本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)植物種植領(lǐng)域，具體涉及一種防治柑橘黃龍病的方法及試劑套裝。

背景技術(shù)：

黃龍病是一種廣泛蔓延、且危害極大的柑橘病害，廣泛發(fā)生在40多個(gè)國家和地區(qū)，主要分布在亞洲、大洋洲、非洲、和美洲。美國、佛羅里達(dá)州、柑桔生產(chǎn)的主要基地，黃龍病嚴(yán)重爆發(fā)，約50%以上的柑橘樹被感染了柑橘黃龍病。黃龍病病原是由柑橘木虱Diaphorina citri傳播的，病原菌主要存在于柑橘樹的韌皮部，結(jié)果如黃脈硬化癥狀，柑橘樹葉片發(fā)生斑駁和黃化，有時(shí)會(huì)被認(rèn)為是鋅或鎂缺乏。染病植物的典型癥狀包括黃脈硬化、斑塊和斑點(diǎn)、黃化葉和果實(shí)小，根部發(fā)黑腐爛果實(shí)不能成熟，且果實(shí)為苦和酸性，經(jīng)濟(jì)價(jià)值大大降低，給果農(nóng)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前砍除黃龍病病樹、化學(xué)農(nóng)藥防止柑橘木虱和培養(yǎng)無毒苗是控制柑桔黃龍病發(fā)生的主要防治措施，在世界范圍內(nèi)，黃龍病給柑橘果農(nóng)產(chǎn)生的損失高達(dá)上千萬，極大地威脅著柑橘產(chǎn)業(yè)，這引起了世界各國政府的強(qiáng)烈關(guān)注。

在中國，黃龍病發(fā)病日趨嚴(yán)重，究其原因，柑橘果園中速效氮肥的大量使用造成土壤酸化是導(dǎo)致黃龍病爆發(fā)力度逐年上述的主要原因之一，據(jù)數(shù)據(jù)調(diào)查顯示，大多數(shù)柑橘品種需要在pH5-7條件下才能較好的生長(zhǎng)，而近幾年柑橘果園氮肥的使用量約每公頃525公斤，且逐年增加，相比30年前使用量增加一倍之多，過度使用氮肥導(dǎo)致柑橘果園土壤酸化，廣西、江西和湖南的柑桔園土壤pH為4.5-5.5，這大大影響了柑橘樹的生長(zhǎng)環(huán)境；另一方面，研究表明柑橘樹對(duì)氮，鐵，鋅，和B的吸收的最佳pH為6。在酸性條件下（pH5.0以下），B、Zn、Mg元素不能被有效吸收，由于柑橘不能有效吸收所需的元素從而導(dǎo)致柑橘葉片黃化，根系活力下降，導(dǎo)致植物發(fā)育較差，并減少從土壤中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而導(dǎo)致柑橘黃龍病常常與缺素癥同時(shí)發(fā)生。上述諸多原因造成柑橘黃龍病日趨嚴(yán)重，其帶來的損失也急速加大，在中國江西，果園有30%的柑橘樹被黃龍病所感染，并要求砍除。在中國湖南，黃龍病造成了巨大的損失已達(dá)30-50%。

