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一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法與流程

文檔序號:12422904閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于用甜菜堿作為卵母細(xì)胞冷凍保存的細(xì)胞器保護劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于將甜菜堿加入平衡液、冷凍液、解凍液和基礎(chǔ)液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于解凍液包括解凍液Ⅰ和解凍液Ⅱ。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于甜菜堿在平衡液、冷凍液、解凍液和基礎(chǔ)液中的濃度為0.2~1mmol/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于甜菜堿在平衡液、冷凍液、解凍液和基礎(chǔ)液中的濃度為0.5mmol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于甜菜堿在卵母細(xì)胞冷凍保存領(lǐng)域的應(yīng)用:

一、冷凍:

GV期卵母細(xì)胞在500μl平衡液中平衡3分鐘后移入冷凍液中,迅速將3~5個卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體轉(zhuǎn)移到冷凍環(huán)上,再投入液氮;

二、解凍:

液氮冷凍的卵母細(xì)胞先在解凍液Ⅰ中靜置3分鐘后轉(zhuǎn)入解凍液Ⅱ中靜置3分鐘,再移入基礎(chǔ)液中靜置3分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于基礎(chǔ)液為添加了血清和甜菜堿的基礎(chǔ)培養(yǎng)液,基礎(chǔ)液中血清的體積濃度為10%、甜菜堿的濃度為0.5mmol/L;平衡液為基礎(chǔ)液+7.5%v/v乙二醇+7.5%v/v DMSO+0.25M海藻糖;冷凍液為基礎(chǔ)液+15%v/v乙二醇+15%v/v DMSO;解凍液Ⅰ為基礎(chǔ)液+1M海藻糖;解凍液Ⅱ為基礎(chǔ)液+0.5M海藻糖。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于基礎(chǔ)培養(yǎng)液為DMEM培養(yǎng)液、TCM199培養(yǎng)液、M16培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種降低冷凍保存卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞器損傷的方法,其特征在于血清為小牛血清、胎牛血清或新生牛血清。

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