一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種評鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免疫增強劑，具有預(yù)防、保健、治療和調(diào)節(jié)免疫等多種功效，是替代抗生素藥物的理想、綠色、環(huán)保、安全、新型飼料添加劑。該發(fā)酵中草藥飼料添加劑由猴頭菇、菌陳蒿、黨參、金銀花、茯苓、夏枯草、甘草、黃芪、白術(shù)、連翹、防風(fēng)、山楂、百部等復(fù)方中草藥通過“中草藥超聲波輔助浸提+多菌種好氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵相結(jié)合二步發(fā)酵”工藝制得，具有中草藥和益生菌的雙重優(yōu)點，可以高效調(diào)理評鰈類魚腸道健康，標(biāo)本兼治，固本培元，保持腸道微生態(tài)平衡和最佳免疫狀態(tài)，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率，提高評鰈類魚機體免疫力，提高養(yǎng)殖收益，降低養(yǎng)殖風(fēng)險，替代抗生素使用，對評鰈類魚無不良影響，使用安全，不存在藥物殘留和耐藥性等問題，有著廣闊的市場前景。
【專利說明】一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑的制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑的制備方法，屬于飼料添加劑領(lǐng) 域。

【背景技術(shù)】
[0002] 水產(chǎn)品在人們?nèi)粘ｏ嬍持性絹碓秸紦?jù)重要的份額，為了滿足不斷增長的水產(chǎn)品的 需求，解決因水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大和生長周期縮減而導(dǎo)致的生理機能紊亂、疾病頻發(fā)成 為水產(chǎn)養(yǎng)殖的重點問題，也是水產(chǎn)飼料產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵。在此背景下，抗生素類飼料添加劑 受到熱捧，被廣泛應(yīng)用于飼料業(yè)中，在一定程度上促進(jìn)了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，但是抗生素帶 來的高殘留、高污染和抗藥性等問題愈發(fā)的嚴(yán)重。當(dāng)前社會，食品安全事故頻發(fā)，人們在滿 足溫飽的同時也更加注重飲食健康，綠色健康的水產(chǎn)品備受關(guān)注。中草藥飼料添加劑符合 綠色水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展要求，消除了人們對其飼喂出水產(chǎn)產(chǎn)品的安全顧慮，值得大力推廣應(yīng) 用。但當(dāng)前中藥飼料添加劑的研究水平較低，制作工藝簡單粗糙，產(chǎn)品科技含量較低，質(zhì)量 不夠穩(wěn)定，諸如此類問題嚴(yán)重制約著中藥飼料添加的推廣應(yīng)用。微生物發(fā)酵中藥是對傳統(tǒng) 中藥加工技術(shù)的改革和創(chuàng)新，具有諸多特點和優(yōu)勢。將此技術(shù)引入中藥飼料添加劑的研究， 可使其科技含量大幅提升，效果更加顯著，質(zhì)量更加穩(wěn)定，效益更加明顯，可以顯著提高機 體免疫力，增強水產(chǎn)動物抵抗疾病的水平，對于解決當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中水產(chǎn)動物的多種問 題有著重要的應(yīng)用價值。利用微生物發(fā)酵技術(shù)來加工中草藥，可使其主要功能活性物質(zhì)的 含量顯著提高，這對于注重養(yǎng)殖成本的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)顯得尤為重要。
[0003] 鲆鰈類（flatfish)是我國尤其是北方海水養(yǎng)殖魚類的主要種類，由于其雙眼在身 體同一側(cè)，又稱比目魚類.養(yǎng)殖方式主要有工廠化養(yǎng)殖、網(wǎng)箱養(yǎng)殖和池塘養(yǎng)殖等。目前已 J{懾素鹿飽有貨贊{Paralichthys olivaceus)、大餐贊{ Scophthalmus maximus)、 大西洋牙鲆 紅s i/efliaiiAs)、石蝶 Ofareiw1S Aico/oraiiAs)、大西洋庸蝶 iflippoglossus hiossusppogP)私年潰舌場{Gynoglossus semilaevis Gunther)等反。秩, 其中以牙鲆和大菱鲆的養(yǎng)殖規(guī)模最大，南北方均有養(yǎng)殖。隨著鲆鰈類養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大， 取得了巨大的經(jīng)濟效益。但是疾病的不斷爆發(fā)嚴(yán)重制約了鲆鰈類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，病毒性病 原中大菱鲆虹彩病毒引起的危害較大，細(xì)菌性病原主要有鰻弧菌、哈維氏弧菌、創(chuàng)傷 弧菌、燦爛弧菌和溶藻弧菌等弧菌、遲鈍愛德華氏菌、假單胞菌和腸球菌，寄生蟲病原 有鞭毛蟲、盾纖毛蟲、車輪蟲和隱核蟲等。