目前，防止或控制柑桔黃龍病的主要方法是砍樹、殺滅木虱和無毒苗，但這些措施具有諸多弊端，砍樹一方面給果農(nóng)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，且并不能有效根除黃龍病及致病菌，還存在二次污染；殺滅木虱場(chǎng)用到許多化學(xué)除蟲劑，對(duì)環(huán)境、植株及果實(shí)造成惡劣影響，嚴(yán)重時(shí)影響食品安全，且對(duì)于已染病的果實(shí)植株效果甚微，經(jīng)濟(jì)損失仍然很大；無毒苗近些年受熱捧，是柑橘產(chǎn)業(yè)的一大喜訊，但無毒苗并不抗病，只代表苗木在出圃時(shí)無毒無病，對(duì)栽培環(huán)境的要求很高，并不能有效防治黃龍病的感染。隨著人們對(duì)黃龍病發(fā)病原因了解的深入，用生石灰調(diào)節(jié)土壤pH值是改善土壤酸化的傳統(tǒng)方法。CN 104255351 B 的專利文獻(xiàn)公開了一種防治柑橘黃龍病的方法，用生石灰進(jìn)行消毒和調(diào)節(jié)土壤pH 值為5.5 ～ 7.5，配合采用含有甲殼素和稀土的有機(jī)水溶性肥、含有甲殼素、稀土元素的葉面肥與有機(jī)硅的混合液和含芽孢桿菌的生物肥來進(jìn)行治理柑橘黃龍病，其中所涉及的肥料諸多，步驟繁瑣，經(jīng)過一年時(shí)間的治理，發(fā)病樹體只有一半恢復(fù)健康，其治理效果較差，投入與挽回的經(jīng)濟(jì)損失相差無幾，不適于大面積推廣。

因此，開發(fā)新的、效果良好的防治柑橘黃龍病的方法及產(chǎn)品是挽救柑橘行業(yè)亟待解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決目前黃龍病防治方法匱乏、操作復(fù)雜、效果低微的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種防治柑橘黃龍病的方法及試劑套裝，通過以生石灰調(diào)節(jié)土壤酸度，配合使用有機(jī)生物菌肥，改良土壤結(jié)構(gòu)和質(zhì)量，進(jìn)一步借助其生物菌配合植物免疫誘導(dǎo)劑促進(jìn)柑橘植株根系活力、提高柑橘抗病性，從而高效、綠色防治柑橘黃龍病，促進(jìn)柑橘植株健康生長(zhǎng)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案一是：

一種防治柑橘黃龍病的方法，所述方法包括以下步驟；

A、按照50-150kg/畝的使用量將生石灰施加至柑橘果園的土壤；

B、按照100-250kg/畝的使用量向柑橘果園的土壤中施加含有微生物菌的有機(jī)肥料；

C、每30-40天向柑橘植株噴霧或灌根植物免疫誘導(dǎo)劑一次，使用量100-150g/畝，連續(xù)使用3-5次。

優(yōu)選的，所述步驟A中將生石灰施加至柑橘果園的土壤，施加一次使土壤pH值提高0.5-1.0，施加兩次最終使土壤pH值提高至6.0-6.5。

優(yōu)選的，所述步驟B向柑橘果園的土壤中施加含有微生物菌的有機(jī)肥料時(shí)，按微生物菌0.5-1.5×10⁹cfu/畝添加至有機(jī)肥料中攪拌均勻而成。

優(yōu)選的，所述微生物菌包括木霉菌和側(cè)孢芽胞桿菌，所述木霉菌和側(cè)孢芽胞桿菌的數(shù)量比為1：1-3。

優(yōu)選的，所述植物免疫誘導(dǎo)劑為有效成分極細(xì)鏈格孢激活蛋白含量3wt.%的可濕性粉劑。

本發(fā)明還提供一種防治柑橘黃龍病的試劑套裝，所述試劑盒中包括以下質(zhì)量份數(shù)的試劑，試劑一為生石灰，試劑二為含有芽孢桿菌的有機(jī)肥料，試劑三為植物免疫誘導(dǎo)劑，其中，所述試劑一、試劑二及試劑三的質(zhì)量份數(shù)比為5-40:10-25：0.03-0.1。

