本發(fā)明涉及殺蟲(chóng)劑，具體涉及一種紅火蟻觸殺殺蟲(chóng)劑及氟蟲(chóng)腈在滅殺紅火蟻中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：紅火蟻(s.invicta)是最具有入侵性的社會(huì)性昆蟲(chóng)，已經(jīng)被國(guó)際上列為最具入侵性和破壞性的百種外來(lái)有害生物之一。紅火蟻食性復(fù)雜、習(xí)性兇猛、繁殖迅速、競(jìng)爭(zhēng)力強(qiáng)，能造成重大經(jīng)濟(jì)損失、社會(huì)危害和環(huán)境影響，紅火蟻的雜食性和攻擊性使其不僅是一種經(jīng)濟(jì)害蟲(chóng)，還威脅到公眾健康?；瘜W(xué)防治措施仍然是防治紅火蟻有效措施，但仍然不能根除紅火蟻。而且長(zhǎng)期用化學(xué)藥劑對(duì)紅火蟻進(jìn)行控制，會(huì)導(dǎo)致意想不到的反彈。氟蟲(chóng)腈(商品名：銳勁特)英文通用名稱為fipronil，是原法國(guó)羅納-普朗克公司于1981年開(kāi)發(fā)的苯基吡唑類新型廣譜性殺蟲(chóng)劑，化學(xué)名稱：(±)-5-氨基-1-(2，6-二氯-4，4，4-三氟甲苯基)-4-三氟甲基亞硫?；?3-氰基吡唑。氟蟲(chóng)腈能與γ-氨基丁酸受體結(jié)合，有效阻塞昆蟲(chóng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的γ-氨基丁酸調(diào)節(jié)的氯離子通道，干擾昆蟲(chóng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起昆蟲(chóng)神經(jīng)和肌肉的過(guò)度興奮直至死亡。作為控制作物害蟲(chóng)的殺蟲(chóng)劑，氟蟲(chóng)腈活性高，殺蟲(chóng)譜廣，有觸殺、胃毒和內(nèi)吸作用，對(duì)鱗翅目、同翅目、半翅目、纓翅目和直翅目，鞘翅目和膜翅目的多種害蟲(chóng)有優(yōu)良的防效。氟蟲(chóng)腈由于具有獨(dú)特的作用機(jī)制，可有效地控制對(duì)有機(jī)磷、氨基甲酸酯、擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗性的害蟲(chóng)。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)一些害蟲(chóng)對(duì)氟蟲(chóng)腈產(chǎn)生一定程度的抗性。kolaczinski等(2001)用who套裝試劑對(duì)5個(gè)品系的按蚊進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)其中兩個(gè)品系對(duì)氟蟲(chóng)腈具有抗性。氟蟲(chóng)腈在動(dòng)物、植物、環(huán)境中代謝生成毒性與氟蟲(chóng)腈相當(dāng)或毒性更高的砜化物或亞砜化合物。在動(dòng)物體內(nèi)通過(guò)吸收、代謝、排泄以和水解、光解等作用，廣泛分布于動(dòng)物的組織中，特別是在脂肪組織中含量較高。主要的排出途徑是通過(guò)糞便。具體途徑如下：氟蟲(chóng)腈在動(dòng)物體內(nèi)的代謝途徑。毒死蜱(chlorpyrifos)是一種高效、廣譜的有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑，具有觸殺、胃毒和熏蒸作用，可用于防治螟蟲(chóng)、卷葉蟲(chóng)、粘蟲(chóng)、介殼蟲(chóng)、蚜蟲(chóng)、棉鈴蟲(chóng)、葉蟬和紅蜘蛛等害蟲(chóng)毒死蜱對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性作用，在動(dòng)物體內(nèi)能夠轉(zhuǎn)換為比其本身毒性強(qiáng)3000倍的氧化毒死蜱。在水、空氣、土壤、植物和動(dòng)物體內(nèi)的初級(jí)代謝物對(duì)雞胎盤(pán)比毒死蜱毒性高2-3倍。而且毒死蜱和tcp(3，5，6-三氯-2-吡啶酚)有可能存在協(xié)同效應(yīng)。