專(zhuān)利名稱(chēng)：擔(dān)子菌亞門(mén)和五加科提取物的生理活性組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有生理活性包括但不限于抗腫瘤活性和降血糖效應(yīng)(即降低血糖水平的效應(yīng))的組合物。更具體地講，公開(kāi)了包含在屬于擔(dān)子菌亞門(mén)(Basidiomycotina)多孔菌科(Polyporaceae)真菌(例如靈芝(Ganoderma lucidum)和/或采絨革蓋菌(Coriolus versicolor)的子實(shí)體和/或菌絲體培養(yǎng)物(除菌絲體外還包括培養(yǎng)溶液)的提取物和得自五加科(Araliaceae)植物的根中的提取物中發(fā)現(xiàn)的有效成分的組合物。也公開(kāi)了制備和使用這類(lèi)組合物的方法。
此外，屬于五加科包括人參(Daucus carota)的植物的根及其提取組分從古代也獨(dú)立地地用作天然藥物，并且已知其具有多種有益效應(yīng)。
本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)包含得自擔(dān)子菌亞門(mén)的提取組分和得自屬于五加科植物的根的提取組分的組合物具有顯著的有效抗腫瘤活性。另外，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這類(lèi)組合物可以降低高血糖個(gè)體的血糖水平(在下文稱(chēng)為“降血糖效應(yīng)”)。雖然不希望受理論的限制，但本發(fā)明人認(rèn)為，這些組合物的生理活性可能與其氧化還原電位相關(guān)。
因此，在本發(fā)明內(nèi)容的一個(gè)方面，公開(kāi)了包含在屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型中發(fā)現(xiàn)的有效成分和在屬于五加科植物的根中發(fā)現(xiàn)的有效成分的組合物。這些有效成分可以合成制備，或者可以例如從靈芝和/或采絨革蓋菌以及藥用人參(它可以是例如人參(Panax ginseng)和/或竹節(jié)參(Panax japonicus))中提取。所述組合物當(dāng)溶于水溶液中時(shí)，優(yōu)選表現(xiàn)出氧化還原電位低于約+1230mV，更優(yōu)選氧化還原電位低于約+900mV。這類(lèi)組合物可以包含治療有效量的這些組分的有效成分?？梢詫⑦@類(lèi)組合物給予例如腫瘤患者和/或血糖水平高的患者。
雖然本發(fā)明的內(nèi)容具體考慮了從天然產(chǎn)物中提取的有效成分，當(dāng)然也考慮了合成制備的表現(xiàn)出本文所述效應(yīng)的有效成分。
在本

發(fā)明內(nèi)容
的另一方面，公開(kāi)了包含屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型的提取組分和屬于五加科植物的根的提取組分的組合物。最好是，這類(lèi)組合物的氧化還原電位約為+1230mV或更低。
在本

發(fā)明內(nèi)容
的另一方面，公開(kāi)了其中靈芝和/或采絨革蓋菌是上述擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型的組合物。
在本

發(fā)明內(nèi)容
的另一方面，公開(kāi)包含治療有效量的上述組分的組合物。在一個(gè)代表性實(shí)施例中，所述組合物包含從約0.5-2重量份的五加科植物根和約2重量份上述擔(dān)子菌亞門(mén)提取的組分。最好是，從擔(dān)子菌亞門(mén)的子實(shí)體中提取所述組分。所述五加科植物最好屬于藥用人參科，更優(yōu)選所述五加科植物是人參和/或竹節(jié)參。
在本

