專利名稱：具有降低的脂肪酸飽和水平的油和種子的制作方法
具有降低的脂肪酸飽和水平的油和種子本申請為2005年10月7日提交的、發(fā)明名稱為“在種子中具有“不飽和”或降低飽和水平的脂肪酸的某些植物以及來自種子的油”的PCT申請PCT/US2005/036052的分案申請，所述PCT申請進入中國國家階段的日期為2007年5月25日，申請?zhí)枮?00580040443. 2。與相關(guān)串請的交叉參考本發(fā)明要求提交于2004年10月8日的美國臨時申請系列號60/617，532的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
植物油已經(jīng)逐漸取代動物油和脂肪作為飲食脂肪攝入的主要來源。然而，在多數(shù)工業(yè)國家中飽和脂肪攝入保持在總熱量消耗的約15%至20%。在推動更健康的生活方式的努力中，美國農(nóng)業(yè)部(USDA)最近已經(jīng)推薦飽和脂肪占每日熱量攝入的小于10%。為使消費者易于了解，當(dāng)前由USDA發(fā)布的標(biāo)簽指導(dǎo)現(xiàn)在要求總飽和脂肪酸水平低于I. 0g/14g方可獲得“低飽和”標(biāo)簽，低于0. 5g/14g方可獲得“無飽和”標(biāo)簽。這意味著植物油的飽和脂肪酸含量需要低于7%和3. 5%方可分別獲得“低飽和”和“無飽和”標(biāo)簽。由于這些指導(dǎo)的發(fā)布，因此對“低飽和”油的消費需求明顯增加。迄今為止，滿足要求的主要為油菜油以及程度低得多的向日葵油和紅花油。無論是植物或動物來源，油的特征主要由碳和氫原子的數(shù)目以及脂肪酸鏈包含的雙鍵的數(shù)目和位置決定。來自植物的多數(shù)油由不同數(shù)量的軟脂酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、油酸(18:1)、亞油酸(18:2)和亞麻酸(18:3)脂肪酸組成。習(xí)慣上將軟脂酸和硬脂酸稱為“飽和”，因為其碳鏈被氫原子飽和，因此不具有雙鍵；它們含有最大可能數(shù)目的氫原子。然而，油酸、亞油酸和亞麻酸是其中分別具有1、2和3個雙鍵的18碳脂肪酸鏈。一般認(rèn)為油酸是單不飽和脂肪酸，而認(rèn)為亞油酸和亞麻酸是多不飽和脂肪酸。美國農(nóng)業(yè)部將“無飽和”產(chǎn)品定義為具有少于3. 5% (以重量計)的組合飽和脂肪酸(與脂肪酸總量相比)的產(chǎn)品。不飽和脂肪(單不飽和及多不飽和)是有益的(特別是適量消費時)，而飽和脂肪及反式脂肪則不然。飽和脂肪和反式脂肪提高血中LDL膽固醇水平。膳食膽固醇也提高LDL膽固醇，并且甚至不提高LDL而促進心臟病。因此，建議選擇低飽和脂肪、反式脂肪和膽固醇的食品作為健康飲食的一部分。最近的研究已經(jīng)確定了以高水平單不飽和脂肪酸(特別是油酸)作為主要飲食脂肪組分的健康價值。這些飲食認(rèn)為可降低由高飽和脂肪酸飲食導(dǎo)致的動脈硬化的發(fā)病率。因此存在對具有高單不飽和脂肪酸含量的食用植物油的需求。種子誘變已經(jīng)用于產(chǎn)生具有不高于4%飽和脂肪酸含量的菜籽油(PCT國際專利申請公布號WO 91/15578)。1985年，超過13%的世界食用油供應(yīng)產(chǎn)生自油料種子作物物種蕓苔，通常稱為油菜籽或芥菜。蕓苔是第三重要的食用油來源，僅次于大豆和棕櫚。由于蕓苔能在相對低的溫度下萌發(fā)和生長，因此它也是可在較冷的農(nóng)業(yè)區(qū)種植以及在更溫暖的地區(qū)作為冬季作物的少數(shù)具有經(jīng)濟重要性的食用油料種子作物之一。此外，正更多地考慮將植物油(特別是菜籽油)用于工業(yè)應(yīng)用，因為它們具有提供與合成油或礦物/基于環(huán)烷的油相當(dāng)?shù)男阅艿臐摿Γ€具有可生物降解這一非常需要的優(yōu)勢。在所有的植物油中，蕓苔油具有最低水平的飽和脂肪酸。“蕓苔”指油菜籽(芥)，其具有至多為種子脂肪酸總量2% (以重量計)(優(yōu)選至多0.5% (以重量計)，最優(yōu)選基本為0% (以重量計))的芥酸(C22:1)，并在壓榨后產(chǎn)生每克含有小于30微摩爾脫脂(無油)粉的風(fēng)干粉。這些類型的油菜籽通過其與該物種中更常規(guī)變種相比較的可食性來區(qū)分?？梢砸曰瘜W(xué)方法進行植物油的修飾。已經(jīng)使用該方法獲得含有少于約3%飽和脂肪酸的沙拉/烹調(diào)油(美國專利號4，948，811);油可以通過化學(xué)反應(yīng)形成，或者通過物理分離飽和脂類而形成。一般參考使用“遺傳工程”獲得具有所需特征的油(參閱第3欄第58行及以下等等)。然而，沒有詳細(xì)公開如何這樣修飾任一特定油料種子植物以提供具有 所需特征的植物油。作為替代的，一般通過常規(guī)育種技術(shù)修飾植物油的脂肪酸組成。這些技術(shù)使用現(xiàn)存的種質(zhì)作為影響脂肪酸組成的天然發(fā)生的突變的來源。使用適當(dāng)?shù)暮Y選與其后的育種結(jié)合來發(fā)現(xiàn)和選擇這些突變。例如，已經(jīng)使用這樣的方法來降低菜籽油中長鏈飽和脂肪酸芥酸的含量(Stefansson,B. R. (1983)((High and Low Erucic Acid Rapeseed Oils)),KramerJ. K. G.等編輯；Academic Press,New York ; 144-161頁)和提高玉米油中單不飽和脂肪酸油酸的量(美國專利申請系列號07/554，526)。近來，已經(jīng)嘗試通過使用誘變劑增加用以選擇所需特征的可用突變。然而，誘變劑一般通過失活或修飾已存在的基因而導(dǎo)致特定功能的喪失或降低來發(fā)揮作用。因此通過誘變引入新特征經(jīng)常依賴于某個現(xiàn)存性狀的喪失。此外，通過誘變劑實現(xiàn)所需目的通常是不確定的。