優(yōu)選的，所述含有微生物菌的有機(jī)肥料中微生物菌含量為0.5-1.5×10⁹cfu/100-250kg。

優(yōu)選的，所述微生物菌包括木霉菌和側(cè)孢芽胞桿菌。

更有選的，所述微生物菌由數(shù)量比為1：1-3的木霉菌和側(cè)孢芽胞桿菌組成。

優(yōu)選的，所述植物免疫誘導(dǎo)劑為有效成分極細(xì)鏈格孢激活蛋白含量3wt.%的可濕性粉劑。

上述技術(shù)方案中，提供了一種防治柑橘黃龍病的方法及配套的試劑套裝，所述試劑套裝中包括以下質(zhì)量份數(shù)的試劑，試劑一為生石灰，試劑二為含有微生物菌的有機(jī)肥料，試劑三為植物免疫誘導(dǎo)劑，所述試劑一、試劑二及試劑三的質(zhì)量份數(shù)比為5-40:10-25：0.03-0.1。應(yīng)用該試劑套裝用于防治黃龍病時(shí)，首先，按照50-150kg/畝的使用量將生石灰施加至柑橘果園的土壤，施加生石灰可以改善土壤酸化的狀況，將土壤pH由5以下提高至6.0-6.5，可以提升根系活力，促進(jìn)B、Zn、Mg元素及土壤中營養(yǎng)物質(zhì)的有效吸收，為植物免疫系統(tǒng)的建立提供基礎(chǔ)，促進(jìn)柑橘葉片由黃轉(zhuǎn)綠，從而改善和緩解黃龍病植株的癥狀。進(jìn)一步的，按照100-250kg/畝的使用量向柑橘果園的土壤中施加含有微生物菌的有機(jī)肥料，通過施加含有微生物菌的有機(jī)肥料可以改善土壤的板結(jié)結(jié)構(gòu)、提高土壤有機(jī)質(zhì)和肥力，從而改善植物根系的生長(zhǎng)環(huán)境，大大提高植物的根系活力，另一方面還能調(diào)節(jié)土壤微生物菌群平衡，抑制有害菌群生長(zhǎng)，使得促進(jìn)植物生長(zhǎng)。每30-40天向柑橘植株噴霧或灌根植物免疫誘導(dǎo)劑一次，使用量100-150g/畝，連續(xù)使用3-5次，施加植物免疫誘導(dǎo)劑可以促進(jìn)植物產(chǎn)生水楊酸、茉莉酸和乙烯等物質(zhì)，進(jìn)而促進(jìn)植保素、抗病相關(guān)蛋白和酚類有機(jī)物等抗菌、抗病毒物質(zhì)的合成，大大提高植物免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)能力，獲得系統(tǒng)抗性，還能夠促進(jìn)植物的生長(zhǎng)、代謝，提高植物葉綠素含量，達(dá)到提高植物抗多種病害免疫能力的效果。上述三種措施同步進(jìn)行，相互配合增效，通過生石灰改善土壤酸化程度，提升植株根系活力，配合施加含微生物菌的有機(jī)肥料和施加植物免疫誘導(dǎo)劑，抑制有害菌群的同時(shí)形成肥沃的土壤基礎(chǔ)，進(jìn)一步以發(fā)達(dá)根系吸收微量元素及營養(yǎng)物質(zhì)促進(jìn)植物生長(zhǎng)，促進(jìn)植物葉綠素增加，所吸收的微量元素及營養(yǎng)物質(zhì)在植物免疫誘導(dǎo)劑的作用下，使得植物免疫系統(tǒng)的防御能力大大提高，增強(qiáng)了植株抗病性，三種措施相輔相成，防治結(jié)合，標(biāo)本兼治，從而達(dá)到了染病植株快速恢復(fù)正常、染病風(fēng)險(xiǎn)高的植株免于感染。

本發(fā)明的有益效果是：（1）本發(fā)明提供的方法和試劑套裝，大大改善了土壤酸化程度，調(diào)節(jié)了土壤菌群，提高了植株根系活力和免疫能力，標(biāo)本兼治的使得染病植株高效、快速恢復(fù)正常、染病風(fēng)險(xiǎn)高的植株免于感染，提高了染病植株的治愈率，降低了黃龍病的發(fā)病率；（2）本發(fā)明方法易于操作，步驟簡(jiǎn)單，且對(duì)環(huán)境、對(duì)植物及果實(shí)無污染性，是綠色的、有機(jī)的，有效保證了產(chǎn)品質(zhì)量、品質(zhì)和食品安全及環(huán)境安全，適于大范圍推廣使用。

