專利名稱:一種開放式植物組織培養(yǎng)方法
一種開放式植物組織培養(yǎng)方法技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種農(nóng)林領(lǐng)域的植物組織培養(yǎng)育苗技術(shù)。
背景技術(shù)：
[0002]植物組織培養(yǎng)是本世紀(jì)初開始，以植物生理學(xué)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一項(xiàng)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)。經(jīng)過近一個(gè)世紀(jì)的發(fā)展。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行無性繁殖的方法已取得了很大的進(jìn)展。與傳統(tǒng)的植物繁育方法相比，這方法具有快速高效，不受季節(jié)限制，有時(shí)還結(jié)合“脫毒”技術(shù)取得防止帶毒退化、增強(qiáng)生活力及較好地保持種性的效果，在當(dāng)前倡導(dǎo)高效現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)發(fā)展模式的形勢(shì)下，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)高質(zhì)量的種苗具有十分廣闊的市場前景。雖然它的理論研究已相當(dāng)精深，但由于技術(shù)環(huán)節(jié)還存在不少問題，組培成本太高，無法滿足市場對(duì)高質(zhì)量組培苗低價(jià)位的需求，因此，如何降低組培成本是決定組培效益的關(guān)鍵所在，也是組培技術(shù)得以健康發(fā)展的首要條件。傳統(tǒng)組培過程中的污染是組培技術(shù)的主要難點(diǎn)之一，主要表現(xiàn)為培養(yǎng)基的污染，培養(yǎng)基高壓滅菌具有資金投入大、能耗高，培養(yǎng)基成分遭受破壞等缺點(diǎn)，近年引起興趣的植物開放式組織培養(yǎng)，是在抗菌劑的作用下，培養(yǎng)基不需高壓滅菌，利用塑料杯代替組培瓶，簡化組培環(huán)節(jié)，降低組培成本。[0003]將培養(yǎng)基改造成既可保證植物組織正常生長，又具有抗菌功能的培養(yǎng)基，關(guān)鍵是要找到一種或幾種能夠添加到培養(yǎng)基的高效廣譜性抗菌劑。植物組織培養(yǎng)制作培養(yǎng)基，將熱熔的瓊脂營養(yǎng)液分裝進(jìn)培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基體積一般占培養(yǎng)瓶容積的五分之一左右，留有較大的瓶內(nèi)空間，從已經(jīng)公開的資料來看，現(xiàn)有的開放式組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基加入抑菌劑只對(duì)固體培養(yǎng)基部分抑菌，對(duì)瓶內(nèi)空間的微生物無能為力，這就可能導(dǎo)致植物材料接種到培養(yǎng)基表面后，瓶內(nèi)微生物沉降附著在培養(yǎng)物表面并繁殖，培養(yǎng)物遭受污染幾率較高。[0004]從已經(jīng)公開的資料來看，培養(yǎng)基所添加抑菌劑的量較大，可能將提高培養(yǎng)基滲透壓，對(duì)培養(yǎng)物生長產(chǎn)生不利的影響。
發(fā)明內(nèi)容
[0005]本發(fā)明的主要目的在于提供一種開放式組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明采用揮發(fā)性抑菌劑加入培養(yǎng)基，在對(duì)培養(yǎng)基本身消毒的同時(shí)，由于抑菌劑自身具有揮發(fā)能力，能揮發(fā)到瓶內(nèi)空間進(jìn)行消毒，使培養(yǎng)物處在較為無菌的環(huán)境生長，降低培養(yǎng)物污染概率。[0006]本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下[0007]一種開放式植物組織培養(yǎng)方法，其在培養(yǎng)基中添加揮發(fā)性植物精油抑菌劑，免去高壓消毒程序，在室內(nèi)開放環(huán)境條件下接種；將培養(yǎng)材料置于滿足植物組織培養(yǎng)的溫度、光照條件的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)。[0008]所述的植物精油抑菌劑的使用量為2 μ l-2ml/L培養(yǎng)基。[0009]所述的植物精油抑菌劑包括以下成分的至少一種[0010](I)肉桂油。包括桂皮油和桂葉油，分別蒸鍛自肉桂(Cinnamomum cassia)的干燥枝、葉，主要成分桂皮醛，反式茴香腦、可巴烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0011](2)桉葉油(尤加利油)。從藍(lán)桉、桉葉樹等桉樹屬(Eucalyptus)植物的葉、枝中提取。主要組成1，8_桉葉素、莰烯、水芹烯、松油醇、乙酸香葉醇等。其在培養(yǎng)基添加量是 2u1-2ml/Lo[0012](3)茶樹油。自白千層屬(Melaleuca)植物的新鮮枝葉提取。主要組成對(duì)孟烯-1-醇，1，8_桉葉油素、松油烯、異松油烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0013](4)百里香油。由百里香(Thymus vulgaris 及 Τ· zygis var gracilis)進(jìn)入花期的地上部分提取。主要成分百里香酚、香芹酚。其在培養(yǎng)基添加量是2yl-2ml/L。[0014](5) 丁香油。提取自丁香(Eugenia caryophyllata)干燥花蕾,主要成分丁香酹。 其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0015](6)薰衣草油。