專利名稱：北冬蟲夏草的工廠化栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食用菌生產(chǎn)領(lǐng)域，具體是指北冬蟲夏草的工廠化栽培方法。
背景技術(shù)：
北冬蟲夏草生長在中山區(qū)或淺山區(qū)，能夠在多種昆蟲的蛹上寄生，對于生長環(huán)境的要求較低，因此北冬蟲夏草也叫蛹蟲草或蛹草，目前野生的北冬蟲夏草主要分布在我國吉林、河北、陜西等省。其主要的化學(xué)成分藥理、藥效與野生冬蟲夏草極為相似，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究分析室、中國科學(xué)院沈陽分院理化測試中心等權(quán)威部門的檢測表明，北蟲草的一些主要營養(yǎng)及藥物成份如蟲草素、蟲草多糖、蛋白質(zhì)等還要高于冬蟲夏草。
隨著人們生活品質(zhì)的不斷提供，對北冬蟲夏草的需求也越來越
大，天然野生的北冬蟲夏草已經(jīng)難以滿足人們的需求，近幾年來，已人工成功栽培出北冬蟲夏草的成熟子實(shí)體，為解決北冬蟲夏草資源緊缺開辟了一條有效途徑。但在北冬蟲夏草的人工種植栽培中還存在種源退化、"白臉"現(xiàn)象，即在北蟲草栽培中特有的菌絲不轉(zhuǎn)色或菌絲徒長而導(dǎo)致不出草的現(xiàn)象，畸形子實(shí)體產(chǎn)生較多等因素而導(dǎo)致其產(chǎn)量較低，嚴(yán)重制約了北冬蟲夏草規(guī)?；耘嗯c推廣。此外人工栽培北冬蟲夏草，其"蟲"與"菌"的結(jié)合，首要條件是必須有大量的蟲源，雖然利用家蠶蛹、蓖麻蠶蛹、樗蠶蛹為寄主人工培養(yǎng)北冬蟲夏草獲得成功例子不少，然而成本太高，培養(yǎng)材料受季節(jié)限制，而且目前北蟲草在人工培育過程中，其生物轉(zhuǎn)化率低、菌種快退化、菌絲徒長不轉(zhuǎn)色以及雜菌污染等問題，使得北蟲草產(chǎn)量和質(zhì)量不穩(wěn)定，難以形成規(guī)?；a(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足，而提供一種成本較低、生產(chǎn)簡便、生物轉(zhuǎn)換率高、質(zhì)量穩(wěn)定的北冬蟲夏草的工廠化栽培方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型的技術(shù)方案是，包括以下步驟
(1) 、菌種制備制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和改良馬鈴薯葡萄
糖瓊脂培養(yǎng)料備用；
① 母種制備從野生北冬蟲夏草進(jìn)行組織分離獲得母種，母
種在按1:20 1: 25比例經(jīng)過轉(zhuǎn)管后，在18'C-23"C下培養(yǎng)13~15天,挑選長勢較好的備用；
② 原種制備將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基均勻裝入培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶的裝料量為20%-40%，用棉塞封口，在0.1Mpa壓力下滅菌lh，冷卻后，
在無菌條件下把備用的母種按1:1接入培養(yǎng)瓶中，靜置24h后，放在搖床上培養(yǎng)至出現(xiàn)大量菌球，放置冰箱內(nèi)4"C保存
(D栽培種制備:將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐中，對培養(yǎng)基和發(fā)酵罐管道分別在0.1Mpa壓力下滅菌lh，冷卻至20。C，在無菌條件下接入備用的原種，在20攝氏度下培養(yǎng)30-36h，至發(fā)酵罐內(nèi)出現(xiàn)大量菌球；
(2) 、配料裝瓶制作培養(yǎng)料，并將培養(yǎng)料均勻裝入培養(yǎng)中，培養(yǎng)
瓶的裝料量為20%-40%，用棉塞封口；(3) 、 滅菌把培養(yǎng)瓶放入滅菌鍋中，在0.11Mpa-0.15Mpa壓力下
滅菌1.5h-2h;
(4) 、接種培養(yǎng)料冷卻到2fC以下，在無菌條件下接種，每支
母種接1瓶原種，每300ml原種接10L栽培種；
(5) 、培養(yǎng)將接種好的北冬蟲夏草培養(yǎng)瓶移到發(fā)菌室靜置培養(yǎng)
24h后，置于搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，140-160r/min， 22-25°C，培養(yǎng)4-6天，然后再室內(nèi)培養(yǎng)40天-60天，其中發(fā)菌室溫度要求22'C 25。C，空氣相對濕度65% 70%，且保持遮光，并適時(shí)開門窗進(jìn)行通風(fēng)換氣，保持發(fā)菌室空氣新鮮；(6)、出草采收。