發(fā)明內(nèi)容
的另一方面，公開(kāi)了可以用作抗腫瘤藥的組合物。在本發(fā)明內(nèi)容的另一方面，公開(kāi)了表現(xiàn)出降血糖效應(yīng)的組合物。提供了使用這類(lèi)組合物的療法。
也公開(kāi)了生產(chǎn)具有這類(lèi)生理活性的這類(lèi)組合物的各種方法。提供了代表性實(shí)施例，例如從具有適宜氧化還原電位的溶液中獲取組分，所述溶液可以通過(guò)對(duì)擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的一種或多種類(lèi)型和五加科植物的根進(jìn)行熱水提取來(lái)獲得。最好是，所述擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型可以是靈芝和/或采絨革蓋菌?？梢砸约s0.5-2重量份的五加科根相對(duì)于約2重量份的上述擔(dān)子菌亞門(mén)的比率，提取這類(lèi)組分。所述五加科根最好是藥用人參，更優(yōu)選是人參和/或竹節(jié)參。當(dāng)然，可以采用提供基本相同效應(yīng)的不同技術(shù)，生產(chǎn)治療有效的組合物。
在閱讀以下詳述與所附的權(quán)利要求書(shū)之后，將容易理解本發(fā)明的其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。發(fā)明詳述本發(fā)明組合物的有效成分可以以不同方式制備，包括但不限于合成技術(shù)或分離技術(shù)。在制備本發(fā)明組合物的一個(gè)優(yōu)選方法中，所述有效成分來(lái)源于屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型的提取組分以及來(lái)源于屬于五加科植物的根的提取組分。擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科包括靈芝、采絨革蓋菌和其它相關(guān)真菌。更優(yōu)選所述提取組分可以得自多孔菌科的一種或多種類(lèi)型的子實(shí)體和/或菌絲體培養(yǎng)物(除菌絲體外還包括培養(yǎng)溶液)。
優(yōu)選所述擔(dān)子菌亞門(mén)選自一種或多種類(lèi)型的靈芝和采絨革蓋菌。更優(yōu)選可以使用靈芝和采絨革蓋菌的組合。本文所用的擔(dān)子菌亞門(mén)類(lèi)型的分類(lèi)學(xué)鑒定基于Imazeki和Hongou編寫(xiě)的“Primary ColorPicture Book of Japanese Mushrooms”(Hoiku Co.)中提供的鑒定。
靈芝的一個(gè)代表性實(shí)例是Reishi真菌(靈芝)。雖然這種真菌在樹(shù)上天然繁殖良好，但天然真菌很難得。然而，也可以人工培育這種真菌。這種真菌有光澤，由蠟狀菌帽和長(zhǎng)度可達(dá)約15cm的柄構(gòu)成。其子實(shí)體的顏色有紅色、藍(lán)色、黃色、白色、紫色和黑色。所述真菌有白色纖維(white strands)，在因病害弱化的樹(shù)的樹(shù)干上和/或基部周?chē)L(zhǎng)。
真菌采絨革蓋菌天然生長(zhǎng)在日本西部，尤其在是信州(shinshuu)(特別是長(zhǎng)野縣)以及四國(guó)島和九州島。這種真菌事實(shí)上是一種喜木真菌，在闊葉樹(shù)上生長(zhǎng)尤其良好。這種擔(dān)子菌亞門(mén)在自然界中生長(zhǎng)良好，可以人工培育，也可以生長(zhǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)物中，而無(wú)限制。最好使用天然生長(zhǎng)的真菌。
最好使用所述真菌的子實(shí)體和/或菌體的培養(yǎng)物。通過(guò)在室溫黑暗中風(fēng)干，制備子實(shí)體。
當(dāng)使用靈芝時(shí)，特別建議使用自然成熟的黑色子實(shí)體。當(dāng)使用采絨革蓋菌時(shí)，建議使用天然生長(zhǎng)的在夏季采集并且在室溫黑暗中風(fēng)干的子實(shí)體。
所述藥用人參最好是一種五加科植物，除人參(Panax ginseng C.A.Meyer)外，還包括西洋參(Panax quinquefolium L.)、Panaxnotogingseng、竹節(jié)參(Panax japonicus C.A.Meyer)。最好使用人參和/或竹節(jié)參。更優(yōu)選使用竹節(jié)參?？梢允褂眠@些類(lèi)型的人參中任一種的根。此外，可以使用單一類(lèi)型的五加科植物，或者也可以使用兩種或更多種類(lèi)型的組合。屬于傘形科(Umbelliferae)的植物也可以用作五加科植物的代用品。
通過(guò)使用水的提取技術(shù)，可以獲得合適的組合物。雖然可以用水在室溫下進(jìn)行提取，但最好使用熱水。擔(dān)子菌亞門(mén)提取組分和五加科提取組分的原料可以用熱水分別提取，然后可以將這些提取物混合，或者可以將所述擔(dān)子菌亞門(mén)和所述五加科植物根的混合物混合在一起，然后用熱水提取。對(duì)于用熱水提取，可以將原料搗碎、切片或制成粉末。最好是將原料搗碎成裂片。更優(yōu)選裂片的大小約為5mm。
用于熱水提取的熱水的溫度最好在約80℃和約100℃之間，更優(yōu)選在約90℃和約95℃之間。建議的提取時(shí)間至少為1小時(shí)，優(yōu)選2小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，最優(yōu)選2.5小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。所述提取時(shí)間最好限制在約3-4小時(shí)。提取過(guò)程可以采用回流冷凝器進(jìn)行。
雖然對(duì)于相對(duì)于提取原料的水的用量沒(méi)有特別的限制，但所述提取最好使用約500重量份水相對(duì)于約10-20重量份原料的比率。采用這種重量比(尤其是在使用回流冷凝器時(shí))獲得的提取溶液的濃度通常為適于無(wú)需額外加工而直接給藥的濃度。