由薰衣草(Lavandula officinalis 或 L. angustifolia)的花序提取。主要成分為乙酸芳樟酯、芳樟醇、薰衣草醇、乙酸薰衣草酯、對(duì)-1-孟烯-4-醇等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ1-2ml/L。[0016](7)檸檬油。由檸檬屬(Lemon)的新鮮果皮經(jīng)壓榨而得。主要 成分是苧稀(對(duì)孟-1，8-二烯)和檸檬醛。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0017](8)山蒼子油由山蒼子(Litsea cubeba)果實(shí)提取。主要成分是括檸檬醛、甲基庚烯酮、香茅醛、香茅醇、菔烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0018](9)香茅油(香草油)。香茅(Cymbopogon nardus)全草提取。主要成分香茅醒、 香茅醇。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0019](10)牛至油。自牛至(Origanum vulgare)全草提取,主要成分香療酹、歐百里香酚、麝香草酚等。其在培養(yǎng)基添加量是2yl-2ml/L。[0020](11)廣藿香油。自廣藿香(Pogostemon cablin或P. patchouli pelletiver var. snavis或P. heyneanus)葉子、枝桿及根部提取,主要成分為廣藿香烯、廣藿香醇、廣藿香酮。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0021](12)紫蘇油。提取自紫蘇(Perilla frutescens)莖葉,主要成分為朽1檬烯、紫蘇烯，α -亞麻酸等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0022](13)迷迭香油。提取自迷迭香(Rosmarinus officinalis)莖葉，主要成分為 ct-薇稀、茨稀、β _薇稀、1，8_按葉素、棒腦、龍腦。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l_2ml/L。[0023](14)大蒜油。從大蒜(Allium sativum)鱗莖提取,主要成分丙基二硫化丙烯、 二硫化二丙烯、三硫化二丙烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0024](15)沒藥油。地丁樹或哈地丁樹(Commiphora)的樹脂油，主要成分為桂醛、沒藥酸、肉桂醛、小茴香醛，丁香酚。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0025](16) 土荊芥油。自土荊芥(Chenopodium ambrosioides)果實(shí)和葉提取,主要成分驅(qū)蛔素、對(duì)聚傘花素、土荊芥酮。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0026](17) 丁香羅勒油。提取自丁香羅勒(Ocimum gratissimum)的全草,主要成分丁香酚、芳樟醇、松油醇羅勒烯。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0027](18)薄荷油。提取自薄荷(Mentha arvensis)莖葉。主要成分左旋薄荷醇、左旋薄荷酮、異薄荷酮、胡薄荷酮、乙酸癸酯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0028](19)花椒油。從花椒屬(Zanthoxylum)果實(shí)提取,主要成分為朽1檬烯、枯醇、香葉醇等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l_2ml/L。[0029](20)佛手柑油。從佛手柑(Citrus medica var sarcodactylis)果皮提取，中國的佛手柑主要含有橙花醇、檸檬腦、檸檬醛等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0030](21)連翅油。提取自連翅(Forsythia suspens)的果實(shí),主要成分α-菔烯、β-菔烯、松油醇-4-醇、水芹烯。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0031](22)蒼術(shù)油。從南蒼術(shù)(Atractylodes Iancea)或北蒼術(shù)(A. chinensis)等的干燥根莖提取。主要成分蒼術(shù)醇、蒼術(shù)酮、蒼術(shù)烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2yl-2ml/L。[0032](23)巖蘭草油(香根油)。提取自巖蘭草(Andropogon muricatus)根,主要成分安息香酸、巖蘭草醇、巖蘭草酮、巖蘭草烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/Lo[0033](24)藿香油。提取自藿香(Agastache rugosus)全草,主要成分甲基黑椒酹(對(duì)烯丙基苯甲醚)、丁香酚甲醚等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l_2ml/L。[0034](25)雪松油。提取自雪松(Juniperus virginiana)根莖枝,主要成分α -雪松烯、Y-依蘭油烯、雪松醇等。其在培養(yǎng)基添加量是2yl-2ml/L。[0035](26)艾葉油。提取自蒿屬(Artemisia)的干葉或鮮葉，主要成分為蒲品烯醇_4與 α _職品稀醇等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l_2ml/L。[0036](27)鼠尾草油。