專利名稱：含有普伐他汀鈉的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，進(jìn)行用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟；涉及以進(jìn)行用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟為特征的普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法；涉及以進(jìn)行用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟為特征的普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法。
本發(fā)明還涉及普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于將選自上述三個步驟中的兩個或多于兩個步驟組合。
本發(fā)明進(jìn)而涉及一種含有可工業(yè)生產(chǎn)的普伐他汀鈉的組合物，其特征在于含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物。
背景技術(shù)：
普伐他汀為特開昭57-2240號公報(USP4,346,227)中作為HMG-CoA還原酶抑制劑公開的化合物，具有下式(II)，
現(xiàn)在普伐他汀鈉正作為高脂血癥治療藥物出售。
作為HMG-CoA還原酶抑制劑，除普伐他汀外，還已知有許多化合物，例如阿托伐他汀、氟伐他汀、伊伐他汀等全都是通過合成制造的化合物。
另一方面，洛伐他汀和辛伐他汀雖然是與普伐他汀一樣可通過發(fā)酵制造的物質(zhì)，但是前兩種物質(zhì)可通過一段發(fā)酵生成，而普伐他汀則需通過兩段發(fā)酵才能生成，在這一點(diǎn)上存在區(qū)別。即，普伐他汀鈉如下式所示，通過將第一階段發(fā)酵生成的前體在第二階段進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)而生成。
最初進(jìn)行微生物發(fā)酵時，生成了比化學(xué)反應(yīng)合成多許多的沒有想到的雜質(zhì)。即使在各步驟進(jìn)行純化，也無法完全除去所有雜質(zhì)，特別是當(dāng)以工業(yè)生產(chǎn)為目的進(jìn)行大量培養(yǎng)時，雜質(zhì)的除去變得更為困難。
另一方面，“制造安全有效藥物的一個重要因素是得到高純度的產(chǎn)物?；瘜W(xué)物質(zhì)可通過下述生產(chǎn)方法例如由原料物質(zhì)化學(xué)合成、分離或純化由生物產(chǎn)生的該所述物質(zhì)或者分離或純化在利用了基因重組細(xì)胞等的生產(chǎn)中所產(chǎn)生的該所述物質(zhì)等方法而獲得。即使采用包括基因重組法的任何生產(chǎn)方法，通常也會因?yàn)樵系募兌?、反?yīng)的不完全性、分離或純化過程中的分解等原因而難于以100％的純度獲得所制造的物質(zhì)。而且，在醫(yī)藥領(lǐng)域中，無法否認(rèn)若診斷用藥、治療用藥含有雜質(zhì)，則可能對診斷或治療產(chǎn)生不利影響，這顯然是本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中的技術(shù)常識，總之，獲得盡可能高純度的產(chǎn)物是重要的?！薄皷|京高裁平成9年(換行)第302號事件(12年2月17日判決)”。
而且，HmG-CoA還原酶抑制劑為了有效降低血液中膽固醇，是需要長期服用的一種藥物。為了盡量減少副作用，必須特別要求高純度。
因此，如上所述，由兩段發(fā)酵生成的普伐他汀類與由一段發(fā)酵生成的辛伐他汀和洛伐他汀相比，由于含有更多的雜質(zhì)，因而純化步驟特別重要，尋找除去雜質(zhì)、分離或純化高純度普伐他汀的方法的研究持續(xù)至今。
本發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)特別是在兩段發(fā)酵生成普伐他汀時，必定生成下述化合物(I)， 而且上述化合物(I)的產(chǎn)量是轉(zhuǎn)化培養(yǎng)普伐他汀時所生成雜質(zhì)中最多的。不過，如上所述，雖然知道為獲得高純度普伐他汀，從在藥物制造中被認(rèn)為是雜質(zhì)的化合物中確實(shí)除去上述化合物(I)是重要的課題，但由于上述化合物(I)是關(guān)于普伐他汀的一個不對稱碳原子上的羥基的旋光異構(gòu)體，因而與其它雜質(zhì)相比極難除去。
從而，希望開發(fā)出一種方法，該方法不是色譜之類煩雜、不利于工業(yè)生產(chǎn)的方法，而是無損于工藝生產(chǎn)性、能以相當(dāng)于色譜純化程度的高純度分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，而且是可以除去上述化合物(I)、得到高純度普伐他汀的簡便的分離或純化方法。
另一方面，作為HMG-CoA還原酶抑制劑的純化方法，已知有下述各種方法。
(1)WO 92/16276號公報(特表平6-506210號公報)該公報涉及“以使用高效液相色譜法為特征的HMG-CoA還原酶抑制劑的純化方法，以及由該純化方法所獲得的HMG-CoA還原酶抑制劑”。
