一種貴腐葡萄的培育方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種貴腐葡萄的培育方法，包括如下步驟：1)灰葡萄孢菌種的制備；2)葡萄原料的培育；3）人工接種灰葡萄孢；4）采收貴腐葡萄。通過人工接種灰葡萄孢，并使其能在低空氣濕度條件下能正常侵染葡萄果實、發(fā)生貴腐作用；降低貴腐葡萄對自然栽種環(huán)境的要求，擴大可培育獲得貴腐葡萄的栽培區(qū)域，使更多地方能生產(chǎn)高品質(zhì)的貴腐葡萄，滿足高檔葡萄酒對高品質(zhì)葡萄原料的需求。
【專利說明】一種貴腐葡萄的培育方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及葡萄栽培【技術領域】，具體為一種人工培育貴腐葡萄的方法。

【背景技術】
[0002] 貴腐葡萄酒是世界上最高檔的葡萄酒之一，它由發(fā)生貴腐作用后的葡萄為原料 生產(chǎn)的高檔甜白葡萄酒。貴腐作用是由于葡萄在接近成熟期感染了灰葡萄孢 所引起的，灰葡萄孢的侵染和生長能夠使葡萄原料的水分揮發(fā)，導致葡萄果實中 糖類、有機酸、多元醇等成分發(fā)生變化，最終形成含糖量很高且芳香濃郁的貴腐葡萄?；移?萄孢侵染葡萄果實后，一般情況下會引起葡萄灰霉病從而引起減產(chǎn)，但在早晚陰冷濕潤、下 午干燥炎熱的特殊環(huán)境下則會引發(fā)貴腐作用。分析其主要原因是，早晚的濕冷條件有利于 灰葡萄孢的生長及其侵染葡萄的發(fā)生，而中午過后的干熱天氣才能使葡萄果粒里的水分從 感染處蒸發(fā)，脫水提高了葡萄的甜度。由于發(fā)生貴腐作用的條件極為苛刻，目前僅有歐洲少 數(shù)幾個葡萄產(chǎn)區(qū)能通過自然發(fā)生的途徑獲得貴腐葡萄，其產(chǎn)量遠遠不能滿足高檔甜型葡萄 酒對優(yōu)質(zhì)貴腐葡萄的需求。
[0003] 廣西中西部地區(qū)屬于亞熱帶季風氣候，每年10月一 12月間降雨較少，氣候干燥， 光照充足，氣溫基本在10 - 25°C，非常適宜通過避雨栽培、產(chǎn)期延后調(diào)節(jié)等技術栽培優(yōu)質(zhì) 葡萄，其中也包括優(yōu)質(zhì)的白色釀酒葡萄品種。這為獲得貴腐葡萄提供了最根本的原料基礎。
[0004] 但是由于氣候持續(xù)干燥，空氣濕度穩(wěn)定偏低，灰葡萄孢不具備侵染成熟葡萄的條 件，無法像歐洲貴腐葡萄產(chǎn)區(qū)那樣依賴自然條件獲得天然的貴腐葡萄。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種通過人工接種灰葡萄孢，并使其能在低空氣濕度條件下 能正常侵染葡萄果實、發(fā)生貴腐作用，最終獲得優(yōu)質(zhì)貴腐葡萄，滿足高檔葡萄酒對優(yōu)質(zhì)貴腐 葡萄的不斷需求。
[0006] 本發(fā)明的技術方案：一種貴腐葡萄的培育方法，包括如下步驟： 1) 灰葡萄孢菌種的制備：將灰葡萄孢菌株接種、液態(tài)發(fā)酵至濃度為IO6 - IO8CFU /mL， 過濾、洗滌、干燥，并粉碎成粒徑小于200目的灰葡萄孢菌粉； 2) 葡萄的培育：以成熟的白色釀酒葡萄品種為種植對象，控制葡萄果實于陽光充足，氣 溫在10_25°C的月份充分成熟； 3) 人工接種灰葡萄孢： A、 菌粉懸浮液的配制：將灰葡萄孢菌粉按質(zhì)量體積比0. 1% - 5%的量懸浮于清水中，按 質(zhì)量體積比加入〇. 1% - 2%的聚谷氨酸，0. 5% - 5%的低聚果糖，充分混合均勻備用； B、 選擇天氣晴好，平均氣溫為KTC 一 25 °C的時機將灰葡萄孢菌粉懸浮液按 IOmL-IOOmL/穗果實的量均勻噴撒于成熟葡萄果穗表面，待葡萄果實表面有明顯白色絲狀 菌斑生成，說明接種成功； 4) 采收貴腐葡萄：接種成功后，定期取樣測定果實汁液含糖量，當含糖量達到300g/ L 一 340g/L時，即可米收貴腐葡萄成品。
[0007] 優(yōu)選的,所述灰葡萄孢菌種液態(tài)發(fā)酵工藝如下： 1) 從原種斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌絲體，制備生物量為IO6 - IO8CFU /mL的原種懸 浮液，并按體積比4% - 10%的量接種于種子培養(yǎng)基中； 2) 在KTC 一 20°C條件下，振蕩發(fā)酵或攪拌發(fā)酵至菌體重量與培養(yǎng)基體積比值達到 5% - 8%終止發(fā)酵。