提取自鼠尾草(Salvia officinalis)葉與花,主要成分有龍腦、 側(cè)柏酮、樟腦、桉葉油。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0037](28)快樂鼠尾草油。提取自快樂鼠尾草(Salvia sclarea)花苞和花，主要成分洋蘇草醇、洋蘇 草酮、桉油醇、沉香醇。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0038](29)歐薄荷油。提取自歐薄荷(Mentba piperita)葉子,主要成分薄荷腦、胡薄荷醇、薄荷酮等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0039](30)生姜油。提取自姜(Zingiber officinale)的根莖。主要成分姜烯、姜醇、姜酮等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0040](31)細(xì)辛精油。提取自遼細(xì)辛(Asarum heterotropoide)根。主要成分甲基丁香酚、黃樟醚、優(yōu)香芹酮等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0041](32)芫荽油。芫荽(Coriandrum sativum)的果實(shí)經(jīng)水蒸氣蒸懼而得。主要成分為芳樟醇、聚傘花酚、松油烴、香葉醇等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0042](33)月桂油。提取自月桂樹(Laurus nobilis)的葉。主要成分是丁子香酹、桉樹腦和菔烯。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0043](34)松節(jié)油。由松屬(Pinus)的樹脂蒸餾取得。主要成分為菔烯、β_菔烯、 芋烯、莰烯、蒈烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0044](35)茴香油。提取自大茴香(Illicium verum)或小茴香(Foeniculum vulgare) 的果實(shí)。主成分桉油醇、甲基黑椒酚、反式茴腦、大茴香醛。其在培養(yǎng)基添加量是 2u1-2ml/Lo[0045](36)天竺葵油。由天竺葵(Pelargonium graveolens)花葉提取。主成分香茅醇、甲酸香茅酯和乙酸香茅醇。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0046](37)柏木油。產(chǎn)自側(cè)柏(Thuja occidentalis)和扁柏(Cupressus funebris)木， 枝，葉，主成分為柏木腦、α -和β -寸白木烯、羅漢柏烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l_2ml/ L。[0047](38)芥茉油(黑芥末油和白芥末油)。由黑芥(Brassica nigra)和白芥(B.hirta)種子提取。主成分為異硫氰酸烯丙酯。其在培養(yǎng)基添加量是2μ1-2πι1/1。[0048](39)橙花油。從橙(Citrus sinensis)花提取,主要成分L-芳樟醇、乙酸芳樟醇、 橙花醇、乙酸橙花酯。其在培養(yǎng)基添加量是2 μ l-2ml/L。[0049](40)羅勒油。由甜羅勒(Ocimum basilicum)或圣羅勒(O. sanctum)全草提取,主要化學(xué)成分為沉香醇、樟腦、松萜或菔烯、莰烯等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0050](41)葡萄柚油。由葡萄柚(Citrus paradisi)果皮提取,主要成分松職、菔烯、檜烯、月桂烯、檸檬油精、香葉醇。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0051](42)樟腦油。由樟(Cinnamomum camphora)的樹干、枝葉提取,主要成分為樟腦、 桉葉素、黃樟素、芳樟醇等。其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L。[0052]所述的植物精油抑菌劑還包括吐溫-20，單方或復(fù)合精油總體積與吐溫-20體積比為1. 8-2. 5 I。其中，添加乳化劑吐溫-20可使精油均勻地分散在培養(yǎng)基中。[0053]組培的微生物污染是限制組培產(chǎn)業(yè)化的重要原因之一，傳統(tǒng)組培中培養(yǎng)基需經(jīng)高溫高壓滅菌。在培養(yǎng)基添加抑菌劑，可免去高壓滅菌程序，又能保證植物組織正常生長，具有省去高壓滅菌器的資金投入，節(jié)省能源，縮短培養(yǎng)基制作時(shí)間，許多不耐高壓滅菌的培養(yǎng)基添加劑可直接投放到培養(yǎng)基，減少瓊脂用量，培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)和激素?fù)p失較少，不耐高溫的培養(yǎng)容器也適宜用作培養(yǎng)容器等優(yōu)點(diǎn)。[0054]與現(xiàn)有技術(shù)的實(shí)施方案比較[0055]1、專利公開號(hào)CN101455180A以大蒜、黃連、忍冬葉、甘草根、桂花、石蒜提取物減壓濃縮制作抑菌劑，發(fā) 明開放式組織培養(yǎng)育苗方法。公開號(hào)CN101946809以聚賴氨酸、異噻唑啉酮、中藥水提物等發(fā)明適合于組織培養(yǎng)的抑菌劑組合，省去培養(yǎng)基高壓滅菌程序。專利號(hào)ZL 200610172193. 4發(fā)明了含蜂膠抑菌劑植物培養(yǎng)基。從以上已經(jīng)公開的資料來看，以上加入的抑菌劑不具揮發(fā)性，它們只能對(duì)固體培養(yǎng)基部分抑菌。本發(fā)明的揮發(fā)性抑菌劑在對(duì)培養(yǎng)基本身消毒的同時(shí)，也能對(duì)瓶內(nèi)空間進(jìn)行消毒，使培養(yǎng)物處在較為無菌的環(huán)境生長， 降低培養(yǎng)物污染概率；[0056]2、相對(duì)已經(jīng)公開的類似專利，本發(fā)明采用高效抑菌劑，在培養(yǎng)基添加量小(總使用量為2 μ l-2ml/L培養(yǎng)基)，對(duì)培養(yǎng)基滲透壓沒有影響；[0057]3、本發(fā)明成分為植物天然成分，廣泛應(yīng)用于空氣清新、食品調(diào)香、皮膚擦拭等，對(duì)人體無毒，添加量少，無不適刺激味。
