專利名稱：人骨形成細(xì)胞治療炎性風(fēng)濕性疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及骨形成細(xì)胞在治療炎性風(fēng)濕性疾病(inflammatoryrheumatic disease, IRD)中的治療性應(yīng)用，特別是在治療IRD(之炎癥部分)的炎癥中的治療性應(yīng)用。
背景技術(shù)：
風(fēng)濕性疾病包括影響運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)(特別是包括關(guān)節(jié)、肌肉、結(jié)締組織、關(guān)節(jié)和骨周圍 軟組織)的多種痛性疾病。炎癥和/或自身免疫反應(yīng)是許多風(fēng)濕性疾病的病因。這些病癥(常稱為“炎性風(fēng) 濕性疾病”或“IRD”)包括但不限于各種起源的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等。目前IRD的可用治療手段主要包括針對(duì)病因的抗風(fēng)濕藥(disease-modifying antirheumatic drug, DMARD) > H M # # eS # iit (non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID)禾口止痛藥。因此，需要另外的IRD治療方式，特別是針對(duì)IRD之炎癥部分的治療方式。WO 2005/089127包括在支架裝置中的骨生成細(xì)胞，用以使骨關(guān)節(jié)炎的骨軟骨面再 生。WO 2007/093431建議使用成骨細(xì)胞治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨壞死。這些文獻(xiàn)并未公開(kāi) 骨形成細(xì)胞的抗炎作用，也未公開(kāi)使用骨形成細(xì)胞來(lái)抑制風(fēng)濕性疾病的炎癥部分。Liu等，2006(J Immunol 176 (5) :2864_71)公開(kāi)了在同種異體組織移植中從間充 質(zhì)干細(xì)胞分化的骨生成細(xì)胞具有免疫豁免(immunoprivileged)和免疫調(diào)節(jié)性能。然而，同 種異體移植中的組織排斥機(jī)制與風(fēng)濕性疾病中炎癥的機(jī)制顯然不同。這也體現(xiàn)在目前使用 不同類型的藥物來(lái)治療這些病癥中。因此，Liu等，2006并未公開(kāi)骨形成細(xì)胞的任何抗炎作 用，也未公開(kāi)骨形成細(xì)胞抑制風(fēng)濕性疾病之炎癥部分的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，骨形成細(xì)胞除了具有預(yù)期的骨再生作用以外，還表現(xiàn) 出強(qiáng)效的免疫抑制和特異性抗炎作用，因此對(duì)于治療對(duì)象中的炎性風(fēng)濕性疾病(IRD)特別 有用，更特別地用于治療對(duì)象中IRD的炎癥，即IRD的炎癥部分。因此，本發(fā)明的一些方面提供了用于治療IRD的分離的骨形成細(xì)胞，以及分離的 骨形成細(xì)胞在制備用于治療IRD之藥物中的用途。還公開(kāi)了用于治療IRD(之炎癥部分) 中炎癥的分離的骨形成細(xì)胞，以及分離的骨形成細(xì)胞在制備用于治療IRD (之炎癥部分)中 炎癥之藥物中的用途。本發(fā)明還涉及用于在有此治療需要的對(duì)象中預(yù)防和/或治療IRD的方法，其包括 向所述對(duì)象施用預(yù)防或治療有效量的分離的骨形成細(xì)胞。還公開(kāi)了用于在有此治療需要的 對(duì)象中預(yù)防和/或治療IRD(之炎癥部分)中炎癥的方法，其包括向所述對(duì)象施用預(yù)防和/ 或治療有效量的分離的骨形成細(xì)胞。同時(shí)，本發(fā)明還涉及用于治療IRD之包含分離的骨形 成細(xì)胞的藥物組合物。此外，還公開(kāi)了用于治療IRD(之炎癥部分)中炎癥的包含分離的骨 形成細(xì)胞的藥物組合物。
還描述了用于治療炎癥的分離的骨形成細(xì)胞，以及分離的骨形成細(xì)胞在制備用于 治療炎癥之藥物中的用途。還描述了用于在有此治療需要的對(duì)象中預(yù)防和/或治療炎癥的 方法，其包括向所述對(duì)象施用預(yù)防或治療有效量的分離的骨形成細(xì)胞。此外描述了用于治 療炎癥之包含分離的骨形成細(xì)胞的藥物組合物。本文所用的與細(xì)胞或細(xì)胞群有關(guān)的術(shù)語(yǔ)“分離的”意指這些細(xì)胞或細(xì)胞群不形成 動(dòng)物或人體的一部分，而是從其取出或分離而來(lái)的。所述骨形成細(xì)胞可以優(yōu)選地為哺乳動(dòng)物來(lái)源的，包括非人哺乳動(dòng)物來(lái)源，更優(yōu)選 地為人來(lái)源的。骨形成細(xì)胞通?？色@得自或源自對(duì)象(例如優(yōu)選人或非人哺乳動(dòng)物對(duì)象) 的生物樣品(即，從對(duì)象取出并包含其細(xì)胞的樣品)。對(duì)象優(yōu)選地包括溫血?jiǎng)游铮鼉?yōu)選地是哺乳動(dòng)物對(duì)象(包括人和非人哺乳動(dòng)物對(duì) 象)，更優(yōu)選地是靈長(zhǎng)類對(duì)象(包括人和非人靈長(zhǎng)類對(duì)象)，更加優(yōu)選地是人對(duì)象。所述骨 形成細(xì)胞因而可以來(lái)自這些來(lái)源。所述骨形成細(xì)胞可優(yōu)選地用于自體施用(即，施用給獲得所述細(xì)胞或所述細(xì)胞來(lái) 源的同一對(duì)象)或同種異體施用(即，施用給與獲得所述細(xì)胞或所述細(xì)胞來(lái)源的對(duì)象屬于 同一物種但非該對(duì)象本身的對(duì)象)。還可以異種施用所述骨形成細(xì)胞(即，將從一個(gè)物種之 對(duì)象獲得或來(lái)源的細(xì)胞施用給另一物種的對(duì)象)。優(yōu)選地，本文中的人骨形成細(xì)胞自體施用或同種異體施用給患有IRD的人對(duì)象。 自體施用可以是特別優(yōu)選的。