該公報的純化方法的特征在于在HMG-CoA還原酶抑制劑的純化工藝中使用高效液相色譜法。而本發(fā)明的分離或純化方法的特征在于通過使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑，除去普伐他汀的雜質(zhì)，和/或用無機(jī)酸和/或無機(jī)堿通過分解除去雜質(zhì)，可不用高效液相色譜法而得到高純度的普伐他汀，這一點(diǎn)與該公報的純化方法不同。
而且也沒有關(guān)于本發(fā)明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下為特征的”分離或純化方法的記載或暗示。
另外，由于高效液相色譜法需要大量的溶劑，而這些溶劑中含有少量不揮發(fā)性雜質(zhì)，在大規(guī)模生產(chǎn)的情況下則更嚴(yán)重。在除去溶劑時，這些雜質(zhì)混入試料中。而且，使用這樣大量的溶劑將引起嚴(yán)重的環(huán)境污染、帶來高額的蒸餾費(fèi)用。
因此，高效液相色譜法煩雜，不利于工業(yè)生產(chǎn)，沒法考慮將其用于工業(yè)分離或純化普伐他汀。
在普伐他汀的工業(yè)生產(chǎn)中，即使采用高效液相色譜法，也難于除去作為普伐他汀旋光異構(gòu)體的上述化合物(I)而得到所需高純度的普伐他汀。
(2)WO 99/42601號公報該公報涉及“通過將HMG-CoA還原酶抑制劑的濃縮培養(yǎng)液用酸調(diào)節(jié)至pH4.5-7.5，然后用乙酸乙酯萃取HMG-CoA還原酶抑制劑，根據(jù)需要使其內(nèi)酯化后結(jié)晶，得到純度等于或大于99.6％的HMG-CoA還原酶抑制劑的分離或純化方法”。
該公報的純化方法在用有機(jī)溶劑從含有由微生物生成的普伐他汀的培養(yǎng)濃縮液萃取普伐他汀類的步驟中，使用乙酸乙酯，而與之相對，本發(fā)明的純化方法使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑，就這一點(diǎn)而言兩種分離或純化方法是不同的。
而且，本發(fā)明的分離或純化方法的特征在于通過用無機(jī)酸和/或無機(jī)堿分解普伐他汀的雜質(zhì)，得到高純度的普伐他汀。而該公報中沒有關(guān)于用無機(jī)酸和/或無機(jī)堿分解HMG-CoA還原酶抑制劑的雜質(zhì)這一步驟的記載或暗示。
另外，也沒有記載或暗示本發(fā)明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下為特征”的分離或純化方法。
確實(shí)，該公報的實(shí)施例3中記載有普伐他汀的分離或純化方法，但該實(shí)施例中記載用乙酸乙酯萃取后的普伐他汀的純度停留在不足70.3％，之后則采用與本發(fā)明的分離或純化方法不同的色譜法進(jìn)行純化，而關(guān)于最終所得普伐他汀的純度則完全沒有記載。因此，不知道最終是否得到了高純度的普伐他汀，而且也沒有關(guān)于是否對其進(jìn)行純化，以將上述化合物(I)的含量降低至相對于普伐他汀為0.1％重量或以下的記載或暗示。
而且，對于該公報實(shí)施例中記載可以以99.6％或以上的高純度獲得的洛伐他汀，僅從最終產(chǎn)物的HPLC圖(圖4)來看，難以認(rèn)為得到了純度為99.6％或以上的洛伐他汀，沒有可信性。
(3)WO 00/17182號公報該公報涉及“以使用頂替色譜法為特征的HMG-CoA還原酶抑制劑的純化方法以及由該純化方法所獲得的HMG-CoA還原酶抑制劑”。
該公報的純化方法的特征是在HMG-CoA還原酶抑制劑的純化工藝中使用頂替色譜法。而本發(fā)明的分離或純化方法的特征在于使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑除去普伐他汀的雜質(zhì)，和/或通過用無機(jī)酸和/或無機(jī)堿分解除去雜質(zhì)，可不用包括頂替色譜法在內(nèi)的一切色譜法而得到高純度的普伐他汀，這一點(diǎn)與該公報的純化方法不同。
而且也沒有關(guān)于本發(fā)明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下為特征的”分離或純化方法的記載或暗示。
由此，在普伐他汀的工業(yè)生產(chǎn)中，即使采用頂替色譜法，不僅煩雜，而且也難以除去作為普伐他汀旋光異構(gòu)體的上述化合物(I)。
另外，除上述純化方法外，本領(lǐng)域人員通常采用的分離或純化方法還有例如分析用高壓液相色譜法(HPLC)，但分析用HPLC不是作為分離或純化普伐他汀的方法的實(shí)用手段。分析用HPLC使用直徑非常細(xì)的填充柱(直徑4.6mm×長度25cm)，每次分析時向高壓柱中添加約10μg(1×10-2mg)試料，一次分析要大約30分鐘。雖然試料會全部從柱中流出，但是是極端稀釋的溶液狀態(tài)，雖然可在分析系統(tǒng)中檢測成分，但對于收集并不實(shí)用。而且，分析用HPLC上沒有附屬的收集系統(tǒng)，即使裝了收集系統(tǒng)，在想得到固體試料的情況下也需要除去溶劑。如果將分析用HPLC用于普伐他汀的分離或純化，則分離或純化制作1個僅5mg片劑所需的普伐他汀，就需要500次分析和250小時，分析用HPLC對于普伐他汀的分離或純化目的而言是一種不現(xiàn)實(shí)的操作，可知不利于工業(yè)生產(chǎn)。
并且基于前述理由，分析用HPLC也不是以工業(yè)規(guī)模分離或純化普伐他汀的合適手段。
