duì)該組分進(jìn)行硅膠柱色譜法(柱尺寸3.5×60cm，展開(kāi)劑系統(tǒng)氯仿∶甲醇＝10∶1)，分離到2.5g含有大量人參皂甙Rb1、Rb2、Rc和Rd的皂角甙組分。在其中各加入3g(濕重)雙歧桿菌KK-1(保藏編號(hào)KCCM 10364)和雙歧桿菌KK-2(保藏編號(hào)KCCM 10365)，然后37℃溫育72小時(shí)，得到其培養(yǎng)產(chǎn)物。將該培養(yǎng)產(chǎn)物用丁醇提取、濃縮并干燥，得到2g經(jīng)加工的人參提取物，下文中被稱為GPDM。
對(duì)比例1未經(jīng)加工的人參提取物的制備將20g切成片狀的五年生的高麗參，用5倍蒸餾水在60℃抽提5小時(shí)，用蒸發(fā)器(Eyella，KN-IN型，日本)進(jìn)行真空濃縮，并用凍干法(Samwon Nangyul Co.，SFDSM24L型，韓國(guó))干燥，得到1g未經(jīng)加工的人參粉末。
對(duì)比例2酸處理的人參提取物的制備將20g五年生的高麗參根切成片狀。在其中加入2000ml含0.1％乳酸的蒸餾水，在60℃溫育5小時(shí)。在其中加入5000ml的丁醇，抽提并用蒸發(fā)器(Eyella，KN-IN型，日本)進(jìn)行真空濃縮，用凍干法(SamwonNangyul Co.，SFDSM24L型，韓國(guó))干燥，得到1.5g酸處理的人參提取物。
實(shí)驗(yàn)例1含量分析實(shí)驗(yàn)從上述對(duì)比例1、2和實(shí)施例1和4中得到的提取物中各取2g用100ml甲醇分三次提取。真空濃縮甲醇可溶層，并用100ml蒸餾水重懸。將該懸浮液用100ml乙醚溶劑分三次提取，真空濃縮。然后，將該濃縮物用100ml丁醇分三次提取，真空濃縮，得到它們的濃縮物。將上述濃縮物溶于100ml甲醇，得到100mg的皂角甙組分。用TLC(薄層色譜法，溶劑體系氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10，噴顯劑5％甲醇的硫酸溶液(methanolic sulfuric acid solution)進(jìn)行含量分析，使用TLC掃描儀(日本島津，CS-9301PC)作為檢測(cè)器。由此獲得的結(jié)果如下表1所示。
表1對(duì)比例(CE)1、2和實(shí)施例(E)1、4中皂角甙的含量

結(jié)果，在用乳酸菌處理的實(shí)施例1中，人參皂甙F2和化合物K的含量顯著提高，而在用酸及后續(xù)的乳酸菌處理的實(shí)施例4中，人參皂甙Rg3、人參皂甙Rh2和原人參萜二醇的含量顯著提高。
實(shí)驗(yàn)例2對(duì)腦中風(fēng)的預(yù)防或治療活性為了證實(shí)經(jīng)加工的人參提取物和從中分離的皂角甙化合物對(duì)腦中風(fēng)的預(yù)防或治療活性，并將對(duì)比例1中的未經(jīng)加工的人參提取物和對(duì)比例2中的酸處理的人參提取物的活性與本發(fā)明人參提取物的活性進(jìn)行比較，通過(guò)下列程序進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
方法在再灌注前大約五分鐘時(shí)，對(duì)腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ褪┯貌煌瑵舛鹊拇郎y(cè)樣品。然后開(kāi)始再灌注。在操作1后24小時(shí)，處死該動(dòng)物，取出腦部，然后進(jìn)一步用腦模具將腦切成2mm寬的腦片，用2，3，5-氯化三苯基四唑(TTC)染色法進(jìn)行染色。通過(guò)圖像分析系統(tǒng)對(duì)腦梗塞形成區(qū)域進(jìn)行分析。
結(jié)果如圖1所示，實(shí)施例1的經(jīng)加工的人參提取物(GBM)、實(shí)施例3的皂角甙組分(GA)、實(shí)施例7(GPD)和實(shí)施例8(GPDM)的皂角甙化合物顯示出顯著的腦神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)活性，并且證實(shí)了它們的活性優(yōu)于作為陽(yáng)性對(duì)照的Ebselin(Sigma Co.，)和黃苓苷元。只用載體處理的對(duì)照組被稱為Cont，實(shí)施例1被稱為GBM，實(shí)施例2被稱為GB，實(shí)施例3被稱為GA，實(shí)施例4被稱為GAM，實(shí)施例5被稱為GPT，實(shí)施例6被稱為GPTM，實(shí)施例7被稱為GPD，實(shí)施例8被稱為GPDM?！?”是指該值與對(duì)照組相比在95％顯著水平上顯著。