本文所用的術(shù)語(yǔ)“骨形成細(xì)胞”泛指能有助于形成骨材料和/或骨基質(zhì)的細(xì)胞或 者能夠發(fā)育成有助于形成骨材料和/或骨基質(zhì)之細(xì)胞的細(xì)胞，特別是指具有以下特征的分 離的細(xì)胞或細(xì)胞群a)能夠進(jìn)行骨生成分化，或b)定向于骨生成分化，或c)至少部分地已 經(jīng)沿骨生成進(jìn)行分化，更優(yōu)選地是指符合b)或c)中任一項(xiàng)的分離的細(xì)胞或細(xì)胞群。不受 限制地，骨形成細(xì)胞特別地包括骨原細(xì)胞(osteoprogenitor)、成骨細(xì)胞(osteoblast)、骨 細(xì)胞以及本領(lǐng)域已知的其它骨生成譜系的細(xì)胞類型。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員一般理解本文中術(shù)語(yǔ)“骨形成細(xì)胞”的界限。然而，作為進(jìn) 一步指導(dǎo)并且不受限制地，本發(fā)明的骨形成細(xì)胞可表現(xiàn)出以下任一、多個(gè)或所有特征a)所述細(xì)胞包含堿性磷酸酶(ALP)的表達(dá)(更特別地是骨-肝-腎型ALP的表 達(dá))或骨鈣蛋白的表達(dá)，或二者均表達(dá)；b)任選地，所述細(xì)胞包含前膠原1型氨基端前肽(procollagen type lamino-terminal propeptide, PlNP)、骨粘連蛋白(osteonectin, ON)、骨橋蛋白 (osteopontin，0P)和骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)中任何一種或多種的表達(dá)；c)任選地，所述細(xì)胞包含間充質(zhì)標(biāo)記物⑶105、⑶73和⑶90中任何一種或多種的 表達(dá)；d)所述細(xì)胞顯示礦化外部環(huán)境或者合成含鈣細(xì)胞外基質(zhì)的能力(例如，當(dāng)暴露 于骨生成介質(zhì)時(shí)；參見(jiàn)Jaiswal等，1997. J Cell Biochem 64:295-312)。鈣在細(xì)胞內(nèi) 的積累以及在基質(zhì)蛋白質(zhì)中的沉積可通過(guò)常規(guī)方法來(lái)測(cè)量，例如通過(guò)在45Ca2+中培養(yǎng)、清 洗以及再次培養(yǎng)，然后測(cè)定細(xì)胞內(nèi)存在的或細(xì)胞外基質(zhì)中沉積的任何放射性(美國(guó)專利 No. 5，972，703)來(lái)測(cè)量，或者通過(guò)使用Ca2+試劑盒(Sigma試劑盒#587)測(cè)定針對(duì)礦化的培 養(yǎng)底物來(lái)測(cè)量，或者如實(shí)施例中所述地來(lái)測(cè)量；
e)所述細(xì)胞基本上不分化成脂肪細(xì)胞譜系(例如脂肪細(xì)胞)或軟骨細(xì)胞譜系(例 如軟骨細(xì)胞)中的任一細(xì)胞，并且優(yōu)選地不分化成上述兩類細(xì)胞。可使用本領(lǐng)域成熟的標(biāo) 準(zhǔn)分化誘導(dǎo)條件(例如參見(jiàn)Pittenger等，1999. Science 284 143-7)和測(cè)定方法(例如， 經(jīng)誘導(dǎo)后，脂肪細(xì)胞通常用油紅0染色以顯示脂質(zhì)累積；軟骨細(xì)胞通常用愛(ài)茜藍(lán)(alcian blue)和番紅0染色)來(lái)測(cè)試不向所述細(xì)胞譜系分化?；旧先狈ο蛑旧珊?或軟骨 生成分化的傾向可通常意味著，當(dāng)應(yīng)用各測(cè)試時(shí)，少于50%、或少于30%、或少于5%、或少 于的測(cè)試細(xì)胞顯示脂肪生成或軟骨生成分化的跡象。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述骨形成細(xì)胞可表現(xiàn)出上述a)、d)和e)中的所有特征。當(dāng)細(xì)胞中某特定組分(例如標(biāo)記物或酶)為陽(yáng)性時(shí)，這意味著本領(lǐng)域技術(shù)人員將 會(huì)推斷出獨(dú)特信號(hào)的存在或證據(jù)，例如與合適的對(duì)照相比，當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏y(cè)量時(shí)，可通過(guò)抗 體檢測(cè)或通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)該組分。當(dāng)所述方法允許對(duì)組分進(jìn)行定量評(píng)估 時(shí)，陽(yáng)性細(xì)胞一般可產(chǎn)生與對(duì)照顯著不同的信號(hào)，例如且不受限制地，至少比對(duì)照產(chǎn)生的該 信號(hào)高出1. 5倍，例如高出至少2倍、至少4倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40 倍、至少50倍，甚至更高。可使用本領(lǐng)域已知的任何合適的免疫學(xué)技術(shù)(例如免疫細(xì)胞化學(xué)或親和吸附、 Western印跡分析、FACS、ELISA等)、或通過(guò)任何合適的酶活性生化測(cè)定(例如，針對(duì)ALP的 測(cè)定)、或通過(guò)測(cè)量標(biāo)記物mRNA之量的任何合適的技術(shù)(例如，Northern印跡、半定量或定 量RT-PCR等)來(lái)檢測(cè)上述細(xì)胞特異性標(biāo)記物的表達(dá)。本公開(kāi)內(nèi)容中列出的標(biāo)記物序列數(shù) 據(jù)是已知的并可通過(guò)公共數(shù)據(jù)庫(kù)(如GenBank(htttp://www. ncbi. nlm. nih. gov/))獲得。用于本發(fā)明的分離的骨形成細(xì)胞或細(xì)胞群可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的方式 獲得或來(lái)源。在一個(gè)實(shí)施方案中，骨形成細(xì)胞或細(xì)胞群可通過(guò)使用已知的分化實(shí)驗(yàn)方案從 分化程度相對(duì)較低的成人祖細(xì)胞或干細(xì)胞(例如從間充質(zhì)干細(xì)胞)分化而得到。