硅膠色層分離法雖然可根據(jù)硅膠粒子的大小大致分為柱層析和快速柱層析法，但無法期待其成為用于工業(yè)規(guī)模分離或純化的合適手段。
實(shí)際上，曾嘗試用各種色譜法分離上述化合物(I)和其它雜質(zhì)，但由于上述化合物(I)是普伐他汀的立體異構(gòu)體，因而無法將該化合物自普伐他汀分離。
重結(jié)晶是醫(yī)藥品領(lǐng)域廣泛使用的分離或純化操作。然而即使采用重結(jié)晶，對于從普伐他汀中選擇性分離結(jié)構(gòu)類似于普伐他汀的上述化合物(I)，將組合物中的普伐他汀純度改善至所需程度而言也是沒有效果的。
也考慮了氣相色譜法、蒸餾等其它分離或純化方法，但任何一種方法的基礎(chǔ)都是以試料分子的大小差異為基準(zhǔn)進(jìn)行的分離，兩者都需要加熱試料。而普伐他汀具有在其熔點(diǎn)分離的趨勢，無法將這些作為分離或純化的方法。
即使反復(fù)進(jìn)行任何前述分離或純化方法以除去上述化合物(I)，普伐他汀的收率反而減少了。
而且，如上所述，即使將歷來已知的任何分離或純化方法組合，以將上述化合物(I)減少至0.1％或以下的量，也未成為適用于普伐他汀的工業(yè)生產(chǎn)的方法。
因此，至今為止根本不知道有不損害工藝生產(chǎn)性而得到高純度普伐他汀，特別是通過除去作為普伐他汀類似物的具有上述通式(I)的化合物而得到高純度普伐他汀的分離或純化方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明者們對含有普伐他汀的藥物組合物進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了獲得高純度普伐他汀(優(yōu)選純度為99.5％或以上)的分離或純化方法，進(jìn)而從該藥物組合物中除去包括普伐他汀類似物的上述化合物(I)的雜質(zhì)的分離或純化方法，特別是除去上述化合物(I)使其含量相對于普伐他汀為0.1％重量或以下的分離或純化方法，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明涉及(1)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，進(jìn)行用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟；(2)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，進(jìn)行用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟；以及(3)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，進(jìn)行用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟；優(yōu)選(4)(1)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為碳原子數(shù)3或4的直鏈或支鏈烷基；(5)(1)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(6)(2)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中無機(jī)酸為磷酸；以及(7)(2)或(6)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中用無機(jī)酸進(jìn)行分解的步驟中pH為2-5。
本發(fā)明進(jìn)而涉及(8)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；(9)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；以及(10)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟、用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；優(yōu)選(11)(8)或(10)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為碳原子數(shù)3或4的直鏈或支鏈烷基；(12)(8)或(10)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(13)(8)-(12)中任一項所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中無機(jī)酸為磷酸；以及(14)(8)-(13)中任一項所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中用無機(jī)酸進(jìn)行分解的步驟中pH為2-5。
另外，本發(fā)明涉及(15)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；優(yōu)選
(16)(15)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為碳原子數(shù)3或4的直鏈或支鏈烷基；以及(17)(15)中所述普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基。