[0008] 優(yōu)選的，所述種子培養(yǎng)基的制備工藝如下： 1) 取質(zhì)量比為1:1的馬鈴薯和大麥芽，馬鈴薯粉碎至直徑不大于Icm的小塊，大麥芽粉 碎至粒徑20目； 2) 加水稀釋，所述水的質(zhì)量為馬鈴薯和大麥芽總質(zhì)量的2. 5倍； 3) 60°C糖化 8h ; 4) 經(jīng)40目濾網(wǎng)或濾篩過濾除渣； 5) 補充水，使培養(yǎng)基的體積與糖化前的體積一致； 6) 110 - 121°C濕熱滅菌 20min。
[0009] 優(yōu)選的，所述菌株選自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏的灰葡萄孢 ACCC36257或ACCC36258,或由野生灰葡萄孢菌株篩選得出。
[0010] 優(yōu)選的，所述白色釀酒葡萄品種包括賽美容、索味濃、霞多麗、雷司令等。
[0011] 優(yōu)選的，通過避雨栽培和/產(chǎn)期調(diào)節(jié)技術來控制葡萄果實成熟時間。
[0012] 優(yōu)選的，所述灰葡萄孢菌粉懸浮液的噴撒頻率為：每1 一 3天噴撒1次，連續(xù)噴撒 3 - 6 次。
[0013] 本發(fā)明的培育方法具有如下顯著的有益效果： 1、 本發(fā)明通過人工接種灰葡萄孢，提高灰葡萄孢侵染葡萄的幾率，提高貴腐葡萄的產(chǎn) 率； 2、 所噴撒的菌粉懸浮液中的聚谷氨酸和低聚果糖對葡萄的表面起保濕作用，抑制雜菌 生長，促進灰葡萄孢定殖并侵染葡萄果實，使灰葡萄孢在晴朗干燥的氣象條件下定殖、侵染 成熟葡萄果實，并發(fā)生貴腐作用； 3、 本發(fā)明的培育方法降低貴腐葡萄對栽種環(huán)境的要求，擴大可培育獲得貴腐葡萄的栽 培區(qū)域，使更多地方能生產(chǎn)高品質(zhì)的貴腐葡萄，滿足高檔葡萄酒對高品質(zhì)葡萄原料的需求。

【具體實施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領域技術人 員可以對本發(fā)明作各種修改或改動，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。
[0015] 實施例1 1)灰葡萄孢菌種制備 A、種子培養(yǎng)基：馬鈴薯200g粉碎至直徑不大于Icm小塊，大麥芽200g粉碎至粒徑20 目左右，加入IL自來水中，60°C糖化8h，40目濾網(wǎng)或濾篩過濾除渣，濾液用自來水補足至IL 體積，121°C濕熱滅菌20min ; B、 菌株：選擇由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257 ; C、 發(fā)酵：接種發(fā)酵從原種斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌絲體，制備生物量為IO8CFUAiL的 原種懸浮液，按體積比10%的量接種于種子培養(yǎng)基中，20°C條件下在搖瓶中振蕩發(fā)酵，或在 發(fā)酵罐機械攪拌發(fā)酵罐中發(fā)酵l〇d，至菌體重量與培養(yǎng)基體積比值達到8%終止發(fā)酵； D、 菌種粉劑制備：將發(fā)酵所得菌體過濾收集，用無菌水洗滌3次后，于20°C真空干燥至 含水量小于30%，粉碎成粒徑小于200目的灰葡萄孢菌粉。
[0016] 2)葡萄的培育 以成熟的白色釀酒葡萄品種賽美容為原料，在廣西中西部地區(qū)，通過避雨栽培和產(chǎn)期 調(diào)節(jié)技術，控制葡萄果實于10月下旬充分成熟。
[0017] 3)人工接種灰葡萄孢 將灰葡萄孢菌粉按質(zhì)量體積比5%的量懸浮于清水中，按質(zhì)量體積比加入2%的聚谷氨 酸，5%的低聚果糖，充分混合均勻后，選擇天氣晴好，平均氣溫為25°C的時機將灰葡萄孢 菌粉懸浮液按IOOmL /穗果實的量均勻噴撒于葡萄果穗表面，每1天噴撒1次，連續(xù)噴撒6 次，噴撒期間及噴撒后觀察果實表面灰葡萄孢菌斑的生成情況，待葡萄果實表面有明顯白 色絲狀菌斑生成，說明接種成功。
[0018] 4)采收貴腐葡萄 接種成功后，定期取樣測定果實汁液含糖量，當含糖量達到340g/L時，即可采收貴腐 葡萄成品。