不受限 制地，在WO 2007/093431中公開(kāi)了一種獲得形成骨之成骨細(xì)胞的合適方法，其包括在血漿 和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF-2)存在下培養(yǎng)分離的骨髓干細(xì)胞(BMSC)或間充質(zhì)干細(xì) 胞(MSC)。在另一個(gè)實(shí)例中，如 Pittenger 等，1999 (Science 284 143-7)和 Jaiswal 等， 1997(同上)所述，骨生成細(xì)胞譜系可通過(guò)在骨生成介質(zhì)中分化MSC而獲得。在另一實(shí)施方 案中，骨形成細(xì)胞或細(xì)胞群可以從含有該細(xì)胞的生物樣品中分離出來(lái)以及任選地進(jìn)行培養(yǎng) 和/或擴(kuò)增。例如，如Skjodt等，1985 (J Endocrinol 105 391-6)所述，成骨細(xì)胞可直接 從骨小梁分離并培養(yǎng)。本文所用的術(shù)語(yǔ)“炎性風(fēng)濕性疾病”或“IRD”一般地包括所有涉及炎性組分和/或 自身免疫組分、特別是涉及至少一種炎性組分的風(fēng)濕性疾病。例如且不受限制地，IRD特別 地包括骨關(guān)節(jié)炎(OA)、銀屑病性關(guān)節(jié)病、痛風(fēng)、假性通風(fēng)以及多種起因的關(guān)節(jié)炎(包括類風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、腸病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎和賴特爾綜合征(Reiter syndrome)、骨壞 死、幼年型少關(guān)節(jié)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(pauciarticular juvenile rheumatoidarthritis)、斯 蒂爾病(Still disease)、貝赫切特病(Behcet disease)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膿毒性關(guān)節(jié)炎 和脊柱關(guān)節(jié)病(例如強(qiáng)直性脊柱炎、腸病性脊柱炎和未區(qū)分的脊柱關(guān)節(jié)病等)等)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容可涉及選自以下的任一種IRD:骨關(guān)節(jié) 炎(0A)、銀屑病性關(guān)節(jié)病、痛風(fēng)、假性痛風(fēng)以及各種起因的關(guān)節(jié)炎(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 (RA)、腸病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎和賴特爾綜合征、骨壞死、幼年型少關(guān)節(jié)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病、貝赫切特病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膿毒性關(guān)節(jié)炎和脊柱關(guān)節(jié)病(例如強(qiáng)直性脊 柱炎、腸病性脊柱炎和未區(qū)分的脊柱關(guān)節(jié)病等)等)。在另一實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容可涉及除了骨關(guān)節(jié)炎(OA)、骨壞死和類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎(RA)以外的任一種IRD。在又一實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容可涉及選自以下的任一種IRD:銀屑病性關(guān)節(jié)病、 痛風(fēng)、假性痛風(fēng)以及各種起因的關(guān)節(jié)炎(包括腸病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎和賴特爾綜合 征、幼年型少關(guān)節(jié)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病、貝赫切特病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膿毒性關(guān)節(jié)炎 和脊柱關(guān)節(jié)病(例如強(qiáng)直性脊柱炎、腸病性脊柱炎和未區(qū)分的脊柱關(guān)節(jié)病等)等)。本發(fā)明的骨形成細(xì)胞可特別地用于治療IRD疾病(或治療所述疾病的炎癥或炎癥 部分)，其包括(具有或不具有自身免疫部分的)炎癥以及骨損傷例如糜爛或軟骨下?lián)p傷。 在該實(shí)施方案中，所述骨形成細(xì)胞可協(xié)同改善所述兩種病變，從而可實(shí)現(xiàn)更顯著的治療改
口 ο在另一實(shí)施方案中，所述骨形成細(xì)胞可用于治療IRD疾病(或治療所述疾病的炎 癥或炎癥部分)，其中所述疾病包括炎癥但不包括骨損傷。例如，可以治療存在炎癥部分但 隨后無(wú)骨損傷之患者中的IRD疾病。骨形成細(xì)胞在此類疾病中的應(yīng)用先前并未指明，這是 因?yàn)樵谟嘘P(guān)骨形成細(xì)胞之抗炎作用的本公開(kāi)內(nèi)容之前，無(wú)法預(yù)期施用骨形成細(xì)胞對(duì)此類疾 病的任何益處。預(yù)防和/或治療IRD (即IRD之炎癥部分)的炎癥可特別地包括抑制、減少或降低 所述IRD中的全身性和/或局部炎癥(即，抑制、減少或降低炎癥(炎癥部分))的水平或 程度。