本發(fā)明還涉及(18)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；(19)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；以及(20)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟、用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；優(yōu)選(21)(18)或(20)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為碳原子數(shù)3或4的直鏈或支鏈烷基；(22)(18)或(20)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(23)(18)-(22)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中無機(jī)酸為磷酸；(24)(18)-(23)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中用無機(jī)酸進(jìn)行分解的步驟中pH為2-5；以及(25)(18)-(24)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及(26)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行，除去具有下述通式(I)
的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；優(yōu)選(27)(26)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為碳原子數(shù)3或4的直鏈或支鏈烷基；(28)(26)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(29)(26)-(28)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上。
本發(fā)明還涉及(30)含有可工業(yè)生產(chǎn)的普伐他汀鈉的組合物，其特征在于含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物；優(yōu)選(31)(30)中所述含有可工業(yè)生產(chǎn)的普伐他汀鈉的組合物，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上；(32)含有普伐他汀鈉的組合物，其特征在于含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的、由(8)-(17)中任一項所述分離或純化方法制得的具有下述通式(I) 的化合物；(33)(32)中所述含有普伐他汀鈉的組合物，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上。
本發(fā)明中，“普伐他汀類”是指具有下式(II) 的普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽以及具有類似于上式(II)的結(jié)構(gòu)的化合物，即普伐他汀的類似物“例如上述化合物(I)”。
通?？梢酝ㄟ^下述分離或純化方法實(shí)現(xiàn)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化。
首先，根據(jù)常規(guī)方法過濾和/或離心完成轉(zhuǎn)化培養(yǎng)后的含有普伐他汀的培養(yǎng)液，分離菌體，之后濃縮得到培養(yǎng)濃縮液。
將所得培養(yǎng)濃縮液根據(jù)需要用酸調(diào)節(jié)pH后，用乙酸乙酯等與水難混合的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類。例如WO 99/42601號公報中，用酸將含有HMG-CoA還原酶抑制劑的培養(yǎng)濃縮液調(diào)節(jié)至pH4.5-7.5(優(yōu)選5.5-7.5)，然后用乙酸乙酯萃取。
可根據(jù)常規(guī)方法從上述萃取液中收集由此得到的普伐他汀類。例如，將上述萃取液用水、飽和食鹽水等洗滌，然后加入氫氧化鈉，萃取分液，可得到作為反萃取水層的普伐他汀鹽的水溶液?？筛鶕?jù)需要使所得普伐他汀鹽結(jié)晶。
根據(jù)需要所進(jìn)行的結(jié)晶化可通過有機(jī)合成化學(xué)技術(shù)中普遍已知的方法“例如Ullmann’s，Encyclopedia of Industrial Chemistry，卷A24，第5版(1993)，437-505頁上所記載的方法”如下進(jìn)行。
作為結(jié)晶化的方法，例如可以將有機(jī)溶劑和水加入到所得普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物中，通過加熱溶解，加入晶種，得到作為結(jié)晶體的普伐他汀。