附圖說明

圖1 為實(shí)施例2中在第一次噴施植物免疫誘導(dǎo)劑十五天后空白對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組測(cè)定根系活力數(shù)據(jù)圖；

圖2A為感染黃龍病的柑橘植株生長(zhǎng)狀況圖（2016年4月10日照）；

圖2B為圖2A中感染黃龍病的柑橘植株以本發(fā)明提供的方法處理，在其第二次噴施植物免疫誘導(dǎo)劑后15天的生長(zhǎng)狀況圖；

圖2C為圖2A中感染黃龍病的柑橘植株以本發(fā)明提供的方法處理，第三次噴施植物免疫誘導(dǎo)劑后15天的生長(zhǎng)狀況圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供一種防治柑橘黃龍病的方法及試劑套裝，以下以具體實(shí)施例詳細(xì)說明，以便更好的理解本發(fā)明，所涉及試劑，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得，所涉及操作步驟，如無特殊說明，均為常規(guī)操作。

實(shí)施例1

本發(fā)明提供一種防治柑橘黃龍病的方法及試劑套裝，所述試劑套裝中包括以下質(zhì)量份數(shù)的試劑，試劑一為生石灰，試劑二為含有微生物菌的有機(jī)肥料，試劑三為植物免疫誘導(dǎo)劑，通過以生石灰調(diào)節(jié)土壤酸度和提高植株根系活力，配合使用含有微生物菌的有機(jī)肥料，一方面改良土壤結(jié)構(gòu)和質(zhì)量，還調(diào)節(jié)菌群平衡，抑制有害菌群，進(jìn)一步借助其生物菌配合植物免疫誘導(dǎo)劑促進(jìn)柑橘植株根系活力、提高柑橘果樹免疫系統(tǒng)的抗病性，從而高效、綠色防治柑橘黃龍病，促進(jìn)柑橘植株健康生長(zhǎng)。

具體的，所述試劑一生石灰、試劑二含有微生物菌的有機(jī)肥料及試劑三植物免疫誘導(dǎo)劑的質(zhì)量份數(shù)比為5-40:10-25：0.03-0.1。其中，有機(jī)肥料可為雞糞、牛羊馬糞或豆粕、棉粕等，一般控制其組成中有機(jī)質(zhì)占35-45wt.%、水分30-40 wt.%、氮磷鉀等無機(jī)微量微素20-30 wt.%。

含有微生物菌的有機(jī)肥料中微生物菌含量為0.5-1.5×10⁹cfu/100-250kg，適量的微生物菌可以改善土壤結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)土壤菌群平衡，抑制有害菌群，促進(jìn)植物根系對(duì)微量元素和營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率。

所述微生物菌包括木霉菌和側(cè)孢芽胞桿菌，木霉菌和側(cè)孢芽胞桿菌的數(shù)量比為1：1-3。木霉菌可產(chǎn)生多種對(duì)植物病原真菌、細(xì)菌及昆蟲具有拮抗作用的生物活性物質(zhì)，抑制、削弱和排除同一生長(zhǎng)環(huán)境中的灰霉病病原物，提高農(nóng)作物的抗逆性，還能誘導(dǎo)寄主植物產(chǎn)生自我防御系統(tǒng)獲得抗病性，增加根和苗的活力，促進(jìn)植物生長(zhǎng)和提高農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量；側(cè)孢芽胞桿菌分泌大量幾丁質(zhì)酶，抑制真菌類病害，同時(shí)分解有機(jī)質(zhì)，促進(jìn)肥料的吸收利用率，兩者科學(xué)合理配比，同時(shí)保證了對(duì)土壤的改良效果、抑制有害菌群的效果，還促進(jìn)了肥料吸收利用率，對(duì)植物自身免疫系統(tǒng)的建立有促進(jìn)作用。