由于當(dāng)前病害防治水平的限制，鲆鰈類疾病的防 治仍以化學(xué)藥物為主，頻繁用藥造成病原菌產(chǎn)生耐藥或變異致使病害難以控制，繼而產(chǎn)生 水產(chǎn)品的藥物殘留問題，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的品質(zhì)。因此，進(jìn)行主動防病、無公害防病成為當(dāng) 今養(yǎng)殖業(yè)能夠可持續(xù)發(fā)展的方向和趨勢。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，考慮中草藥具有的抗菌、抗 病毒、提高機體免疫力和改善動物生長性能的左右，可減少抗生素大量使用造成的養(yǎng)殖業(yè) 污染，且原料來源廣，價格低廉，是一種綠色、環(huán)保、高效的飼料添加劑，研制開發(fā)一種鲆鰈 類魚用中草藥免疫增強劑。
[0005] 本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)的： 一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，其特征在于復(fù)方中草藥由以下質(zhì)量比的中草藥組 成：猴頭菇12?18份、菌陳蒿8?12份、黨參8?12份、金銀花6?10份、茯苓3?5份、 夏枯草6?10份、甘草6?8份、黃苗3?5份、白術(shù)6?10份、連翅6?10份、防風(fēng)6? 10份、山楂5?7份、百部3?5份。
[0006] 本發(fā)明提供一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，所選發(fā)酵劑為由地衣芽孢桿菌、 產(chǎn)朊假絲酵母、嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌組成的復(fù)合發(fā)酵劑，其中地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿 菌、植物乳桿菌的接種量為2?4%、產(chǎn)朊假絲酵母接種量為5?8%。
[0007] 本發(fā)明提供一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑的制備方法，具體包括以下的步 驟： (1) 復(fù)方中草藥的制備：按照上述配方準(zhǔn)確稱量中草藥，將其粉碎至40?60目，混合 均勻，制得復(fù)方中草藥； (2) 超聲波輔助浸提：向復(fù)方中草藥粉劑中加入質(zhì)量比5?10倍的水，在超聲波輔助 作用下，l〇〇°C條件下回流浸提20?30min，超聲功率400w，頻率25kHz ; (3) 發(fā)酵液制備：向浸提后的中草藥浸提液中加入浸提液質(zhì)量比3. 0?5. 0%葡萄糖、 2. 0 ?3. 0% 酵母膏、0· 3 ?0· 5% 磷酸二氫鉀、0· 02%MgS04. 7Η20、0· 01%CaCl2, pH 調(diào)至 7. 0 ? 7. 2 ； (4) 好氧發(fā)酵：選用液體發(fā)酵罐，裝液量為60?70% (體積比)，接種地衣芽孢桿菌和產(chǎn) 朊假絲酵母，接種量分別為2?4%、5?8%(體積比)，控制發(fā)酵溫度28?37°C，轉(zhuǎn)速150? 300rpm，通氣量10?20L/min ;在此發(fā)酵條件下發(fā)酵12?24h ; (5) 厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌，接種量均為2?4%(體 積比)，發(fā)酵溫度28?37°C，控溫厭氧發(fā)酵12?24h ; (6) 發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1. 2?2倍體積比的麩皮吸附，在40?60°C 鼓風(fēng)干燥機中干燥，水分控制在8?10% ; (7) 粉碎：將干燥后的產(chǎn)品用粉碎機60目過篩粉碎，即得鲆鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免 疫增強劑。
[0008] 本發(fā)明提供一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，具有預(yù)防、保健、治療和調(diào)節(jié)免疫 等多種功效，是替代抗生素藥物的理想、綠色、環(huán)保、安全、新型飼料添加劑。該發(fā)明發(fā)酵中 草藥飼料添加劑一是可以高效調(diào)理鲆鰈類魚腸道健康，標(biāo)本兼治，固本培元，保持腸道微生 態(tài)平衡和最佳免疫狀態(tài)，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率，提高動物機體免疫力；二是可抑制和 阻止病原大腸菌、梭狀芽孢桿菌、沙門氏菌等有害菌的發(fā)生，增加腸道益生菌，維持健康的 腸道菌群；三是增強免疫作用，通過刺激腸道內(nèi)免疫系細(xì)胞，增加局部抗體的形成，增加巨 噬細(xì)胞活性；四是發(fā)酵中草藥飼料添加劑進(jìn)入腸內(nèi)抵制有害菌，降低惡臭及有害成分形成， 使排出的糞便消除惡臭，在保護養(yǎng)殖環(huán)境的同時提高鲆鰈類魚肉質(zhì)品質(zhì)。