可以通過(guò)過(guò)濾或其它已知方法，從所述獲得的提取溶液中除去提取原料。如果需要，可以將提取溶液濾液和上清液濃縮，并作為濃縮溶液使用。另外，通過(guò)蒸發(fā)所述水組分，也可以獲得固體(粉狀)提取組分，并且如果需要，可以通過(guò)干燥或其它已知方法，獲得所需的干提取組分。
關(guān)于所述組合物的給藥形式和劑型，自然可以在濃縮或干燥過(guò)程中加入用于所述提取組分藥物生產(chǎn)或穩(wěn)定的添加劑。
所述提取原料可以以約15重量份擔(dān)子菌亞門(mén)相對(duì)于約1.5-6重量份五加科植物根的比率使用。對(duì)于約15重量份擔(dān)子菌亞門(mén)，最好使用約2-4重量份五加科根。對(duì)于約15重量份擔(dān)子菌亞門(mén)，更優(yōu)選使用約3重量份五加科根。
在這種組合中，可以選擇靈芝和/或采絨革蓋菌作為所述擔(dān)子菌亞門(mén)組分。最好使用靈芝和采絨革蓋菌。擔(dān)子菌亞門(mén)總量的優(yōu)選比率為約1-4重量份采絨革蓋菌相對(duì)于約2重量份靈芝。最好使用約1重量份采絨革蓋菌相對(duì)于約2重量份靈芝的比率。更具體地講，使用約5重量份采絨革蓋菌、約1.5-6重量份五加科植物(最好是竹節(jié)參)的根和約10重量份靈芝。更優(yōu)選使用約5重量份采絨革蓋菌、約3重量份五加科植物(最好是竹節(jié)參)的根和約10重量份靈芝。
另外，可以使用約10重量份采絨革蓋菌、約1.5-6重量份五加科植物(最好是竹節(jié)參)的根和約5重量份靈芝。
另一優(yōu)選比率是約0.5-2重量份五加科植物的根和約2重量份擔(dān)子菌亞門(mén)。更優(yōu)選使用約0.75-1.25重量份五加科植物的根相對(duì)于約2重量份擔(dān)子菌亞門(mén)的比率。最優(yōu)選使用約1重量份五加科植物的根相對(duì)于約2重量份擔(dān)子菌亞門(mén)。
更具體地講，靈芝和采絨革蓋菌可以用作擔(dān)子菌亞門(mén)，其比率為1重量份采絨革蓋菌、約0.5-2重量份五加科植物根和約1重量份靈芝。更優(yōu)選可以使用約0.75-1.25重量份五加科植物根，最優(yōu)選可以使用1重量份。
在另一實(shí)施方案中，使用約5-10重量份采絨革蓋菌、約3-10重量份五加科植物根和約10重量份靈芝。最好選擇竹節(jié)參的根作為所述五加科植物的根。
對(duì)于任一上述組合，靈芝和采絨革蓋菌中任一個(gè)(即任一種的子實(shí)體)可以單獨(dú)用作擔(dān)子菌亞門(mén)。最好將人參或竹節(jié)參用作五加科植物組分。更優(yōu)選可以使用竹節(jié)參，但即使用人參取代竹節(jié)參，也可以獲得治療有效的組合物。
現(xiàn)在描述一種用于制備靈芝子實(shí)體、采絨革蓋菌子實(shí)體和竹節(jié)參(根)的重量比為1∶1∶1的組合物的代表性方法。例如，可以將6g靈芝子實(shí)體、6g采絨革蓋菌子實(shí)體和6g竹節(jié)參合并、混合并搗碎為大小約5mm的裂片。將500ml蒸餾水加入這種搗碎的產(chǎn)物中，可以用回流冷凝器將混合物煮沸3小時(shí)。此后，將溶液過(guò)濾，得到儲(chǔ)備液組合物。
如有必要，可以將這種儲(chǔ)備液稀釋?zhuān)怨┠承?yīng)用。如果稀釋是必不可少的，則可以使用各種稀釋率，例如范圍在2-300倍的稀釋率，優(yōu)選為2-20倍，最優(yōu)選4-16倍。雖然對(duì)于稀釋技術(shù)沒(méi)有特別的限制，但與提取法相似，建議使用水。
此外，可以用各種適宜的濃縮方法從儲(chǔ)備液中除去溶劑，以制備固體提取物。
對(duì)于以這種方法制備的組合物，無(wú)論是溶液還是懸浮液狀態(tài)，都優(yōu)選所述組合物的氧化還原電位約為+1230mV或更低。更優(yōu)選所述組合物的氧化還原電位約為+900mV或更低。這類(lèi)組合物表現(xiàn)出有效的抗腫瘤活性。
在水性溶劑中，優(yōu)選在水中測(cè)量氧化還原電位值。氧化還原電位可以直接在上述儲(chǔ)備液中或者在水稀釋的溶液中測(cè)定。如果已經(jīng)將所述組合物固化，則應(yīng)該在測(cè)量氧化還原電位之前，用合適的溶劑例如水將固體溶解或懸浮。
如下測(cè)定本文所用的特定組合物溶液的氧化還原電位。氧化還原電位是當(dāng)將電極浸入試驗(yàn)溶液中時(shí)觀測(cè)到的氧化還原電極的電位。在使用參比電極的情況下，首先測(cè)定參比電極的單電極電位，即氧化還原電極(例如鉑電極)和參比電極之間的電位差。然后，將電極電位測(cè)量裝置的參比電極置于試驗(yàn)溶液中，記錄電位差。記錄的試驗(yàn)溶液的電位差加上單電極電位就是該溶液的氧化還原電位。例如，如果使用鉑試驗(yàn)電極和參比電極(例如AgCl(內(nèi)部溶液3.3mol/L KCl)，則通過(guò)將參比電極的單電極電位與參比電極與試驗(yàn)溶液之間電位差相加獲得的電位就是氧化還原電位。在本說(shuō)明書(shū)中，所述氧化還原電位在25℃的試驗(yàn)溶液溫度下測(cè)定。
在制備所述組合物之后，或?qū)⑵淙芙饣驊腋≈?，其氧化還原電位通常在規(guī)定內(nèi)時(shí)間而變化。因此，有時(shí)應(yīng)該檢查氧化還原電位。最好是，當(dāng)氧化還原電位約為+900mV或更低時(shí)，使用所述溶液。也應(yīng)該在每次給藥之前檢查所述組合物的氧化還原電位。最好將所述組合物及其溶液貯存于25℃，測(cè)量室溫度也應(yīng)該是25℃。
所得組合物的氧化還原電位看來(lái)相當(dāng)重要，因?yàn)橛绕鋵?duì)于氧化還原電位為+900mV或更低的組合物而言，在所述組合物的氧化還原電位和其抗腫瘤活性之間存在負(fù)相關(guān)。換句話說(shuō)，氧化還原電位越低，則抗腫瘤活性越強(qiáng)。
因此，可以在給予題述組合物之前，通過(guò)在給予所述組合物之前測(cè)量其氧化還原電位，可以估計(jì)所述組合物的抗腫瘤活性和降血糖效應(yīng)。以這種方式，可以提高治療功效。
在本