使用該方法僅在植物油中獲得了少數(shù)類型的修飾脂肪酸組成。這種影響脂肪酸組成的“創(chuàng)造性”突變的一個實例是降低菜籽油中多不飽和脂肪酸(特別是亞油酸和亞麻酸)，而同時提高單不飽和脂肪酸油酸(Auld,M.,等，(1992)Crop Sci.出版中)。另一實例是降低菜籽油中的飽和脂肪酸(PCT國際專利申請公布號WO 91/15578)。然而，種子油合成的生物化學(xué)是復(fù)雜并且尚未完全了解的，可能存在若干機制造成在菜籽油中觀察到的脂肪酸組成改變(PCT國際專利申請公布號WO 91/15578)。使用誘變影響這些改變基本上是隨機、非特異的。理論上，通過使用遺傳工程修飾脂肪酸組成的可能性會允許精確受控地引入特定的所需基因以及失活不需要的特定基因或基因產(chǎn)物。因此，可以向植物中引入完全不依賴于現(xiàn)存基因的新性狀，或者可以失活或修飾預(yù)選擇的基因。然而，有效使用遺傳工程修飾脂肪酸組成的一個先決條件是在植物細(xì)胞中調(diào)節(jié)脂肪酸合成和加工的機理的合理的準(zhǔn)確模型。美國專利號6，495,738(還可參閱WO 99/50430)顯示可以通過在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)真菌軟脂酰CoA A-9去飽和酶來改變玉米油和煙草種子的飽和脂肪酸水平。這些蛋白質(zhì)最可能使軟脂酰CoA分子酶酶促去飽和，優(yōu)選通過移去分子CoA部分的第9和第10個碳原子之間的兩個氫原子并添加雙鍵，從而產(chǎn)生棕櫚油酰CoA(16:1 A-9)。棕櫚油酰CoA最終摻入種子油中，從而降低所述油的總飽和水平。玉米油的總飽和脂肪酸水平(平均約為13. 9% )不符合上文所述當(dāng)前的標(biāo)簽指導(dǎo)。此外，與大豆、蕓苔、向日葵等相比，一般不認(rèn)為玉米是油料作物。事實上，認(rèn)為產(chǎn)生并提取自玉米的油是淀粉提取中使用的濕磨方法的副產(chǎn)品。因此，幾乎沒有興趣修飾玉米油的飽和水平。公認(rèn)在油料種子中脂肪酸合成主要發(fā)生在質(zhì)體中，并且新合成的脂肪酸從質(zhì)體外運至胞質(zhì)。它們在胞質(zhì)中用于在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中發(fā)生甘油三酯的裝配。脂肪酸合成的主要產(chǎn)物是軟脂酸(16:0)，它似乎可有效延伸成硬脂酸(18:0)。仍然在質(zhì)體中時，飽和脂肪酸可以接著通過稱為A-9去飽和酶的酶去飽和，以引入一個或多個碳-碳雙鍵。特別是硬脂酸可被質(zhì)體A-9去飽和酶迅速去飽和而獲得油酸(18:1)。事實上，軟脂酸也可被質(zhì)體A-9去飽和酶去飽和成棕櫚油酸(16:1)，但該脂肪酸在多數(shù)植物油中僅以痕量存在(0-0. 2% )。因此，質(zhì)體中脂肪酸合成的主要產(chǎn)物為軟脂酸、硬脂酸和油酸。在多數(shù)油中，由于飽和脂肪酸以小得多的比例存在，因此油酸是合成的主要脂肪酸。其后在胞質(zhì)中質(zhì)體外植物脂肪酸的去飽和似乎僅限于油酸，它可去飽和成亞酸(18:2)和亞麻酸(18:3)。此外，取決于植物，油酸可以通過延長(至20:1、22:1和/或24:1)或通過加入官能團而進一步進行修飾。接著這些脂肪酸與飽和脂肪酸軟脂酸和硬脂酸一起可以裝配成甘油三酯。植物A-9去飽和酶是可溶的。它位于質(zhì)體間質(zhì)中，使用酯化成ACP (主要是硬脂酰ACP)的新合成脂肪酸作為底物。這與酵母A-9去飽和酶相反，后者位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜(ER，或微粒體)中，使用酯化成CoA的脂肪酸作為底物，并且使飽和脂肪酸軟脂酸和硬脂酸去飽和。美國專利號5，723，595和6，706，950涉及植物去飽和酶。酵母A-9去飽和酶已經(jīng)從釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中分離、克隆并測序(Stukey, J. E.等，J. Biol. Chem. 264 :16537-16544 (1989) ；Stukey, J. E.等，J. Biol.Chem. 265 :20144-20149 (1990))。該基因還已用于在顯然過表達(dá)的條件下轉(zhuǎn)化同一酵母菌株，引起轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞中貯藏脂類累積的提高，所述提高通過使用尼羅紅染色甘油三酯的熒光顯微術(shù)測定(美國專利號5，057，419)。沒有對脂肪酸組成進行表征。該參考文獻(xiàn)包含對使用來自分離的酵母A-9去飽和酶基因的信息首先從酵母或從其他生物分離其他去飽和酶基因，接著在條件下將這些基因再引入酵母或植物的一般討論。推測這可以導(dǎo)致高表達(dá)，從而修飾產(chǎn)生的油及其脂肪酸組成。其后，報道了將酵母A-9去飽和酶基因引入煙草葉組織(Polashcok，J.等，F(xiàn)ASEB J. 5 :A1157(1991))并在該組織中明顯表達(dá)。此外，該基因在番茄中表達(dá)。參閱Wang 等，J.Agric Food Chem. 44 :3399-3402(1996)和 C. Wang 等，Phytochemistry 58 227-232(2001)。盡管在煙草和番茄中報道了某些不飽和物的提高和一些飽和物的降低，但是煙草和馬鈴薯顯然不是油料植物。還將該酵母基因引入了歐洲油菜(Brassica napus)中(參閱美國專利號5，777，201)。盡管報道了軟脂酸和硬脂酸(飽和物)的減少以及棕櫚油酸和油酸(不飽和物)的增加(參閱該專利實施例7的表Ia和Ib)，但在下文詳述章節(jié)中將更詳細(xì)地討論該參考文獻(xiàn)。