一種白及種子的快速回土培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種白及種子快速回土培育方法，包括如下步驟：種子的選擇及消毒→培養(yǎng)基質的選取和處理→種子的萌發(fā)→幼苗的回土栽培，本發(fā)明能大大縮短白及苗的無菌培養(yǎng)時間，使白及種子在萌發(fā)40天內就可回土栽培，從而可大大降低白及種苗的生產成本。另外，本發(fā)明通過采用具有特殊功效的液體培養(yǎng)基，可使回土栽培的白及組培苗的生根率和存活率大大提高。
【專利說明】
一種白及種子的快速回土培育方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及一種白及種子的快速回土培育方法。
【背景技術】
[0002]白及是一種蘭科多年生草本植物，現(xiàn)已經列入國家的珍稀瀕危保護植物，并且還收載于國際貿易公約(GITES)附錄二中，受到國際保護。
[0003]白及不僅是一種觀賞植物，同時也是一種重要的藥用植物。研究發(fā)現(xiàn)，白及含有多種化學成分，主要有聯(lián)芐類、菲類、二氫菲類、黃酮類、2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類、多酚類等。具有收斂止血、消腫生肌、保護胃黏膜、抗菌、抗癌的作用。
[0004]目前野生白及已遭到過度采挖，數(shù)量急劇減少。又由于白及種子非常細小且無胚乳，在自然條件下很難自主萌發(fā)生長，因此急需開展人工繁育和栽培。目前已有人就白及種子的萌發(fā)及種苗的培育進行了研究，如專利申請?zhí)枮?01510173823.9的“一種白芨的種子組織快繁育苗方法”、專利申請?zhí)枮?01310282939.7的“白芨的種子組培繁殖方法”等，但這些方法都是采用在無菌條件下培育白及組培苗，生產成本較高。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種能大大縮短白及苗無菌培養(yǎng)時間的白及種子的快速回土培育方法。
[0006]本發(fā)明提供的白及種子的快速回土培育方法包括下列步驟:
[0007](I)種子的選擇及消毒:選取已成熟且果皮已開裂的白及種子，將其進行消毒處理；
[0008](2)培養(yǎng)基質的選取和處理:選取毛邊紙作為培養(yǎng)基質，將該毛邊紙滅菌后粗糙面向上放入培養(yǎng)盤中，并用含有甜蕎胚芽添加物的無菌水浸濕；
[0009](3)種子的萌發(fā):將白及種子置于浸濕的毛邊紙上，在相對濕度85?100%、溫度20?28°C、每天光照12?24小時和光照強度為1500?30001x的條件下使其萌發(fā)；
[0010](4)幼苗的回土栽培:將長出真葉的白及無根苗與毛邊紙同時放入液體培養(yǎng)基I /4MS+6-BA0.5?I.5mg/L+IBAl.0?3.0mg/L+甜蕎胚芽添加物20?40g/L中，使白及無根苗從毛邊紙上自然脫落，然后取出毛邊紙將含有白及無根苗的液體培養(yǎng)基均勻地撒在已消毒且由草炭、蛭石、珍珠巖按(3?5): (O?I):(0.5?2)的重量比配制的土壤的表面，無根苗在溫度22?26°C、遮光50?70%、土壤濕度為70?85%的條件下生長；
[0011]所述甜蕎胚芽添加物是將寧蕎I號蕎麥種子經48小時的萌發(fā)生長后，去掉其胚芽上的種皮，將胚芽用粉碎機粉碎后制成的。