[0009] 本發(fā)明提供一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，所述鲆鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免 疫增強劑產(chǎn)品在水產(chǎn)飼料全價料中使用的質(zhì)量比例為〇. 1?〇. 5% :或所述的飼料添加劑在 預(yù)混料、濃縮料以全價料中所需的比例添加使用。
[0010] 本發(fā)明提供一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，其優(yōu)勢在于：一是在發(fā)酵中草藥 飼料添加劑制備過程中采用了"中草藥超聲波輔助浸提+多菌種好氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵相結(jié) 合二步發(fā)酵"的生產(chǎn)工藝，與現(xiàn)有的中草藥飼料添加劑產(chǎn)品相比作用效果更顯著；二是發(fā)酵 中草藥飼料添加劑具有中草藥和益生菌的雙重優(yōu)點，可以高效調(diào)理鲆鰈類魚腸道健康，標(biāo) 本兼治，固本培元，保持腸道微生態(tài)平衡和最佳免疫狀態(tài)，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率，提 高動物機體免疫力，提高養(yǎng)殖收益，降低養(yǎng)殖風(fēng)險；三是該產(chǎn)品可替代抗生素使用，對鲆鰈 類魚無不良影響，使用安全，不存在藥物殘留和耐藥性等問題，有著廣闊的市場前景。

【具體實施方式】
[0011] 實施例1 : 一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，具體制備步驟如下： (1) 稱量：按照如下配方準(zhǔn)確稱量中草藥：猴頭菇12份、菌陳蒿12份、黨參8份、金銀 花10份、茯苓3份、夏枯草10份、甘草6份、黃芪5份、白術(shù)6份、連翹10份、防風(fēng)6份、山 楂7份、百部3份； (2) 復(fù)方中草藥的制備：將稱量后的中草藥粉碎至40?60目，混合均勻，制得復(fù)方中 草藥； (3) 超聲波輔助浸提：向復(fù)方中草藥粉劑中加入質(zhì)量比5倍的水，在超聲波輔助作用 下，100°C條件下回流浸提20?30min，超聲功率400w，頻率25kHz ; (4) 發(fā)酵液制備：向浸提后的中草藥浸提液中加入浸提液質(zhì)量比3. 0%葡萄糖、3. 0%酵 母膏、0· 3% 磷酸二氫鉀、0· 02%MgS04. 7Η20、0· 01%CaCl2, pH 調(diào)至 7. 0 ?7. 2 ; (5) 好氧發(fā)酵：選用液體發(fā)酵罐，裝液量為60?70% (體積比)，接種地衣芽孢桿菌和產(chǎn) 朊假絲酵母，接種量分別為2%、8%(體積比)，控制發(fā)酵溫度28?37°C，轉(zhuǎn)速150?300rpm， 通氣量10?20L/min ;在此發(fā)酵條件下發(fā)酵12h ; (6) 厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌，接種量分別為2%、4% (體積比)，發(fā)酵溫度28?37°C，控溫厭氧發(fā)酵24h ; (7) 發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1. 2倍體積比的麩皮吸附，在40?60°C鼓 風(fēng)干燥機中干燥，水分控制在8?10% ; (8) 粉碎：將干燥后的產(chǎn)品用粉碎機60目過篩粉碎，即得鲆鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免 疫增強劑。
[0012] 實施例2: 一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，具體制備步驟如下： (1) 稱量：按照如下配方準(zhǔn)確稱量中草藥：猴頭菇18份、菌陳蒿8份、黨參12份、金銀 花6份、獲考:5份、夏枯草6份、甘草8份、黃苗3份、白術(shù)10份、連翅6份、防風(fēng)10份、山楂 5份、百部5份； (2) 復(fù)方中草藥的制備：將稱量后的中草藥粉碎至40?60目，混合均勻，制得復(fù)方中 草藥； (3) 超聲波輔助浸提：向復(fù)方中草藥粉劑中加入質(zhì)量比10倍的水，在超聲波輔助作用 下，KKTC條件下回流浸提20?30min，超聲功率400w，頻率25kHz ; (4) 發(fā)酵液制備：向浸提后的中草藥浸提液中加入浸提液質(zhì)量比5. 0%葡萄糖、2. 0%酵 母膏、0· 5% 磷酸二氫鉀、0· 02%MgS04. 7Η20、0· 01%CaCl2, pH 調(diào)至 7· O ?7· 2 ; (5) 好氧發(fā)酵：選用液體發(fā)酵罐，裝液量為60?70% (體積比)，接種地衣芽孢桿菌和產(chǎn) 朊假絲酵母，接種量分別為4%、5%(體積比)，控制發(fā)酵溫度28?37°C，轉(zhuǎn)速150?300rpm， 通氣量10?20L/min ;在此發(fā)酵條件下發(fā)酵24h ; (6) 厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌，接種量分別為4%、2% (體積比)，發(fā)酵溫度28?37°C，控溫厭氧發(fā)酵12h ; (7) 發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用2倍體積比的麩皮吸附，在40?60°C鼓風(fēng) 干燥機中干燥，水分控制在8?10% ; (8) 粉碎：將干燥后的產(chǎn)品用粉碎機60目過篩粉碎，即得鲆鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免 疫增強劑。