WO 00/11012和美國專利號6，825，335涉及用于在植物中表達(dá)的合成酵母去飽和酶基因，其中該基因包含去飽和酶結(jié)構(gòu)域和cyt b5結(jié)構(gòu)域。這些參考文獻(xiàn)的背景章節(jié)詳細(xì)討論了脂肪酸合成。植物油的性能特征(無論是飲食特征或工業(yè)特征)基本由其脂肪酸譜決定，即由油中存在的脂肪酸種類以及每個種類的相對和絕對量決定。盡管已知脂肪酸譜和性能特征之間的若干關(guān)系，但有許多仍然未知。盡管如此，植物油中存在的不飽和的類型和數(shù)量與其飲食和工業(yè)應(yīng)用都相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)蕓苔油含有約8-12%的亞麻酸，這使其就氧化而言(因此也就風(fēng)味和穩(wěn)定性而言)處于與大豆油相似的類別。可以以許多方式提高蕓苔油的氧化穩(wěn)定性，例如通過氫化來減少不飽和量、添加抗氧化劑和用具有較好氧化穩(wěn)定性的油進行調(diào)和。例如，用低亞麻酸油(如向日葵)調(diào)和蕓苔油可降低18:3水平，從而提高油的穩(wěn)定性。然而，這些處理必然提高油的費用，并且可能具有其他問題，例如氫化可能同時提高飽和脂肪酸的水平和反式不飽和的量，這兩者都是飲食應(yīng)用中所不希望的。高油酸油是可以提供的，但是除了這些溢價油可能增加的費用以外，來自為極高油酸水平育種的作物的植物油可證明不適用于工業(yè)用途，因為它們保留了很高水平的多不飽和脂肪酸，主要是亞油酸和/或亞麻酸。這些油對于飲食應(yīng)用仍然非常有用，包括作為烹調(diào)油，但在可見于工業(yè)應(yīng)用的更嚴(yán)格條件下氧化穩(wěn)定性不足。添加抗氧化劑甚至也不能使這些油達(dá)到工業(yè)應(yīng)用所需的氧化穩(wěn)定性水平，這可能是因為這些油中對氧化極端敏感的亞麻酸水平。
氧化穩(wěn)定性對于工業(yè)應(yīng)用是很重要的，可在熱和壓力條件下以及在化學(xué)副產(chǎn)物存在下延長潤滑劑的壽命。在這些應(yīng)用中，亞麻酸(以及亞油酸，其程度較低)仍然是弱氧化穩(wěn)定性的最主要原因。因此需要獲得歐洲油菜變種，其具有農(nóng)業(yè)成活力并產(chǎn)生具有足以使其可用于飲食應(yīng)用的氧化穩(wěn)定性水平，并且還本身足夠穩(wěn)定或者(取決于確切的應(yīng)用)對抗氧化劑具有足夠的感應(yīng)性，從而可用于工業(yè)應(yīng)用。歐洲專利申請EP 323753、美國專利號5，840, 946和美國專利號5，638，637涉及具有80-90%油酸含量(以脂肪酸總量的重量計)和不高于2%的芥酸的菜籽油。使用誘變提高油酸含量?！?946申請的權(quán)利要求書進一步規(guī)定該油具有不超過2%的芥酸含量和小于3. 5%的a-亞麻酸含量以及不高于7%的硬脂酸和軟脂酸形式的飽和脂肪酸含量。這些專利涉及在誘變之后進行選擇。美國專利號5，387，758,5, 434，283和5，545，821涉及具有2-4% (以重量計)的硬脂酸和軟脂酸組合以及不高于約2% (以重量計)的芥酸含量的菜籽油。使用誘變降低硬脂酸和軟脂酸含量。國際申請WO 92/03919 和美國專利號 5，668，299,5, 861，187 和 6，084，157 涉及
具有改變的脂肪酸譜的油菜籽、植物和油。提到了若干這樣的譜，其全部預(yù)期最高約2%的芥酸含量與約7%至約12%的軟脂酸含量、約14%至約20%的亞油酸含量、約0. 8%至約I. 1%的硬脂酸含量、約7%至約9%的a-亞麻酸含量以及某些范圍的FDA飽和物的組合。這些專利將飽和脂肪酸和“FDA飽和物”定義為月桂酸(C12:0)、肉豆蘧酸(C14:0)、軟脂酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的總和。國際申請WO 93/06714 和美國專利號 6，270，828、6，562，397、6，680，396 和6，689，409涉及具有降低的硫苷(glucosinolate)(從而具有降低的硫)以及約2%至約7%的a-亞麻酸含量的蕓苔油和種子。美國專利號6，169，190涉及來自蕓苔種子的油，其具有約71-77%的油脂肪酸含量和少于約3%的亞麻酸含量。還要求了 34-55之間的油酸亞麻酸比。美國專利號6，063，947和5，850，026要求保護得自蕓苔種子的油、相關(guān)蕓苔植物以及產(chǎn)生油的方法，其中油具有高于約80% (約86-89%)的油酸含量、約2%至約6%的亞油酸含量、少于約2. 5% (約1-2% )的a -亞麻酸含量和少于約2% (水解后)的芥酸含量。這些專利涉及種子特異性抑制微粒體油酸去飽和酶(將油酸轉(zhuǎn)化成亞油酸的A-12去飽和酶)和微粒體亞油酸去飽和酶(將亞油酸轉(zhuǎn)化成a-亞麻酸的A-15去飽和酶)的基因表達(dá)。美國專利號5，952，544要求保護催化碳15和16間反應(yīng)的植物質(zhì)體或微粒體A-15脂肪酸去飽和酶的片段。美國專利號4，627，192和4，743，402涉及向日葵種子和向日葵油，其具有約80-94% (相對于其總脂肪酸含量)的油酸含量，并且亞油酸與油酸的比值小于約0. 09。這些向日葵植物通過常規(guī)育種技術(shù)得到。WO 2003002751涉及激酶基因等用于改變植物油表型的用途。
不能預(yù)計A-9去飽和酶基因顯著(并且需要地)影響已經(jīng)有益的油料種子作物的脂肪酸譜的能力，特別是降低飽和脂肪水平而不對植物和油的其他方面產(chǎn)生不利影響的能力。發(fā)明概述本發(fā)明提供“無飽和”蕓苔油。本發(fā)明還部分涉及減少某些植物種子中飽和脂肪酸的方法。令人驚奇地，通過在蕓苔(Brassica)中使用A-9去飽和酶基因?qū)崿F(xiàn)了這些結(jié)果。該技術(shù)可應(yīng)用于本文公開的其他植物。本發(fā)明包括能產(chǎn)生這些油和種子的植物，優(yōu)選蕓苔。本發(fā)明還提供來自所述植物的種子和油，其中特別地，油具有此前未曾得到過的優(yōu)勢特征和脂肪酸譜。本發(fā)明還提供植物優(yōu)化的A-9去飽和酶基因。在一些優(yōu)選的實施方案中，優(yōu)選的植物包含本發(fā)明△-9去飽和酶基因的至少兩個拷貝。令人驚奇地，這些植物產(chǎn)生的種子不顯示基因沉默的效應(yīng)，而是還具有總飽和物水平的令人驚奇的降低。附圖