發(fā)明內(nèi)容
的更特別優(yōu)選的組合物中，氧化還原電位優(yōu)選為+330mV或更低，更優(yōu)選為+300mV或更低，最優(yōu)選為+250mV或更低。此外，氧化還原電位優(yōu)選為-1200mV或更高，更優(yōu)選為-300mV或更高。
本發(fā)明組合物可以僅包含擔(dān)子菌亞門(mén)提取組分和五加科植物根提取組分。然而，也可以包括其它有效成分或非活性成分，只要所述額外的成分不抑制上述2種提取組分的協(xié)同作用。例如，本文所述的提取組分可以與藥學(xué)上可接受的載體和添加劑混合，以便制備適用于給藥的組合物。雖然對(duì)于形式?jīng)]有特別的限制，但所述組合物可以以溶液、糖漿、混懸劑、乳劑、顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊、乳油、錠劑、咀嚼片、栓劑、滴眼劑、注射劑、氣霧劑、酏劑等形式制備。本發(fā)明組合物也可以以固體(粉劑)形式使用，通過(guò)在給藥時(shí)加入水，可以重建溶液。因此，對(duì)于本發(fā)明組合物可以利用各種給藥途徑。
已經(jīng)表明本發(fā)明的組合物具有抗腫瘤活性，尤其是對(duì)于白血病、宮頸癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌(包括轉(zhuǎn)移癌)和皮膚癌(包括轉(zhuǎn)移癌)。白血病的一個(gè)實(shí)例是造成紅細(xì)胞組織增生。因此，本發(fā)明組合物可以用作哺乳動(dòng)物(包括例如人類(lèi)、靈長(zhǎng)類(lèi)、牛、馬、狗和貓)的抗腫瘤藥。
雖然已知擔(dān)子菌亞門(mén)提取組分具有抗腫瘤活性，并且已知五加科植物根的提取組分具有抗腫瘤活性，但與所述單個(gè)組分的抗腫瘤活性相比，本發(fā)明組合物顯示出出乎意料的有效抗腫瘤活性。
另外，本發(fā)明組合物也具有降血糖效應(yīng)，已經(jīng)表明本發(fā)明組合物在胰島素依賴性糖尿病和非胰島素依賴性糖尿病中都有效。
此外，本發(fā)明組合物沒(méi)有表現(xiàn)出任何副作用。事實(shí)上，本發(fā)明組合物可以用來(lái)降低和減輕其它藥物的副作用。
例如，當(dāng)將本發(fā)明組合物作為抗腫瘤藥給予人類(lèi)患者時(shí)，所述組合物除引起腫瘤痊愈或消退之外，還表現(xiàn)出各種有益效應(yīng)，例如減輕疼痛、改善食欲和使患者睡眠好。當(dāng)給予人類(lèi)以降低血糖水平時(shí)，本發(fā)明組合物除引起血液葡萄糖水平降低之外，又表現(xiàn)出各種有益效應(yīng)，例如減輕機(jī)體的疼痛，尤其是顯著緩解頭疼和肢體麻木，增進(jìn)食欲、恢復(fù)視力、減輕應(yīng)激以及使患者睡眠好。
雖然本發(fā)明組合物可以以治療有效量口服或胃腸外給予，但最好口服給予所述組合物。在下文指出適合于口服給藥的一般劑量。自然，所述劑量應(yīng)該根據(jù)患者的癥狀和精力來(lái)適當(dāng)調(diào)節(jié)。一般而言，通?；蛘５膭┝坷缡侨談┝繛槊?kg體重從200mg-2g擔(dān)子菌亞門(mén)和100mg-1g五加科植物根獲得的提取組分。這些劑量最好是每日給予1-3次。
尤其是當(dāng)用作抗腫瘤藥時(shí)，最好以每天每1kg體重約0.27g擔(dān)子菌亞門(mén)和五加科植物根的比率給予從原料提取的所述提取組分。更優(yōu)選以約0.18g擔(dān)子菌亞門(mén)/1kg體重/天和約0.09g五加科植物根/1kg體重/天的比率給予從原料提取的所述提取組分。
當(dāng)用作降血糖藥時(shí)，最好以每天每1kg體重約0.12g擔(dān)子菌亞門(mén)和五加科植物根的比率給予從原料提取的所述提取組分。更優(yōu)選以約0.08g擔(dān)子菌亞門(mén)/1kg體重/天和約0.04g五加科植物根/1kg體重/天的比率給予從原料獲得的所述提取組分。
當(dāng)用作降血糖藥(即以降低血糖水平)時(shí)，所述組合物最好與五加科植物根的水和/或醇提取物一起給予。可以用裂片或粉末形式(最好是大小約5mm的裂片)的五加科植物根、最好是藥用人參、最優(yōu)選竹節(jié)參獲得這類(lèi)醇提取物。將約300-600重量份的40％乙醇溶液加入到10-20重量份裂片中。通過(guò)將溶液加熱至80-100℃直至乙醇幾乎完全揮發(fā)為止，進(jìn)行熱提取。
因?yàn)楸景l(fā)明組合物的毒性看來(lái)非常低，并且看來(lái)不引起嚴(yán)重的副作用，所以如有必要，根據(jù)癥狀，也可以安全地給予高劑量。
建議口服給藥的劑型是溶液或糖漿劑。建議用水作為給藥介質(zhì)。
概括而言，本文提供本發(fā)明內(nèi)容的以下代表性方面(1)組合物，所述組合物包含治療有效量的在屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型和在屬于五加科植物的根中發(fā)現(xiàn)的有效成分。這些有效成分可以合成制備或從天然產(chǎn)物中分離。在本發(fā)明內(nèi)容的一個(gè)優(yōu)選方面，利用約0.5-2重量份五加科植物根相對(duì)于2重量份擔(dān)子菌亞門(mén)的比率，并且從中分離所述有效成分。這類(lèi)組合物已經(jīng)表現(xiàn)出降血糖(降低血糖)效應(yīng)。
(2)段落(1)的上述組合物，其中上述擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型是靈芝和/或采絨革蓋菌。
(3)依照段落(1)和(2)的上述組合物，其中上述屬于五加科的植物是藥用人參。
(4)依照段落(1)-(3)的上述組合物，其中上述五加科的植物是人參和/或竹節(jié)參。
(5)依照段落(1)-(4)的上述組合物，其中所述氧化還原電位為+1230mV或更低。
(6)組合物，所述組合物包含治療有效量的屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型的熱水提取組分和屬于五加科植物的根的熱水提取組分。其它組合物包含在含40％或更高乙醇和屬于五加科植物的根的溶液中的這類(lèi)提取組分。
(7)依照段落(6)的上述組合物，所述組合物具有降血糖效應(yīng)。
(8)組合物，所述組合物包含屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型的提取組分和屬于五加科植物的根的提取組分。
(9)通過(guò)給予治療有效量的依照段落(1)-(8)中任一個(gè)的組合物治療患者的方法。例如，可以將這類(lèi)組合物給予應(yīng)該降低血糖水平的患者。