[0012]進一步地，步驟(I)中所述消毒處理是指將白及種子按白及種子:升汞溶液=1:10的體積比放入0.1%的升汞溶液中消毒7?15分鐘，再用無菌水清洗8?15分鐘。
[0013]進一步地，步驟(2)中毛邊紙的滅菌是指將毛邊紙在121°C滅菌30?50分鐘。
[0014]進一步地，步驟(2)中甜蕎胚芽添加物按IL無菌水添加10?30g甜蕎胚芽添加物加入。
[0015]進一步地，步驟(4)中土壤采用濃度為0.05%?I%的地菌靈進行消毒處理。
[0016]本發(fā)明能大大縮短白及苗的無菌培養(yǎng)時間，使白及種子在萌發(fā)40天內就可回土栽培，從而可大大降低白及種苗的生產成本。另外，本發(fā)明通過采用具有特殊功效的液體培養(yǎng)基，可使回土栽培的白及組培苗的生根率和存活率大大提高。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
[0018](I)種子的選擇及消毒:選取已完全成熟且果皮剛開裂的白及種子，將白及種子及
0.1%的升汞溶液按體積比1:10放入離心管中消毒11分鐘，再用無菌水清洗12分鐘；
[0019](2)培養(yǎng)基質的選取和處理:選取由老竹子和嫩竹子漿液按1:1比例制作的毛邊紙作為培養(yǎng)基質，將該毛邊紙在121°C滅菌40分鐘后放入培養(yǎng)盤中，共放3層，放入時毛邊紙的粗糙面向上；
[0020](3)種子的萌發(fā):將經消毒處理后的白及種子播種在毛邊紙上，并保持用含有20g/L甜蕎胚芽添加物的無菌水(即每IL無菌水中添加有20g甜蕎胚芽添加物)浸濕毛邊紙，在溫度25°C、空氣濕度90%、每天光照18小時和光照強度為20001x的條件下使白及種子萌發(fā)，培養(yǎng)35天，有98 %的白及種子萌發(fā)并長出了綠色真葉；
[0021](4)幼苗的回土栽培:將長出真葉的白及無根苗與毛邊紙同時放入液體培養(yǎng)基I/4MS+6-BA1.0mg/L+IBA2.0mg/L+甜蕎胚芽添加物30g/L中，使白及無根苗從毛邊紙上自然脫落，然后取出毛邊紙，將含有白及無根苗的液體培養(yǎng)基均勻撒在已用0.5%的地菌靈消毒且由草炭、蛭石、珍珠巖按4:0.5:1的重量比配制的土壤的表面，在溫度240C，遮光60%、土壤濕度為80%的條件下培養(yǎng)45天，有95%的幼苗長出了新根；
[0022]上述甜蕎胚芽添加物是將寧蕎I號甜蕎種子經48小時萌發(fā)生長后，去掉其胚芽上的種皮，將胚芽用粉碎機粉碎制成的。
[0023]實施例2
[0024](I)種子的選擇及消毒:選取已完全成熟且果皮剛開裂的白及種子，將白及種子及
0.1%的升汞溶液按體積比1:10放入離心管中消毒7分鐘，再用無菌水清洗8分鐘；
[0025](2)培養(yǎng)基質的選取和處理:選取由老竹子和嫩竹子漿液按1:1比例制作的毛邊紙作為培養(yǎng)基質，將該毛邊紙在121°C滅菌30分鐘后放入培養(yǎng)盤中，共放2層，放入時毛邊紙的粗糙面向上；
[0026](3)種子的萌發(fā):將經消毒處理后的白及種子播種在毛邊紙上，并保持用含有1g/L甜蕎胚芽添加物的無菌水(即每IL無菌水中添加有1g甜蕎胚芽添加物)浸濕毛邊紙，在溫度20 °C、空氣濕度85%、每天光照12小時和光照強度為15001x的條件下使白及種子萌發(fā)，培養(yǎng)35天，有90 %的白及種子萌發(fā)并長出了綠色真葉；