[0019] 實施例2 1)灰葡萄孢菌種制備 A、種子培養(yǎng)基：馬鈴薯200g粉碎至直徑不大于Icm小塊，大麥芽200g粉碎至粒徑20 目左右，加入IL自來水中，60°C糖化8h，40目濾網(wǎng)或濾篩過濾除渣，濾液用自來水補足至IL 體積，121°C濕熱滅菌20min。種子培養(yǎng)基可按比例擴大配制量。
[0020] B、菌株：選擇由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36258作 為發(fā)酵菌株； C、 發(fā)酵：接種發(fā)酵從原種斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌絲體，制備生物量為IO6CFUAiL的 原種懸浮液，按體積比4%的量接種于種子培養(yǎng)基中，KTC條件下在搖瓶中振蕩發(fā)酵，或在 發(fā)酵罐機械攪拌發(fā)酵罐中發(fā)酵5,至菌體重量與培養(yǎng)基體積比值達到5%終止發(fā)酵； D、 菌種粉劑制備：將發(fā)酵所得菌體過濾收集，用無菌水洗滌3次后，于20°C真空干燥至 含水量小于30%。粉碎成粒徑小于200目的灰葡萄孢菌粉。
[0021] 2)葡萄的培育 以成熟的白色釀酒葡萄品種霞多麗為原料。在廣西中西部地區(qū)，通過避雨栽培和產(chǎn)期 調(diào)節(jié)技術，控制葡萄果實于11月上旬充分成熟。
[0022] 3)人工接種灰葡萄孢 將灰葡萄孢菌粉按質(zhì)量體積比1%的量懸浮于清水中，按質(zhì)量體積比加入1%的聚谷氨 酸，2%的低聚果糖，充分混合均勻后，選擇天氣晴好，平均氣溫為20°C的時機將灰葡萄孢菌 粉懸浮液按IOmL/穗果實的量均勻噴撒于葡萄果穗表面。每2天噴撒1次，連續(xù)噴撒4次， 噴撒期間及噴撒后觀察果實表面灰葡萄孢菌斑的生成情況。待葡萄果實表面有明顯白色絲 狀菌斑生成,說明接種成功。
[0023] 4)采收貴腐葡萄 接種成功后，定期取樣測定果實汁液含糖量，當含糖量達到300g/L時，即可采收貴腐 葡萄成品。
[0024] 實施例3 1)灰葡萄孢菌種制備 A、 種子培養(yǎng)基：馬鈴薯300g粉碎至直徑不大于Icm小塊，大麥芽300g粉碎至粒徑20 目左右，加入I. 5L自來水中，60°C糖化8h，40目濾網(wǎng)或濾篩過濾除渣，濾液用自來水補足至 I. 5L體積，120°C濕熱滅菌20min。種子培養(yǎng)基可按比例擴大配制量； B、 菌株：選擇由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36258作為發(fā) 酵菌株； C、 發(fā)酵：接種發(fā)酵從原種斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌絲體，制備生物量為IO7CFUAiL的 原種懸浮液，按體積比8%的量接種于種子培養(yǎng)基中，15°C條件下在搖瓶中振蕩發(fā)酵，或在 發(fā)酵罐機械攪拌發(fā)酵罐中發(fā)酵5d，至菌體重量與培養(yǎng)基體積比值達到6%終止發(fā)酵； D、 菌種粉劑制備：將發(fā)酵所得菌體過濾收集，用無菌水洗滌3次后，于20°C真空干燥至 含水量小于30%。粉碎成粒徑小于200目的灰葡萄孢菌粉。
[0025] 2)葡萄的培育 以成熟的白色釀酒葡萄品種索味濃為原料。在廣西中西部地區(qū)，通過避雨栽培和產(chǎn)期 調(diào)節(jié)技術，控制葡萄果實于11月中旬充分成熟。
[0026] 3)人工接種灰葡萄孢 將灰葡萄孢菌粉按質(zhì)量體積比2. 5%的量懸浮于清水中，按質(zhì)量體積比加入1. 5%的聚 谷氨酸，2. 5%的低聚果糖，充分混合均勻后，選擇天氣晴好，平均氣溫為18°C的時機將灰葡 萄孢菌粉懸浮液按SOmL/穗果實的量均勻噴撒于葡萄果穗表面。每3天噴撒1次，連續(xù)噴 撒3次，噴撒期間及噴撒后觀察果實表面灰葡萄孢菌斑的生成情況。待葡萄果實表面有明 顯白色絲狀菌斑生成，說明接種成功。
[0027] 4)采收貴腐葡萄 接種成功后，定期取樣測定果實汁液含糖量，當含糖量達到330g/L時，即可采收貴腐 葡萄成品。
[0028] 實施例4 實施例4與實施例1的培育方法相似，其區(qū)別在于：所培育的葡萄品種為雷司令，控制 葡萄成熟的時間為11月下旬，菌粉的添加量為〇. 5% (w/v)，聚谷氨酸的添加量為0. 5% (w/ v)，低聚果糖的添加量為1% (w/v)，噴撒菌粉時的氣溫為15°C，噴撒頻率為2天/次，連續(xù) 噴撒5次，當含糖量達到320g/L時，即可采收貴腐葡萄成品。