(10)組合物，所述組合物包含屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型和屬于五加科植物的根的有效成分。這些有效成分可以合成制備或通過(guò)從天然產(chǎn)物分離來(lái)制備。最好使用0.5-2重量份的五加科植物根相對(duì)于2重量份擔(dān)子菌亞門(mén)的比率，并且從中分離所述有效成分。這類(lèi)組合物已經(jīng)表現(xiàn)出抗腫瘤活性。
(11)依照段落(10)的上述組合物，其中上述擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型是靈芝和/或采絨革蓋菌。
(12)依照段落(10)和(11)的上述組合物，其中上述屬于五加科的植物是藥用人參。
(13)依照段落(10)-(12)的上述組合物，其中屬于上述五加科的植物是人參和/或竹節(jié)參。
(14)依照段落(5)-(8)和(10)-(13)的上述組合物，其中所述氧化還原電位為+1230mV或更低。
(15)通過(guò)給予治療有效量的依照段落(10)-(14)中任一個(gè)的組合物治療患者的方法。例如，可以將這類(lèi)組合物給予腫瘤患者，優(yōu)選給予患有晚期癌癥的患者。
(16)組合物，所述組合物包含從相對(duì)于約5重量份靈芝約10重量份采絨革蓋菌和約1.5-6重量份竹節(jié)參中提取的組分。
(17)依照段落(16)的上述組合物，其中所述氧化還原電位為+1230mV或更低。
(18)通過(guò)給予治療有效量的依照段落(16)和(17)中任一個(gè)的組合物治療患者的方法。
在本說(shuō)明書(shū)中也提供了本發(fā)明內(nèi)容的其它方面。
以上和以下公開(kāi)的其它實(shí)施例、組合物和方法步驟的每個(gè)都可以分別使用，或與其它實(shí)施例結(jié)合使用，以提供改進(jìn)的組合物以及這類(lèi)組合物的制備和使用方法?，F(xiàn)在將描述其中這類(lèi)實(shí)施例、組合物和方法步驟結(jié)合在一起或更加詳細(xì)的本發(fā)明的代表性實(shí)施例。這種詳細(xì)描述僅用來(lái)為本領(lǐng)域技術(shù)人員指出實(shí)施本發(fā)明內(nèi)容優(yōu)選方面的進(jìn)一步的細(xì)節(jié)，并不限制本發(fā)明的范圍。僅權(quán)利要求書(shū)限定要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍。因此，在以下詳細(xì)描述中公開(kāi)的特征和步驟的組合廣義而言對(duì)于實(shí)施本發(fā)明并非必不可少的，而是僅指出本發(fā)明的具體描述的代表性實(shí)施例。實(shí)施例1-第一種代表性組合物的制備使用靈芝的子實(shí)體、采絨革蓋菌的子實(shí)體和竹節(jié)參的根。使用靈芝的黑色子實(shí)體，讓其自然成熟，并且在中國(guó)北部森林于夏季采集。然后將黑色子實(shí)體在黑暗中于室溫風(fēng)干。采絨革蓋菌的天然子實(shí)體在日本收集于夏季，然后在黑暗中于室溫風(fēng)干。竹節(jié)參生長(zhǎng)完全的植株的根在日本收集于夏季，然后在黑暗中于室溫風(fēng)干。
分別稱(chēng)量6g靈芝、6g采絨革蓋菌和6g竹節(jié)參，將這三種原料的混合物搗碎成大小約5mm的裂片。將500ml水(離子交換水，純度1μS/cm或更低)加入該混合物中，用回流冷凝器將其回流煮沸2小時(shí)。然后將溶液過(guò)濾，獲得提取組合物。經(jīng)測(cè)定，1ml該組合物包含相當(dāng)于約0.012g靈芝、約0.012g采絨革蓋菌和約0.012g竹節(jié)參的提取組分。用上述離子交換水以1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128和1/256的比率將該溶液進(jìn)一步稀釋。實(shí)施例2-第二種代表性組合物的制備分別稱(chēng)量6g靈芝、6g采絨革蓋菌和6g竹節(jié)參，將這三種原料的混合物磨成粉末。然后以與實(shí)施例1相同的方式加工所述粉狀混合物，以便制備實(shí)施例2的組合物。實(shí)施例2的組合物以與實(shí)施例1相同的方式進(jìn)行稀釋。實(shí)施例3-在人白血病細(xì)胞(K562細(xì)胞)中證實(shí)抗腫瘤活性和增殖抑制將150μl(20×103細(xì)胞)的K562細(xì)胞系統(tǒng)的培養(yǎng)物溶液沉積到微量滴定板的每個(gè)相應(yīng)孔中。K562細(xì)胞系統(tǒng)由The National UniversityHospital of Denmark的Departmemt of Clinical Microbiology Rigshopitalet，Aafs，7806提供。將按照上述實(shí)施例1-2制備的50μl所述儲(chǔ)備液以及每種稀釋液加入到相應(yīng)的孔中，于37℃培養(yǎng)所述細(xì)胞。采用SRB(磺基羅丹明B(sulfohodamine B))法，評(píng)價(jià)培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)后的細(xì)胞增殖。
如下進(jìn)行SRB法。將50μl80％TCA(三氯乙酸)加入每孔中，將細(xì)胞固定化1小時(shí)。接著，將細(xì)胞沖洗4次，并徹底干燥。向每孔中加入200μl 4％SRB(磺基羅丹明B)，將細(xì)胞染色30分鐘，沖洗4次，然后干燥。將10mM未經(jīng)緩沖的Tris堿加入每孔，并攪拌5分鐘。此后，于490nm的波長(zhǎng)下測(cè)量每孔溶液的光吸收。根據(jù)這些結(jié)果獲得的在培養(yǎng)設(shè)定的時(shí)間后的所述細(xì)胞計(jì)數(shù)和原始細(xì)胞計(jì)數(shù)的比率，用作增殖抑制率(％)。
與實(shí)施例1和實(shí)施例2的每個(gè)實(shí)施例中獲得的組合物相關(guān)的結(jié)果示于表1和表2中。正如表1和表2中所示，在實(shí)施例1中獲得的組合物的儲(chǔ)備液和稀釋液(至多約16倍稀釋液)在K562細(xì)胞系統(tǒng)中顯示出顯著的增殖抑制。在實(shí)施例2中獲得的組合物的儲(chǔ)備液和稀釋液(至多約8倍稀釋液)在K562細(xì)胞系統(tǒng)中也顯示出顯著的增殖抑制。這些結(jié)果表明，這些組合物具有抗腫瘤活性，也表明從裂片提取，產(chǎn)生更有效的抗腫瘤活性。表1K562細(xì)胞增殖抑制率(％)