可用于結(jié)晶化的有機(jī)溶劑有例如己烷、庚烷等脂族烴類；甲苯、二甲苯等芳香族烴類；乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等酯類；乙酸等有機(jī)酸類；甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、異戊醇、二甘醇、丙三醇、辛醇等醇類；丙酮、丁酮等酮類；二乙醚、二異丙醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚等醚類；甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、六甲替磷酰三胺等酰胺類；二甲基亞砜等亞砜類；或者水與一種或多種上述有機(jī)溶劑的混合溶劑。優(yōu)選水與一種或多種上述有機(jī)溶劑的混合溶劑，更優(yōu)選水與選自醇類、酯類和酮類的一種或多種有機(jī)溶劑的混合溶劑，最優(yōu)選水、醇類和酯類的混合溶劑。
本發(fā)明的分離或純化方法的特征在于如上所述根據(jù)常規(guī)方法得到培養(yǎng)濃縮液后，在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟中，不用乙酸乙酯而是用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。
上式中，R的定義中“碳原子數(shù)等于或大于3的烷基”有例如正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基等基團(tuán)，優(yōu)選碳原子數(shù)3-6的直鏈或支鏈烷基，更優(yōu)選碳原子數(shù)3或4的直鏈或支鏈烷基，最優(yōu)選正丙基或正丁基。
本發(fā)明的分離或純化方法的特征在于在上述分離或純化普伐他汀的方法中，進(jìn)行用無機(jī)酸分解普伐他汀的雜質(zhì)的步驟和/或用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟。
將選自用具有上式CH3CO2R的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀的步驟、用無機(jī)酸分解普伐他汀的雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟的兩個或兩個以上步驟組合進(jìn)行時，可以在分離或純化方法中以不同順序適當(dāng)實(shí)施所需步驟。這樣的分離或純化方法的具體例子如下(a)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；(b)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；(c)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行；以及(d)普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數(shù)等于或大于3的烷基)的有機(jī)溶劑萃取普伐他汀類的步驟、用無機(jī)酸分解雜質(zhì)的步驟和用無機(jī)堿分解雜質(zhì)的步驟組合進(jìn)行。
通過無機(jī)酸分解普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的雜質(zhì)的步驟可在惰性溶劑的存在或不存在下(優(yōu)選存在下)，將普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽在pH2-5的條件(優(yōu)選pH3-4)下進(jìn)行。
可用于雜質(zhì)的無機(jī)酸分解的“無機(jī)酸”只要是可在通常的反應(yīng)中用作無機(jī)酸的物質(zhì)即可，對其沒有特別限定，可以是例如氫溴酸、鹽酸、硫酸、高氯酸、磷酸、硝酸等無機(jī)酸，優(yōu)選磷酸或硫酸，最優(yōu)選磷酸。
雜質(zhì)的無機(jī)酸分解中的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間雖然取決于pH值，但基本上是如果反應(yīng)溫度低則需要延長反應(yīng)時間，如果反應(yīng)溫度高則需要縮短反應(yīng)時間，例如反應(yīng)溫度為20℃至80℃(優(yōu)選40℃至60℃)，反應(yīng)時間為1分鐘至6小時(優(yōu)選5分鐘至20分鐘)。
可用于雜質(zhì)的無機(jī)酸分解中的“惰性溶劑”只要是通?？捎米魅軇┑奈镔|(zhì)即可，對其沒有特別限定，可以是例如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、異戊醇、二甘醇、甘油、辛醇、環(huán)己醇、甲氧基乙醇等醇類；水；或者水與上述醇類的混合溶劑。優(yōu)選水或者水與上述醇類的混合溶劑。最優(yōu)選水或者水與乙醇的混合溶劑。
反應(yīng)結(jié)束后，可通過常規(guī)方法從反應(yīng)溶液中收集目標(biāo)化合物普伐他汀。例如，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，分離含有目標(biāo)化合物的有機(jī)層，用水等洗滌，餾去溶劑后得到所需物質(zhì)。進(jìn)一步如果需要，還可以加入活性炭脫色，過濾除去活性炭，然后加入氫氧化鈉、甲醇鈉、乙醇鈉等形成鹽的試劑，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等減壓濃縮，可得到普伐他汀的鹽。