如上所述，已證實(shí)本發(fā)明制備的經(jīng)加工的人參提取物顯示出了對(duì)腦中風(fēng)的治療和預(yù)防功效，因此，所述提取物可用于抗腦中風(fēng)的藥物或健康保健食品。
實(shí)驗(yàn)例3毒性測(cè)試方法(1)用實(shí)施例1中的提取物對(duì)ICR小鼠(平均體重25±5g)和Sprague-Dawley大鼠(235±10g，Hyochang Science)進(jìn)行急性毒性檢測(cè)。通過(guò)口服和腹膜內(nèi)施用，對(duì)由10只小鼠或大鼠組成的四個(gè)組分別施用500mg/kg、725mg/kg、1000mg/kg和5000mg/kg的測(cè)試樣品或溶劑(0.2ml，腹膜內(nèi)施用)，觀察2周。
方法(2)用實(shí)施例1中的提取物對(duì)ICR小鼠和Sprague-Dawley大鼠進(jìn)行急性毒性檢測(cè)。通過(guò)腹膜內(nèi)施用，對(duì)由10只小鼠或大鼠組成的四個(gè)組分別施用25mg/kg、250mg/kg、500mg/kg和725mg/kg的測(cè)試樣品或溶劑(0.2ml，腹膜內(nèi)施用)，觀察24小時(shí)。
結(jié)果處理方法對(duì)任何組或任一性別的死亡率、臨床征兆、體重改變以及肉眼所見(jiàn)的現(xiàn)象沒(méi)有相關(guān)的影響。這些結(jié)果暗示本發(fā)明制備的提取物是有效且安全的。
下文中，將描述賦形劑的配制方法和種類，但本發(fā)明并不局限于此。代表性制品的例子如下所述。
粉劑的制備實(shí)施例1中的干粉 50mg乳糖100mg滑石10mg將上述成分混合并填充到密封容器中來(lái)制備粉劑制品。
片劑的制備實(shí)施例1中的干粉 50mg玉米淀粉100mg乳糖100mg硬脂酸鎂2mg將上述成分混合并壓片來(lái)制備片劑制品。
膠囊劑的制備實(shí)施例1中的干粉 50mg玉米淀粉100mg乳糖100mg硬脂酸鎂2mg將上述成分混合來(lái)制備片劑制品，并用傳統(tǒng)的膠囊劑制備方法將其填充到明膠膠囊中。
注射劑的制備實(shí)施例1中的干粉 50mg用于注射的蒸餾水適量pH控制劑適量用傳統(tǒng)的注射劑制備方法溶解活性成分、調(diào)節(jié)pH到7.5左右，然后將所有成分裝到2ml安瓿中并消毒，以此來(lái)制備注射制品。
液體藥劑的制備實(shí)施例1中的干粉0.1～80g糖 5～10g檸檬酸 0.05％～0.3％焦糖 0.005％～0.02％維生素C0.1％～1％蒸餾水 79％～94％CO2氣體0.5％～0.82％用傳統(tǒng)的液體藥劑的制備方法溶解活性成分、裝入所有成分并消毒，以此來(lái)制備液體藥劑。
健康保健食物制品實(shí)施例1中的提取物 1000mg維生素混合物適量維生素A醋酸鹽 70μg維生素E 1.0mg維生素B10.13mg維生素B20.15mg維生素B60.5mg維生素B120.2μg維生素C 10mg生物素 10μg煙酰胺 1.7mg葉酸50μg泛酸鈣 0.5mg礦物質(zhì)混合物適量硫酸亞鐵1.75mg氧化鋅 0.82mg碳酸鎂 25.3mg磷酸二氫鉀 15mg
磷酸二鈣 55mg檸檬酸鉀 90mg碳酸鈣 100mg氯化鎂 24.8mg上述維生素和礦物質(zhì)混合物可以在很多方面有所改變。這樣的變化不能被認(rèn)為是脫離本發(fā)明的精神和范圍。
健康飲品制品實(shí)施例1中的提取物1000mg檸檬酸 1000mg寡聚糖 100g杏仁濃縮液 2g?；撬? 1g蒸餾水 900ml用傳統(tǒng)的健康飲品制備方法，將活性成分溶解，混合，在85℃攪拌1小時(shí)，過(guò)濾，然后將所有成分放入1000ml的安瓿中并進(jìn)行消毒。
因此，很明顯，所述的發(fā)明可以在許多方面進(jìn)行改變。這樣的變化不能被認(rèn)為是脫離本發(fā)明的精神和范圍，并且對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯然所有這樣的改進(jìn)應(yīng)該被認(rèn)為包括在下列權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
工業(yè)實(shí)用性如本發(fā)明所述，該組合物含有經(jīng)加工的人參提取物，顯示出對(duì)腦中風(fēng)的預(yù)防或治療功效，其中所述的經(jīng)加工的人參提取物先用酸處理，隨后用乳酸菌或腸道細(xì)菌通過(guò)生物處理進(jìn)行發(fā)酵。因此，它可用于預(yù)防或治療人類或哺乳動(dòng)物中的腦中風(fēng)。
權(quán)利要求