毒死蜱殺蟲(chóng)劑與細(xì)胞色素p450單氧化酶誘導(dǎo)研究多集中于魚(yú)類、人類和小鼠中(wheelockandeder,2005；cuietal.,2008；lee,2009)，在昆蟲(chóng)中，而對(duì)細(xì)胞色素p450單氧化酶的研究尚少。最近，于榮榮等(2013)用毒死蜱誘導(dǎo)東亞飛蝗，結(jié)果顯示，cyp4g62能被高劑量毒死蜱顯著誘導(dǎo)，cyp9aq1經(jīng)毒死蜱處理后，在低、中和高濃度均被顯著誘導(dǎo)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種紅火蟻觸殺殺蟲(chóng)劑及氟蟲(chóng)腈在滅殺紅火蟻中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種紅火蟻觸殺殺蟲(chóng)劑，其有效成分是氟蟲(chóng)腈、辛硫磷和或毒死蜱。本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)包括：其有效成為是濃度為0.15-0.36μg/ml的辛硫磷或0.26-0.55μg/ml的氟蟲(chóng)腈或0.34-0.64μg/ml的毒死蜱。所述的紅火蟻觸殺殺蟲(chóng)劑是將有效成分溶解于丙酮中制得。其有效成分是濃度不低于15.168μg/ml氟蟲(chóng)腈。本發(fā)明的另一目的在于提供了氟蟲(chóng)腈在滅殺紅火蟻中的應(yīng)用。所述的應(yīng)用，是含有氟蟲(chóng)腈的殺蟻餌劑被紅火蟻工蟻取食，當(dāng)餌劑被紅火蟻帶進(jìn)巢內(nèi)后，通過(guò)工蟻在巢內(nèi)的頻繁活動(dòng)和交哺喂食行為，將藥劑傳遞到巢內(nèi)的工蟻、幼蟻和蟻后，引起全巢紅火蟻中毒死亡。本發(fā)明制備簡(jiǎn)單，使用方便，滅殺效果好。附圖說(shuō)明圖1是bsa蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2.是不同濃度對(duì)硝基苯酚的吸光度具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1紅火蟻的防治方法很多，其中化學(xué)防治技術(shù)是最有效、最深入、應(yīng)用最為廣泛的防治方法。餌劑的撒播是紅火蟻大面積防治最有效的和持效的方式，灌巢(mounddrench)也是和時(shí)、有效、快速防治紅火蟻的有效方法之一。本申請(qǐng)選擇7種不同類型的殺蟲(chóng)劑對(duì)紅火蟻的觸殺毒力測(cè)定，明確不同藥劑對(duì)紅火蟻的毒力差異和不同等級(jí)紅火蟻(蟻后和工蟻)對(duì)藥劑的敏感度差異。試驗(yàn)材料試蟲(chóng)和材料供試紅火蟻采自廣東省廣州增城和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)校園。參照kuriachan等(2000)方法，用大塑料桶從田間采回紅火蟻蟻群，放置1-2d，待蟻群在桶內(nèi)建立了新的群落后，將自來(lái)水緩慢滴入桶內(nèi)，令紅火蟻從群落中自動(dòng)上移、浮出。用40目的撈網(wǎng)將蟻群轉(zhuǎn)入盆口涂以爽身粉的塑料盆(7.0l)中，在室內(nèi)(室溫25℃,rh65％-80％)用人工飼料飼養(yǎng)一周后供試驗(yàn)用(曾鑫年等,2006)。工蟻、兵蟻、有翅雄蟻、有翅雌蟻和蟻后和幼蟻的判斷標(biāo)準(zhǔn)參考曾玲等(2005)方法。供試藥劑藥劑96％毒死蜱原粉chlorpyrifos；95％高效氯氰菊酯原藥beta-cypermethrin；91％辛硫磷乳油phoxim；96％毒死蜱chlorpyrifos；97％吡蟲(chóng)啉imidacloprid；90％氟蟲(chóng)腈fipronil；95％高效氯氟氰菊酯ambda-cyhalothrin；97.2％啶蟲(chóng)咪acetamiprid；96.2％多殺菌素spinosad；93.7％阿維菌素abamectin。