通過無機(jī)堿分解普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的雜質(zhì)的步驟可在惰性溶劑的存在或不存在下(優(yōu)選存在下)，將普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽在pH10-14的條件下進(jìn)行。
可用于雜質(zhì)的無機(jī)堿分解的“無機(jī)堿”只要是可在通常的反應(yīng)中用作無機(jī)堿的物質(zhì)即可，對其沒有特別限定，可以是例如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等堿金屬碳酸鹽類；碳酸氫鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等堿金屬碳酸氫鹽類；氫化鋰、氫化鈉、氫化鉀等堿金屬氫化物類；氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿金屬氫氧化物類；或者甲醇鋰、甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等堿金屬醇鹽類。優(yōu)選堿金屬氫氧化物類。最優(yōu)選氫氧化鈉。
雜質(zhì)的無機(jī)堿分解中的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間雖然取決于pH值，但基本上是如果反應(yīng)溫度低則需要延長反應(yīng)時間，如果反應(yīng)溫度高則需要縮短反應(yīng)時間，例如反應(yīng)溫度為-10℃至110℃，反應(yīng)時間為15分鐘至200小時。
可用于雜質(zhì)的無機(jī)堿分解中的“惰性溶劑”只要是對本反應(yīng)呈惰性的溶劑即可，對其沒有特別限定，可以是例如與雜質(zhì)的無機(jī)酸分解中使用的惰性溶劑相同的溶劑。
用無機(jī)堿分解含有由微生物生成的普伐他汀類的培養(yǎng)濃縮液中所含的雜質(zhì)時的優(yōu)選反應(yīng)條件是pH為11-14(更優(yōu)選11-12)，反應(yīng)溫度為40℃-110℃(更優(yōu)選95℃-105℃)，反應(yīng)時間為2小時-24小時(更優(yōu)選2小時-5小時)。
另一方面，當(dāng)用有機(jī)溶劑將含有由微生物生成的普伐他汀類的培養(yǎng)濃縮液在酸性條件(優(yōu)選pH4-6)下萃取分液后，再用無機(jī)堿分解在堿性(優(yōu)選pH8-9)條件下反萃取的水溶液中所含雜質(zhì)時的優(yōu)選反應(yīng)條件是pH為13-14(更優(yōu)選13.5-14)，反應(yīng)溫度為-10℃至50℃(更優(yōu)選-5℃至5℃)，反應(yīng)時間為2小時至180小時(更優(yōu)選20小時至50小時，最優(yōu)選25小時至35小時)。
反應(yīng)結(jié)束后，可通過常規(guī)方法從上述反應(yīng)溶液中收集目標(biāo)化合物普伐他汀。例如，加入硫酸水溶液等酸的水溶液，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，分離含有目標(biāo)化合物的有機(jī)層，用水等洗滌，餾去溶劑后得到所需物質(zhì)。進(jìn)一步如果需要，還可以加入活性炭脫色，過濾除去活性炭，然后加入甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鈉等形成鹽的試劑，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等減壓濃縮，可得到普伐他汀的鹽。
進(jìn)而，本發(fā)明的分離或純化方法也可以包括將所得普伐他汀鹽結(jié)晶化的步驟，結(jié)晶化的方法可以根據(jù)上述常規(guī)方法進(jìn)行。
發(fā)明的效果本發(fā)明的分離或純化方法是不使用柱色譜法等煩雜、不便于工業(yè)應(yīng)用的方法而獲得高純度普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽(優(yōu)選純度為99.5％或以上)的方法。
通過本發(fā)明的分離或純化方法，可以除去上述化合物(I)，使其含量相對于普伐他汀為0.1％重量或以下。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性當(dāng)將本發(fā)明的普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽用作藥物時，可以將其本身或者與合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑等混合，制成例如片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑或糖漿劑等進(jìn)行經(jīng)口給藥或者制成注射劑或栓劑等進(jìn)行非經(jīng)口給藥。
另外，本發(fā)明的純化度的分析可用高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行。
