專利名稱：一種累代選育對蝦新品種的鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)，具體的說是一種累代選育對蝦新品種的鑒定方法。
背景技術(shù)：
凡納濱對蝦是我國和世界上目前養(yǎng)殖面積最大,產(chǎn)量最高的對蝦，占我國對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量的81 世界對奸養(yǎng)殖產(chǎn)量的66%。良好的種質(zhì)資源,是凡納濱對奸養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的先決條件，因此凡納濱對蝦的人工選育工作的開展引起科研人員和企業(yè)的高度重視。結(jié)合家系選育和群體選育，凡納濱對蝦選育工作可以實(shí)現(xiàn)優(yōu)良生產(chǎn)性狀如生長快、抗逆性強(qiáng)、抗病力高等的選擇，提高餌料系數(shù)、養(yǎng)成率和產(chǎn)量，相比于普通的未經(jīng)選育的群體具有較大的優(yōu)勢。自張留所(張留所，相建海凡納濱對蝦微衛(wèi)星位點(diǎn)在兩個(gè)選育家 系中遺傳的初步研究.遺傳2005，27(6):6)等報(bào)道選育工作開展后，陳錨(陳錨，吳長功，相建海，黃皓，劉小林，劉翠紅，何建國，孫成波凡納濱對蝦的選育與家系的建立.海洋科學(xué)2008，32(11) :5)、黃永春(黃永春，艾華水，殷志新，黃仙德，李色東，翁少萍，何建國凡納濱對蝦抗WSSV選育家系的抗病與生長特性.臺(tái)灣海峽2011，30(3))、梁華芳(梁華芳，杜國平，黃海立，吳灶和，葉富良，邱德全，孫成波凡納濱對蝦快速生長家系選育的初步研究.廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)2011，31(3))等均報(bào)道了選育工作的開展，選育群體與未經(jīng)選育的群體間生長性狀、抗病性狀均有顯著差異。2010年以來，相繼有三個(gè)凡納濱對蝦新品種獲得批準(zhǔn)，分別是“中科一號”、“科海一號”和“中興一號”。然而在實(shí)際生產(chǎn)中，這些累代選育的新品種之間的表型差異較小，很難通過外觀的差異將其區(qū)分，這給引種鑒定和更進(jìn)一步的選擇育種研究帶來了很大困難，因此亟需建立一種對累代選育對蝦新品種進(jìn)行鑒定的方法。微衛(wèi)星標(biāo)記是近年發(fā)展起來的用于遺傳多樣性研究技術(shù)，因其具有高效、多態(tài)、共顯性標(biāo)記等特點(diǎn)，特別適合研究種群的遺傳變異和分化，成為針對家系或品種鑒別的主要手段。目前的對蝦選育是通過針對某一性狀的累代選育，其遺傳特性上趨于均一化，且由于是在某一基礎(chǔ)群上進(jìn)行的選育，因此來源較為單一，這就為通過微衛(wèi)星和線粒體控制區(qū)域進(jìn)行種質(zhì)鑒定提供了可能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種對累代選育對蝦新品種進(jìn)行鑒定的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案為—種對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，采用線粒體控制區(qū)的引物擴(kuò)增并測序待鑒定群體的線粒體控制區(qū)；將擴(kuò)增所得線粒體控制區(qū)序列符合累代選育群體單倍型的待鑒定群體再利用5對微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增所的產(chǎn)物進(jìn)行微衛(wèi)星分型；而后利用微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)進(jìn)行判別分析，進(jìn)而得到累代選育對蝦新品種；所述5對微衛(wèi)星位點(diǎn)引物為
權(quán)利要求
1.一種對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，其特征在于采用線粒體控制區(qū)的引物擴(kuò)增并測序待鑒定群體的線粒體控制區(qū)；將擴(kuò)增所得線粒體控制區(qū)序列符合累代選育群體單倍型的待鑒定群體再利用5對微衛(wèi)星位點(diǎn)引物進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增所的產(chǎn)物進(jìn)行微衛(wèi)星分型；而后利用微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)進(jìn)行判別分析，進(jìn)而得到累代選育對蝦新品種； 所述5對微衛(wèi)星位點(diǎn)引物為
2.按權(quán)利要求I所述對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，其特征在于所述累代選育對蝦新品種為凡納濱對蝦“科海一號”。
3.按權(quán)利要求2所述對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，其特征在于采用線粒體控制區(qū)的引物擴(kuò)增待鑒定群體的線粒體控制區(qū)；將擴(kuò)增所得序列具SEQID1、SEQID2和/或SEQID3所示序列的待鑒定群體再利用5對微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增所的產(chǎn)物進(jìn)行微衛(wèi)星分型；將分型數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，利用判別公式進(jìn)行對累代選育對蝦新品種的鑒別；判別公式為Zl=-4. 00561+5. 40776*Χ1+2. 08033^X2+1. 41601*Χ3+1· 97728^X4+2. 21149*Χ5Z2=-l. 15643+0. 30931*Χ1+0. 14533^X2+0. 61950^X3+1. 2762(^X4+0. 79256*Χ5 其中Χ1、Χ2、Χ3、Χ4、Χ5分別為五個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)分型的轉(zhuǎn)化數(shù)據(jù)。
4.按權(quán)利要求3所述對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，其特征在于將所述微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，將含有累代選育對蝦新品種特異性標(biāo)記的記為1，不含有特異性標(biāo)記的記為O。
5.按權(quán)利要求4所述對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，其特征在于所述判別公式中Ζ1>Ζ2為累代選育對蝦新品種，ΖΚΖ2為其他群體。
6.按權(quán)利要求I所述對累代選育對蝦新品種的鑒定方法，其特征在于所述線粒體控制區(qū)的引物對為CRF: 5 ’ -ACCATTGACCTAAAAGTGAAAGAAC-3，CRR: 5 ’ -ATCAATAAATATAAATTAACTACGC-3，。
全文摘要
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)，具體的說一種對累代選育對蝦新品種的鑒定方法。采用線粒體控制區(qū)的引物擴(kuò)增并測序待鑒定群體的線粒體控制區(qū)；將測序所得線粒體控制區(qū)符合累代選育群體單倍型的待鑒定群體再利用5對微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增所的產(chǎn)物進(jìn)行微衛(wèi)星分型；而后利用微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)進(jìn)行判別分析，進(jìn)而得到累代選育對蝦新品種；采用本發(fā)明通過分子標(biāo)記進(jìn)行鑒定，可以克服表型特征難以鑒別累代選育新品種的困難，可以在對蝦個(gè)體較小時(shí)完成檢測，不受對蝦發(fā)育時(shí)期和個(gè)體大小的影響，可以提高鑒定的準(zhǔn)確率，通過該鑒別方法，可以實(shí)現(xiàn)累代選育對蝦新品種的鑒別。
文檔編號C12Q1/68GK102888459SQ20121038463
公開日2013年1月23日 申請日期2012年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月11日
發(fā)明者相建海, 于洋, 張曉軍, 李富花 申請人:中國科學(xué)院海洋研究所