所述植物免疫誘導(dǎo)劑為有效成分極細(xì)鏈格孢激活蛋白含量3wt.%的可濕性粉劑。極細(xì)鏈格孢激活蛋白是一種從微生物發(fā)酵后提煉的一種具有生物活性的、單一、穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，能刺激植物體自身酶活性的增加，從而刺激植物體自身代謝的調(diào)控，刺激植物體根莖葉的生長(zhǎng)，提高葉綠素含量，具體有以下作用：（1）促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)，增強(qiáng)根系吸收能力，從而提高作物產(chǎn)量；（2）仰制植物體內(nèi)外病原菌繁殖，減輕病蟲害；（3）增強(qiáng)植物新陳代謝，促進(jìn)光合作用和強(qiáng)化葉片保護(hù)膜，抵抗病原菌；（4）增強(qiáng)光合作用，提高化肥利用率；另一方面，該蛋白穩(wěn)定性好，易溶于水，在pH4~10穩(wěn)定，耐高溫，100℃沸水中煮30min仍然穩(wěn)定，自然光照下2d對(duì)效果不產(chǎn)生影響，常溫貯存2年穩(wěn)定，更保證了其效果的穩(wěn)定性和便于儲(chǔ)存，制劑形式可濕性粉劑，其中有效成分極細(xì)鏈格孢激活蛋白的含量為3wt.%，具體應(yīng)用中，我單位將該可濕性粉劑制成包裝的商品使用，商品名為阿泰靈，以1000-1500倍質(zhì)量的水分散后可以形成穩(wěn)定懸浮液用于噴霧或灌根。

本試劑套裝中科學(xué)合理的配制三種試劑的量和比例，以生石灰調(diào)節(jié)土壤酸度和提高植株根系活力，配合使用含有微生物菌的有機(jī)肥料，一方面改良土壤結(jié)構(gòu)和質(zhì)量，還調(diào)節(jié)菌群平衡，抑制有害菌群，進(jìn)一步借助其生物菌配合植物免疫誘導(dǎo)劑促進(jìn)柑橘植株根系活力、提高柑橘果樹免疫系統(tǒng)的抗病性，從而高效、綠色防治柑橘黃龍病，促進(jìn)柑橘植株健康生長(zhǎng)。

實(shí)施例2 本實(shí)施例通過詳細(xì)的實(shí)地實(shí)驗(yàn)證明本方法防治柑橘黃龍病的效果

本發(fā)明方法和試劑套裝防治柑橘黃龍病的田間對(duì)比試驗(yàn)

選定黃龍病發(fā)病程度相近、生長(zhǎng)狀況相似的果園，分別作為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組(標(biāo)號(hào)分別為A、B、C和D)和1個(gè)空白對(duì)照組（標(biāo)號(hào)CK），每組處理30株果樹，上述五組同時(shí)進(jìn)行如下處理：

CK組：常規(guī)管理，不作特別處理；

A組：按照50-150kg/畝的使用量將生石灰施加至柑橘果園的土壤，要求生石灰撒均勻，覆蓋整個(gè)處理區(qū)的地表；

B組：按照100-250kg/畝的使用量向柑橘果園的土壤中施加含有微生物菌的有機(jī)肥料。操作方法是沿果樹行間樹冠位置（滴水線）深挖直線溝或環(huán)狀溝，要求開溝深30cm，寬20-30cm，在溝內(nèi)均勻施加含有微生物菌的有機(jī)肥料，要求肥料施用保證均勻；

C組：按照100-150g/畝的使用量向柑橘植株噴霧或灌根植物免疫誘導(dǎo)劑，以后每隔30-40天連續(xù)再噴霧或灌根一次，連續(xù)使用3次，要求每次噴施以葉面均勻噴霧至有水珠滴落為準(zhǔn)；