[0013] 實施例3: 一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑，具體制備步驟如下： (1) 稱量：按照如下配方準(zhǔn)確稱量中草藥：猴頭菇15份、菌陳蒿10份、黨參10份、金銀 花8份、茯苓4份、夏枯草8份、甘草7份、黃芪4份、白術(shù)8份、連翹8份、防風(fēng)8份、山楂6 份、百部4份； (2) 復(fù)方中草藥的制備：將稱量后的中草藥粉碎至40?60目，混合均勻，制得復(fù)方中 草藥； (3) 超聲波輔助浸提：向復(fù)方中草藥粉劑中加入質(zhì)量比7. 5倍的水，在超聲波輔助作用 下，100°C條件下回流浸提20?30min，超聲功率400w，頻率25kHz ; (4) 發(fā)酵液制備：向浸提后的中草藥浸提液中加入浸提液質(zhì)量比4. 0%葡萄糖、2. 5%酵 母膏、0· 4% 磷酸二氫鉀、0· 02%MgS04. 7Η20、0· 01%CaCl2, pH 調(diào)至 7. 0 ?7. 2 ; (5) 好氧發(fā)酵：選用液體發(fā)酵罐，裝液量為60?70% (體積比)，接種地衣芽孢桿菌和產(chǎn) 朊假絲酵母，接種量分別為3%、6. 5%(體積比)，控制發(fā)酵溫度28?37°C，轉(zhuǎn)速150?300rpm， 通氣量10?20L/min ;在此發(fā)酵條件下發(fā)酵18h ; (6) 厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌，接種量均為3% (體積 比)，發(fā)酵溫度28?37°C，控溫厭氧發(fā)酵18h ; (7) 發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1. 6倍體積比的麩皮吸附，在40?60°C鼓 風(fēng)干燥機中干燥，水分控制在8?10% ; (8) 粉碎：將干燥后的產(chǎn)品用粉碎機60目過篩粉碎，即得鲆鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免 疫增強劑。
[0014] 通過對牙鲆幼魚非特異性免疫的影響實驗驗證本發(fā)明產(chǎn)品的免疫增強功效，試驗 結(jié)果如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種鲆鰈類魚用中草藥免疫增強劑的制備方法，其特征在于具體包括以下的步 驟： (1) 復(fù)方中草藥的制備：按照猴頭菇12?18份、菌陳蒿8?12份、黨參8?12份、金 銀花6?10份、獲考:3?5份、夏枯草6?10份、甘草6?8份、黃苗3?5份、白術(shù)6? 10份、連翹6?10份、防風(fēng)6?10份、山楂5?7份、百部3?5份比例準(zhǔn)確稱量中草藥， 將其粉碎至40?60目，混合均勻，制得復(fù)方中草藥； (2) 超聲波輔助浸提：向復(fù)方中草藥粉劑中加入質(zhì)量比5?10倍的水，在超聲波輔助 作用下，l〇〇°C條件下回流浸提20?30min，超聲功率400w，頻率25kHz ; (3) 發(fā)酵液制備：向浸提后的中草藥浸提液中加入浸提液質(zhì)量比3. 0?5. 0%葡萄糖、 2. 0 ?3. 0% 酵母膏、0· 3 ?0· 5% 磷酸二氫鉀、0· 02%MgS04. 7Η20、0· 01%CaCl2, pH 調(diào)至 7. 0 ? 7. 2 ； (4) 好氧發(fā)酵：選用液體發(fā)酵罐，裝液量為60?70% (體積比)，接種地衣芽孢桿菌和產(chǎn) 朊假絲酵母，接種量分別為2?4%、5?8%(體積比)，控制發(fā)酵溫度28?37°C，轉(zhuǎn)速150? 300rpm，通氣量10?20L/min ;在此發(fā)酵條件下發(fā)酵12?24h ; (5) 厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌，接種量均為2?4%(體 積比)，發(fā)酵溫度28?37°C，控溫厭氧發(fā)酵12?24h ; (6) 發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1. 2?2倍體積比的麩皮吸附，在40?60°C 鼓風(fēng)干燥機中干燥，水分控制在8?10% ; (7) 粉碎：將干燥后的產(chǎn)品用粉碎機60目過篩粉碎，即得鲆鰈類魚用發(fā)酵型中草藥免 疫增強劑。
【文檔編號】A23K1/16GK104222675SQ201410514828
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】董書閣, 侯文燕, 董靜靜, 段智崗, 侯文杰, 代書強 申請人:青島嘉瑞生物技術(shù)有限公司