生化試劑考馬斯亮藍(lán)g-250，coomassiebrilliantblueg250；牛血清蛋白(bsa)，bovineserumalbumin；分析試劑和有機(jī)溶劑磷酸氫二鈉，disodiumhydrogenphosphate，分析純；磷酸二氫鈉，sodiumdihydrogenphosphate，分析純；氫氧化鈉，sodiumhydroxide，分析純；醋酸，acetate，分析純；醋酸鈉，sodiumacetate，分析純；碳酸鈉，sodiumcarbonate，分析純；碳酸氫鈉，sodiumblcarbonate，分析純；鹽酸，hydrochloricacid，分析純；丙酮，acetone，分析純。主要儀器設(shè)備光照培養(yǎng)箱(lrh-300-gh)；電子天平(bs2190s，精確度0.1mg)；紫外分光光度計(jì)(uv-9100型)；微量點(diǎn)滴儀(hma0807140)；高速冷凍離心機(jī)(mikro22r型)；微量注射器(1-5μl)；水浴鍋(hh.s21-4型)；hoshizaki制冰機(jī)(fm-120ee)；kh-500超聲波清洗器。試驗(yàn)方法觸殺毒力測(cè)定藥膜法:將原藥溶解于適量丙酮中配成一系列濃度的藥劑，移取1ml經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)后的丙酮藥液至口徑、底徑、高分別為6.6、4.4和6.8cm的一次性塑料水杯中，水杯的涂藥面積為72.85cm2，轉(zhuǎn)動(dòng)水杯使藥液均勻涂布于內(nèi)壁，待丙酮揮發(fā)干后，倒置水杯，在杯口涂抹適量爽身粉，隨機(jī)挑選10頭蟻后或50頭工蟻于杯中。每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，空白對(duì)照為丙酮。觀察記錄24h和48h后的死亡蟻數(shù)，計(jì)算死亡率。按幾率值法和最小二乘法求取毒力回歸方程，計(jì)算致死中濃度(lc50)值。點(diǎn)滴法：將原藥溶解于適量丙酮中配成一系列濃度的藥劑，挑選蟻后、有翅雌蟻各10頭、工蟻30頭，用微量點(diǎn)滴儀移取1μl經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)后的上述濃度的藥液，點(diǎn)滴于試蟲(chóng)前胸背板，置于一次性塑料水杯中，在杯口涂抹適量爽身粉，以小棉球供應(yīng)10％的蔗糖水，每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，對(duì)照用丙酮點(diǎn)滴。觀察記錄24h死亡蟲(chóng)數(shù)，按(2.1)和(2.2)分別計(jì)算死亡率(％)和校正死亡率(％)。結(jié)果統(tǒng)計(jì)用spss(軟件統(tǒng)計(jì)處理，求出毒力回歸方程和lc50和lc90。統(tǒng)計(jì)分析方法生物測(cè)定數(shù)據(jù)均采用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件polo進(jìn)行分析，應(yīng)用microsoftexcel2010軟件整理和運(yùn)用graphpadinstat軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(one-wayanovaandtukey’stest,p<0.05)。結(jié)果與分析種殺蟲(chóng)劑對(duì)紅火蟻工蟻觸殺毒力作用室內(nèi)條件下，采用藥膜法測(cè)定7種殺蟲(chóng)劑對(duì)紅火蟻工蟻24h觸殺毒力試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2-1。結(jié)果顯示，辛硫磷對(duì)工蟻的lc50和lc90分別為：0.15和0.36μg/ml，高效氯氟氰菊酯對(duì)工蟻的lc50和lc90分別為：0.24和0.38μg/ml；氟蟲(chóng)腈對(duì)工蟻的lc50和lc90分別為：0.26和0.55μg/ml；毒死蜱對(duì)工蟻的lc50和lc90分別為：0.34和0.64μg/ml；吡蟲(chóng)啉對(duì)工蟻的lc50和lc90分別為：663.46和877.43μg/ml；多殺菌素對(duì)工蟻的lc50和lc90分別為：1068.90和1351.11μg/ml。這表明，紅火蟻工蟻對(duì)大多殺蟲(chóng)劑較敏感，所試7種藥劑中有5種殺蟲(chóng)劑處理24h的lc50值低于0.5μg/ml；多殺菌素觸殺毒力雖不和上述四種農(nóng)藥，但相對(duì)較好，只有阿維菌素的觸殺毒力最弱。