簡述圖I顯示在擬南芥中實現(xiàn)了飽和脂肪酸大于60%的降低。該圖概述了單個擬南芥事件的T2和T3種子數(shù)據(jù)。圖2顯示來自18個額外轉(zhuǎn)化體的T2擬南芥種子中“飽和物”高達(dá)60-70%的降低。該圖中展示的數(shù)據(jù)為表8中顯示的數(shù)值數(shù)據(jù)和較早的數(shù)值數(shù)據(jù)的組合。圖3顯示在Westar蕓苔中飽和脂肪超過43%的降低(包括24:0時為50%的降低)。圖4A顯示來自多種蕓苔植物(包括事件36-11. 19)的種子中總飽和物與對照相比的柱形圖。圖4B和4C顯示柱形圖中展示的數(shù)值數(shù)據(jù)。圖5A顯示來自多種蕓苔植物(包括事件218-11. 30)的種子中總飽和物與對照相比的柱形圖。圖5B和5C顯示柱形圖中展示的數(shù)值數(shù)據(jù)。圖6A-F顯示來自T3大田試驗的半種子數(shù)據(jù)。圖6A和6B明確顯示了與空白(轉(zhuǎn)基因分離出植物的事件)和野生型對照(未轉(zhuǎn)化株系)相比，轉(zhuǎn)基因事件中C16:0的降低和C16:l的提高。圖6C和6D明確顯示了與空白和野生型對照相比，轉(zhuǎn)基因事件中C18:0的降低和C18:1的提高。圖6E和6F分別明確顯示了與空白和野生型對照相比，轉(zhuǎn)基因事件中C20:0和C22:0的降低。圖6G和6H明確顯示了與空白和野生型對照相比，轉(zhuǎn)基因事件中C16:0的改變和降低以及C16:1的改變和提高。圖61和6J明確顯示了與空白和野生型對照相比，轉(zhuǎn)基因事件中C18:0的改變和降低以及C18:1的改變和提高。圖6K和6L顯示C18:2和C18:3相似的柱形圖。圖6M進一步展示了與現(xiàn)有的優(yōu)秀株系Nex 710相比總飽和物的降低。圖6N顯示了 1000個種子的分布。圖7A和7B展示使用實施例16的方案得到的數(shù)據(jù)。圖8和9是用來自實施例19討論的F3植物的DNA進行的兩個凝膠電泳的圖片。序列簡沭SEQ ID NO : I顯示本文使用的植物優(yōu)化的A-9去飽和酶基因可讀框的核酸序列。SEQ ID NO :2顯示前面為Kozak序列和BamHI克隆位點(殘基1-10)的SEQ IDNO :1的ORF序列以及ORF末端的翻譯終止子(殘基1379-1381)。SEQ ID NO 3顯示用于擴增A-9基因的A-9正向B引物的核酸序列。SEQ ID NO 4顯示用于擴增A-9基因的A-9反向B引物的核酸序列。SEQ ID NO 5顯示SEQ ID NO 1編碼的氨基酸序列。發(fā)明詳述本發(fā)明提供“無飽和”蕓苔油。本發(fā)明還部分涉及減少某些植物種子中飽和脂肪酸的方法。令人驚奇地，通過在植物(優(yōu)選油料植物，更優(yōu)選蕓苔(Brassica))中使用A-9去飽和酶基因產(chǎn)生“無飽和”水平的脂肪酸實現(xiàn)了這些結(jié)果。本發(fā)明包括這些植物，還提供來自所述植物的種子和油，其中油具有此前未曾獲得的特別有利的特征和脂肪酸譜。本文不例了構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)微粒體A _9_CoA去飽和酶基因。這種A -9去飽和酶是膜結(jié)合酶，催化16:0-CoA和18:0-CoA至16:1-CoA和18:1-CoA的反應(yīng)(在A-9位置加入雙鍵)。本發(fā)明的意義還在于其他飽和物(如C20:0、C22:0和C24:0)的水平也令人驚奇并有利地降低了，而C16:1和C18:1不飽和物則提高(C18:2和C18:3不提高或幾乎不提高，在一些情況下這些相對不穩(wěn)定的多不飽和物甚至降低)。迄今為止尚不清楚這在已經(jīng)具有需要的(但不是最優(yōu)的)脂肪酸譜的蕓苔和其他“優(yōu)良”油料種子作物中是否是良好的酶(包括該基因是否可以足夠表達(dá))。(例如，它在玉米中僅得到飽和物10%的降低。)如背景章節(jié)中提到的，由于復(fù)雜的脂肪酸譜和不同生物和植物的代謝途徑及其不同的物理細(xì)胞機器，盡管該基因和酶可能在蕓苔中有效力，也不能期待該效力是有益的。如背景章節(jié)中所討論的，一種或多種類型所需脂肪酸的提高經(jīng)常導(dǎo)致其他所需脂肪酸的降低、不需要脂肪酸的提高和農(nóng)學(xué)損失(即對修飾植物的其他完全不利的效應(yīng))。令人驚奇地，還可以實踐本發(fā)明而不對其他有價值的農(nóng)學(xué)特征，如種莢大小、種子產(chǎn)量、種子大小、油產(chǎn)量等產(chǎn)生相應(yīng)的不利效應(yīng)。在單個轉(zhuǎn)基因插入片段純合的植物中沒有不利效應(yīng)。一些雙純合疊加(通過兩個轉(zhuǎn)基因事件的雜交產(chǎn)生)顯示種莢數(shù)和結(jié)實率的降低，原因未知。然而表27含有具有與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ障嗨频姆N子產(chǎn)量以及“無飽和”組成的疊加(即顯然提高了拷貝數(shù)的事件)。去飽和酶之間(甚至是酵母、真菌、植物和動物A-9去飽和酶之間)的差異產(chǎn)生了不可預(yù)見性的另一原因。去飽和酶的差異可以部分歸結(jié)為不同去飽和酶的來源生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的差異。