所述炎癥的水平或程度可通過(guò)已知的方式進(jìn)行適當(dāng)評(píng)價(jià)，例如但不限于，通過(guò)測(cè)量炎 癥的癥狀(例如發(fā)熱、組織腫脹、疼痛、功能損失等)和/或通過(guò)測(cè)量炎癥的細(xì)胞和/或分 子標(biāo)記物(例如，IL-I α、IL-I β、IL-2、IL_6、IL_8和TNF α )(例如所述標(biāo)記物的局部和/ 或全身性水平)來(lái)實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明中所用的分離的骨形成細(xì)胞可被適當(dāng)?shù)嘏渲瞥伤幬锝M合物并作為藥物組 合物施用。除了本文所述的骨形成細(xì)胞以外，這樣的藥物組合物還可包含可藥用的賦形 劑、載體、緩沖劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其它材料。這些材 料應(yīng)當(dāng)是無(wú)毒性的，并且不應(yīng)干擾細(xì)胞活性。載體或其它材料的精確性質(zhì)將取決于施 用途徑。例如，所述組合物可采用可胃腸外施用的水性溶液形式，同時(shí)無(wú)熱原并具有合 適的ΡΗ、等滲性和穩(wěn)定性。對(duì)于藥物制備的一般原則來(lái)說(shuō)，讀者可參考Cell Therapy Stem CellTransplantation, Gene Therapy and Cellular Immunotherapy, G. Morstyn& W. Sheridan 編，Cambridge University Press,1996 ；以及 HematopoieticStem Cell Therapy, Ε.D. Ball, J. Lister & P. Law，Churchill Livingstone，2000。這樣的藥物組合物可包含確保其中細(xì)胞存活的其它組分。例如，所述組合物可包 含合適的緩沖系統(tǒng)(例如磷酸鹽或碳酸鹽緩沖系統(tǒng))以獲得期望的PH(更通常為接近中性 PH)，并且可包含足夠的鹽以確保細(xì)胞的等滲條件從而防止?jié)B透壓應(yīng)激。例如，如本領(lǐng)域中 所知，為這些目的的合適溶液可以是磷酸鹽緩沖液(PBS)、氯化鈉溶液、林格氏注射液或乳 酸鹽林格氏注射液。此外，所述組合物還可包含載體蛋白質(zhì)例如白蛋白(其可增強(qiáng)細(xì)胞的 存活力)。
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所述藥物組合物可包含用于修復(fù)骨創(chuàng)傷和缺陷的其它組分。例如，這樣的組分 可包括但不限于羥基磷灰石/磷酸三鈣顆粒(HA/TCP)、明膠、聚乳酸、聚乳酸乙醇酸、透 明質(zhì)酸、殼聚糖、多聚L-賴氨酸以及膠原。例如，所述骨形成細(xì)胞可與脫礦物質(zhì)的骨基質(zhì) (demineralised bone matrix, DBM)或其它基質(zhì)聯(lián)用從而使該復(fù)合材料具有骨生成性質(zhì) (在其中正確地形成骨)以及誘導(dǎo)骨生成的性質(zhì)。使用自體骨髓細(xì)胞及同種異體DBM的類 似方法也獲得了好的結(jié)果(Connolly 等，1995. Clin Orthop 313:8-18)。所述藥物組合物還可包含補(bǔ)充性生物活性因子(例如骨形態(tài)發(fā)生蛋白，如BMP-2 或BMP-4、BMP-7)或任何其它生長(zhǎng)因子)或與其共施用。其它可能的伴隨組分包括適用于 輔助骨再生的鈣或磷酸鹽的無(wú)機(jī)來(lái)源(W000/07639)。需要時(shí)，可利用載體基質(zhì)或材料來(lái) 施用細(xì)胞制備物以提供改善的組織再生。例如，所述材料可以是顆粒狀陶瓷或生物聚合物 (如明膠、膠原、骨粘連蛋白、纖維蛋白原或骨鈣蛋白)。多孔基質(zhì)可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行合成 (例如 Mikos 等，Biomaterials 14 :323，1993 ；Mikos 等，Polymer 35 :1068，1994 ；Cook 等， J. Biomed. Mater. Res. 35 :513，1997)。所述藥物組合物還可包括可用于IRD的本領(lǐng)域任何已知療法或者與其共施用，所 述療法例如但不限于針對(duì)病因的抗風(fēng)濕藥(DMARD)、糖皮質(zhì)激素、非甾體抗炎藥(NSAID)或 止痛藥。因此，本發(fā)明還提供了包含骨形成細(xì)胞以及選自DMARD、糖皮質(zhì)激素、NSAID和止痛 藥的藥劑的藥物組合物，以同時(shí)、依次或分開(kāi)用于治療IRD。所述骨形成細(xì)胞以“預(yù)防有效量”(即，研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床工作者找 出的抑制或延緩對(duì)象發(fā)病的量)或以“治療有效量”(即，研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床 工作者找出的引起對(duì)象中生物學(xué)或醫(yī)學(xué)應(yīng)答的量，其可包括緩解所治療之疾病或病癥的癥 狀等)。所用骨形成細(xì)胞(任選地與一種或多種其它活性劑聯(lián)用)的劑量或量取決于個(gè)體 病例，并且有針對(duì)性地根據(jù)個(gè)體情況以實(shí)現(xiàn)最佳效果。因此，其取決于所治療疾病的性質(zhì)和 嚴(yán)重程度，還取決于性別、年齡、體重、健康狀況、飲食、施用方式和時(shí)間以及待治療對(duì)象的 個(gè)體應(yīng)答，取決于施用途徑、效力、穩(wěn)定性和作用時(shí)間，取決于所述治療為急性或慢性或預(yù) 防性，或者取決于除了本發(fā)明的骨形成細(xì)胞以外是否還施用其它活性化合物。例如且不受限制地，可向?qū)ο?優(yōu)選非人哺乳動(dòng)物或人對(duì)象)局部和/或全身性 施用約1 X IO3至約1 X IO9劑量的骨形成細(xì)胞、或約1 X IO4至約1 X IO8劑量的骨形成細(xì)胞、 或約IX IO5至約IXlO7劑量的骨形成細(xì)胞、或約IX IO6至約IXlO8劑量的骨形成細(xì)胞。 這樣的施用可以為一次或重復(fù)的，或者可通過(guò)體積單位來(lái)施用。例如且不受限制地，重復(fù)施 用的頻率可以為每天一次或兩次；每周一次、二次或多次；每月一次、二次或多次。