D組：按照生石灰50-150kg/畝、含有微生物菌的有機(jī)肥料100-250kg/畝的使用量的使用量施加至柑橘果園的土壤，同時(shí)按照100-150g/畝的使用量向柑橘植株噴霧或灌根植物免疫誘導(dǎo)劑，以后每隔30-40天再噴霧或灌根一次植物免疫誘導(dǎo)劑，連續(xù)使用3次，要求與上述組分別相同。

進(jìn)行處理后，以植物免疫誘導(dǎo)劑噴施時(shí)間為準(zhǔn)，分別在第1次噴施后15天、第2次噴施后15天和第3次噴施后15天調(diào)查各個(gè)處理組果樹黃龍病的發(fā)病情況，并按照2.1各組病情指數(shù)和防治效果統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表1；在第3次噴施后15天各組隨機(jī)抽取6棵植株按照下述2.2TTC法測(cè)定根系活力。

2.1各組病情指數(shù)和防治效果

（1）柑橘黃龍病病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：

0級(jí)：全樹無??；

1級(jí)：果樹上有1~2個(gè)梢有斑駁黃化葉出現(xiàn)；

3級(jí)：部分側(cè)枝或主枝有斑駁黃化癥狀，癥狀枝占全樹的1/3以下；

5級(jí)：癥狀側(cè)枝或主枝占全樹的1/3以上和2/3以下；

7級(jí)：癥狀枝在2/3以上；

9級(jí)：全樹死亡。

（2）計(jì)算方法

1)病情指數(shù)病情指數(shù)= [∑(各級(jí)病株數(shù)×相對(duì)級(jí)別值)/(調(diào)查總株數(shù)×9)]×100

2)防治效果（%）=（CK1—PT1）/ CK1×100

注：CK1代表空白對(duì)照組病情指數(shù)；PT1代表各處理組病情指數(shù)。

根據(jù)上述分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算方法統(tǒng)計(jì)調(diào)查數(shù)據(jù)和防治效果數(shù)據(jù)，在噴施前對(duì)初始癥狀進(jìn)行病情分級(jí)及病情指數(shù)計(jì)算，5組的初始狀態(tài)均為0級(jí)12棵、1級(jí)9棵、3級(jí)6棵、5級(jí)2棵、7級(jí)1棵和9級(jí)0棵，病情指數(shù)16.3，結(jié)果如下表1.

表1 不同處理時(shí)期黃龍病防治效果數(shù)據(jù)

從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，經(jīng)過上述方法處理后的A、B、C、D組果樹，與空白對(duì)照組的黃龍病病情相比，都有不同程度的減輕。第1次噴施后15天，A、B、C、D組的防治效果分別為：4.26%，4.26%，4.26%和23.40%，只有聯(lián)合處理的D組防治效果較明顯，其防治效果大大高于單獨(dú)使用三種措施的和，原因在于A組只改善土壤pH值，根系活力尚未回復(fù)，加之土壤貧瘠、營養(yǎng)匱乏，其防治效果不明顯，B組施加含微生物均的有機(jī)肥料后，土壤肥力增強(qiáng)，但土壤酸性仍很大，不利于吸收，植株抗病能力不強(qiáng)，C組噴霧植物免疫誘導(dǎo)劑，免疫能力提升，健康植株無繼續(xù)感染，但由于土壤酸性大，肥力弱，染病植株恢復(fù)力很弱，防治效果不明顯，只有聯(lián)合處理的D組，增加了土壤肥力，抑制有害菌群情況下，改善土壤酸度和菌群平衡，大大提高根系活力，有利于吸收營養(yǎng)物質(zhì)和提升免疫力以促進(jìn)植株生長(zhǎng)，同時(shí)植物免疫誘導(dǎo)劑也大大提高了植株的抗病能力，從而使得染病植株轉(zhuǎn)好，健康植株免于染病，三種措施相互協(xié)調(diào)，大大增強(qiáng)了防治效果。第2次噴施后15天，A、B、C、D組的防治效果分別為：10.61%，18.18%，25.76%和59.09%，隨著治理時(shí)間的延長(zhǎng)，措施單獨(dú)使用的A、B和C組防治效果也拉開差距，以施加植物免疫誘導(dǎo)劑提高植物自身免疫系統(tǒng)的抗病能力，防治效果較好些，施加肥料，改善土壤菌群平衡的B組次之，至改善土壤pH，不增加肥力，不增加植物免疫能力的A組防治效果最差，三種措施聯(lián)合使用的D組，防治效果大大高于分別單獨(dú)使用三種措施的A、B和C組效果，比三組防治效果之和還要高15%左右；第3次噴施后15天，A、B、C、D組的防治效果分別為：9.09%，23.86%，30.86%和78.41%，經(jīng)過一個(gè)周期的治理，其中，經(jīng)過三種處理方式綜合處理后，最終的黃龍病防治效果最高達(dá)到78.41%，比A、B和C組防治效果之和還要高25%左右。