上文背景章節(jié)中討論了來自美國專利號5，777，201的酵母去飽和酶。它比本文示例的曲霉去飽和酶更長(510個氨基酸對455個氨基酸)。此外，它僅在約400個氨基酸上具有約52%的同一性(通過BLAST和BestFit (Smith-Waterman程序)確定，都用EMBOSS完成)。該專利實施例7的表Ia和Ib顯示使用酵母去飽和酶實現(xiàn)的飽和物降低遠(yuǎn)弱于根據(jù)本發(fā)明在蕓苔中使用示例的曲霉去飽和酶實現(xiàn)的降低。有多種因素可能解釋酵母去飽和酶相對弱的性能。例如，該蛋白可能在植物中內(nèi)在地不穩(wěn)定(而本發(fā)明去飽和酶很顯然在蕓苔中非常穩(wěn)定)。在其他酶特性上也可能存在差異，如催化效率、底物親和力、輔因子親和力等。與美國專利號5，723，595和6，706, 950的紅花去飽和酶相比，紅花去飽和酶(396個氨基酸)比本發(fā)明示例的曲霉去飽和酶(455個氨基酸)更短。紅花去飽和酶還可見于質(zhì)體，而本發(fā)明曲霉去飽和酶見于ER/微粒體/胞質(zhì)隔室。此外,紅花去飽和酶使用見于質(zhì)體的?；鵄CP底物，而曲霉去飽和酶使用見于胞質(zhì)隔室的?；鵆oA底物。因此，就本發(fā)明而言，不了解?；鵆oA底物庫中的大部分是否可用于曲霉去飽和酶。因此，非常有意義的是，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的A-9去飽和酶能夠獲得具有優(yōu)秀特性(特別是就提高油的食用品質(zhì)而言)的蕓苔植物、種子和來自于它們的油。非常令人驚奇地，在擬南芥中獲得了飽和脂肪酸的高于60%的降低，在蕓苔中獲得了飽和脂肪酸的高于43% 的降低。必須注意到，這是在已經(jīng)產(chǎn)生任何適當(dāng)植物的最佳脂肪酸譜之一的植物中獲得的。如下文所示并詳細(xì)討論的，本發(fā)明還用于獲得令人驚奇并有利的脂肪酸譜和比例。盡管認(rèn)為硬脂酸是飽和脂肪酸，但是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其具有降低膽固醇的作用。因此，相對較高的硬脂酸水平可能是有益的。類似的，相對較高水平的花生四烯酸可能是需要的。如本文數(shù)據(jù)所示，來自本發(fā)明種子的油具有有利的這兩種脂肪酸譜以及所需水平的如11-十八碳烯酸。本文還顯示，在本發(fā)明的商品品質(zhì)植物中，有利水平的這些脂肪酸和/或總飽和物與需要的植物高度、產(chǎn)量和其他有益特征組合存在(與如矮化植物相反)。本文展示了這些本發(fā)明植物的示例數(shù)據(jù)。還應(yīng)該注意,本發(fā)明不僅限于示例的去飽和酶。GENBANK中提供了多種去飽和酶和A-9去飽和酶，可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法進行序列比對以觀察并比較酶序列的差異?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明使用與本文的示例相似的酶。例如，本發(fā)明的曲霉去飽和酶具有兩個結(jié)構(gòu)域。第一個結(jié)構(gòu)域(大致在分子的氨基端三分之二)為去飽和酶結(jié)構(gòu)域，第二個結(jié)構(gòu)域(大致在分子的C端三分之一)為細(xì)胞色素b5結(jié)構(gòu)域。例如，SEQ ID NO :5的殘基62-279可以與如脂肪酸去飽和酶gnl I CDD I 25523pfam00487 的殘基 4-233 比對。SEQID NO :5 的殘基 332-407 可以與 gnl | CDD | 22935pfam00173(細(xì)胞色素b5結(jié)構(gòu)域)的殘基1_74比對。SEQ ID NO :5的殘基17-305可以與脂肪酸去飽和酶gnl IcddI 11113 cog 1398 (ole 1)脂類代謝結(jié)構(gòu)域的殘基3-288比對。seqID NO 5的殘基301-449可以與gnl | CDD 114396 C0G5274的CYB5 (與脂類代謝相關(guān)的細(xì)胞色素b)的殘基11-163比對。缺乏細(xì)胞色素b5的SEQ ID NO :5去飽和酶結(jié)構(gòu)域可以是功能性的，因為這是植物質(zhì)體去飽和酶的一般結(jié)構(gòu)。也已經(jīng)公開了假想的微粒體松去飽和酶(L0⑶SAF438199)，其使用可見于胞質(zhì)隔室的酰基CoA底物，并且缺乏細(xì)胞色素b5結(jié)構(gòu)域。還可以將曲霉細(xì)胞色素b5結(jié)構(gòu)域與其他生物(甚至是來自植物胞質(zhì)去飽和酶)的進行交換。如下文詳細(xì)討論的，這些結(jié)構(gòu)域或編碼一種或兩種這些結(jié)構(gòu)域的區(qū)段可作為探針用于定義本發(fā)明的分子。因此，可根據(jù)本發(fā)明使用的基因和蛋白質(zhì)不僅包括具體示例的全長序列，還包括這些序列的部分、區(qū)段和/或片段(包括與全長分子相比的內(nèi)部和/或末端缺失)、其變體、突變體、嵌合體和融合物。用于本發(fā)明的蛋白質(zhì)可以具有替代的氨基酸，只要它們保留本文具體示例的蛋白質(zhì)的特征性酶活性?！白凅w”基因具有編碼相同蛋白質(zhì)或與示例蛋白質(zhì)功能等價的等價蛋白質(zhì)的核苷酸序列。術(shù)語“變體蛋白質(zhì)”和“等價蛋白質(zhì)”指具有與示例蛋白質(zhì)相同或基本相同的生物/功能活性的蛋白質(zhì)。在本文中使用的“等價”序列指具有改善功能性或不對功能性產(chǎn)生不利影響的氨基酸替換、缺失、添加或插入的序列。該定義還包括保留功能性的片段。保留與示例蛋白相應(yīng)片段相同或相似功能的片段和其他等價物在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？