本發(fā)明還包括制備所述藥物組合物的方法，其中所述藥物組合物意在用于治療 IRD，其通過(guò)將本文公開(kāi)的骨形成細(xì)胞與一種或多種另外組分的混合來(lái)實(shí)現(xiàn)。所述骨形成細(xì)胞或包含其的藥物制劑可通過(guò)使它們移植或遷移至目標(biāo)組織位點(diǎn) 并重建或再生功能缺陷區(qū)域的方式施用。所述組合物的施用將取決于待修復(fù)的骨骼肌位 點(diǎn)。例如，在關(guān)節(jié)疾病的情形中，可通過(guò)直接注射或移植進(jìn)關(guān)節(jié)腔來(lái)施用。在另一些情形中， 所述骨形成細(xì)胞或包含其的藥物制劑可全身性施用，從而它們可在全身發(fā)揮抗炎作用或者 它們可遷移至患病區(qū)域。因此，在一般性實(shí)例中，所述施用可以是全身性、局部、關(guān)節(jié)內(nèi)或關(guān) 節(jié)周圍施用。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，上述藥用細(xì)胞制劑可采用液體組合物的形式施用。
在另一實(shí)施方案中，所述骨形成細(xì)胞或細(xì)胞群可移至和/或培養(yǎng)在合適的基底上 以用于移植。其上可施加和培養(yǎng)細(xì)胞的基底可以是金屬(例如鈦、鈷/鉻合金或不銹鋼)、 生物活性表面(例如磷酸鈣)、聚合物表面(例如聚乙烯)等。盡管并非優(yōu)選地，還可使用 硅質(zhì)材料例如玻璃陶瓷作為基底。最優(yōu)選的是金屬(例如鈦)和磷酸鈣，然而磷酸鈣并非 基底的必要組分。所述基底可以是多孔的或無(wú)孔的。例如，如有必要，可將已在培養(yǎng)皿中增殖或分化的細(xì)胞移至三維固體支持物上，從 而使它們通過(guò)在本發(fā)明液體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中孵育固體支持物來(lái)擴(kuò)增和/或繼續(xù)分化過(guò)程。細(xì) 胞可被移至三維固體支持物上，例如通過(guò)用含有所述細(xì)胞的液體懸液注入支持物來(lái)實(shí)現(xiàn)。 可將如上獲得的經(jīng)注入支持物移植進(jìn)人對(duì)象中。還可通過(guò)將其浸入液體培養(yǎng)基中再次培養(yǎng) 該經(jīng)注入的支持物。所述三維固體支持物需要是生物相容性的，從而能夠?qū)⑵湟浦策M(jìn)入體中。它可 采用任何合適的形狀，如圓柱、球形、盤狀或任意形狀的一部分。就適于作為生物相容性 三維固體支持物的材料而言，特別要提及碳酸鈣，特別是霰石(尤其以珊瑚骨骼的形狀)、 基于氧化鋁的多孔陶瓷、基于氧化鋯的多孔陶瓷、基于磷酸三鈣的多孔陶瓷、和/或羥基 磷灰石、通過(guò)水熱交換使碳酸鈣轉(zhuǎn)化成羥基磷灰石而獲得的仿制珊瑚骨骼、或者其它磷灰 石_硅灰石玻璃陶瓷、生物活性玻璃陶瓷例如Bioglass(TM)玻璃。一般定義除非另有定義，本發(fā)明公開(kāi)的所有術(shù)語(yǔ)(包括技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ))均具有本發(fā)明所 述領(lǐng)域之技術(shù)人員常規(guī)理解的含義。本文使用的無(wú)數(shù)量詞修飾的形式包括單數(shù)和復(fù)數(shù)的所指對(duì)象，除非文中另有指 明。例如，“細(xì)胞”是指一種(個(gè))或多于一種(個(gè))細(xì)胞。本文使用的術(shù)語(yǔ)“包含”和“包括”是“含有”或“涵蓋”等的同義詞，是開(kāi)放式的， 不排除未記載的其它成員、要素或方法步驟。通過(guò)端點(diǎn)記載的數(shù)值范圍包括納入該范圍內(nèi)的所有數(shù)值以及所記載的端點(diǎn)。當(dāng)涉及測(cè)量值例如參數(shù)、數(shù)量、持續(xù)時(shí)間等時(shí)，本文使用的術(shù)語(yǔ)“約”意在包括 從該特定數(shù)值起的+/-10%或更少、優(yōu)選+/-5%或更少、更優(yōu)選+/-1%或更少、尤其優(yōu)選 +/-0. 或更少的差異，其中這些差異適于進(jìn)行本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，“約”所修飾 的數(shù)值本身是具體、優(yōu)選地公開(kāi)的。本說(shuō)明書(shū)中引用的所有文獻(xiàn)均通過(guò)引用全部并入本文中。特別的，本文具體涉及 的所有文獻(xiàn)的教導(dǎo)內(nèi)容均通過(guò)引用并入本文。


圖1顯示骨形成細(xì)胞中間充質(zhì)和骨標(biāo)記物的表達(dá)。圖2顯示骨形成細(xì)胞的礦化㈧和ALP⑶染色。圖3顯示用CARRA治療的動(dòng)物(淺灰色)、用CARRA+DEX治療的動(dòng)物(深灰色)、 用CARRA+0B治療的動(dòng)物(黑色)以及用CARRA+0B+DEX治療的動(dòng)物(虛線)之踝部直徑之 間的比較。直徑表示為與基線相比的百分比增加。圖4顯示用CARRA治療的動(dòng)物(菱形)、用CARRA+DEX治療的動(dòng)物(正方形)、用 CARRA+0B治療的動(dòng)物(三角形)之爪直徑之間的比較。直徑表示為與基線相比的百分比增加。圖5顯示用ADJ治療的動(dòng)物(菱形)、用ADJ+DEX治療的動(dòng)物(正方形)以及用 ADJ+0B治療的動(dòng)物(三角形)之爪直徑之間的比較。直徑表示為與基線相比的百分比增 加。附圖中使用的縮略語(yǔ)如下CARRA 角叉藻聚糖0. 7% ；ADJ 完全弗氏佐劑75 μ g ； DEX 地塞米松lmg/kg ；OB 成骨細(xì)胞1 X IO具體實(shí)施例方式實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)操作以下，所描述的操作得到骨形成細(xì)胞，其(A)來(lái)自基本如W02007/093431所述的骨 髓干細(xì)胞(BMSC)，或(B)通過(guò)在骨生成培養(yǎng)基中進(jìn)一步分化(A)的細(xì)胞而得到，或(C)通過(guò) 擴(kuò)增來(lái)自骨小梁的成骨細(xì)胞而得到。