HPLC的測定條件為A移動相20％乙腈、30％甲醇、50％TEAP緩沖液(0.3％三乙胺-H3PO4(PH3.2))；檢測波長UV238nm；柱Waters公司制造的反相柱Symmetry C18 3.5μm，φ4.6mm×15cm；流量1ml/分鐘B移動相甲醇∶水∶乙酸(100)∶三乙胺混合液(600∶400∶1∶1)；檢測波長UV 238nm；柱ELMER OPTICS制造的柱ERC-ODS-1262φ6mm×10cm；柱溫30℃；
流量1ml/分鐘，或者C移動相甲醇∶水∶乙酸(100)∶三乙胺混合液(450∶550∶1∶1)；檢測波長UV 238nm；柱BECKMAN公司制造的ULTRASPHERE ODSφ4.6mm×15cm 5μm；柱溫25℃；流量1.3ml/分鐘。
具體實(shí)施例方式
下面給出實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的范圍并不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1用乙酸正丁酯由培養(yǎng)濃縮液萃取(1a)培養(yǎng)液的濃縮用氫氧化鈉將10L完成轉(zhuǎn)化培養(yǎng)后的普伐他汀培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至pH12后，加熱至50℃攪拌30分鐘。將培養(yǎng)液冷卻至室溫后，加入作為助濾劑的500g Celite 545(商標(biāo))(CELITE CORPORATION制造)過濾。向分離后的菌體中加入3L水，再次使其懸浮后過濾。將所得兩份濃縮液合并，得到10L培養(yǎng)濃縮液。
(1b)用乙酸正丁酯萃取用25％硫酸將所得培養(yǎng)濃縮液調(diào)節(jié)至pH5.7后，加入5L乙酸正丁酯，攪拌，萃取普伐他汀。用75％硫酸將分離后的水層調(diào)節(jié)至pH5.7，然后加入5L乙酸正丁酯，攪拌萃取。合并所得的兩份乙酸正丁酯層，向其中加入2L飽和食鹽水，攪拌洗滌。分離上層，向得到的8L萃取液中加入1L水，邊攪拌邊加入25％氫氧化鈉將其調(diào)節(jié)至pH9.5，之后分離水層，得到1L普伐他汀的鈉鹽水溶液。經(jīng)HPLC(條件A)測定，普伐他汀鈉的純度為90％或以上。由本實(shí)施例的結(jié)果可知，通過使用乙酸正丁酯，可得到高純度的普伐他汀鈉。
實(shí)施例2用乙酸正丙酯由培養(yǎng)濃縮液萃取用乙酸正丙酯代替乙酸正丁酯，與實(shí)施例1一樣進(jìn)行處理，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。經(jīng)HPLC(條件A)測定，普伐他汀鈉的純度為85％或以上。由本實(shí)施例的結(jié)果可知，通過使用乙酸正丙酯，可得到高純度的普伐他汀鈉。
實(shí)施例3用磷酸進(jìn)行雜質(zhì)的分解向?qū)嵤├?所得水溶液[經(jīng)HPLC(條件A)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為9.3％]中加入350ml乙醇，用磷酸將其調(diào)節(jié)至pH3.0，然后在50℃攪拌10分鐘。經(jīng)HPLC(條件A)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為0.9％。由本實(shí)施例的結(jié)果可知，通過使用磷酸，可以顯著除去化合物(I)。
實(shí)施例4用硫酸進(jìn)行雜質(zhì)的分解用硫酸代替磷酸，與實(shí)施例3一樣進(jìn)行處理。經(jīng)HPLC(條件A)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為3％。由本實(shí)施例的結(jié)果可知，通過使用硫酸，可以顯著除去化合物(I)。
實(shí)施例5用氫氫化鈉進(jìn)行的雜質(zhì)的分解、萃取和結(jié)晶化(5a)用氫氧化鈉進(jìn)行的雜質(zhì)的分解將500ml普伐他汀的培養(yǎng)濃縮液[經(jīng)HPLC(條件B)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為12.1％]加熱至100℃，然后以水溶液形式添加2當(dāng)量的氫氧化鈉(pH11.3)。在100℃攪拌3小時后冷卻，在室溫用20％硫酸水溶液調(diào)節(jié)至pH8.5，得到氫氧化鈉堿處理液(普伐他汀鈉含量56.6g)。經(jīng)HPLC(條件B)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為0.41％。由本實(shí)施例的結(jié)果可知，通過使用氫氧化鈉，可以顯著除去化合物(I)。
(5b)用氫氧化鈉進(jìn)行雜質(zhì)分解后的萃取和結(jié)晶化用乙酸正丁酯將260g由(5a)所得的氫氧化鈉堿處理液(普伐他汀鈉含量19g)與實(shí)施例(1b)一樣進(jìn)行處理，分離水層，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。
將所得普伐他汀的鈉鹽水溶液減壓濃縮至大約1/2量，然后加入77ml水再次減壓濃縮。用水調(diào)整濃縮液的液量，使之達(dá)到普伐他汀游離形態(tài)(free form)的6倍量，冷卻至0-5℃，滴加20％硫酸水溶液，在pH4.6析出普伐他汀的游離形態(tài)結(jié)晶，攪拌1晚后過濾。用冷的稀硫酸(pH4)洗滌結(jié)晶，得到普伐他汀的游離形態(tài)濕結(jié)晶。