氟蟲(chóng)腈，辛硫磷和毒死蜱也具有良好的觸毒殺活性。表2-1.7種殺蟲(chóng)劑對(duì)紅火蟻工蟻的觸殺毒力(1.6mg/頭)χ2(df)：卡方值(自由度)。氟蟲(chóng)腈對(duì)工蟻和蟻后的觸殺毒力室內(nèi)條件下，采用點(diǎn)滴法測(cè)定氟蟲(chóng)腈紅火蟻工蟻與蟻后的24h觸殺毒力試驗(yàn)結(jié)果(表2-2)可見(jiàn)，氟蟲(chóng)腈對(duì)工蟻與蟻后的lc50分別為5.12和15.168μg/ml。氟蟲(chóng)腈對(duì)紅火蟻工蟻與蟻后個(gè)體對(duì)藥劑的敏感性差異很大，毒力可以相差2-3倍左右。表2-2.氟蟲(chóng)腈對(duì)紅火蟻工蟻和蟻后的觸殺毒力χ2(df)：卡方值(自由度)。小結(jié)室內(nèi)條件下，采用藥膜法測(cè)定7種殺蟲(chóng)劑對(duì)紅火蟻工蟻24h觸殺毒力。結(jié)果顯示，紅火蟻工蟻對(duì)大多殺蟲(chóng)劑較敏感，所試7種藥劑中有5種殺蟲(chóng)劑處理24h的lc50值低于0.5μg/ml；多殺菌素觸殺毒力雖不如上述四種農(nóng)藥，但效果相對(duì)較好，只有阿維菌素的觸殺毒力最弱。氟蟲(chóng)腈，辛硫磷和毒死蜱也具有良好的觸毒殺活性。同時(shí)采用點(diǎn)滴法測(cè)定氟蟲(chóng)腈對(duì)紅火蟻工蟻與蟻后的24h觸殺毒力試驗(yàn)，結(jié)果顯示，氟蟲(chóng)腈對(duì)工蟻與蟻后的lc50分別為4.604和15.168μg/ml。氟蟲(chóng)腈對(duì)紅火蟻工蟻與蟻后個(gè)體對(duì)藥劑的敏感性差異很大，毒力可以相差2-3倍。蟻后較工蟻表現(xiàn)出一定的耐藥性。實(shí)施例2細(xì)胞色素p450(cytochromep450，簡(jiǎn)稱p450)是多功能氧化酶系的核心部分，在整個(gè)酶系的氧化代謝中起著末端氧化的作用(邱立紅等,1999；isinandguengerich,2007)。p450能夠參與昆蟲(chóng)體內(nèi)多種外源物質(zhì)和內(nèi)源物質(zhì)的代謝。細(xì)胞色素p450活性測(cè)定常用以下幾種方法：1.o-脫乙基法：通過(guò)7-乙氧基香豆素脫乙基酶(7-ethoxycoumarino-deacthylase，ecod)的活性表征細(xì)胞色素p450酶系的活性。7-乙氧基香豆素(7-ethoxycoumarin)脫乙基作用后轉(zhuǎn)化成7-羥基香豆素(7-hydroxycoumarin)后熒光值可產(chǎn)生變化(激發(fā)波長(zhǎng)368nm，發(fā)射波長(zhǎng)456nm)，利用熒光分光光度計(jì)，測(cè)7-羥基香豆素生成量產(chǎn)生的熒光值的變化表征細(xì)胞色素p450的活性(ullrich,1972；aitio,1978)。2.o-脫甲基法：利用對(duì)硝基苯甲醚(p-nitroanisole)在細(xì)胞色素p450的o-脫甲基作用下生成對(duì)硝基苯酚(p-nitrophenol)，可用分光光度計(jì)(fredandandhodgson,1980)檢測(cè)堿性條件下p-nitrophenol在405nm處的吸收峰。艾國(guó)民建立用乙酸乙酯/正己烷作為終止劑和萃取劑，通過(guò)高效液相色譜梯度洗脫，分析對(duì)硝基苯酚的生成量，顯著提高了測(cè)試的靈敏度和分辨度(艾國(guó)民等,2009)；3.艾氏劑環(huán)氧化法(aldrinepoxidation,ae)：在細(xì)胞色素p450環(huán)氧化作用下艾氏劑生成狄氏劑，然后再通過(guò)氣相色譜檢測(cè)狄氏劑的量，從而測(cè)定細(xì)胞色素p450的活性(hammocketal.,1975；yuetal.,1982)。本申請(qǐng)采用p450o-脫甲基法測(cè)定紅火蟻p450的酶活性，以對(duì)硝基苯甲醚(p-nitroanisole)為底物，探究紅火蟻工蟻與蟻后p450酶活性差異以和殺蟲(chóng)劑對(duì)紅火蟻細(xì)胞色素p450o-脫甲基活性的誘導(dǎo)作用。明確了外源化合物對(duì)紅火蟻工蟻p450酶活性誘導(dǎo)的時(shí)間效應(yīng)和劑量效應(yīng)，從而為進(jìn)一步研究紅火蟻的耐藥性機(jī)制和紅火蟻的科學(xué)治理提供理論依據(jù)。