專利名稱：飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是一種檢測技術領域的方法，特別是一種飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法。
背景技術：
異養(yǎng)菌平板計數(shù)(HPC)指的是經(jīng)過一系列單一的以培養(yǎng)基為基礎的檢測所包括的水中微生物，是用來描述所有需要有機物生長的細菌。所有的HPC方法只能檢測出水中一部分的異養(yǎng)菌。目前在我國所有飲用水相關標準中，對于飲用水中的HPC仍然采用傳統(tǒng)的較高溫度(37℃)，和營養(yǎng)瓊脂這一基礎培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法。盡管傳統(tǒng)的方法具有一定的科學性，并且此方法的應用具有一定的歷史，但是根據(jù)越來越多的實驗表明，牛肉膏蛋白胨對于一些細菌不具有靈敏性，一些可能具有致病性的細菌并不能在此培養(yǎng)基中生長。根據(jù)富營養(yǎng)培養(yǎng)基計數(shù)結果來評價貧營養(yǎng)環(huán)境的水處理的有效性及管網(wǎng)的清潔、衛(wèi)生程度并不可靠，飲用水的致病風險很可能較預期高得多。必須建立適合貧營養(yǎng)條件下飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法。
經(jīng)對現(xiàn)有技術文獻檢索發(fā)現(xiàn)，GB5750-85《中華人民共和國國家標準生活飲用水標準檢驗法》提供的水質(zhì)中細菌總數(shù)或異養(yǎng)菌的檢測方法國家標準中，細菌總數(shù)或異養(yǎng)菌是指1mL水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后，所生長的細菌菌落的總數(shù)。對生活飲用水，直接吸取1mL水樣于平皿中，加入營養(yǎng)瓊脂后混勻，37℃培養(yǎng)24h，進行計數(shù)。該檢測方法已被許多實驗證明明顯低估異養(yǎng)菌的真實數(shù)量，該法可能只檢出了水樣細菌總數(shù)中很少的一部分，其他未檢出細菌根本就不能在檢測環(huán)境中生長，或者生長相對緩慢，在設定時間內(nèi)不能形成可見菌落。顧孔珍等(顧孔珍，錢純，羅岳平，用R2A培養(yǎng)基提高飲用水中細菌總數(shù)檢出率，凈水技術，Vol.23，No.1，2004)對富營養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、m-SPC培養(yǎng)基和貧營養(yǎng)的R2A培養(yǎng)基分別采用傾倒平皿法、均勻涂布法和濾膜法在20℃，7天對相同水樣檢測發(fā)現(xiàn)，貧營養(yǎng)的R2A培養(yǎng)基均勻涂布法檢測計數(shù)結果明顯高于其它營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和m-SPC培養(yǎng)基培養(yǎng)計數(shù)結果，其中高于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾倒平皿法9.5倍。但該方法采用20℃，培養(yǎng)7天，不適合開展常規(guī)檢測。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對傳統(tǒng)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基檢測異養(yǎng)菌方法的不足，提供了一種飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，通過采用一種貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，在37℃，48h條件下，以傾倒平皿法計數(shù)實現(xiàn)對飲用水中異養(yǎng)菌的檢測。可更準確地反應出水中實際存在的異養(yǎng)菌數(shù)量，可比營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基計數(shù)結果提高8～10倍。
本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的，本發(fā)明具體步驟如下(1)用無菌水將水樣依次倍比稀釋至10-1和10-2倍；(2)用無菌的槍頭分別吸取1mL上述倍比稀釋過的水樣，注入無菌的培養(yǎng)皿中，每個稀釋度平行10皿，并做空白和無菌水對照；(3)每皿各加約15mL已融化并冷卻到45～50℃的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，輕輕旋轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與水樣充分混勻；(4)待凝固后，將平板倒置，并分別放于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48h，每天進行觀察和菌落計數(shù)。
所述的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，具體配比為酵母0.049％；酪蛋白酸水解物0.049％；可溶性淀粉0.049％；MgSO4·7H2O0.005％；瓊脂1.473％；胰蛋白胨0.025％；蛋白胨0.025％；C6H12O60.049％；丙酮酸鈉0.029％；K2HPO40.029％；蒸餾水98.218％；其中比例為重量百分比。
培養(yǎng)基中胰蛋白胨、蛋白胨和酪蛋白酸水解物提供氮、碳和礦物質(zhì)；酵母粉是維生素和痕量元素的來源；葡萄糖是碳源；可溶性淀粉可以吸收有毒的代謝副產(chǎn)物，在受損的生物體的恢復中起輔助作用；磷酸氫二鉀用于平衡pH值；硫酸鎂是二價陽離子和硫酸根離子的來源；丙酮酸鈉促進受抑細胞的活化；瓊脂是促凝劑。
所述的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，其配制方法如下將貧營養(yǎng)培養(yǎng)基配方中除瓊脂以外的其他成分酵母、酪蛋白酸水解物、可溶性淀粉、MgSO4·7H2O、胰蛋白胨、蛋白胨、C6H12O6、丙酮酸鈉、K2HPO4、蒸餾水按重量比例秤取后混合加熱溶解，再用固體K2HPO4或KH2PO4調(diào)節(jié)pH至7.2，然后按貧營養(yǎng)培養(yǎng)基重量比例加入瓊脂煮沸至溶，分裝后，121℃滅菌15分鐘。