表2K562細(xì)胞增殖抑制率(％)

實(shí)施例4-所述組合物的氧化還原電位的測(cè)量在實(shí)施例1中獲得的每種經(jīng)稀釋組合物于25℃溫育24小時(shí)，測(cè)量每種溶液的氧化還原電位(mV)。用一種氧化還原測(cè)量裝置(HM-14P，由Touaku Denpa Kogyou生產(chǎn)，鉑電極，參比電極(氯化銀，內(nèi)部溶液3.3mol/L KCl)來(lái)測(cè)量氧化還原電位，測(cè)量室的溫度為25℃。于25℃，參比電極的單電極電位為206mV。電位讀數(shù)示于表3。通過(guò)在表3的每個(gè)所示電位上加上206mV，得到氧化還原電位。表3氧化還原電位[mV]

因此，在本說(shuō)明書(shū)中，例如所使用的1∶4稀釋液的氧化還原電位為226mV。此外，計(jì)算不同稀釋度的組合物的氧化還原電位和在實(shí)施例3中測(cè)量的細(xì)胞增殖抑制率(24小時(shí)后)的相關(guān)系數(shù)(correlation)，發(fā)現(xiàn)為0.960。因此，看來(lái)在氧化還原電位和細(xì)胞增殖抑制之間有強(qiáng)的負(fù)相關(guān)。實(shí)施例5-癌癥患者的臨床給藥用與實(shí)施例1相同的方法獲得一種組合物的儲(chǔ)備液。將該儲(chǔ)備液連續(xù)給予26位重癥癌癥患者，每次劑量為150ml，一日3次，給予35天。結(jié)果表明，接受所述組合物的所有患者或者報(bào)告或者發(fā)現(xiàn)顯示出身體疼痛減輕、食欲增加、皮膚病癥改善、應(yīng)激減輕、睡眠改善和各種機(jī)體機(jī)能障礙改善。也觀察到并發(fā)癥的減輕和恢復(fù)。
表4顯示了病灶消退的病例和病灶完全痊愈的病例。表5顯示了對(duì)這些患者中的某些患者血液檢驗(yàn)的結(jié)果，表6顯示了這些患者中的某些患者的免疫學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果。表4-X射線和超聲檢查結(jié)果

表5

HGB血紅蛋白 RBC紅細(xì)胞WBC白細(xì)胞PLT血小板表6

CD4輔助T細(xì)胞NK天然殺傷細(xì)胞CD8殺傷T細(xì)胞actLYM活化淋巴細(xì)胞正如表4-6中所示，證實(shí)了通過(guò)給予本發(fā)明的組合物在人體內(nèi)產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)。換句話說(shuō)，獲得了對(duì)于宮頸癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌(轉(zhuǎn)移癌)、皮膚癌(轉(zhuǎn)移癌)、乳腺癌和皮膚癌的良好的治療結(jié)果。實(shí)施例6-糖尿病患者的臨床給藥用與實(shí)施例1相同的方法獲得儲(chǔ)備液。另外，將竹節(jié)參搗碎為大小約5mm的裂片。將500重量份40％乙醇溶液加入到10-20重量份的這些裂片中，將溶液加熱至80-100℃直至乙醇幾乎完全蒸發(fā)，進(jìn)行熱提取，得到竹節(jié)參提取溶液。
將實(shí)施例1組合物的儲(chǔ)備液和竹節(jié)參提取溶液以2∶1的比率混合。將該溶液每日給予25位糖尿病患者(11位男性和14位女性)，每次劑量為150ml，一日兩次，給予25天。
結(jié)果表明，接受所述組合物的所有患者或者報(bào)告或者發(fā)現(xiàn)顯示出身體疼痛減輕、尤其是頭痛和肢體麻木顯著改善，食欲增加、視力恢復(fù)、應(yīng)激減輕并且睡眠改善。也觀察到并發(fā)癥的減輕和恢復(fù)。在某些患者中，甚至其壞死性下肢的感覺(jué)恢復(fù)。
臨床結(jié)果示于表7中，如表7所示，證實(shí)了在這種臨床給藥后所有患者的血液葡萄糖水平均降低。該組合物的給予與任何副作用無(wú)關(guān)。除了改善自覺(jué)癥狀外，也產(chǎn)生了顯著的降血糖效應(yīng)。表7

*1胰島素依賴性糖尿病，2非胰島素依賴性糖尿病此外，注意到患者13、16、20和22僅用上述本發(fā)明組合物(即以2∶1的比率混合的實(shí)施例1的組合物溶液和竹節(jié)參提取溶液)治療。因此，患有NIDDM的4位患者僅給予本發(fā)明組合物進(jìn)行治療?；加蠭DDM的13位患者和NIDDM的9位患者給予本發(fā)明組合物和胰島素兩者治療。所有患者先前在進(jìn)行該項(xiàng)試驗(yàn)之前都已經(jīng)用胰島素治療過(guò)。此外，給予用本發(fā)明組合物和胰島素兩者治療的患者的胰島素劑量與進(jìn)行該項(xiàng)試驗(yàn)之前給予的劑量相同。
表8顯示了每組患者的平均血液葡萄糖水平。按照糖尿病類(lèi)型和治療類(lèi)型將結(jié)果進(jìn)行了分組。在表8中提供了在給藥前后的血液葡萄糖水平以及給藥后血液葡萄糖相對(duì)于給藥前血液葡萄糖水平的百分比。表8

如表8所示，證實(shí)了在這種臨床給藥后所有患者的血液葡萄糖水平均顯著降低。給予這種組合物與任何副作用無(wú)關(guān)。實(shí)施例7-癌癥患者的臨床給藥用與實(shí)施例1相同的方法獲得一種組合物的儲(chǔ)備液。將該儲(chǔ)備液連續(xù)口服給予3位重癥癌癥患者，每次劑量為150ml，一日3次，給予35天。僅給予患者1(P.V.)所述儲(chǔ)備液，而不給予其它藥物?；颊?(Y.T.)除給予所述儲(chǔ)備液外，還給予800mg劑量的5-FU，一日6次，給予35天，作為化學(xué)療法。患者3(N.V.)除給予所述儲(chǔ)備液外，還用60Gy的放射性射線照射，一日4次，照射35天，作為放射療法。每位患者在給藥前后進(jìn)行血液檢驗(yàn)和免疫學(xué)檢驗(yàn)。
作為對(duì)照，患者4(A.R.)在此期間不給予任何具體治療。然而，患者4也進(jìn)行血液檢驗(yàn)和免疫學(xué)檢驗(yàn)。
表9顯示了用于每位患者的病癥和治療方法。表10顯示了這些患者報(bào)告的病癥的恢復(fù)或改善。表11和表12分別顯示了每位患者的血液檢驗(yàn)結(jié)果和免疫學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果。表9

表10

表11

*括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示給藥后的每次計(jì)數(shù)與給藥前的每次計(jì)數(shù)相比的百分率。表12