A.從BMSC獲得成骨細(xì)胞從患骨病患者的髂嵴獲取20 60ml經(jīng)肝素化的骨髓(BM)。將BM與磷酸鹽緩沖 液(PBS)混合(體積比2 1)，并平鋪在密度梯度Ficoll溶液上。離心后，從交界處收集 單核細(xì)胞并用PBS清洗兩次。平行地，將移至干燥試管的160ml血液離心后，從患者或健康 供者獲取血清。用補(bǔ)充有20%同種異體血漿和lOng/ml FGF2 (或者使用本領(lǐng)域已知的誘導(dǎo) 成骨細(xì)胞表型的另一種生長(zhǎng)因子，例如BMP)的αΜΕΜ培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸。在175cm2培養(yǎng) 瓶中用IXlO7個(gè)細(xì)胞鋪板，并維持在37°C、含5%0)2的濕潤(rùn)氣氛中。使細(xì)胞附著4天，然 后第一次更換培養(yǎng)基。在第7天和第11天進(jìn)行另兩次部分更換培養(yǎng)基(更換一半體積)。 在第14天，使用胰蛋白酶-EDTA溶液于37°C下剝離細(xì)胞1 5分鐘。對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后以 IXlO6個(gè)細(xì)胞/175cm2再培養(yǎng)一周。B.骨 丨旬充J1!細(xì)朐,在骨牛成培養(yǎng)基Φ分化通過(guò)與胰蛋白酶-EDTA孵育來(lái)回收標(biāo)準(zhǔn)MSC擴(kuò)增培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并以 60 120，000個(gè)細(xì)胞/孔鋪板于6孔板的擴(kuò)增培養(yǎng)基中(12500個(gè)細(xì)胞/cm2)。第二天，用 2. 5ml骨生成培養(yǎng)基替換所述培養(yǎng)基。將細(xì)胞培養(yǎng)2、3或4周。每3 4天更換培養(yǎng)基。培養(yǎng)基
地塞米松稀釋液
Dexl (5. I(T4M) :2μ 1 地·■米松母液(5. I(T2M)+198
Dex2 (I(T6M) 2 μ 1 Dexl (5. I(T4M) +998 μ 1 α -MEM
骨生成培養(yǎng)基(40ml)
體積終濃度
αΜΕΜ 31ml/
FCS 6ml15%
PenStrepGlu (100X)400 μ 1IX
地塞米松(Dex2)400 μ 1ICT8M
抗壞血酸200 μ 150 μ g/ml
β-甘油磷酸鹽2mlIOmM
C.小梁成骨細(xì)胞擴(kuò)增從人骨標(biāo)本仔細(xì)地去除軟結(jié)締組織和骨皮質(zhì)，將余下的骨小梁切碎成為小片段 (Imm2)。用PBS充分清洗所述骨片段以取出所附著的骨髓細(xì)胞，并將所述細(xì)胞接種于25cm2 組織培養(yǎng)瓶中補(bǔ)充有自體血清、添加或不添加生長(zhǎng)因子(如上)的培養(yǎng)基中。每周更換兩 次培養(yǎng)基。4周后，使用胰蛋白酶-EDTA溶液剝離細(xì)胞，計(jì)數(shù)并最后以5000個(gè)細(xì)胞/cm2的 密度重新鋪板。流式細(xì)胞術(shù)利用流式細(xì)胞術(shù)來(lái)分析細(xì)胞的免疫學(xué)_生物學(xué)細(xì)胞表面標(biāo)記物。用下列經(jīng)標(biāo)記的 單克隆抗體孵育骨形成細(xì)胞15分鐘HLA-I、HLA-DR、CD80、CD86、CTLA-4、CD40L和CD28，然 后用PBS清洗，繼而離心并用0. 3mlPBS重懸。在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和透化處理后，用特異性抗體免疫檢測(cè)0CN，利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì) 染色進(jìn)行分析。礦化測(cè)定通過(guò)向細(xì)胞添加骨生成培養(yǎng)基來(lái)評(píng)價(jià)礦化能力的誘導(dǎo)。在補(bǔ)充有0. 1 μ M地塞米 松、0. 05mM抗壞血酸和3mM甘油磷酸鹽的5%自體血漿存在下，將 6000個(gè)骨形成細(xì)胞(如 上)/cm2接種于6孔板中。培養(yǎng)2、3或4周后，用3. 7%福爾馬林/PBS固定細(xì)胞并用茜素 紅染色。ALP 染餼對(duì)細(xì)胞染色用于ALP檢測(cè)。用PBS清洗骨形成細(xì)胞(如上)兩次，然后在室溫下 用60%檸檬酸緩沖丙酮固定30秒鐘，然后用蒸餾水再漂洗45秒。然后，在室溫避光條件 下用Fast Blue RR/Naphtol AS-MX磷酸鹽溶液清洗細(xì)胞30分鐘。用蒸餾水清洗細(xì)胞2分 鐘，隨后用Mayer’ s蘇木精溶液染色10分鐘。最后，用蒸餾水清洗細(xì)胞3分鐘。增殖測(cè)定 在存在或不存在PHA (一種T細(xì)胞有絲分裂活化劑)時(shí)，將來(lái)自個(gè)體A (外周血單核 細(xì)胞，PBMCa)的200，000個(gè)人T細(xì)胞/ml與來(lái)自個(gè)體B的經(jīng)輻射或⑶3缺失的PMBC (APCb) 以及來(lái)自第三個(gè)體的人骨形成細(xì)胞以總體積200 μ 1接種于96孔微量滴定板中，孵育10 天。以20，000、100，000和200，000/1111接種人骨形成細(xì)胞。在存在或不存在PHA下，當(dāng) PBMCa和APCb共孵育時(shí)發(fā)生混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，其中PBMCa細(xì)胞被APCb上的表面抗原激 活。將所述培養(yǎng)物與1 μ Ci/ml 3H-胸苷孵育18小時(shí)以測(cè)量T細(xì)胞增殖。用冰冷的PBS清 洗細(xì)胞兩次，然后用冰冷的三氯乙酸(TCA)清洗細(xì)胞兩次。最后，用含有0. IN NaOH和0. 1% Triton-XlOO的溶液裂解細(xì)胞。收集上清液并與閃爍液混合，以利用β計(jì)數(shù)器進(jìn)行分析。結(jié)果骨重建性能3周后利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞標(biāo)記物(骨和間充質(zhì)標(biāo)記物)或膜標(biāo)記物水平進(jìn)行 評(píng)估(圖1)。骨標(biāo)記物(ALP、0CN)和間充質(zhì)標(biāo)記物(⑶105、73、90)高度表達(dá)，而造血標(biāo)記 物(CD45)為陰性。利用ALP產(chǎn)生(ALP染色)和鈣沉積(礦化)評(píng)價(jià)與骨生物學(xué)功能的關(guān)聯(lián)在第21 天，ALP在大多數(shù)細(xì)胞(如果不是所有的話)中表達(dá)，觀察到重要的礦物質(zhì)沉積(鏡檢中占 總區(qū)域的65%以上)(圖2)。