材料與方法供試蟲(chóng)源和飼養(yǎng)同實(shí)施例1?；瘜W(xué)試劑nadph(98％純度)、牛血清白蛋白(bsa)；tris-base、二硫蘇糖醇(dtt，99％純度)；苯基硫脲(ptu)；苯基硫脲(ptu)；苯甲基磺酰氟(pmsf)；乙二胺四乙酸(edta)，7-乙氧基香豆素(7-ethoxycoumarin)、7-羥基香豆素(7-hydroxycoumarin)；對(duì)硝基苯甲醚，p-nitroanisole；對(duì)硝基苯酚p-nitrophenol；考馬斯亮藍(lán)g-250；乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid，edta)、甘氨酸(gly)、三氯乙酸(tca)、甘油、85％磷酸、丙酮、nah2po4和na2hpo4。實(shí)驗(yàn)儀器5417c/r型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(eppendorf，germany)；ls-55熒光分光光度計(jì)(perkinelmer，usa)；bio-40紫外-可見(jiàn)分光光度儀(perkinelmer，usa)；sartorius2004m電子天平(opton，13germany)；sph-100b型搖床；水浴鍋。實(shí)驗(yàn)方法選取發(fā)育整齊的紅火蟻工蟻成蟲(chóng)若干頭，分別用氟蟲(chóng)腈lc50(0.25μg/ml)、毒死蜱lc50(0.34μg/ml)處理，用丙酮處理作為對(duì)照。放入涂有藥膜的一次性塑料杯中，置于環(huán)境條件為溫度26±2℃、相對(duì)濕度50％-60％、光周期16h：8h(l：d)的溫室內(nèi)，分別在處理后24、48、72和96h取樣，保存于-80℃冰箱中用于測(cè)定p-nao-脫甲基活性。p450酶活性測(cè)定酶液的制備參照于彩虹等(2002)的方法并稍作修改，取紅火蟻若干，按60頭/ml比例加入一定量的0.1mol/l、ph7.5的磷酸鹽緩沖液(含1mmol/ledta、1mmol/lpmsf、1mmol/ldtt和10％甘油)勻漿，4℃，10800rpm離心20min，用脫脂棉過(guò)濾上清液作為酶液，用于p-nao-脫甲基活性和蛋白含量的測(cè)定。p-nao-脫甲基活性測(cè)定參照yu等(1992)并加以改進(jìn)、反應(yīng)：取375μl2mmpna、30μl9.6mmnadph，和345μl的粗酶源混合，34℃暴露在空氣中水浴30min，在酶標(biāo)板中加入200μl的反應(yīng)液，在405nm處測(cè)定吸光度。以對(duì)硝基苯酚量計(jì)算生成的結(jié)果，酶活力單位為：μmol/pro(mg)/30min。對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線制作1、10-5mol/l對(duì)硝基苯酚溶液：精確稱取0.03478g對(duì)硝基苯酚溶于2.5ml的乙醇中，待用時(shí)再用乙醇稀釋10000倍即可。2、0.5mol/lnaoh溶液：精確稱取0.1gnaoh完全溶解于5ml的蒸餾水中。3、按0,20,40,80,120,160,200μl的標(biāo)準(zhǔn)將10-5mol/l對(duì)硝基苯酚溶液分別加入到酶標(biāo)板孔中，不足250μl，用0.5mol/lnaoh溶液補(bǔ)平。每個(gè)濃度至少重復(fù)3次。4、在a405處用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度(od值)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。蛋白含量測(cè)定參照bradford(1976)的考馬斯亮藍(lán)g-250的方法，用牛血清白蛋白(bsa)制作蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。將試管分成7組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，建立3ml的反應(yīng)體系(如表3-1)。表3-1.蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定table3-1.themethodofproteinstandardcurve2.5mlg-250+0.5ml測(cè)定液液混勻，室溫放置5min，用紫外-可見(jiàn)分光光度儀測(cè)定595nm處吸光值。以od值為橫坐標(biāo)，bsa濃度為縱坐標(biāo)做出蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定酶液蛋白含量時(shí)，將原酶液稀釋30-50倍，同樣采用3ml的反應(yīng)體系，其中酶液0.5ml，g-2502.5ml，室溫反應(yīng)5min后測(cè)定595nm處吸光值，根據(jù)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出酶液中的蛋白含量。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析根據(jù)比活力公式計(jì)算紅火蟻對(duì)硝基苯甲醚(p-nitroanisole)在細(xì)胞色素p450的o-脫甲基作用的活性：比活力(μmol/min/mgpro.)＝(od×v總/(t×pro.×v酶)其中，od為反應(yīng)產(chǎn)物對(duì)硝基苯酚(p-nitrophenol)(μmol/ml)在405nm處的吸光值；v總為反應(yīng)總體積(ml)；t為反應(yīng)時(shí)間(min)；pro.為原酶液蛋白含量(mg/ml)；v為反應(yīng)酶液體積(ml)。結(jié)果與分析蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果如圖1所示。牛血清蛋白含量(μg/ml)為自變量(x)，以od595值為因變量(y)，擬合蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y＝0.0067x+0.1154，r2＝0.9948，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的回歸關(guān)系進(jìn)行t檢驗(yàn),表現(xiàn)為差異顯著。對(duì)硝基苯酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果如圖2所示。以對(duì)硝基苯酚的濃度值(nmol/l)作自變量(x)，od400值作因變量(y)，擬合對(duì)硝基苯酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y＝3.18×10-2+1.41×10-2x，r2＝0.9996，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的回歸關(guān)系進(jìn)行t檢驗(yàn)，表現(xiàn)為差異顯著。不同等級(jí)紅火蟻(蟻后和工蟻)細(xì)胞色素p450o-脫甲基酶活性紅火蟻不同等級(jí)(蟻后和工蟻)細(xì)胞色素p450o-脫甲基酶測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3-2.，紅火蟻蟻后細(xì)胞色素p450o-脫甲基酶活性低于工蟻且差異顯著，其比活力分別為3.23和5.35μmol/mg/pro/30min，相差1.66倍。表3-2.不同等級(jí)紅火蟻(蟻后和工蟻)細(xì)胞色素p450o-脫甲基酶活性測(cè)定table3-2.thespecificactivitiesofcytochromep450ofdifferentcastesofs.invicta注：表中數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(μmol/mg/30minprotein)，同列中不同小寫(xiě)字母表示不同處理差異顯著(anova,p＜0.05)，括號(hào)內(nèi)數(shù)值為工蟻與蟻后組的比值.note:theresultsareshownasmean±s.e(μmol/mg/30minprotein)；differentlowercaselettersinthesamecolumnmeansignificantdifference(anova,p＜0.05),datainbracketdenotefoldbetweenworkers/queens.