一種達(dá)烏里芯芭組織培養(yǎng)繁育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種達(dá)烏里芯芭組織培養(yǎng)繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]達(dá)烏里芯色Cymbaria dahurica L.，為玄參科芯色屬植物，也稱大黃花、白蒿茶，蒙藥名“阿拉坦-阿給”，是蒙醫(yī)專用藥芯芭的基源植物之一，多生于海拔620-110米之間的荒漠草原及山地草原上，主要分布于內(nèi)蒙古、黑龍江、河北等地。全草入藥，具有燥“協(xié)日烏素”，清熱，祛風(fēng)濕、利尿、止血等功效，用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、吐血、衄血、便血、外傷出血、腎炎水腫、黃水瘡等癥。
[0003]目前，市場(chǎng)上的芯芭藥材主要來自野生資源，隨著其藥用價(jià)值的提高，市場(chǎng)對(duì)藥材的需求量增大，導(dǎo)致達(dá)烏里芯芭被過渡采挖，野生資源蘊(yùn)藏量也日趨減少，資源瀕臨枯竭。雖然近年來國內(nèi)外對(duì)蒙藥的關(guān)注不斷增加，蒙藥芯芭也引起了諸多學(xué)者的重視，研究報(bào)道不斷增加，但主要集中在資源分布、定性鑒別、化學(xué)成分及藥理作用研究上。到目前為止，針對(duì)芯芭的人工種植、種苗繁育技術(shù)的相關(guān)研究未見報(bào)道。達(dá)烏里芯芭一般通過種子進(jìn)行繁殖，但在初步的種苗繁育工作中發(fā)現(xiàn)，達(dá)烏里芯芭的種子繁殖存在發(fā)芽率低、發(fā)芽不整齊、種苗質(zhì)量不穩(wěn)定等問題，嚴(yán)重制約了達(dá)烏里芯芭的規(guī)范化種植和生產(chǎn)。采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高達(dá)烏里芯芭種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)達(dá)烏里芯芭優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種達(dá)烏里芯芭組織培養(yǎng)繁育方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良達(dá)烏里芯芭種苗、滿足生產(chǎn)需要。
[0005]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的:一種達(dá)烏里芯芭組織培養(yǎng)繁育方法，其特征在于:該方法包括以下步驟:
[0006](I)外植體的選擇與消毒:取達(dá)烏里芯芭飽滿果實(shí)，剝?nèi)スず笕〕龇N子作為外植體，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0007](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)45天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0008](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5-2.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、
0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
[0009]本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于:
[0010](I)采用生物技術(shù)對(duì)達(dá)烏里芯芭進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，通過達(dá)烏里芯芭叢生芽的繁殖，能夠在短時(shí)間內(nèi)培育出大量適合栽培種植的達(dá)烏里芯芭幼苗，保障達(dá)烏里芯芭種苗的增殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0011](2)采用本發(fā)明得到的達(dá)烏里芯芭叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到15-25倍，叢生芽健壯，接種到生根培養(yǎng)基后容易生根。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。
[0013]實(shí)施例1
[0014]本發(fā)明所述的達(dá)烏里芯芭的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0015](I)外植體的選擇與消毒:取達(dá)烏里芯芭飽滿果實(shí)，剝?nèi)スず笕〕龇N子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0016](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)45天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0017](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA,0.lmg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生長倍率為7.0倍，叢生芽增殖系數(shù)為15.5。
[0018]實(shí)施例2
[0019]本發(fā)明所述的達(dá)烏里芯芭的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的另一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0020](I)外植體的選擇與消毒:取達(dá)烏里芯芭飽滿果實(shí)，剝?nèi)スず笕〕龇N子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0021](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)45天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0022](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA,0.lmg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生長倍率為18.1倍，叢生芽增殖系數(shù)為20.5。
[0023]實(shí)施例3
[0024]本發(fā)明所述的達(dá)烏里芯芭的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的再一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0025](I)外植體的選擇與消毒:取達(dá)烏里芯芭飽滿果實(shí)，剝?nèi)スず笕〕龇N子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0026](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)45天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0027](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA,0.5mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為
5.8，生長倍率為15.8倍，叢生芽增殖系數(shù)為19.2。
[0028]實(shí)施例4
[0029]本發(fā)明所述的達(dá)烏里芯芭的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的又一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0030](I)外植體的選擇與消毒:取達(dá)烏里芯芭飽滿果實(shí)，剝?nèi)スず笕〕龇N子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0031](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)45天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0032](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加2.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAAU.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生長倍率為20.3倍，叢生芽增殖系數(shù)為24.5。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種達(dá)烏里芯芭組織培養(yǎng)繁育方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒:取達(dá)烏里芯芭飽滿果實(shí)，剝?nèi)スず笕〕龇N子作為外植體，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體 (2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的無菌外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)45天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5-2.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、.0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
【專利摘要】一種達(dá)烏里芯芭組織培養(yǎng)繁育方法，包括如下步驟：(1)取達(dá)烏里芯芭種子作為外植體進(jìn)行消毒；(2)將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到無菌試管苗；(3)將所述無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中進(jìn)行試管苗快速繁殖培養(yǎng)獲得叢生芽。采用本發(fā)明得到的達(dá)烏里芯芭叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到15-25倍，能夠在短時(shí)間內(nèi)提供成活率高的達(dá)烏里芯芭優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決達(dá)烏里芯芭的規(guī)?；鐔栴}。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105145371
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510658610
【發(fā)明人】韋坤華, 李旻輝, 李林軒, 徐建平, 繆劍華, 張樂, 朱虹, 韋瑩, 肖冬, 李翠, 王一諾
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年10月12日