免疫調(diào)節(jié)件能表1和2所示的結(jié)果表明，APC被PBMC識(shí)別為外來(lái)細(xì)胞，從而PBMC進(jìn)行增殖。當(dāng) PBMCa和APCb在自體BM來(lái)源之成骨細(xì)胞(來(lái)自個(gè)體B，BMOBb)存在下混合，該混合的淋巴 細(xì)胞反應(yīng)被抑制40 50%。在PHA (—種強(qiáng)的T細(xì)胞增殖刺激物)(10 μ g/ml)存在下也觀察到了同樣的作用 (表2)。成骨細(xì)胞的免疫抑制作用對(duì)于經(jīng)刺激的T細(xì)胞來(lái)說(shuō)更為重要(55 65% )。令人感興趣的是，當(dāng)在同種異體BM來(lái)源之成骨細(xì)胞(來(lái)自個(gè)體C，BMOBc)存在下 進(jìn)行混合，混合的淋巴細(xì)胞反應(yīng)也被顯著地抑制(在標(biāo)準(zhǔn)條件下為30 40% (表1)，在PHA 刺激條件下為60 65% )。來(lái)自個(gè)體C的BM來(lái)源之成骨細(xì)胞(BMOBc)被接種于96孔微 量滴定板上，并與PBMCa和APCb共孵育。所述培養(yǎng)物與3H-胸苷孵育18小時(shí)以測(cè)量T細(xì) 胞增殖情況。這些結(jié)果表明，所述抑制作用不具有針對(duì)HLA亞型的特異性。表 1 表2. BM來(lái)源的成骨細(xì)胞(BMOB)對(duì)PHA活化的T細(xì)胞增殖的抑制作用(數(shù)值表示 為摻入[3H]胸苷的cpm) 結(jié)論骨形成細(xì)胞例如骨原細(xì)胞、前成骨細(xì)胞或成骨細(xì)胞可用于治療炎性風(fēng)濕性疾病， 因?yàn)樗鼈儽憩F(xiàn)出骨重建和抗炎的性能。這些細(xì)胞的特征在于高水平表達(dá)與ALP酶活性和礦 化能力相關(guān)的間充質(zhì)和骨表面標(biāo)記物，表明其骨生物學(xué)模式。這些細(xì)胞還能在自體和同種 異體的基礎(chǔ)上下調(diào)經(jīng)刺激T細(xì)胞的增殖應(yīng)答。這表明，自體或同種異體骨髓來(lái)源的骨形成 細(xì)胞產(chǎn)物對(duì)于炎性風(fēng)濕性疾病的治療特別有用。實(shí)施例2 體內(nèi)炎癥模型(IRD)角叉藻聚糖誘導(dǎo)的踝/爪炎癥模型(1)通過(guò)向8周齡的SWISS小鼠后爪注射含1 %角叉藻聚糖(CARRA，Sigma,Switzerland)的PBS溶液來(lái)誘導(dǎo)炎癥；每只動(dòng)物的每一后爪接受單次注射(表3)。經(jīng)角叉 藻聚糖注射的動(dòng)物在注射后立即接受PBS，或濃度為lmg/kg的地塞米松溶液(DeX;Sigma Switzerland)，或1 X IO6個(gè)人骨形成細(xì)胞(OB)(如實(shí)施例IA中所述，其來(lái)自骨髓間充質(zhì)基 質(zhì)細(xì)胞)，或DEX與OB的組合。表3:實(shí)驗(yàn)步驟 用異氟烷鎮(zhèn)靜后，在TO以及在Tl、T4和T24注射之前，分別在施用CARRA之前以 及在注射后lh、4h、6h和24h，用數(shù)碼卡尺測(cè)量踝和爪的周長(zhǎng)。角叉藻聚糖誘導(dǎo)的踝/爪炎癥模型(2)通過(guò)向8周齡的SWISS小鼠后爪注射含λ角叉藻聚糖(CARRA，Sigma， Switzerland)的PBS溶液來(lái)誘導(dǎo)炎癥；每只動(dòng)物的每一后爪接受單次注射(表4)。經(jīng)角叉 藻聚糖注射的動(dòng)物在注射后立即接受PBS，或濃度為lmg/kg的地塞米松溶液(DEX ；Sigma Switzerland)，或1 X IO6個(gè)人骨形成細(xì)胞(OB)(如實(shí)施例IA中所述，其來(lái)自骨髓間充質(zhì)基 質(zhì)細(xì)胞)。表4:實(shí)驗(yàn)步驟 用異氟烷鎮(zhèn)靜后，在TO以及在Tl、T4、T6和Τ24注射之前，分別在施用CARRA之前 以及在注射后lh、4h、6h和24h，用數(shù)碼卡尺測(cè)量踝和爪的周長(zhǎng)。佐劑誘導(dǎo)的踝/爪炎癥模型通過(guò)向8周齡的SWISS小鼠后爪注射含0. 5%完全弗氏佐劑的PBS溶液來(lái)誘導(dǎo)炎 癥；每只動(dòng)物的每一后爪接受單次注射(表5)。經(jīng)佐劑注射的動(dòng)物在注射后立即接受PBS， 或濃度為lmg/kg的地塞米松溶液(DEX)，或1 X IO6個(gè)人骨形成細(xì)胞(OB)(如實(shí)施例IA所 述，其來(lái)自骨髓間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞)。