如表10所示，接受實(shí)施例1組合物的所有患者報(bào)告身體疼痛減輕、食欲增加，睡眠改善和各種機(jī)體機(jī)能障礙改善。也觀察到并發(fā)癥的減輕和恢復(fù)。
此外，如表11所示，僅利用給予本發(fā)明組合物的患者1(S.V)的治療，提高了血液每種組分的濃度。另外，患者2(Y.T.-化學(xué)療法)和患者3(N.V.-放射療法)顯示出相應(yīng)血液檢驗(yàn)有改善。如表12所示，給予本發(fā)明的組合物也改善了經(jīng)過(guò)或者化學(xué)療法或者放射療法的患者2和患者3的免疫學(xué)病癥。實(shí)施例8-制備本發(fā)明組合物的其它代表性方法雖然先前的實(shí)施例已經(jīng)利用從擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的熱水提取組分和屬于五加科植物的根的熱水(和/或乙醇)提取組分，但考慮了其它組合物。例如，可以采用其它提取技術(shù)，從所述天然產(chǎn)物中提取組分。在一個(gè)實(shí)施例中，所述原料可以經(jīng)過(guò)一個(gè)提取過(guò)程，可以將所述提取組分過(guò)濾和真空蒸餾?？梢詫⑺霎a(chǎn)物滅菌、干燥，然后過(guò)篩形成粉末。
然后，可以將干燥的提取組分配制為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑等。例如，可以將提取組分與粘合劑混合物、制粒，然后干燥形成顆粒。這些顆?？梢栽瓨邮褂?，或者可以壓制成片劑或填充到膠囊中。在將所述干躁的提取組分制粒之前或之后，可以加入任選的粘合劑?；蛘?，可以將提取組分干燥并包膠囊。此外，可以加入其它藥學(xué)上可接受的添加劑，包括但不限于一種或多種防腐劑，以便延長(zhǎng)所述組合物的貯藏期。
此外，可以將所述有效成分溶于藥學(xué)上可接受的溶劑中，過(guò)濾并包裝到安瓿中?？梢詫⑦@些安瓿滅菌。再者，可以將其它藥學(xué)上可接受的添加劑加入到所述溶液中，包括但不限于一種或多種防腐劑，以便延長(zhǎng)所述組合物的貯藏期。
另外，可以分離出所述有效成分，并且可以僅將所述有效成分用作治療劑。可以對(duì)所述有效成分進(jìn)行特征鑒定，然后用合成法生產(chǎn)。在這種情況下，所述經(jīng)合成法生產(chǎn)的有效成分可以以粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、安瓿等使用，以便提供用于將本發(fā)明組合物給予患者的其它載體。再者，必要時(shí)可以加入其它各種藥學(xué)上可接受的添加劑。
權(quán)利要求
1.一種組合物，所述組合物包含屬于擔(dān)子菌亞門(mén)(Basidiomycotina)多孔菌科(Polyporaceae)的擔(dān)子菌亞門(mén)的至少一種類(lèi)型的提取組分和屬于五加科(Araliaceae)的植物的根的提取組分。
2.一種權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物的水溶液的氧化還原電位低于約1230mV。
3.一種權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述擔(dān)子菌亞門(mén)的至少一種類(lèi)型是靈芝(Ganoderma lucidum)和/或采絨革蓋菌(Coriolusversicolor)。
4.一種權(quán)利要求1、2或3的組合物，其中所述屬于五加科的植物是藥用人參。
5.一種權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含從約10重量份采絨革蓋菌、約1.5-6重量份竹節(jié)參(Panax japonicus)和約5重量份靈芝中提取的組分。
6.一種權(quán)利要求1、2、3或4的組合物，所述組合物包含從約0.5-2重量份的五加科植物的根相對(duì)于約2重量份的上述擔(dān)子菌亞門(mén)中提取的組分。
7.一種權(quán)利要求1、2、3或4的組合物，所述組合物包含從約1重量份的五加科植物的根相對(duì)于約2重量份的上述擔(dān)子菌亞門(mén)中提取的組分。
8.一種權(quán)利要求1、2、3或4的組合物，所述組合物包含從約1重量份采絨革蓋菌、約1重量份的五加科植物的根和約1重量份靈芝中提取的組分。
9.一種任一前述權(quán)利要求的組合物，其中所述擔(dān)子菌亞門(mén)和所述五加科植物的根的提取組分是熱水提取組分。
10.一種任一前述權(quán)利要求的組合物，其中所述組合物的水溶液的氧化還原電位低于約330mV。
11.一種任一前述權(quán)利要求的組合物，其中所述組合物表現(xiàn)出抗腫瘤活性。
12.一種用于治療腫瘤的任一前述權(quán)利要求的組合物。
13.一種治療腫瘤的方法，所述方法包括給予患者治療有效量的任一前述權(quán)利要求的組合物。
14.一種權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物表現(xiàn)出降血糖效應(yīng)。
15.一種用于治療糖尿病的組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1-12或14中任一項(xiàng)的組合物。
16.一種治療糖尿病的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求1-12、14或15中任一項(xiàng)的組合物。
17.一種制備表現(xiàn)出生理活性的組合物的方法，所述方法包括對(duì)屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的至少一種類(lèi)型和屬于五加科植物的根進(jìn)行熱水提取。
18.一種權(quán)利要求17的方法，其中所述組合物是氧化還原電位低于約900mV的提取溶液。
19.一種權(quán)利要求17的方法，其中所述組合物是氧化還原電位低于約330mV的提取溶液。
20.一種權(quán)利要求17、18或19的方法，所述方法包括從約0.5-2重量份的五加科植物的根和約2重量份的所述擔(dān)子菌亞門(mén)中進(jìn)行提取。
21.一種權(quán)利要求17-20中任一項(xiàng)的方法，其中所述擔(dān)子菌亞門(mén)的至少一種類(lèi)型是靈芝和/或采絨革蓋菌。
22.一種權(quán)利要求17-21中任一項(xiàng)的方法，其中所述屬于五加科的植物是藥用人參。
23.一種組合物，所述組合物是按照權(quán)利要求17-22中任一項(xiàng)的方法生產(chǎn)的。
24.一種治療腫瘤的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求23的組合物。
25.一種治療糖尿病的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求23的組合物。
26.一種藥用組合物，所述藥用組合物包含治療有效量的至少一種在擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科中發(fā)現(xiàn)的有效成分和至少一種在屬于五加科植物的根中發(fā)現(xiàn)的有效成分。
全文摘要
公開(kāi)了可以包含屬于擔(dān)子菌亞門(mén)多孔菌科的擔(dān)子菌亞門(mén)的一種或多種類(lèi)型的有效成分和屬于五加科植物的根的有效成分的組合物。這類(lèi)組合物已經(jīng)顯示出降血糖效應(yīng)和抗腫瘤活性。更優(yōu)選所述擔(dān)子菌亞門(mén)可以是靈芝和/或采絨革蓋菌，而所述屬于五加科的植物可以是藥用人參，例如人參和/或竹節(jié)參。最好是，所述組合物的水溶液的氧化還原電位低于約1230mV，更優(yōu)選低于約900mV，最優(yōu)選低于約330mV。也公開(kāi)了制備這類(lèi)組合物的方法，可以包括上述組分的熱水提取。此外，也公開(kāi)了治療患者的方法，包括給予治療有效量的一種或多種本發(fā)明組合物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1419455SQ01807160
公開(kāi)日2003年5月21日 申請(qǐng)日期2001年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月31日
發(fā)明者五井野正 申請(qǐng)人:五井野正