作為對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步完善和補(bǔ)充，本發(fā)明還可以有以下進(jìn)一步技術(shù)內(nèi)容，所述的步驟(1)的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的配比，每1000mh馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂18 20g，其制備方法為將去皮馬鈴薯切片置容器內(nèi)加水1000ml，煮沸15min，過濾，加入葡萄糖和瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml，加熱溶解；瓊脂溶解后，用分裝器裝入試管中，裝量為試管長的1/5，塞上棉塞，置滅菌鍋中，在O.lMpa壓力下滅菌0.5h，自然落磅；將試管趁熱排放在斜面板上冷卻。
本設(shè)置還可以是所述的步驟(1)的改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的配比，每1000ml:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1.5g，瓊脂18 20g，其制備方法為將去皮馬鈴薯切片置容器內(nèi)加水1000ml，煮沸15min，過濾，加入葡萄糖和瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml，加熱溶解；瓊脂溶解后，用分裝器裝入試管中，裝量為試管長的1/5，塞上棉塞，置滅菌鍋中，在0.1Mpa壓力下滅菌0.5h，自然落磅；將試管趁熱排放在斜面板上冷卻。
進(jìn)一步設(shè)置是所述步驟(2)的培養(yǎng)料的配比為玉米粉2%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、 KH2PO40.1%、 MgSO4 0.05%，其PH值為6.5。本設(shè)置還可以是所述步驟(2)的培養(yǎng)料的配比為-馬鈴薯20%玉米粉3%、葡萄糖2%、蛋白胨0.3%、 、 KH2P04 0.15%、MgS04 0.05%，其PH值為6.5。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用常見的人工代料進(jìn)行工廠化栽培，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)簡便，而且本發(fā)明獲得的北蟲草質(zhì)量穩(wěn)定性好，生物轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)。
下面通過具體實(shí)施方式
對本發(fā)明做進(jìn)一步介紹。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，只用于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定，該領(lǐng)域的工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。
本實(shí)施例包括以下步驟
(1)、菌種制備制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)料備用；
① 母種制備從野生北冬蟲夏草進(jìn)行組織分離獲得母種，母
種在按1:20 1: 25比例經(jīng)過轉(zhuǎn)管后，在18'C-23'C下培養(yǎng)13 15天,挑選長勢較好的備用；
② 原種制備將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或改良馬鈴薯葡萄
糖瓊脂培養(yǎng)基均勻裝入培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶的裝料量為
20%-40%，用棉塞封口，在0.1Mpa壓力下滅菌lh，冷卻后，在無菌條件下把備用的母種按1:1接入培養(yǎng)瓶中，靜置24h后，放在搖床上培養(yǎng)至出現(xiàn)大量菌球，放置冰箱內(nèi)4t:保存
③栽培種制備:將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐中，對培養(yǎng)基和發(fā)酵罐管道分別在0.1Mpa壓
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力下滅菌lh，冷卻至2(TC，在無菌條件下接入備用的原種，在20攝氏度下培養(yǎng)30-36h，至發(fā)酵罐內(nèi)出現(xiàn)大量菌球；
本實(shí)施方式可以釆用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基，其配比，每1000ml:
馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂18 20g，其制備方法為將去皮馬鈴薯切片置容器內(nèi)加水1000ml，煮沸15min，過濾，加入葡萄糖和瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml，加熱溶解；瓊脂溶解后，用分裝器裝入試管中，裝量為試管長的1/5，塞上棉塞，置滅菌鍋中，在0.1Mpa壓力下滅菌0.5h，自然落磅；將試管趁熱排放在斜面板上冷卻。
本發(fā)明還可以采用改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基，其成分配比，每1000ml:
馬鈴薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1.5g，瓊脂18 20g，
其制備方法為將去皮馬鈴薯切片置容器內(nèi)加水1000ml，煮沸15min，過濾，加入葡萄糖和瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml，加熱溶解；瓊脂溶解后，用分裝器裝入試管中，裝量為試管長的1/5，塞上棉塞，置滅菌鍋中，在0.1Mpa壓力下滅菌0.5h，自然落磅；將試管趁熱排放在斜面板上冷卻。
(2)、配料裝瓶將培養(yǎng)料均勻裝入培養(yǎng)中，培養(yǎng)瓶的裝料量為20%-40%，用棉塞封口；本實(shí)施方式所述的培養(yǎng)料的配比優(yōu)選為玉米粉2%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、 KH2P04 0.1%、MgSO4 0.05%，其PH值為6.5。本發(fā)明所述的培養(yǎng)料還可以采用其他配比為玉米粉2%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、KH2PO4 0.1%、 MgSO4 0.05%，其PH值為6.5。本設(shè)置還可以是所述步驟(2)的培養(yǎng)料的配比為馬鈴薯20%玉米粉3%、葡萄糖2%、蛋白胨0.3%、 、 KH2P04 0.15%、 MgS04 0.05%,其PH值為6.5。
(3)、滅菌把培養(yǎng)瓶放入滅菌鍋中，在0.11Mpa-0.15Mpa壓力 下滅菌1.5h-2h;本實(shí)施方式采用高壓滅菌的方法縮短滅菌的時(shí)間，當(dāng) 然本發(fā)明也可以采用常壓滅菌的方法，不過常壓滅菌需要至少滅菌IO 小時(shí)。
(4) 、接種培養(yǎng)料冷卻到24"C以下，在無菌條件下接種，每 支母種接1瓶原種，每300ml原種接10L栽培種；
(5) 、培養(yǎng)將接種好的北冬蟲夏草培養(yǎng)瓶移到發(fā)菌室靜置培養(yǎng) 24h后，置于搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，140-160r/min， 22-25°C，培養(yǎng) 4-6天，然后再室內(nèi)培養(yǎng)40天-60天，其中發(fā)菌室溫度要求22°C 25°C,空氣相對濕度65% 70%，且保持遮光，并適時(shí)開門窗進(jìn) 行通風(fēng)換氣，保持發(fā)菌室空氣新鮮；
(6)、出草采收。 本發(fā)明采用常見的人工代料進(jìn)行工廠化栽培，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn) 簡便，而且本發(fā)明獲得的北蟲草質(zhì)量穩(wěn)定性好，生物轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)。
權(quán)利要求
1. 一種北冬蟲夏草的工廠化栽培方法，其特征在于包括以下步驟(1)、菌種制備制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)料備用；①母種制備從野生北冬蟲夏草進(jìn)行組織分離獲得母種，母種在按1:20～125比例經(jīng)過轉(zhuǎn)管后，在18℃-23℃下培養(yǎng)13～15天，挑選長勢較好的備用；②原種制備將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基均勻裝入培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶的裝料量為20％-40％，用棉塞封口，在0.1Mpa壓力下滅菌1h，冷卻后，在無菌條件下把備用的母種按1:1接入培養(yǎng)瓶中，靜置24h后，放在搖床上培養(yǎng)至出現(xiàn)大量菌球，放置冰箱內(nèi)4℃保存?zhèn)溆?