專利名稱：一種生物芯片片基處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，硬質(zhì)基片形式的生物芯片的制作，主要是將玻璃片或硅片 等硬質(zhì)基片經(jīng)表面化學(xué)處理后，直接在基片上合成探針，或者將合成 好的探針、抗體、抗原等生物樣品點加到基片上，通過化學(xué)結(jié)合反應(yīng)， 將生物樣品固定在硬質(zhì)基片上，它的優(yōu)點在于樣品固定牢固，精密度 好，但它的缺點在于玻璃片片基邊框效應(yīng)明顯，精密度仍未能滿足臨 床使用要求，生物樣品與片基結(jié)合量低，固定樣品活性降低快等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種能降低芯片片基邊框效 應(yīng)，精密度能滿足臨床使用要求，生物樣品與片基結(jié)合量高，固定樣 品活性降低慢的生物芯片片基處理方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是-O) 將H2S04與11202按體積比50%-80%: 20%-50%攪拌混勻，配 成芯片片基處理液；
(2) 將芯片片基浸入片基處理液中，室溫處理12-36小時；
(3) 取出純化水超聲洗滌5次，10min/次；
(4) 風(fēng)干；
(5) 浸入5。/。-30。/oKOH溶液，室溫反應(yīng)30-120分鐘；(6) 取出用純化水沖洗3次；
(7) 60攝氏度烘干；
(8) 冷卻至室溫；
(9) 將3-氨丙基三乙氧基硅垸用純化水配成1%-12%溶液后，加入 0. 1%果糖配成硅化溶液；
(10) 浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘；
(11) 取出用超純水漂洗2次；
(12) 120-180攝氏度干燥30分鐘;
(13) 冷卻至室溫；
(14) 將戊二醛配成1%-10%水溶液后加入1%果糖，用5MNaOH溶 液調(diào)pH至8.0-10，制成醛化溶液；
(15) 將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，30-45攝氏度反應(yīng)10-90分鐘；
(16) 超純水漂洗6次；
(17) 110攝氏度干燥10-40分鐘；
(18) 冷卻至室溫。
有益效果:本發(fā)明的生物芯片片基處理方法，通過在片基前處理中 加入H2S04與H202以及KOH對表面進(jìn)行預(yù)處理，在表面活化過程中 加入果糖和適當(dāng)?shù)墓枸鶟舛?、戊二醛濃度以及適度的高溫烘烤，制出 的生物芯片片基，邊框效應(yīng)低，精密度高，固定樣品活性降低慢，生 物樣品與片基結(jié)合量高。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實施例1
(1) 將H2S04與H202按體積比50%: 50%攪拌混勻，配成片基處理 液
(2) 浸入片基處理液中，室溫處理12小時
(3) 取出純化水超聲洗滌5次，10min/次
(4) 風(fēng)干
(5) 浸入5。/。KOH溶液，室溫反應(yīng)30分鐘
(6) 取出用純化水沖洗3次
(7) 60攝氏度烘干
(8) 冷卻至室溫
(9) 將3-氨丙基三乙氧基硅烷用純化水配成1%溶液后，加入0. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘
(11) 取出用超純水漂洗2次
(12) 120攝氏度干燥30分鐘
(13) 冷卻至室溫
U4)將戊二醛配成1%水溶液后加入1%果糖，用5。/。NaOH溶液調(diào)
pH至8.0，制成醛化溶液 U5)將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，30攝氏度反應(yīng)10分鐘
(16) 超純水漂洗6次
(17) 110攝氏度干燥10分鐘
(18) 冷卻至室溫實施例2
(1) 將H2S04與H202按體積比55%: 45%攪拌混勻，配成片基處理 液
(2) 浸入片基處理液中，室溫處理16小時
(3) 取出純化水超聲洗滌5次，10min/次
(4) 風(fēng)干
(5) 浸入10。/。KOH溶液，室溫反應(yīng)50分鐘
(6) 取出用純化水沖洗3次
(7) 60攝氏度烘干
(8) 冷卻至室溫
(9) 將3-氨丙基三乙氧基硅垸用純化水配成3%溶液后，加入O. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘
(11) 取出用超純水漂洗2次
(12) 130攝氏度干燥30分鐘
(13) 冷卻至室溫
(14) 將戊二醛配成2%水溶液后加入1%果糖，用5y。NaOH溶液調(diào) pH至8.2，制成醛化溶液
(15) 將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，34攝氏度反應(yīng)20分鐘 U6)超純水漂洗6次
(17) 110攝氏度干燥15分鐘
(18) 冷卻至室溫實施例3
(1) 將H2S04與H202按體積比60%: 40°/。攪拌混勻，配成片基處理 液
(2) 浸入片基處理液中，室溫處理20小時
(3) 取出純化水超聲洗漆5次，10min/次
(4) 風(fēng)干
(5) 浸入15MKOH溶液，室溫反應(yīng)70分鐘
(6) 取出用純化水沖洗3次
(7) 60攝氏度烘干
(8) 冷卻至室溫
(9) 將3-氮丙基三乙氧基硅烷用純化水配成5%溶液后，加入O. 1% 果糖配成硅化溶液
OO)浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘
(11) 取出用超純水漂洗2次
(12) 140攝氏度干燥30分鐘 (n)冷卻至室溫
(14) 將戊二醛配成3%水溶液后加入1%果糖，用5%NaOH溶液調(diào) pH至8.5，制成醛化溶液
(15) 將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，38攝氏度反應(yīng)30分鐘
(16) 超純水漂洗6次
(17) 110攝氏度干燥20分鐘
(18) 冷卻至室溫實施例4
(1) 將H2S04與&02按體積比65%: 35%攪拌混勻，配成片基處理 液
(2) 浸入片基處理液中，室溫處理24小時
(3) 取出純化水超聲洗滌5次，10min/次
(4) 風(fēng)干
(5) 浸入20。/。KOH溶液，室溫反應(yīng)90分鐘
(6) 取出用純化水沖洗3次
(7) 60攝氏度烘干
(8) 冷卻至室溫
(9) 將3-氨丙基三乙氧基硅烷用純化水配成7%溶液后，加入0. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘 (n)取出用超純水漂洗2次
(12) 150攝氏度干燥30分鐘
(13) 冷卻至室溫
(14) 將戊二醛配成5%水溶液后加入1%果糖，用5%NaOH溶液調(diào) pH至9.0，制成醛化溶液
(15) 將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，40攝氏度反應(yīng)50分鐘
(16) 超純水漂洗6次
(n) 110攝氏度干燥30分鐘 U8)冷卻至室溫實施例5
(1) 將H2SO4與H2O2按體積比70。/。 30%攪拌混勻，配成片基處理
液
(2) 浸入片基處理液中，室溫處理28小時
(3) 取出純化水超聲洗滌5次，10min/次
(4) 風(fēng)干
(5) 浸入25n/。KOH溶液，室溫反應(yīng)110分鐘
(6) 取出用純化水沖洗3次
(7) 60攝氏度烘干
(8) 冷卻至室溫
(9) 將3-氨丙基三乙氧基硅烷用純化水配成9%溶液后，加入O. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘 Ui)取出用超純水漂洗2次
(12) 160攝氏度干燥30分鐘
(13) 冷卻至室溫
(14) 將戊二醛配成7%水溶液后加入1°/。果糖，用5%NaOH溶液調(diào) pH至9.5，制成醛化溶液
(15) 將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，42攝氏度反應(yīng)70分鐘
(16) 超純水漂洗6次
(17) 110攝氏度干燥35分鐘
(18) 冷卻至室溫實施例6
(1) 將H2S04與H202按體積比80%: 20%攪拌混勻，配成片基處理 液
(2) 浸入片基處理液中，室溫處理36小時
(3) 取出純化水超聲洗滌5次，10min/次
(4) 風(fēng)干
(5) 浸入30Q/。KOH溶液，室溫反應(yīng)120分鐘
(6) 取出用純化水沖洗3次
(7) 60攝氏度烘干
(8) 冷卻至室溫
(9) 將3-氨丙基三乙氧基硅烷用純化水配成12%溶液后，加入0. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘
(11) 取出用超純水漂洗2次
(12) 180攝氏度干燥30分鐘
(13) 冷卻至室溫
(14) 將戊二醛配成10%水溶液后加入1%果糖，用5。/bNaOH溶液調(diào) pH至10.0，制成醛化溶液
(15) 將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，45攝氏度反應(yīng)90分鐘
(16) 超純水漂洗6次
(17) 110攝氏度干燥40分鐘
(18) 冷卻至室溫表1是本發(fā)明實施例1-6的測試部分結(jié)果
表l中用于測試的原料分別為
固定蛋白AFP (Alpha-Fetoprotein)抗體(河南博賽生物生產(chǎn)) 信號抗體辣根過氧化物酶標(biāo)記AFP抗體(河南博賽生物生產(chǎn))
封閉劑小牛血清(上海普龍生物生產(chǎn))
反應(yīng)洗液0. lmol/1 Tris-Hcl (上海美季生物生產(chǎn))
發(fā)光底物SuperSignal ELISAFemto Maximum Sensitivity Substrate(美
國pierce生產(chǎn))
測試時用美國biodot公司的噴點點樣機(jī)器人將固定蛋白按4*12陣列 方式點于玻片表面后，經(jīng)反應(yīng)讀取信號，進(jìn)行分析。
表l:測試結(jié)果
、施例 項\1246
外觀表面清潔無 物理顆粒表面清潔無 物理顆粒表面清潔無 物理顆粒表面清潔無 物理顆粒表面清潔無 物理顆粒表面清潔無 物理顆粒
信號強(qiáng)度880860830850860850
精密度 Ccv%;>3.83.24.24.03.54.0
本底值535353535453
蛋白活性 保持時間l年l年l年l年l年l年
1權(quán)利要求
1、一種生物芯片片基處理方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將H2SO4與H2O2按體積比50％-80％20％-50％攪拌混勻，配成片基處理液；(2)將芯片片基浸入片基處理液中，室溫處理12-36小時；(3)取出純化水超聲洗滌5次，10min/次；(4)風(fēng)干；(5)浸入5％-30％KOH溶液，室溫反應(yīng)30-120分鐘；(6)取出用純化水沖洗3次；(7)60攝氏度烘干；(8)冷卻至室溫；(9)將3-氨丙基三乙氧基硅烷用純化水配成1％-12％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液；(10)浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)30分鐘；(11)取出用超純水漂洗2次；(12)120攝氏度干燥30分鐘；(13)冷卻至室溫；(14)將戊二醛配成1％-10％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液調(diào)pH至8.0-10，制成醛化溶液；(15)將硅化片基浸入醛化溶液，30-45攝氏度反應(yīng)10-90分鐘；(16)超純水漂洗6次；(17)110攝氏度干燥10-40分鐘；(18)冷卻至室溫。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，本要解決的技術(shù)問題是提供一種能降低芯片片基邊框效應(yīng)，精密度能滿足臨床使用要求，生物樣品與片基結(jié)合量高，固定樣品活性降低慢的生物芯片片基處理方法，技術(shù)方案是配芯片片基處理液；將芯片片基浸入片基處理液中，室溫處理；純化水超聲洗滌；風(fēng)干；浸入KOH溶液，室溫反應(yīng)；用純化水沖洗；60攝氏度烘干；冷卻至室溫；浸入硅化溶液中，室溫避光反應(yīng)超純水漂洗干燥冷卻至室溫；將硅化片基進(jìn)入醛化溶液，30-45攝氏度反應(yīng)；超純水漂洗6次；110攝氏度干燥10-40分鐘；冷卻至室溫。制出的生物芯片片基，邊框效應(yīng)低，精密度高，固定樣品活性降低慢，生物樣品與片基結(jié)合量高。
文檔編號C12Q1/00GK101424682SQ20071013447
公開日2009年5月6日 申請日期2007年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月30日
發(fā)明者吳堂明, 張必達(dá), 江晨亮, 潘能科, 陸冬雷 申請人:江蘇三聯(lián)生物工程有限公司