具體實(shí)施方式
[0058]抑菌培養(yǎng)基制備方法[0059]1、容器選擇玻璃培養(yǎng)瓶一定要干凈，消毒劑(液)浸泡后，倒扣涼干不留水跡，可直接分裝培養(yǎng)基。若用一次性無色透明塑料口杯，直接分裝培養(yǎng)基，PE保鮮膜封口，抗老化皮筋扎口。均不經(jīng)高壓滅菌。[0060]2、制備培養(yǎng)基[0061]培養(yǎng)基制備室需干凈，配培養(yǎng)基按常規(guī)方法，瓊脂條用量為常規(guī)用量的70%。左右，瓊脂完全溶解停止加熱，定容。加入本抑菌劑(單方或復(fù)方使用抑菌劑，在培養(yǎng)基總添加量是2μ l-2ml/L)，調(diào)PH，分裝到培養(yǎng)瓶，5min內(nèi)完成加蓋封口。[0062]3.培養(yǎng)基冷卻后常規(guī)方法接種和培養(yǎng)。接種間紫外線消毒20分鐘，75%酒精噴霧降塵，75%酒精擦拭臺(tái)面，接種在開放的臺(tái)面上進(jìn)行，無需超凈工作臺(tái)。[0063]實(shí)施例一、單方抑菌培養(yǎng)基在蝴蝶蘭類原球莖增殖上的應(yīng)用[0064]1/2大量元素MS培養(yǎng)基，每升加激素6-BA 3mg，蔗糖30g、瓊脂7g，加熱完全熔化， 斷開熱源，定容，培養(yǎng)基分別添加表I各種抑菌劑，調(diào)pH至5. 8，不經(jīng)高壓滅菌，直接分裝到玻璃培養(yǎng)瓶，5分鐘內(nèi)加蓋封口，在室內(nèi)開放環(huán)境接種蝴蝶蘭類原球莖，對(duì)照培養(yǎng)基不添加抑菌劑，分裝到玻璃培養(yǎng)瓶，常規(guī)高壓滅菌，冷卻后常規(guī)方法接種類原球莖，每種處理15 瓶，常規(guī)培養(yǎng)，一個(gè)月后觀察培養(yǎng)瓶污染情況、類原球莖重量增加情況，見表I。[0065]表I蝴蝶蘭類原球莖在抑菌培養(yǎng)基上的增殖情況[0066]名稱濃度 μ 1/L污染瓶數(shù)類原球莖鮮重增長率/%對(duì)照O18. 8荼樹油2O17. 7丁香羅勒油2I18. 6土荊芥油2I19. 4 廣藿香油2O19. 3紫蘇油2O18. 4迷迭香油30I18. 7月桂油30O19. 3橙花油30O18. 3葡萄柚油。30O18. 9茴香油500O17. 4芥茉油500O17. 8丁香油500I18. 8薰衣草油500O18. 4檸檬油500O19. O[0067]實(shí)施例二、單方抑菌培養(yǎng)基在胡蘿卜種子發(fā)芽長苗上的應(yīng)用[0068]MS培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂7g/L,加熱完全熔化，斷開熱源，定容，培養(yǎng)基分別添加下表各種抑菌劑，調(diào)pH至5. 8，不經(jīng)高壓滅菌，直接分裝到玻璃培養(yǎng)瓶，5分鐘內(nèi)加蓋封口。對(duì)照培養(yǎng)基不添加抑菌劑，分裝到玻璃培養(yǎng)瓶，常規(guī)高壓滅菌，每種處理10瓶。[0069]去刺胡蘿卜種子常規(guī)75%酒精瞬間消毒，O. 1%氯化汞浸泡10分鐘，在室內(nèi)開放環(huán)境接種，每瓶30粒，常規(guī)培養(yǎng)，一個(gè)月后觀察培養(yǎng)基污染瓶數(shù)、種子發(fā)芽率、芽苗高度范圍，見表2[0070]表2胡蘿卜種子接種在抑菌培養(yǎng)基的生長情況[0071]
權(quán)利要求
1.一種開放式植物組織培養(yǎng)方法，其特征在于在培養(yǎng)基中添加揮發(fā)性植物精油抑菌齊U，免去高壓消毒程序，在室內(nèi)開放環(huán)境接種；將培養(yǎng)材料置于滿足植物組織培養(yǎng)的溫度、光照條件的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求
1所述的一種開放式植物組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的植物精油抑菌劑的使用量為2 μ l-2ml/L培養(yǎng)基。
3.如權(quán)利要求
1所述的一種開放式植物組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的植物精油抑菌劑包括以下成分的至少一種 (1)肉桂油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (2)桉葉油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (3)茶樹油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (4)百里香油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (5)丁香油，其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L ； (6)薰衣草油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (7)檸檬油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (8)山蒼子油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ; (9)香茅油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (10)牛至油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (11)廣藿香油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (12)紫蘇油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (13)迷迭香油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (14)大蒜油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (15)沒藥油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (16)土荊芥油，其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L ； (17)丁香羅勒油，其在培養(yǎng)基添加量是2μ l-2ml/L ； (18)薄荷油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (19)花椒油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (20)佛手柑油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (21)連翹油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (22)蒼術(shù)油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (23)巖蘭草油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (24)藿香油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (25)雪松油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (26)艾葉油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (27)鼠尾草油，其在培養(yǎng)基添加量是2μ1-2πι1/1; (28)快樂鼠尾草油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (29)歐薄荷油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (30)生姜油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (31)細(xì)辛精油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ； (32)芫荽油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(33)月桂油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(34)松節(jié)油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L。(35)茴香油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(36)天竺葵油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(37)柏木油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(38)芥茉油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(39)橙花油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(40)羅勒油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(41)葡萄柚油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L ；(42)樟腦油，其在培養(yǎng)基添加量是2μl-2ml/L。
4.如權(quán)利要求
2或3所述的一種開放式植物組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的植物精油抑菌劑還包括吐溫-20，單方或復(fù)合精油總體積與吐溫-20體積比為1. 8-2. 5:1。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種開放式植物組織培養(yǎng)方法，其在培養(yǎng)基中添加揮發(fā)性植物精油抑菌劑，免去高壓消毒程序，在室內(nèi)開放環(huán)境接種；將培養(yǎng)材料置于滿足植物組織培養(yǎng)的溫度、光照條件的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明的揮發(fā)性抑菌劑在對(duì)培養(yǎng)基本身消毒的同時(shí)，也能對(duì)瓶內(nèi)空間進(jìn)行消毒，使培養(yǎng)物處在較為無菌的環(huán)境生長，降低培養(yǎng)物污染概率；本發(fā)明采用的抑菌劑在培養(yǎng)基添加量小(總使用量為2μl-2ml/L培養(yǎng)基)，對(duì)培養(yǎng)基滲透壓沒有影響；本發(fā)明成分對(duì)人體無毒；添加量少，無不適刺激味。
文檔編號(hào)A01H4/00GKCN102986526SQ201110343100
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2011年11月2日
發(fā)明者劉福平 申請(qǐng)人:福建省亞熱帶植物研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan