專利名稱：一種bFGF－PLA－PEG緩釋微球及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growthfactor，bFGF)的緩釋微球。其制備方法為乳液分散溶劑蒸發(fā)法，用高分子材料PLA-PEG為載體材料包封bFGF，在機(jī)械攪拌作用下制備出該緩釋bFGF微球。
由于bFGF在體內(nèi)的半衰期為3-5分鐘，全身應(yīng)用將被快速滅活難以發(fā)揮其有效作用，局部穿刺分次給藥也難以產(chǎn)生有效作用，并且增加患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，所以不能滿足實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用的需要。因此，研究既能長期緩釋bFGF又能保持其生物活性的緩釋制劑具有重要意義。其中，微球技術(shù)是研究較少的一種緩釋bFGF的方法。國外研究應(yīng)用溶劑擴(kuò)散法制成bFGF的EVAc緩釋微球后，其生物活性喪失99％，而海藻酸鹽緩釋微球雖能保持81％的bFGF的生物活性，但其緩釋期為2-12天。用于包封bFGF的載體材料可分為天然、半合成和合成的高分子材料。近年來，合成高分子材料因其生物相容性良好，可生物降解吸收，在體內(nèi)較穩(wěn)定，降解期可調(diào)控等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛重視，是一種理想的微球制備材料。1990年制備出一種新型聚酯-聚乙二醇嵌段共聚物聚-D，L-乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)備受關(guān)注，該種聚乳酸類材料由于嵌入親水性的聚乙二醇，使材料的親水性及結(jié)晶性得到了改善，可望成為一種優(yōu)良藥物載體材料。中科院成都有機(jī)化學(xué)所已用該材料制備空白微球并包封膜蛋白和白蛋白，證明該材料可以較好的包封蛋白和多肽類藥物。但是經(jīng)查閱文獻(xiàn)，目前國內(nèi)尚無bFGF微球及其相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究的報(bào)道。
本發(fā)明的技術(shù)方案為應(yīng)用乳液分散溶劑蒸發(fā)法，將PLA-PEG溶于有機(jī)溶劑中制成油相，取適量bFGF逐滴加入上述油相中，將其勻化后形成初乳；將此乳液滴加入水相分散介質(zhì)溶液中，充分勻化，室溫下磁力攪拌3-5小時(shí)，即得bFGF-PLA-PEG-Ms膠體溶液；在bFGF-PLA-PEG-Ms膠體溶液中加入適量的支架劑，常規(guī)凍干保存。
本發(fā)明微球基質(zhì)材料選用PLEA，其分子量為4.0×103-6.0×104，PEG在微球基質(zhì)成分中的質(zhì)量百分比為5-10％，并且其分子量為5.5×103-2.0×104。有機(jī)溶劑為二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷(DCM)和丙酮(AC)的混合液，DCM和AC的體積百分比為75-100∶0-35。
本發(fā)明水相分散介質(zhì)PVA的水解度為87-90％，聚合鏈節(jié)數(shù)為1700-1750，重均分子量為1.0-2.0×104，濃度為1-7％；或水相分散介質(zhì)為PVA-PEG混合水溶液，溶液濃度為4-10％，PVA與PEG的質(zhì)量百分比為40-70∶30-60。
本發(fā)明采用普通電磁攪拌器，其攪拌速度為600-1200RPM，旋渦混合速度選擇中速為宜。制備微球的勻化方式包括旋渦混合和超聲，每次超聲5-10s左右，每次旋渦混合時(shí)間3-5min左右。
本發(fā)明制備微球內(nèi)水相體積可在50-300μl之間；外水相中無機(jī)鹽的濃度可在0-2.0g/100ml，也可適當(dāng)增加。凍干微球之前，加入支架劑包括葡萄糖、乳糖或甘露醇等，其含量為1-5％。微球凍干粉劑中二氯甲烷(DCM)殘余量低于限量的1/10。
采用本發(fā)明方法所制備微球表面光滑，外觀均勻，細(xì)膩，顆粒規(guī)則無粘連(

圖1，圖2)，粒徑在10μm下可控(圖3)，載藥量和包封率高，緩釋期在2周以上，其體外釋藥曲線較為光滑平坦，無“鋸齒狀”現(xiàn)象(圖4)，可用于關(guān)節(jié)間隙、骨折和骨缺損等局部給藥或靜脈給藥。
將該微球加入成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液，用MTT法檢測該細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示(圖5)培養(yǎng)初期，bFGF組中游離bFGF的數(shù)量多于微球組中通過緩釋產(chǎn)生的游離bFGF數(shù)量，所以bFGF組的促分裂增殖作用最強(qiáng)。培養(yǎng)中后期(第4天開始)，由于該微球可持續(xù)釋放具有生物活性的bFGF，故微球組對(duì)成纖維細(xì)胞的促分裂增殖作用優(yōu)于bFGF組和空白對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明該微球中的bFGF生物活性保存良好。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明選用PLA-PEG為基質(zhì)材料，提高了bFGF的包封率，改善了此類微球的粒徑分布和體外釋藥情況。利用生物可降解材料包封bFGF制成微球，既能利用高分子材料的疏水性防止bFGF與水接觸，使之在有水環(huán)境下仍保持活性，又能起到藥物緩釋的效果，使給藥局部保持相對(duì)穩(wěn)定的有效藥物濃度。
權(quán)利要求
1.一種緩釋bFGF微球，其特征為所包裹的藥物為bFGF，微球基質(zhì)成分為分子量在4.0×103-6.0×104之間的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)，粒徑在10μm以下，緩釋期在2周以上，其二氯甲烷(DCM)殘余量低于限量的1/10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，該緩釋bFGF微球的制備方法包括以下步驟(1)將PLA-PEG及其它輔料溶于有機(jī)溶劑中制成油相；(2)取適量bFGF加入上述油相中，將其勻化后形成初乳；(3)將此乳液滴加入水相分散介質(zhì)的溶液中，充分勻化，室溫下磁力攪拌3-5小時(shí)，即得bFGF-PLA-PEG-Ms膠體溶液；(4)在bFGF-PLA-PEG-Ms膠體溶液中加入適量的支架劑，常規(guī)凍干保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的微球，其特征為PEG在微球基質(zhì)成分中的重量百分比為5-10％，并且其分子量為5.5×103-2.0×104。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2的方法，其特征為有機(jī)溶劑為二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷(DCM)和丙酮(AC)的混合液，DCM和AC的體積百分比為75-100∶0-35。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2的方法，其特征為水相分散介質(zhì)PVA的水解度為87-90％，聚合鏈節(jié)數(shù)為1700-1750，重均分子量為1.0-2.0×104，濃度為1-7％；或水相分散介質(zhì)為PVA-PEG混合水溶液，溶液濃度為4-10％，PVA與PEG的質(zhì)量百分比為40-70∶30-60。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2的方法，其特征為勻化方式包括旋渦混合和超聲，每次超聲5-10s左右，每次旋渦混合時(shí)間3-5min左右。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2的方法，內(nèi)水相體積可在50-300μl之間；外水相中無機(jī)鹽的濃度可在0-2.0g/100ml，也可適當(dāng)增加。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2的方法，其特征為加入的支架劑包括葡萄糖、乳糖或甘露醇等，其含量為1-5％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2的緩釋微球，其特征為表面光滑圓整，無粘連，粒徑在10μm下可控，緩釋期在2周以上，載藥量可達(dá)(26.73±0.74)×10-3(％)，包封率可達(dá)65.32±1.80(％)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、2的微球用途，其特征是關(guān)節(jié)間隙、骨折和骨缺損等局部給藥或靜脈給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供一種堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basicfibroblast growth factor，bFGF)的緩釋微球及其制備方法和用途。該微球所包裹的藥物為bFGF，其基質(zhì)成分為聚乳酸－聚乙二醇共聚物(PLA－PEG)。并以聚乙烯醇－聚乙二醇(PVA－PEG)混合液為分散介質(zhì)，通過乳液分散溶劑蒸發(fā)法(又名液內(nèi)干燥法、溶劑固化法和溶劑提取法)，在機(jī)械攪拌作用下制備出該緩釋bFGF微球。其表面光滑圓整，均勻度好，顆粒規(guī)則無粘連，粒徑在10μm下可控，載藥量和包封率高，徑距分布較窄，具有優(yōu)良的緩釋bFGF性能，緩釋期在2周以上。其凍干粉劑為白色細(xì)膩，疏松，不塌陷，不粘連，再分散性良好，有機(jī)溶劑殘留量少于限量的1/10。所以，可用于關(guān)節(jié)間隙、骨折和骨缺損等局部給藥或靜脈給藥。
文檔編號(hào)A61K9/16GK1398585SQ0213347
公開日2003年2月26日 申請(qǐng)日期2002年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月15日
發(fā)明者裴福興, 段宏, 陳堅(jiān), 沈彬, 王光林, 蔣學(xué)華, 黎峰 申請(qǐng)人:裴福興, 段宏, 陳堅(jiān)