采用本發(fā)明提供的檢測方法可以有效提高檢測技術的靈敏度，計數(shù)結果可比營養(yǎng)瓊脂平板計數(shù)法高出8～10倍；本發(fā)明采用37℃恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)48h后計數(shù)也適合常規(guī)檢測；本發(fā)明能更真實地反映飲用水中異養(yǎng)菌的真實含量，更有效地評價水處理的有效性、管網(wǎng)水質(zhì)的清潔衛(wèi)生程度和飲用水水質(zhì)的致病風險。
具體實施例方式
以下結合具體的實施例對本發(fā)明的技術方案作進一步詳細描述。
實施例為采用學校公用飲水機出水水樣進行的實際比較實驗。整個發(fā)明實現(xiàn)過程如下1.按發(fā)明內(nèi)容中準備和配制貧營養(yǎng)培養(yǎng)基；貧營養(yǎng)培養(yǎng)基具體配比為酵母0.5克(0.049％)；酪蛋白酸水解物0.5克(0.049％)；可溶性淀粉0.5克(0.049％)；MgSO4·7H2O0.05克(0.005％)；瓊脂15克(1.473％)；胰蛋白胨0.25克(0.025％)；蛋白胨0.25克(0.025％)；C6H12O60.5克(0.049％)；丙酮酸鈉0.3克(0.029％)；K2HPO40.3克(0.029％)；蒸餾水1L(98.218％)；其中括號內(nèi)為重量百分比。
2.按GB5750-85《中華人民共和國國家標準生活飲用水標準檢驗法》準備和配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
3.取飲水機出水水樣時用滅菌的具塞三角燒瓶接取水樣。采用發(fā)明內(nèi)容中的檢測方法；培養(yǎng)方法營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基采用37℃恒溫培養(yǎng)24h后計數(shù)；貧營養(yǎng)培養(yǎng)基采用37℃恒溫培養(yǎng)48h后計數(shù)；4.對某高校公用飲水機共27臺進行了取樣檢測分析，其中飲水機包括了幾種不同的品牌、結構，水包括了純凈水和礦泉水，此時飲水機消毒后約一個半月到兩個多月。每周取2次水樣，每次可以取5個水樣。檢測結果如下表所示。
5.從上表可以清楚看到，采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)24h后計數(shù)結果評價飲水機水質(zhì)致病風險明顯不如貧營養(yǎng)培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)48h后計數(shù)結果更安全。
對某飲水機出水質(zhì)量檢測結果

權利要求
1.一種飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，其特征在于，具體步驟如下(1)用無菌水將水樣依次倍比稀釋至10-1和10-2倍；(2)用無菌的槍頭分別吸取1mL上述倍比稀釋過的水樣，注入無菌的培養(yǎng)皿中，每個稀釋度平行10皿，并做空白和無菌水對照；(3)每皿各加15mL已融化并冷卻的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，輕輕旋轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與水樣充分混勻；(4)待凝固后，將平板倒置，并分別放于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48h，每天進行觀察和菌落計數(shù)。
2.根據(jù)權利要求1所述的飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，其特征是，所述的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，具體為酵母0.049％；酪蛋白酸水解物0.049％；可溶性淀粉0.049％；MgSO4·7H2O0.005％；瓊脂1.473％；胰蛋白胨0.025％；蛋白胨0.025％；C6H12O60.049％；丙酮酸鈉0.029％；K2HPO40.029％；蒸餾水98.218％；其中比例為重量百分比。
3.根據(jù)權利要求1或者2所述的飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，其特征是，所述的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，其配制方法如下將貧營養(yǎng)培養(yǎng)基配方中除瓊脂以外的成分酵母、酪蛋白酸水解物、可溶性淀粉、MgSO4·7H2O、胰蛋白胨、蛋白胨、C6H12O6、丙酮酸鈉、K2HPO4、蒸餾水按重量比例秤取后混合加熱溶解，再用固體K2HPO4或KH2PO4調(diào)節(jié)pH至7.2，然后按貧營養(yǎng)培養(yǎng)基重量比例加入瓊脂煮沸至溶，分裝后，121℃滅菌15分鐘。
4.根據(jù)權利要求1所述的飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，其特征是，步驟(3)中，貧營養(yǎng)培養(yǎng)基冷卻到45～50℃。
5.根據(jù)權利要求1所述的飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，其特征是，步驟(4)中，放于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。
全文摘要
一種飲用水中異養(yǎng)菌的檢測方法，屬于檢測技術領域。步驟如下(1)用無菌水將水樣依次倍比稀釋至10－1和10－2倍；(2)用無菌的槍頭分別吸取1mL上述倍比稀釋過的水樣，注入無菌的培養(yǎng)皿中，每個稀釋度平行10皿，并做空白和無菌水對照；(3)每皿各加15mL已融化并冷卻到45～50℃的貧營養(yǎng)培養(yǎng)基，輕輕旋轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與水樣充分混勻；(4)待凝固后，將平板倒置，并分別放于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48h，每天進行觀察和菌落計數(shù)。本發(fā)明可更準確地反應出水中實際存在的異養(yǎng)菌數(shù)量，可比營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基計數(shù)結果提高8～10倍。
文檔編號C12Q1/04GK1908185SQ200610030140
公開日2007年2月7日 申請日期2006年8月17日 優(yōu)先權日2006年8月17日
發(fā)明者白曉慧, 馬俊, 吳漢靚, 戈志堅 申請人:上海交通大學