梢詾榱硕喾N目的而產(chǎn)生變化如氨基酸替換或添加，例如為了提高(或降低)蛋白質(zhì)的蛋白酶穩(wěn)定性(而不明顯/顯著降低蛋白質(zhì)的功能性)?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如產(chǎn)生點突變)便利地構(gòu)建基因的改變。此外，例如美國專利號5，605，793描述了通過在隨機斷裂后使用DNA再裝配產(chǎn)生額外的分子多樣性的方法。變體基因可用于產(chǎn)生變體蛋白質(zhì)，重組宿主可用于產(chǎn)生變體蛋白質(zhì)。使用這些“基因改組”技術(shù)可以構(gòu)建等價基因和蛋白質(zhì)，其包含任一本文示例序列的(例如)任意5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60個連續(xù)殘基(氨基酸或核苷酸)。

可以使用市售的外切核酸酶或內(nèi)切核酸酶按照標(biāo)準(zhǔn)方法產(chǎn)生全長基因的片段。例如可以使用酶如Bal31或位點定向誘變來系統(tǒng)地從這些基因的末端切除核苷酸。還可以使用多種限制性酶獲得編碼活性片段的基因?？梢允褂玫鞍踪|(zhì)直接獲得這些蛋白質(zhì)的活性片段?？梢越囟瘫景l(fā)明蛋白質(zhì)而仍然保留功能活性，這在本發(fā)明范圍內(nèi)?！敖囟痰鞍踪|(zhì)”指可以切割而在切割后仍然顯示酶活性的蛋白質(zhì)的部分。此外，可以使用分子生物學(xué)技術(shù)產(chǎn)生有效切割的蛋白質(zhì)，其中通過用限制性內(nèi)切核酸酶消化或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的其他技術(shù)去除編碼所述蛋白質(zhì)的DNA堿基。截短后，可以在異源系統(tǒng)如大腸桿菌、桿狀病毒、基于植物的病毒系統(tǒng)、酵母等中表達(dá)所述蛋白質(zhì)，接著在本文公開的昆蟲測定中測定活性。本領(lǐng)域熟知，可以成功地產(chǎn)生截短蛋白質(zhì)，以使它們保留功能活性，而比完整的全長序列更短。本領(lǐng)域熟知，可以以截短(核心毒素)形式使用B.t.毒素。參閱如Adang等，Gene 36 :289-300(1985), ^Characterizedfull-length and truncated plasmid clonesof the crystal protein of Bacillusthuringiensis subsp kurstaki HD—73 and theirtoxicity to Manduca sexta. ”。存在其他保留殺蟲活性的截短蛋白質(zhì)的實例,包括昆蟲保幼激素酯酶(Regents of the University of California 的美國專利號 5，674，485)。本文使用的術(shù)語“毒素”還意在包括功能活性截短物。可以通過如使用寡核苷酸探針定義、鑒定和/或獲得根據(jù)本發(fā)明使用的蛋白質(zhì)和基因。這些探針為可檢測的核苷酸序列，所述核苷酸序列由于適當(dāng)?shù)臉?biāo)記或如國際申請?zhí)朩O 93/16094所述使其具有固有的熒光性而可被檢測。探針(和本發(fā)明的多核苷酸)可以是DNA、RNA或PNA。除了腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶⑴和尿嘧啶(U，RNA分子中)之外，本發(fā)明的合成探針(和多核苷酸)還可以含有次黃苷(能與全部四種堿基配對的中性堿基，有時用于在合成探針中代替全部四種堿基的混合物)。因此，當(dāng)本文中提到合成的簡并寡核苷酸時一般使用“N”或“n”，“N”或“n”可以是G、A、T、C或次黃苷。本文使用的多義密碼子與提交本申請的標(biāo)準(zhǔn)IUPAC命名約定一致(如R為A或G、Y為C或T等)。
如本領(lǐng)域所熟知，如果探針分子與核酸樣品雜交，可以合理的假設(shè)探針和樣品具有顯著同源性/相似性/同一性。優(yōu)選地，首先進行多核苷酸雜交，之后使用本領(lǐng)域所熟知的技術(shù)在低、中或高嚴(yán)格條件下進行洗滌，如Keller，G. H.，M. M. Manak(1987) ((DNAProbes)), Press, New York, NY, 169-170頁中所述。例如，如文中所述,可以通過首先在室溫下用2 X SSC (標(biāo)準(zhǔn)檸檬酸鹽溶液)/0. 1% SDS (十二烷基硫酸鈉)洗滌15分鐘來得到低嚴(yán)格條件。一般進行兩次洗滌?？梢酝ㄟ^降低鹽濃度和/或通過提高溫度得到較高的嚴(yán)格性。例如，在上述洗滌之后可以接著在室溫下兩次用0. 1XSSC/0. 1% SDS洗滌15分鐘，然后在55°C用0. 1XSSC/0. 1% SDS接著洗滌30分鐘。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，這些溫度可以與本文公開的其他雜交和洗滌程序一起使用(例如可以用SSPE代替SSC作為鹽使用)?？梢酝ㄟ^向445ml水中加入50ml 20XSSC和5ml 10% SDS制備2XSSC/0. 1% SDS?？梢酝ㄟ^組合NaCl (175. 3g/0. 150M)、檸檬酸鈉(88. 2g/0. 015M)和水并接著用IONNaOH調(diào)整pH至7. 0，然后調(diào)節(jié)體積至I升來制備20XSSC?？梢酝ㄟ^將IOg SDS溶解到50ml高壓滅菌水中，然后稀釋到IOOml來制備10% SDS0探針檢測提供了以已知方式測定雜交是否保持的方法。這種探針分析提供了鑒定本發(fā)明毒素編碼基因的快速方法。可以使用DNA合成儀和標(biāo)準(zhǔn)程序合成本發(fā)明用作探針核苷酸片段。