；③栽培種制備將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐中，對培養(yǎng)基和發(fā)酵罐管道分別在0.1Mpa壓力下滅菌1h，冷卻至20℃，在無菌條件下接入備用的原種，在20攝氏度下培養(yǎng)30-36h，至發(fā)酵罐內(nèi)出現(xiàn)大量菌球；(2)、配料裝瓶制作培養(yǎng)料，并將培養(yǎng)料均勻裝入培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶的裝料量為20％-40％，用棉塞封口；(3)、滅菌把培養(yǎng)瓶放入滅菌鍋中，在0.11Mpa-0.15Mpa壓力下滅菌1.5h-2h；(4)、接種培養(yǎng)料冷卻到24℃以下，在無菌條件下接種，每支母種接1瓶原種，每300ml原種接10L栽培種；(5)、培養(yǎng)將接種好的北冬蟲夏草培養(yǎng)瓶移到發(fā)菌室靜置培養(yǎng)24h后，置于搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，140-160r/min，22-25℃，培養(yǎng)4-6天，然后再室內(nèi)培養(yǎng)40天-60天，其中發(fā)菌室溫度要求22℃～25℃，空氣相對濕度65％～70％，且保持遮光，并適時(shí)開門窗進(jìn)行通風(fēng)換氣，保持發(fā)菌室空氣新鮮；(6)、出草采收。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的北冬蟲夏草的工廠化栽培方法，其特征在 于所述的步驟(1)的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的配比，每 1000ml:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂18 20g，其制備方法 為將去皮馬鈴薯切片置容器內(nèi)加水1000ml，煮沸15min，過濾， 加入葡萄糖和瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml，加熱溶解；瓊脂溶解后， 用分裝器裝入試管中，裝量為試管長的1/5,塞上棉塞，置滅菌鍋 中，在0.1Mpa壓力下滅菌0.5h，自然落磅；將試管趁熱排放在斜 面板上冷卻。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的北冬蟲夏草的工廠化栽培方法，其特征在 于所述的步驟(1)的改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的配比，每 1000ml:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1.5g， 瓊脂18 20g，其制備方法為將去皮馬鈴薯切片置容器內(nèi)加水 1000ml，煮沸15min，過濾，加入葡萄糖和瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml， 加熱溶解；瓊脂溶解后，用分裝器裝入試管中，裝量為試管長的 1/5，塞上棉塞，置滅菌鍋中，在O.lMpa壓力下滅菌0.5h，自然 落磅；將試管趁熱排放在斜面板上冷卻。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的北冬蟲夏草的工廠化栽培方法， 其特征在于所述步驟(2)的培養(yǎng)料的配比為玉米粉2%、葡 萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、 KH2P04 0.1%、 MgS04 0.05%， 其PH值為6.5。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的北冬蟲夏草的工廠化栽培方法，其特征在于所述步驟(2)的培養(yǎng)料的配比為馬鈴薯20%玉米粉3%、葡萄糖2°/。、蛋白胨0.3%、 、KH2P04 0.15%、MgS04 0.05%， 其PH值為6.5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種北冬蟲夏草工廠化栽培方法，經(jīng)菌種制備、配料裝瓶、滅菌、接種、培養(yǎng)、出草采收步驟工廠化栽培北冬蟲夏草，采用了常見的人工代料作為培養(yǎng)材料，降低了生產(chǎn)成本，而且本發(fā)明獲得的北蟲草質(zhì)量穩(wěn)定性好，生物轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C12N1/14GK101463325SQ20081016360
公開日2009年6月24日 申請日期2008年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月16日
發(fā)明者卿 劉 申請人:浙江博士園生物技術(shù)有限公司