[0029] 實施例5 實施例5與實施例1的培育方法相似，其區(qū)別在于：所培育的葡萄品種為霞多麗，控制 葡萄成熟的時間為12月上旬，菌粉的添加量為0. 1% (w/v)，聚谷氨酸的添加量為0. 1% (w/ v)，低聚果糖的添加量為0.5% (w/v)，噴撒菌粉時的氣溫為KTC，噴撒頻率為1天/次，連 續(xù)噴撒3次，當含糖量達到310g/L時，即可采收貴腐葡萄成品。
[0030] 上述實施例的相關實驗數(shù)據(jù)如下表所示：

【權利要求】
1. 一種貴腐葡萄的培育方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 灰葡萄孢菌種的制備：將灰葡萄孢菌株接種、液態(tài)發(fā)酵至濃度為1〇6 - 108CFU/mL，過 濾、洗滌、干燥，并粉碎成粒徑小于200目的灰葡萄孢菌粉； 2) 葡萄的培育：以成熟的白色釀酒葡萄品種為種植對象，控制葡萄果實于陽光充足，氣 溫在10-25°C的月份充分成熟； 3) 人工接種灰葡萄孢： A、 菌粉懸浮液的配制：將灰葡萄孢菌粉按質(zhì)量體積比0. 1% - 5%的量懸浮于清水中，按 質(zhì)量體積比加入〇. 1% - 2%的聚谷氨酸，0. 5% - 5%的低聚果糖，充分混合均勻備用； B、 選擇天氣晴好，平均氣溫為10°C - 25 °C的時機將灰葡萄孢菌粉懸浮液按 lOmL-lOOmL/穗果實的量均勻噴撒于成熟葡萄果穗表面，待葡萄果實表面有明顯白色絲狀 菌斑生成，說明接種成功； 4) 采收貴腐葡萄：接種成功后，定期取樣測定果實汁液含糖量，當含糖量達到300g/ L 一 340g/L時，即可米收貴腐葡萄成品。
2. 如權利要求1所述的貴腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述灰葡萄孢菌種液態(tài)發(fā) 酵工藝如下： 1) 從原種斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌絲體，制備生物量為1〇6 - 108CFU/mL的原種懸 浮液，并按體積比4% - 10%的量接種于種子培養(yǎng)基中； 2) 在10°C - 20°C條件下，振蕩發(fā)酵或攪拌發(fā)酵至菌體重量與培養(yǎng)基體積比值達到 5% - 8%終止發(fā)酵。
3. 如權利要求2所述的貴腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述種子培養(yǎng)基的制備工 藝如下： 1) 取質(zhì)量比為1:1的馬鈴薯和大麥芽并粉碎，馬鈴薯粉碎至直徑不大于lcm的小塊，大 麥芽粉碎至粒徑20目； 2) 加水稀釋，所述水的質(zhì)量為馬鈴薯和大麥芽總質(zhì)量的2. 5倍； 3) 60°C糖化 8h ; 4) 經(jīng)40目濾網(wǎng)或濾篩過濾除渣； 5) 補充水，使培養(yǎng)基的體積與糖化前的體積一致； 6) 110 - 121°C濕熱滅菌 20min。
4. 如權利要求1所述的人工制備貴腐葡萄的方法，其特征在于，通過避雨栽培和/或產(chǎn) 期調(diào)節(jié)技術來控制葡萄果實成熟時間。
5. 如權利要求1所述的貴腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述灰葡萄孢菌粉懸浮液 的噴撒頻率為：每1 一 3天噴撒1次，連續(xù)噴撒3 - 6次。
6. 如權利要求1所述的貴腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述灰葡萄孢菌株選自中 國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257或ACCC36258,或由野生灰葡 萄孢菌株篩選得出。
【文檔編號】A01G7/00GK104255384SQ201410523702
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月8日 優(yōu)先權日:2014年10月8日
【發(fā)明者】李瑋, 張瑛, 林玲, 曹雄軍, 時曉芳, 周詠梅, 韋榮福 申請人:廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學院葡萄與葡萄酒研究所