1.一種治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物組合物，該藥物組合物含有作為活性成分的經(jīng)加工的人參提取物以及可藥用的載體，其中所述經(jīng)加工的人參提取物的含量為治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的有效量，該經(jīng)加工的人參提取物由包括下列必要步驟的方法得到對(duì)人參提取物進(jìn)行酸處理及用乳酸菌或腸道細(xì)菌進(jìn)行隨后的發(fā)酵處理。
2.如權(quán)利要求1所述的治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物組合物，其中所述的植物原料包括根、莖、花、葉和果實(shí)以及它們的組織培養(yǎng)物。
3.如權(quán)利要求1所述的治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物組合物，其中所述的酸是醋酸、檸檬酸、乳酸或含酸的食物。
4.如權(quán)利要求1所述的治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物組合物，其中所述的乳酸菌屬于雙歧桿菌屬或乳桿菌屬細(xì)菌。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中所述的乳酸菌包含選自下列菌種中的至少一種菌或混合菌嬰兒雙歧桿菌、雙岐雙岐桿菌、乳酸乳桿菌、丁酸梭菌、雙歧桿菌K-103、雙歧桿菌K-506、雙歧桿菌K-513、雙歧桿菌K-525、雙歧桿菌KK-1或雙歧桿菌KK-2。
6.如權(quán)利要求1所述的治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物組合物，其中所述的腸道細(xì)菌屬于擬桿菌屬、梭桿菌屬或真細(xì)菌屬細(xì)菌。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中所述的腸道細(xì)菌包括選自下列菌種中的至少一種菌或混合菌擬桿菌JY-6、糞便擬桿菌、梭桿菌K-60或真細(xì)菌L-8。
8.一種治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物組合物，該藥物組合物含有作為活性成分的皂角甙化合物以及可藥用載體，其中所述的皂角甙化合物的含量為治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病的有效量，該皂角甙化合物選自下列物質(zhì)或其混合物人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1和20-人參皂甙Rg3。
9.如權(quán)利要求1到8任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物在可藥用的載體中作為粉劑、粒劑、片劑、膠囊劑、水性藥劑或注射劑來(lái)提供。
10.人參提取物在制備預(yù)防或治療腦中風(fēng)和腦部疾病的藥物中的用途，其中所述的人參提取物由包括以下必要步驟的方法得到對(duì)人參提取物進(jìn)行酸處理及用乳酸菌或腸道細(xì)菌進(jìn)行隨后的發(fā)酵處理。
11.一種預(yù)防癌癥或過(guò)敏性疾病的健康保健食品，該健康保健食品含有權(quán)利要求1中所述的提取物和營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的添加劑。
12.如權(quán)利要求11所述的健康保健食品，該健康保健食品以飲品形式提供。
全文摘要
本發(fā)明涉及經(jīng)加工的人參提取物的新用途，所述人參提取物具有預(yù)防或治療腦中風(fēng)的活性。本發(fā)明更特別地涉及藥理學(xué)功效增強(qiáng)的經(jīng)加工的人參提取物，其中所述的藥理學(xué)功效的增強(qiáng)是由于后續(xù)的處理方法帶來(lái)的，所述后續(xù)的處理方法即人參的酸處理和生物轉(zhuǎn)化處理如乳酸菌發(fā)酵和腸道細(xì)菌發(fā)酵過(guò)程。本發(fā)明的經(jīng)加工的人參提取物對(duì)腦中風(fēng)有預(yù)防或治療功效。因此，它可用于預(yù)防或治療人類或哺乳動(dòng)物的腦中風(fēng)和腦部疾病。
文檔編號(hào)A61K31/045GK1646150SQ03807770
公開(kāi)日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2003年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月8日
發(fā)明者金東鉉, 柳鐘勛, 斐銀俄, 韓明珠, 秋珉京, 樸恩境 申請(qǐng)人:弘林通產(chǎn)株式會(huì)社