這些核苷酸序列還可以用作PCR引物以擴增本發(fā)明的基因。與給定的多核苷酸雜交是可用于鑒定、發(fā)現(xiàn)和/或定義本發(fā)明蛋白質(zhì)和基因的技術(shù)。本文使用的“嚴(yán)格”雜交條件指得到與本文所述條件相同或大致相同程度雜交特異性的條件。通過標(biāo)準(zhǔn)方法可以進行固定在DNA印跡上的DNA與32p標(biāo)記的基因特異性探針的雜交(參閱如 Maniatis, T.，E. F. Fritsch, J. Sambrook[1982]Molecular Cloning ALaboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。一般在允許檢測靶序列的條件下進行雜交和其后的洗滌。對于雙鏈DNA基因探針，在6XSSPE、5XDenhardt溶液、0. I % SDS,0. lmg/ml變性DNA中在DNA雜交體解鏈溫度(Tm)以下20-25°C進行過夜雜交。按下式描述解鏈溫度(Beltz, G. A.，K. A. Jacobs, T. H. Eickbush,P. T. Cherbas 和 F. C. Kafatos[1983]Methods of Enzymology, R. ffu, L. Grossman 和K. Moldave [編輯]Academic Press, New York 100:266-285)Tm = 81. 5°C +16. 6Log[Na+] +0. 41 (G+C% )-0.61(甲酰胺％ )-600/雙鏈體長度(喊基對)一般如下述進行洗滌I)在I X SSPE、0. I % SDS中室溫洗滌兩次，每次15分鐘(低嚴(yán)格洗滌)。2)在0. 2X SSPE、0. 1% SDS中在Tm-20°C洗滌一次15分鐘(中度嚴(yán)格洗滌)。對于寡核苷酸探針，在6 X SSPE、5 XDenhardt 溶液、0. I % SDS,0. lmg/ml 變性DNA中在雜交體解鏈溫度(Tm)以下10-20°C進行過夜雜交。按下式確定寡核苷酸探針的 Tm:Tm(°C) =2(T/A 堿基對數(shù)目)+4(G/C 堿基對數(shù)目)(Suggs，S. V. , T. Miyake,E. H. Kawashime,M. J. Johnson,K. Itakura和R. B. Wallace [1981] ICN-UCLA Symp. Dev. Biol.Using PurifiedGenes, D. D. Brown [編輯],Academic Press, New York, 23 :683-693)。如下述進行洗滌I)在I X SSPE、0. I % SDS中室溫15分鐘洗滌兩次(低嚴(yán)格洗滌)。2)在I X SSPE、0. I % SDS中在雜交溫度下洗滌一次15分鐘(中度嚴(yán)格洗滌)。
一般可以改變鹽和/或溫度以改變嚴(yán)格性。對于長度> 70堿基左右的標(biāo)記DNA片段，可以使用以下條件低I 或 2XSSPE，室溫低I 或 2XSSPE，42°C中0. 2X 或 1XSSPE，65°C高0. 1XSSPE，65°C。雙鏈體的形成和穩(wěn)定性依賴于雜交體兩條鏈間的顯著互補性，且如上文所提到的，某種程度的錯配是允許的。因此，本發(fā)明的探針序列包括所述序列的突變(單個和多個)、缺失、插入及其組合，其中所突變、插入和缺失允許與目的靶多核苷酸形成穩(wěn)定的雜交體?？梢砸远喾N方法在給定的多核苷酸序列中產(chǎn)生突變、插入和缺失，這些方法為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知。其他方法可能在將來被了解。由于遺傳密碼的簡并性/冗余性，多種不同的DNA序列都可以編碼本文公開的氨基酸序列。產(chǎn)生編碼相同或基本相同的酶的替代DNA序列在受本領(lǐng)域訓(xùn)練的技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。這些變體DNA序列在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，本發(fā)明包括I)得自野生型生物的蛋白質(zhì)；2)由突變產(chǎn)生的變體；3)通過進行保守性氨基酸替換設(shè)計的變體；和
4)通過隨機斷裂并重新組裝編碼本發(fā)明TC蛋白的多種不同序列(DNA改組)產(chǎn)生的變體。參閱如美國專利號5，605，793。編碼本發(fā)明蛋白質(zhì)的DNA序列可以是野生型序列、突變體序列或設(shè)計用于表達(dá)預(yù)定蛋白質(zhì)的合成序列。通過如避免多腺苷酸化信號和使用植物優(yōu)選的密碼子而設(shè)計在植物中聞表達(dá)的DNA序列是特別有用的。本文示例了某些蛋白質(zhì)和基因。由于這些蛋白質(zhì)和基因僅作為示例，因此顯然本發(fā)明包括具有與示例蛋白質(zhì)相同或相似功能的變體或等價蛋白質(zhì)(以及編碼其等價物的核苷酸序列)的用途。等價蛋白質(zhì)與示例酶(或其活性片段)具有氨基酸相似性(和/或同源性)。可以以較窄的同一性和/或相似性范圍的方式定義本發(fā)明優(yōu)選的多核苷酸和蛋白質(zhì)。例如與本文示例或建議的序列相比，酶蛋白的同一性和/或相似性可以是40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%?？梢允褂蒙衔牧谐龅娜我粩?shù)字定義上限和下限。例如，本發(fā)明的蛋白質(zhì)可以定義為例如與示例蛋白具有50-90 %的同一性。除非另有說明，使用如Karlin 和 Altschul (1993)，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :5873-5877 中所改良的 Karlin 和 Altschul (1990)，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87 2264-2268的算法確定本文所使用的兩個核酸的序列同一性和/或相似性百分比。這樣的算法整合在 Altschul 等(1990)，J. Mol. Biol. 215 :402-410 的 NBLAST 和 XBLAST 程序中。使用NBLAST程序進行BLAST核苷酸搜索，評分=100、字寬=12?？梢匀鏏ltschul等(1997)，Nucl. AcidsRes. 25 :3389-3402 中所述使用 Gapped BLAST。使用 BLAST 和 GappedBLAST 程序時，使用程序(NBLAST和XBLAST)各自的默認(rèn)參數(shù)。參閱NCBI/NIH網(wǎng)站。