法測(cè)定根系活力

（1）TTC（氯化三苯基四氮唑）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

（1.1）配制溶液

0.4%TTC溶液的配制：稱取0.4g TTC（氯化三苯基四氮唑）溶解于100mL蒸餾水中并攪拌均勻；

（1.2）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

量取0.25ml 0.4%TTC溶液轉(zhuǎn)移至10ml的容量瓶，加入少許硫代硫酸鈉粉末，搖勻后立即產(chǎn)生紅色的TTF（三苯基甲），再用乙酸乙酯（分析純）定容至刻度線，搖勻，得0.1%TTF溶液。分別量取0.1%TTF溶液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml加入至5個(gè)10ml容量瓶中，并分別以乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻即得到分別含TTF 25μg、50μg、100μg、150μg、200μg（濃度分別為2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)比色系列，以TTF溶液作為空白對(duì)照，在485nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，繪制TTF吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）植株根活力測(cè)定

（2.1） 設(shè)置植株根的實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組

實(shí)驗(yàn)組：稱取根樣品0.5g放入至培養(yǎng)皿中，加入由0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液（1/15μmol/L，pH值為7）等量混合的溶液10ml，把根充分浸沒在溶液內(nèi)，在37℃下黑暗處保溫1-3h，然后加入1mol/L 的硫酸2ml以停止反應(yīng)；

空白對(duì)照組：與實(shí)驗(yàn)組不同的是加入根樣品前先加入2ml、1mol/L 的硫酸，其他操作相同；

（2.2）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出紅色TTF。把紅色提取液收集至試管中，用少量乙酸乙酯把根的殘?jiān)礈於寥?，一并移入試管，最后加乙酸乙酯使總量?0ml，用分光光度計(jì)在485nm處測(cè)定提取液的吸光，以空白作參比讀出吸光度，借助標(biāo)準(zhǔn)曲線求得四氮唑還原量，再將所得數(shù)據(jù)帶入下式a，求出四氮唑還強(qiáng)度。

式a四氮唑還原強(qiáng)度（mg/g(根鮮重)/h）＝四氮唑還原量（mg）/[根重（g）×?xí)r間(h)]。

最后上述各組以平均值做結(jié)果數(shù)據(jù)，制成數(shù)據(jù)表，見圖1，可見，采用本發(fā)明方法綜合處理的D組其根系活力大大增強(qiáng)，一方面得益與生石灰對(duì)土壤酸度的改善，兩一方面，植物免疫誘導(dǎo)劑使植物自身建立了強(qiáng)大的免疫系統(tǒng)，加之微生物菌及有機(jī)肥料的促進(jìn)作用，三種措施相互配合，良性循環(huán)相互增效，促進(jìn)了植株根系的大大增強(qiáng)，使植株健康生長(zhǎng)。

綜上可見，本發(fā)明提供的防治柑橘黃龍病的方法三種措施協(xié)調(diào)作用，使黃龍病果園的植株中染病植株病況大大改善，未染病植株免于染病，大大提高了果園黃龍病的防治效果。