專利名稱：漆酶活性相關(guān)基因序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)中的基因領(lǐng)域，特別是一種漆酶活性相關(guān)基因序列。
背景技術(shù)：
漆酶(laccase，EC 1. 10. 3. 2)廣泛地存在于自然界中，因最初發(fā)現(xiàn)于漆樹的樹脂 而得名。漆酶存在于一些植物和微生物中。漆酶有多種工業(yè)用途。漆酶能除去酚類物質(zhì)而 應(yīng)用于污水處理和作為食品添加劑等；漆酶具有分解木質(zhì)素的作用而應(yīng)于紙漿、造紙工業(yè) 和纖維素乙醇工業(yè)。漆酶有著重要的工業(yè)用途以及廣泛的需求?？寺∨c表達(dá)基因是當(dāng)前研 J Li ^^ ； ^^ °

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種漆酶(laccase，簡(jiǎn)稱Lac)的基因序列，是參考已知的漆 酶基因的N端和C端序列設(shè)計(jì)引物，以產(chǎn)漆酶的枯草桿菌基因組為模板，用PCR法擴(kuò)增得到 全長(zhǎng)的漆酶的基因序列。其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 1所述；它的氨基酸序列如 序列表中SEQ ID NO. 2所述。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)1、枯草桿菌菌種購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。采用常規(guī)方法提取枯草 桿菌基因組DNA。2、引物設(shè)計(jì)與引物合成從 http//www. ncbi. nlm. nih. gov/ _ M 白勺 Nucleotide 巾 T" i牛古 Hffiff (Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168)的 cotA 基因序列(該基因編碼酮依賴的 漆酶)，根據(jù)該基因的N端和C端序列設(shè)計(jì)PCR引物，引物由北京六合華大科技股份有限公 司合成。其引物序列為引物1 5， ATGACACTTGAAAAATTTGTGGATGCTCTCCC3，引物2:5 ’ CTATTTATGGGGATCAGTTATATCCATCGG3’3、漆酶基因序列的克隆用以上合成的兩條引物，以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168)的基因組DNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用0. 8%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn) 行檢測(cè)，從凝膠中純化回收目的產(chǎn)物。然后將純化的PCR產(chǎn)物克隆到PUCM-T載體中，轉(zhuǎn)化 大腸桿菌DH5 a感受態(tài)細(xì)胞，挑取陽(yáng)性克隆，送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行 全序列測(cè)序和拼接。4、對(duì)漆酶基因的測(cè)定4. 1將基因全序列測(cè)序和拼接結(jié)果用BLAST軟件進(jìn)行同源性測(cè)定，比對(duì)結(jié)果
權(quán)利要求
一種漆酶相關(guān)蛋白的基因序列，其特征在于其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所述。
2.一種漆酶相關(guān)蛋白的基因序列，其特征在于其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 2 所述。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種漆酶活性相關(guān)基因序列，是參考已知的漆酶基因的N端和C端序列設(shè)計(jì)引物，以產(chǎn)漆酶的枯草桿菌基因組為模板，用PCR法擴(kuò)增得到全長(zhǎng)的漆酶的基因序列，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所述；它的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所述。本發(fā)明可以通過將這一基因進(jìn)行重組表達(dá)生產(chǎn)漆酶，而應(yīng)用于纖維素乙醇的生產(chǎn)、紙漿和造紙工業(yè)以及污水處理和美食等行業(yè)。
文檔編號(hào)C12N9/02GK101979588SQ201010508100
公開日2011年2月23日 申請(qǐng)日期2010年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月30日
發(fā)明者張愛聯(lián), 楊穗珊 申請(qǐng)人:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所