氟蟲(chóng)腈和毒死蜱對(duì)紅火蟻p450活性誘導(dǎo)作用采用藥膜法用氟蟲(chóng)腈lc50和毒死蜱lc50分別處理紅火蟻工蟻，測(cè)定的細(xì)胞色素p450活性結(jié)果見(jiàn)表3-3.。紅火蟻工蟻p450活性結(jié)果顯示，24h時(shí)，氟蟲(chóng)腈處理組和毒死蜱處理組p450活性顯著高于對(duì)照組，分別為對(duì)照組的1.97倍和1.71倍；48h時(shí)，兩處理組p450活性明顯達(dá)到最高值，分別為對(duì)照組的3.00倍和1.96倍；72h時(shí)，兩處理組p450活性均降低，毒死蜱處理組降低更為明顯，分別為對(duì)照組的2.43倍和1.27倍。96h時(shí)，兩處理組p450活性仍然高于對(duì)照組，分別為對(duì)照組的2.26倍和1.12倍，毒死蜱處理組p450活性基本與對(duì)照組相平。表3-3.氟蟲(chóng)腈lc50(0.05μg/ml)和毒死蜱lc50(0.15μg/ml)理后的紅火蟻(1.25mg/頭)p450活性注：表中數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(μmol/mg/30minprotein)，同一時(shí)間點(diǎn)不同小寫(xiě)字母表示不同處理差異顯著(anova,p＜0.05)，括號(hào)內(nèi)數(shù)值為同一時(shí)間點(diǎn)處理組與對(duì)照組的比值.小結(jié)紅火蟻不同等級(jí)(蟻后和工蟻)細(xì)胞色素p450o-脫甲基酶測(cè)定結(jié)果顯示，紅火蟻蟻后細(xì)胞色素p450o-脫甲基酶活性低于工蟻且差異顯著，其比活力分別為3.23μmol/mg/pro/30min和5.35μmol/mg/pro/30min，相差1.66倍?？赡芤?yàn)榧t火蟻蟻后與工蟻功能的不同，蟻后是整個(gè)蟻巢的中心，負(fù)責(zé)調(diào)控蟻群種群數(shù)量，性別比例等，很少出去蟻巢外活動(dòng)，而工蟻經(jīng)常出去從事覓食等活動(dòng)，很容易接觸到外源化合物而使解毒代謝酶含量升高。顯示了細(xì)胞色素p450在工蟻對(duì)藥物解毒代謝功能的重要性。采用藥膜法用氟蟲(chóng)腈lc50和毒死蜱lc50分別處理紅火蟻工蟻，測(cè)定的細(xì)胞色素p450活性顯示，24h時(shí)，氟蟲(chóng)腈處理組和毒死蜱處理組p450活性顯著高于對(duì)照組，分別為對(duì)照組的1.97倍和1.71倍；48h時(shí)，兩處理組p450活性明顯達(dá)到最高值，分別為對(duì)照組的3.00倍和1.96倍；72h時(shí)，兩處理組p450活性均降低特別毒死蜱處理組明顯下降，分別為對(duì)照組的2.43倍和1.27倍。96h時(shí)，兩處理組p450活性仍然高于對(duì)照組，分別為對(duì)照組的2.26倍和1.12倍，毒死蜱處理組p450活性基本與對(duì)照組相平。從整體看，相對(duì)于毒死蜱，氟蟲(chóng)腈對(duì)紅火蟻有較好的觸殺和誘導(dǎo)作用，且具有持久性。氟蟲(chóng)腈是一種含氟吡唑類殺蟲(chóng)劑，活性高、殺蟲(chóng)譜廣，美國(guó)環(huán)境保護(hù)組織將氟蟲(chóng)腈定為可代替有機(jī)磷類防治螞蟻的一種藥劑(u.s.epa,2000)。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)室研究表明，氟蟲(chóng)腈殺蟻餌劑對(duì)紅火蟻具有優(yōu)良的胃毒作用，紅火蟻工蟻取食，當(dāng)餌劑被紅火蟻帶進(jìn)巢內(nèi)后，通過(guò)工蟻在巢內(nèi)的頻繁活動(dòng)和交哺喂食行為，將藥劑傳遞到巢內(nèi)的工蟻、幼蟻和蟻后，引起全巢紅火蟻中毒死亡，達(dá)到滅殺紅火蟻蟻巢的目的。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其等效物界定。當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12