使用默認(rèn)參數(shù)，用Vector NTI Suite 8(InforMax, Inc. , North Bethesda, MD,美國A)中的AlignX函數(shù)得到用于比較目的的缺口比對。默認(rèn)參數(shù)一般為缺口打開罰分15、缺口延伸罰分6. 66和缺口分離罰分范圍8。可以以這種方式或本領(lǐng)域熟知的其他技術(shù)比對和比較兩種或更多序列。通過分析這些比對可以鑒定本發(fā)明多肽中相對保守和非保守的區(qū)域。這可用于例如評估通過修飾或替換一個或多個氨基酸殘基來改變多肽序列是否預(yù)期是可接受的。氨基酸同源性/相似性/同一性一般(但不必然)在蛋白質(zhì)的決定生物活性的區(qū)域中是最高的，或者在與最終決定生物活性的三維構(gòu)型決定相關(guān)的區(qū)域中是最高的?？紤]到這一點，某些氨基酸替換是可以接受的并預(yù)計是可承受的。例如，這些替換可以在對活性非關(guān)鍵的蛋白質(zhì)區(qū)域中?？梢允褂玫鞍踪|(zhì)晶體結(jié)構(gòu)分析和基于軟件的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)建模來鑒定可(使用位點定向誘變、改組等)進行修飾以確實改變蛋白質(zhì)特性和/或提高功能性的蛋白質(zhì)區(qū)域。還可以改變蛋白質(zhì)的多種特性和三維特征而不對蛋白質(zhì)的活性/功能性產(chǎn)生不 利影響。保守性氨基酸替換預(yù)期是可以接受的/不對分子的三維構(gòu)型產(chǎn)生不利影響的。氨基酸可置于如下類別非極性、極性不帶電荷、堿性和酸性。只要替換不損害化合物的生物活性，則保守性替換在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在所述保守性替代中，一種類別的氨基酸被同一類型的另一氨基酸替換。下表提供了屬于每一類的氨基酸實例。
權(quán)利要求
1.蕓苔植物的細(xì)胞，其中所述蕓苔植物產(chǎn)生具有包含少于3.5%總飽和物和少于80%油酸的油級分的種子，其中所述總飽和物為所有不含雙鍵的脂肪酸的總數(shù)。
2.權(quán)利要求I的植物細(xì)胞，其中所述油級分包含70%至78%的油酸。
3.權(quán)利要求I的植物細(xì)胞，其中所述油級分包含不高于3%的亞麻酸。
4.權(quán)利要求I的植物細(xì)胞，其中所述油級分包含70%至78%的油酸和不高于3.5%的亞麻酸。
5.權(quán)利要求I的蕓苔植物細(xì)胞，其中所述油級分具有不高于2.7%的總飽和物。
6.權(quán)利要求I的植物的細(xì)胞，其中所述植物高度至少為100cm，平均種子重量大于3mg。
7.由權(quán)利要求I的蕓苔植物細(xì)胞所來源的蕓苔植物產(chǎn)生的種子的細(xì)胞。
8.權(quán)利要求7的蕓苔種子的細(xì)胞，所述種子具有包含不高于2.7%的總飽和物的油級分，其中所述總飽和物為所有不含雙鍵的脂肪酸的總數(shù)。
9.由權(quán)利要求7的細(xì)胞產(chǎn)生的植物的細(xì)胞。
10.蕓苔油，其包含少于3.5%的總飽和物和少于80%的油酸，其中所述油是在沒有飽和脂肪酸水平的化學(xué)修飾下從來自相同蕓苔植物的至少8個種子獲得的。
11.油炸食品組合物，其包含馬鈴薯材料和根據(jù)權(quán)利要求10的蕓苔油。
12.權(quán)利要求10的蕓苔油，其具有包含不高于2.7%的總飽和物的油級分。
13.產(chǎn)生油炸食品組合物的方法，其中所述方法包括在根據(jù)權(quán)要求10的蕓苔油中油炸馬鈴薯材料。
14.權(quán)利要求10的油，其中所述油包含70%至78%的油酸。
15.權(quán)利要求10的油，其中所述油包含不不高于3%的亞麻酸。
16.權(quán)利要求10的油，其中所述油包含70%至78%的油酸和不高于3.5%的亞麻酸。
全文摘要
本發(fā)明提供了“無飽和”蕓苔油。本發(fā)明還提供了可用于產(chǎn)生這些油的種子。產(chǎn)生這些種子的植物也包括在本發(fā)明之內(nèi)。所有這些都通過在蕓苔中使用Δ-9去飽和酶基因而令人驚奇地實現(xiàn)。該計數(shù)可用于本文公開的其他植物。本發(fā)明的油具有迄今為止尚未獲得的特別有利的特征和脂肪酸譜。本發(fā)明還提供植物優(yōu)化的Δ-9去飽和酶基因。本發(fā)明還提供植物優(yōu)化的Δ-9去飽和酶基因。在一些優(yōu)選的實施方案中，優(yōu)選植物包含至少兩個拷貝的本發(fā)明Δ-9去飽和酶基因。令人驚奇地，這些植物產(chǎn)生的種子不顯示基因沉默效應(yīng)，而是令人驚奇地具有進一步降低的總飽和物水平。
文檔編號A23L1/217GK102978153SQ201210487268
公開日2013年3月20日 申請日期2005年10月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月8日
發(fā)明者M·湯普森, S·萊迪 申請人:美國陶氏益農(nóng)公司