向普伐他汀的游離形態(tài)濕產(chǎn)物中加入63ml乙酸乙酯，在室溫下溶解后，在室溫下邊攪拌邊用20％硫酸水溶液將其調(diào)節(jié)至pH4.5，攪拌萃取分液后，向乙酸乙酯層中加入21ml水，萃取洗滌后分液。向萃取洗滌后的乙酸乙酯層中加入25ml乙醇，然后在室溫下邊攪拌邊用6％氫氧化鈉·乙醇溶液將其調(diào)節(jié)至pH8.7，得到鈉鹽溶液。之后，通過常規(guī)方法結(jié)晶，得到8.95g普伐他汀鈉鹽的結(jié)晶。經(jīng)HPLC(條件C)測定由該方法制得的普伐他汀鈉鹽的純度為99.67％，化合物(I)/普伐他汀鈉為0.1％重量。
由本實(shí)施例的結(jié)果可知，通過由氫氧化鈉進(jìn)行的雜質(zhì)的分解步驟和用乙酸正丁酯進(jìn)行的萃取步驟，可以顯著除去化合物(I)。
實(shí)施例6用乙酸正丁酯進(jìn)行的萃取、用磷酸進(jìn)行的雜質(zhì)的分解和結(jié)晶化向?qū)嵤├?所得酸處理液中加入25％氫氧化鈉將其調(diào)節(jié)至pH12，再在50℃繼續(xù)攪拌30分鐘。將溶液在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器中減壓濃縮至1L，得到含有普伐他汀鈉鹽的濃縮液。用硫酸將所得濃縮液調(diào)節(jié)至pH4.0，然后用0.5L乙酸乙酯萃取普伐他汀，用0.2L水洗滌萃取液。向萃取液中加入5g活性炭，放置10分鐘后，用濾紙過濾，將濾液用25％氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH8.7，之后在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器中減壓干燥固化，得到50g普伐他汀鈉鹽。用常規(guī)方法進(jìn)行結(jié)晶，得到34g普伐他汀鈉鹽的粗結(jié)晶。將粗結(jié)晶用相同組成的溶劑重結(jié)晶，得到32g普伐他汀鈉鹽的純結(jié)晶。
經(jīng)HPLC(條件A)測定由該方法制得的普伐他汀鈉鹽的純度為99.7％或以上，化合物(I)/普伐他汀鈉為0.1％重量。
由本實(shí)施例可知，通過用乙酸正丁酯進(jìn)行的萃取和用磷酸進(jìn)行的雜質(zhì)的分解步驟，可以除去化合物(I)使其含量為0.1％重量或以下，得到高純度的普伐他汀鈉。
而且可知，通過在用乙酸正丁酯進(jìn)行的萃取步驟和用磷酸進(jìn)行的雜質(zhì)的分解步驟的基礎(chǔ)上增加用氫氧化鈉進(jìn)行的雜質(zhì)的分解步驟，可以進(jìn)一步除去化合物(I)，得到高純度普伐他汀鈉。
實(shí)施例7用氫氧化鈉進(jìn)行的雜質(zhì)的分解、用硫酸進(jìn)行的分解和結(jié)晶化用乙酸乙酯與實(shí)施例(5b)一樣萃取實(shí)施例(5a)所得用氫氧化鈉處理的堿處理液，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。向所得水溶液中加入350ml乙醇，用硫酸將其調(diào)節(jié)至pH1.5，然后在20℃攪拌1小時。通過常規(guī)方法結(jié)晶，得到普伐他汀鈉鹽的純結(jié)晶。經(jīng)HPLC(條件C)測定化合物(I)/普伐他汀鈉為0.1％重量或以下。
由本實(shí)施例可知，通過用硫酸進(jìn)行的雜質(zhì)的分解步驟和用氫氧化鈉進(jìn)行的雜質(zhì)的分解步驟，可以除去化合物(I)使其含量達(dá)到0.1％重量或以下，得到高純度的普伐他汀鈉。
比較例1用乙酸乙酯進(jìn)行的普伐他汀的萃取用乙酸乙酯代替乙酸正丁酯，與實(shí)施例(1a)一樣進(jìn)行處理，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。經(jīng)HPLC(條件A)測定，普伐他汀鈉的純度約為70％。
當(dāng)從培養(yǎng)濃縮液萃取普伐他汀類的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、乙酸正丙酯和乙酸正丁酯時，普伐他汀鈉的純度(％)如下所示。由下述結(jié)果可知，用乙酸正丙酯或乙酸正丁酯進(jìn)行萃取比用乙酸乙酯進(jìn)行萃取更能得到高純度的普伐他汀。


權(quán)利要求
1.含有普伐他汀鈉的組合物，其是工業(yè)生產(chǎn)的并含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物。
2.權(quán)利要求1中所述含有普伐他汀鈉的組合物，其是工業(yè)生產(chǎn)的并含有99.5％或以上的普伐他汀鈉。
全文摘要
普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的分離或純化方法以及含有由該方法所制得的普伐他汀鈉的組合物，所述分離或純化方法的特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學(xué)上可接受的鹽的工藝中，進(jìn)行用具有式CH
文檔編號C12P7/62GK1679535SQ200510070068
公開日2005年10月12日 申請日期2001年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月16日
發(fā)明者杉尾伸弼, 高松安行, 小島俊氏, 鈴木睦夫, 萩澤稔, 浜野潔 申請人:三共株式會社