[0027](4)幼苗的回土栽培:將長出真葉的白及無根苗與毛邊紙同時放入液體培養(yǎng)基I/4MS+6-BA0.5mg/L+IBAl.0mg/L+甜蕎胚芽添加物20g/L中，使白及無根苗從毛邊紙上自然脫落，然后取出毛邊紙，將含有白及無根苗的液體培養(yǎng)基均勻撒在已用0.05%的地菌靈消毒且由草炭、珍珠巖按3:0.5的重量比配制的土壤的表面，在溫度22°C，遮光50%、土壤濕度為70 %的條件下培養(yǎng)45天，有92 %的幼苗長出了新根；
[0028]上述甜蕎胚芽添加物是將寧蕎I號甜蕎種子經48小時萌發(fā)生長后，去掉其胚芽上的種皮，將胚芽用粉碎機粉碎制成的。
[0029]實施例3
[0030](I)種子的選擇及消毒:選取已完全成熟且果皮剛開裂的白及種子，將白及種子及
0.1%的升汞溶液按體積比1:10放入離心管中消毒13分鐘，再用無菌水清洗13分鐘；
[0031](2)培養(yǎng)基質的選取和處理:選取由老竹子和嫩竹子漿液按1:1比例制作的毛邊紙作為培養(yǎng)基質，將該毛邊紙在121°C滅菌50分鐘后放入培養(yǎng)盤中，共放4層，放入時毛邊紙的粗糙面向上；
[0032](3)種子的萌發(fā):將經消毒處理后的白及種子播種在毛邊紙上，并保持用含有30g/L甜蕎胚芽添加物的無菌水(即每IL無菌水中添加有30g甜蕎胚芽添加物)浸濕毛邊紙，在溫度28°C、空氣濕度100%、每天光照24小時和光照強度為30001x的條件下使白及種子萌發(fā)，培養(yǎng)35天，有96.2 %的白及種子萌發(fā)并長出了綠色真葉；
[0033](4)幼苗的回土栽培:將長出真葉的白及無根苗與毛邊紙同時放入液體培養(yǎng)基I/4MS+6-BA1.5mg/L+IBA3.0mg/L+甜蕎胚芽添加物40g/L中，使白及無根苗從毛邊紙上自然脫落，然后取出毛邊紙，將含有白及無根苗的液體培養(yǎng)基均勻地撒在已用0.05%的地菌靈消毒且由草炭、珍珠巖按5: I: 2的重量比配制的土壤的表面，在溫度26°C，遮光70 %、土壤濕度為85%的條件下培養(yǎng)45天，有93.6%的幼苗長出了新根；
[0034]上述甜蕎胚芽添加物是將寧蕎I號甜蕎種子經48小時萌發(fā)生長后，去掉其胚芽上的種皮，將胚芽用粉碎機粉碎制成的。
[0035]實施例4
[0036]在實施例1步驟(3)中，改用含有10g/L甜蕎胚芽添加物的無菌水浸濕毛邊紙，其它步驟同實施例1，在培養(yǎng)35天，有89 %的白及種子萌發(fā)并長出了綠色真葉。
[0037]實施例5
[0038]在實施例1步驟(3)中，改為在空氣濕度95 %、溫度20 °C、每天光照12小時和光照強度為28001x的條件下使白及種子萌發(fā)，其它步驟同實施例1，有82%的白及種子萌發(fā)并長出了綠色真葉。
[0039]實施例6
[0040]在實施例1步驟(4)中，將液體培養(yǎng)基改為l/4MS+6-BA0.5mg/L+IBA3.0mg/L+甜蕎胚芽添加物40g/L，其它步驟同實施例1，培養(yǎng)45天，有90%的幼苗長出了新根。
[0041 ]比較實施例1
[0042]在實施例1步驟(I)中，改選為外觀成熟但未開裂的白及果實，其它步驟同實施例1，白及種子在萌發(fā)培養(yǎng)35天后，僅有49 %的白及種子長出了綠色真葉。
[0043]比較實施例2
[0044]在實施例1步驟(I)中，將白及種子按1:5的體積比加入到升汞溶液中消毒15分鐘，其它步驟同實施例1，白及種子萌發(fā)培養(yǎng)35天后，僅有43 %的白及種子長出了綠色真葉。
[0045]比較實施例3
[0046]在實施例1步驟(2)中，將培養(yǎng)基質改選為濾紙、信簽紙或餐巾紙，其它步驟同實施例I;培養(yǎng)35天后，無任何白及種子萌發(fā)長出綠色真葉。
[0047]比較實施例4
[0048]在實施例1步驟(2)中，改為將毛邊紙的粗糙面向下放在培養(yǎng)盤中，其它步驟同實施例I，培養(yǎng)35天后，僅有49%的白及種子長出了綠色真葉。
[0049]比較實施例5
[0050]在實施例1步驟(3)中，改為不含有甜蕎胚芽添加物的無菌水浸濕毛邊紙，其它步驟同實施例1，培養(yǎng)35天后，僅有38%的白及種子長出了黃綠色真葉，并且長出的無根苗與實施例1相比，明顯矮小。
[0051 ]比較實施例6
[0052]在實施例1步驟(4)中，將液體培養(yǎng)基改為MS+6-BA1.0mg/L+IBA2.0mg/L，其它步驟同實施例1，培養(yǎng)45天，僅有29 %的幼苗長出了新根。
[0053]比較實施例7
[0054]在實施例1步驟(4)中，將配制的土壤改為營養(yǎng)土，其它步驟同實施例1，在培養(yǎng)45天后，僅有37%的幼苗長出了新根。
【主權項】
1.一種白及種子的快速回土培育方法，其特征在于包括如下步驟: (1)種子的選擇及消毒:選取已成熟且果皮已開裂的白及種子，將其進行消毒處理； (2)培養(yǎng)基質的選取和處理:選取毛邊紙作為培養(yǎng)基質，將該毛邊紙滅菌后粗糙面向上放入培養(yǎng)盤中，并用含有甜蕎胚芽添加物的無菌水浸濕； (3)種子的萌發(fā):將白及種子置于浸濕的毛邊紙上，在相對濕度85?100%、溫度20?28°C、每天光照12?24小時和光照強度為1500?30001x的條件下使其萌發(fā)； (4)幼苗的回土栽培:將長出真葉的白及無根苗與毛邊紙同時放入液體培養(yǎng)基I/4MS+6-BA0.5?1.5mg/L+IBAl.0?3.0mg/L+甜蕎胚芽添加物20?40g/L中，使白及無根苗從毛邊紙上自然脫落，然后取出毛邊紙將含有白及無根苗的液體培養(yǎng)基均勻地撒在已消毒且由草炭、蛭石、珍珠巖按(3?5): (O?I):(0.5?2)的重量比配制的土壤的表面，無根苗在溫度22?26°C、遮光50?70%、土壤濕度為70?85%的條件下生長； 所述甜蕎胚芽添加物是將寧蕎I號蕎麥種子經48小時的萌發(fā)生長后，去掉其胚芽上的種皮，將胚芽用粉碎機粉碎后制成的。2.根據權利要求1所述的白及種子的快速回土培育方法，其特征在于:步驟(I)中所述消毒處理是指將白及種子按白及種子:升汞溶液= 1:10的體積比放入0.1%的升汞溶液中消毒7?15分鐘，再用無菌水清洗8?15分鐘。3.根據權利要求1所述的白及種子的快速回土培育方法，其特征在于:步驟(2)中毛邊紙的滅菌是指將毛邊紙在121°C滅菌30?50分鐘。4.根據權利要求1所述的白及種子的快速回土培育方法，其特征在于:步驟(2)中甜蕎胚芽添加物按IL無菌水添加10?30g甜蕎胚芽添加物加入。5.根據權利要求1所述的白及種子的快速回土培育方法，其特征在于:步驟(4)中土壤采用濃度為0.05 %?I %的地菌靈進行消毒處理。
【文檔編號】A01C1/08GK105830582SQ201610236911
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月15日
【發(fā)明人】王躍華, 劉媛媛, 劉曼, 周歡, 羅晴方, 鐘若蘭, 陳燕, 何新友, 胥華, 何詩紅, 劉洪明, 昝加志, 羅倩
【申請人】成都大學