專(zhuān)利名稱(chēng)：豬圓環(huán)病毒pcr診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒。
背景技術(shù)：
豬圓環(huán)病毒能夠不同程度的導(dǎo)致妊娠母豬的繁殖障礙，引起母豬流產(chǎn)、胚胎死亡、胎兒畸形、胎兒木乃伊化及不孕等，在豬群中具傳播快、胚胎致死率高、流行范圍廣、傳播途徑多、病原體頑固等特點(diǎn)，每年給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。而 且經(jīng)?；旌细腥?，靠中和試驗(yàn)和分離病毒來(lái)確診容易造成假陰性，而且操作繁瑣，所需時(shí)間長(zhǎng)，尋求一種操作簡(jiǎn)單、快速的檢測(cè)、鑒別診斷方法是防制這類(lèi)疾病的基礎(chǔ)。目前，針對(duì)以上三種病毒病的診斷方法有很多，這些方法具有操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、敏感度差及陰性率高等缺點(diǎn)；臨床已經(jīng)使用的PCR診斷技術(shù)，雖然有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但不能準(zhǔn)確定量；基于TaqMan技術(shù)熒光定量PCR方法能定量，但是成本較高，且需要合成特異性探針。亟需研究和開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便、快速、特異、成本低、定量的檢測(cè)方法。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒。本實(shí)用新型的技術(shù)方案是豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒，包括盒體和盒蓋，盒體內(nèi)設(shè)有襯墊，襯墊上設(shè)有若干個(gè)放置診斷試劑的的容器孔，盒蓋內(nèi)設(shè)有海綿緩沖層。所述診斷試劑包括PCR緩沖液、引物、酶、超純水、檢測(cè)PCR管。本實(shí)用新型的有益效果是豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒，盒體的襯墊上設(shè)有若干個(gè)放置診斷試劑的的容器孔，將每種診斷試劑放入試劑孔內(nèi)，由熒光PCR儀自動(dòng)收集熒光信號(hào)，避免常規(guī)PCR終點(diǎn)分析法中的人為因素干擾，進(jìn)一步提高靈敏度，采用一對(duì)特異引物進(jìn)行目標(biāo)基因片段的擴(kuò)增及一條可與模板互補(bǔ)配對(duì)的熒光探針進(jìn)行檢測(cè)，提高了特異性，有效地避免假陽(yáng)性和假陰性，準(zhǔn)確，熒光(RT-) PCR檢測(cè)方法與常規(guī)的病原分離方法的敏感性基本一致。使用安全，簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍廣、取樣及樣品處理方便。盒蓋內(nèi)設(shè)有海綿緩沖層，保護(hù)試劑盒在運(yùn)輸過(guò)程中往往不會(huì)因?yàn)閿D壓原因而損壞。

圖I為本實(shí)用新型展開(kāi)示意圖。
具體實(shí)施方式
豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒，包括盒體I和盒蓋5，盒體I內(nèi)設(shè)有襯墊2，襯墊上設(shè)有若干個(gè)放置診斷試劑的的容器孔3，診斷試劑包括PCR緩沖液、引物、酶、超純水、檢測(cè)PCR管，可以根據(jù)需要設(shè)定容器孔的大小和數(shù)量。盒蓋內(nèi)設(shè)有海綿緩沖層4。豬圓環(huán)病毒引物的序列如下上游引物Pl :5 ' -TAA CTA CTC CTC CCG CCATAC-3 ;;下游引物P2 5 ; -GCC TAC GTG GTC TAC ATT TCC-3 ;;利用上述引物檢測(cè)豬圓環(huán)病毒的多重SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法，包括提取樣品的DNA后，按如下SYBRGreen I實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系和SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增程序?qū)悠愤M(jìn)行檢測(cè)。所述SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系，在25 μ 體系中加入以下成份SYBRGreen I PreMix 17 μ , Pl O. 5 μ , Ρ2 O. 5 μ , DNA 2 μ , ddH20 5 μ ，所述 SYBRGreen I實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增程序?yàn)?5°C預(yù)變性5min ;進(jìn)入循環(huán)，95°C變性15s，55°C退火20s，72°C延伸20s，40個(gè)循環(huán)；反應(yīng)結(jié)束后先加熱至95°C，然后再降至65°C，開(kāi)始以O(shè). 5°C /s遞增至95°C檢測(cè)熒光信號(hào)得出擴(kuò)增產(chǎn)物的溶解曲線(xiàn)?！?br> 權(quán)利要求1.豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒，包括盒體和盒蓋，盒體內(nèi)設(shè)有襯墊，其特征在于襯墊上設(shè)有若干個(gè)放置診斷試劑的的容器孔，盒蓋內(nèi)設(shè)有海綿緩沖層。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種豬圓環(huán)病毒PCR診斷試劑盒，包括盒體和盒蓋，盒體內(nèi)設(shè)有襯墊，襯墊上設(shè)有若干個(gè)放置診斷試劑的容器孔，盒蓋內(nèi)設(shè)有海綿緩沖層。盒體的襯墊上設(shè)有若干個(gè)放置診斷試劑的容器孔，將每種診斷試劑放入試劑孔內(nèi)，由熒光PCR儀自動(dòng)收集熒光信號(hào)，避免常規(guī)PCR終點(diǎn)分析法中的人為因素干擾，提高了特異性，有效地避免假陽(yáng)性和假陰性，準(zhǔn)確，使用安全，簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍廣、取樣及樣品處理方便。盒蓋內(nèi)設(shè)有海綿緩沖層，保護(hù)試劑盒在運(yùn)輸過(guò)程中往往不會(huì)因?yàn)閿D壓原因而損壞。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK202482325SQ20122001490
公開(kāi)日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2012年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月13日
發(fā)明者崔保安, 魏戰(zhàn)勇 申請(qǐng)人:魏戰(zhàn)勇