表5:實(shí)驗(yàn)步驟 用異氟烷鎮(zhèn)靜后，在TO以及在T1、T4、T6和Τ24注射之前，分別在施用ADJ之前以 及在注射后lh、4h、6h和24h，用數(shù)碼卡尺測(cè)量踝和爪的周長(zhǎng)。結(jié)果對(duì)角叉藻聚糖誘導(dǎo)之炎癥的作用注射角叉藻聚糖誘導(dǎo)隨即的炎癥反應(yīng)，其可通過(guò)經(jīng)注射動(dòng)物的(爪或踝)直徑增 加來(lái)測(cè)量。與基線相比，直徑在1小時(shí)后增加約20%，4小時(shí)后增加約25%，24小時(shí)后增加 約 17% (圖 3)。在踝部，地塞米松(lmg/kg)誘導(dǎo)對(duì)炎癥以及由注射角叉藻聚糖的踝/爪腫脹的有 力抑制(圖3)。地塞米松對(duì)炎癥的抑制在Ih和4h時(shí)為100%，但在之后逐漸減弱，在24h 時(shí)完全消失。通過(guò)踝部比較，施用骨形成細(xì)胞誘導(dǎo)中等程度但是重要的炎癥抑制作用，其在Ih 和4h時(shí)分別降低30%和40%，然而這種抑制似乎維持時(shí)間較長(zhǎng)，在24h時(shí)維持抑制40%。令人感興趣的是，在角叉藻聚糖誘導(dǎo)的炎癥中，觀察到骨形成細(xì)胞和地塞米松聯(lián) 用具有(強(qiáng)的)協(xié)同作用(圖3)。在第1、4和24小時(shí)抗炎作用分別為50%、80%和75%。骨形成細(xì)胞在爪中的抗炎作用更強(qiáng)且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。地塞米松在第lh、6h和24h時(shí) 分別表現(xiàn)出100%、70%和38%的抑制作用，而骨形成細(xì)胞則分別為80%、90%和95% (圖 4)。這可能是由于注射細(xì)胞在爪中分布和擴(kuò)散更好所致。結(jié)果對(duì)佐劑誘導(dǎo)之炎癥的作用在佐劑誘導(dǎo)的炎癥中，盡管爪/踝炎癥更加嚴(yán)重(即，與基線相比，在第4h至6h 直徑增加了 40 50% )，骨形成細(xì)胞顯示出強(qiáng)的抗炎作用(峰值效應(yīng)為75 90% )，這與 地塞米松的抑制作用類似(圖5)，而前者維持了 24h。
權(quán)利要求
用于治療炎性風(fēng)濕性疾病(IRD)之炎癥部分的分離的骨形成細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所用的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述骨形成細(xì)胞a)能夠進(jìn)行骨生成 分化，或b)定向于骨生成分化，或c)至少部分地已經(jīng)沿骨生成進(jìn)行分化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)所用的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述骨形成細(xì)胞表現(xiàn) 出以下特征i)所述細(xì)胞包含堿性磷酸酶(ALP)和/或骨鈣蛋白(OCN)的表達(dá)，所述ALP更特別地 是骨-肝-腎型ALP; )所述細(xì)胞顯示出礦化外部環(huán)境或者合成含鈣細(xì)胞外基質(zhì)的能力；和iii)所述細(xì)胞基本上不分化成脂肪細(xì)胞譜系或軟骨細(xì)胞譜系中的任一細(xì)胞，并且優(yōu)選 地不分化成上述兩類細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所用的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述骨形成細(xì)胞為人 來(lái)源的，所述藥物用于向人對(duì)象自體或同種異體施用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所用的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述施用是全身性、局部的、關(guān)節(jié)內(nèi) 或關(guān)節(jié)周圍的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所用的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述IRD選自骨關(guān) 節(jié)炎(OA)、銀屑病性關(guān)節(jié)病、痛風(fēng)、假性痛風(fēng)以及各種起因的關(guān)節(jié)炎包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 (RA)、腸病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎和賴特爾綜合征、骨壞死、幼年型少關(guān)節(jié)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、斯蒂爾病、貝赫切特病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膿毒性關(guān)節(jié)炎和脊柱關(guān)節(jié)病包括強(qiáng)直性脊柱 炎、腸病性脊柱炎和未區(qū)分的脊柱關(guān)節(jié)病。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所用的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述IRD是除了骨關(guān) 節(jié)炎(OA)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和骨壞死以外的其它炎性風(fēng)濕性疾病。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述IRD包括炎癥和骨損傷。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的分離的骨形成細(xì)胞，其中所述IRD包括炎癥但不包 括骨損傷。
10.藥物組合物，其包含骨形成細(xì)胞以及選自針對(duì)病因的抗風(fēng)濕藥(DMARD)、糖皮質(zhì)激 素、非甾體抗炎藥(NSAID)和止痛藥，以同時(shí)、依次或分開(kāi)用于IRD之炎癥部分的治療。全文摘要
本發(fā)明涉及分離的骨形成細(xì)胞的新治療用途，特別是在治療炎性風(fēng)濕性疾病中的用途。
文檔編號(hào)C12N5/077GK101903031SQ200880122100
公開(kāi)日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2008年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月21日
發(fā)明者克里斯泰勒·比齊蒙古, 恩里科·巴斯蒂亞內(nèi)利, 澤維爾·佩塞斯, 辛迪·巴德 申請(qǐng)人:骨治療公司