一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，屬于植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】。所述的方法包括以下步驟：1)擬接種材料的選擇與預(yù)處理，2）外植體的消毒，3）無(wú)菌系的建立，4）叢生芽的誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)，5）壯苗與生根培養(yǎng)，6）試管苗的煉苗與移栽。本發(fā)明具有的有益效果：叢生芽的誘導(dǎo)率達(dá)到90%以上，壯苗生根培養(yǎng)后的生根率達(dá)到96%以上，存活率可達(dá)96%以上，繁殖速度快、繁殖率高、脫病毒及提純復(fù)壯等優(yōu)點(diǎn)，克服現(xiàn)有技術(shù)中繁殖系數(shù)低、周期長(zhǎng)、受季節(jié)限制等缺陷，可在短時(shí)間內(nèi)工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗以滿足城鄉(xiāng)綠化之需。以一個(gè)莖段為例，一年內(nèi)可工廠化快速繁殖種苗上萬(wàn)株，且質(zhì)量?jī)?yōu)異。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]小葉矮生型廣玉蘭是近年從國(guó)外引進(jìn)的廣玉蘭新樹(shù)種，是廣玉蘭的變種，葉小，樹(shù)體緊湊矮生，樹(shù)高只占廣玉蘭的一半左右屬名貴品種，可作綠化、盆花，四季常綠，觀賞性強(qiáng)花色潔白優(yōu)雅，4~5月開(kāi)花，適應(yīng)性強(qiáng)，耐零下15度低溫。其種苗主要靠扦插、嫁接等常規(guī)方法繁殖(目前國(guó)內(nèi)尚未推廣)，但周期長(zhǎng)且生根率低，無(wú)法滿足生產(chǎn)用種苗之需。
[0003]誘導(dǎo)率直接體現(xiàn)了植物的繁殖率和繁殖速度，專(zhuān)利號(hào)為201110372472.6的中國(guó)專(zhuān)利:一種提高紅麻子葉不定芽誘導(dǎo)率的方法，以紅麻種子無(wú)菌苗子葉為外植體材料進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)、增殖，不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.l-3mg/L TDZ+0.01-lmg/LNAA+0.l_3mg/LAgN03，不定芽增殖培養(yǎng)基為:MS+2mg/L6-BA+0.lmg/L IBA+100mg/L LH ;以上不定芽誘導(dǎo)、增殖的培養(yǎng)條件均以光、暗培養(yǎng)時(shí)間分別為14h和IOh循環(huán)進(jìn)行、光照強(qiáng)度為20000LX、溫度為26±1°C的條件進(jìn)行培養(yǎng)，紅麻子葉不定芽的誘導(dǎo)最高可達(dá)到了 85%。
[0004]又如專(zhuān)利號(hào)為201310255798.X的中國(guó)專(zhuān)利:一種廣玉蘭高效栽培方法，是在苗木栽植時(shí)加大密植，當(dāng)苗木生長(zhǎng)到干徑5厘米以上時(shí)，對(duì)局部苗木進(jìn)行增施肥料，對(duì)未增施肥苗木進(jìn)行短截措施，在增施肥苗木干徑達(dá)到10~12厘米后，對(duì)增施肥苗木進(jìn)行移植，余下苗木再增施肥料。是利用廣玉蘭主枝頂端生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)和強(qiáng)陽(yáng)性特點(diǎn)，首先在苗木栽植時(shí)適當(dāng)加大密植，充分利用土地和空間；當(dāng)苗木生長(zhǎng)到干徑5厘米時(shí)采用施肥和短截及密度調(diào)整的方法，來(lái)改善苗圃中部分苗木生長(zhǎng)環(huán)境，促進(jìn)這些苗木快速優(yōu)先生長(zhǎng)；通過(guò)局部苗木的施肥，人為拉開(kāi)苗木間的生長(zhǎng)勢(shì)，使部分苗木接受的光照、空氣、水分和營(yíng)養(yǎng)更多，其生長(zhǎng)更加優(yōu)勢(shì)突出，可明顯提高廣玉蘭出圃規(guī)格，提前實(shí)現(xiàn)苗木商品化和高效益；通過(guò)對(duì)未施肥苗木進(jìn)行短截措施，可抑制這些苗木在短期內(nèi)(3年左右)較慢生長(zhǎng)，保證未短截苗木優(yōu)先較快生長(zhǎng)(即施肥苗)；在優(yōu)勢(shì)苗木達(dá)到商品苗后，對(duì)苗木進(jìn)行移植并供應(yīng)市場(chǎng)，余下苗木再增施肥料，由于密度的調(diào)整，陽(yáng)光、空氣、水分和營(yíng)養(yǎng)空間增大了，苗木的生長(zhǎng)就更加快了，苗圃的整體效益就提聞了。
[0005]再如專(zhuān)利號(hào)為201110243132.3的中國(guó)專(zhuān)利:一種廣玉蘭的栽培方法，于冬季整地施肥，將田地挖60厘米深進(jìn)行整地，每畝施基肥包括:雞糞800~1200公斤、復(fù)合肥80~120公斤，或每施入腐熟的餅肥300~500公斤、復(fù)合肥100~200公斤；將I~2年生廣玉蘭嫁接苗定植培養(yǎng)，株距為1.8m~2.5m，行距為1.0m~1.8m，2~3年后于3月下旬至4月初進(jìn)行隔株移栽,株距為1.8m~2.5m,行距為2.0m~3.6m ;移栽后的3年內(nèi)，在春季、夏季進(jìn)行修剪，保留樹(shù)冠高度為樹(shù)高的1/3，主干在1.6m~2.0m下無(wú)分叉，及時(shí)摘心、除萌，并重點(diǎn)培養(yǎng)主干，發(fā)明目的是提高抗旱性、抗倒伏性、耐水性和生長(zhǎng)速度。
[0006] 以上公開(kāi)的技術(shù)，雖然可提高植物某些性能指標(biāo)，但周期仍較長(zhǎng)，難滿足大規(guī)模生產(chǎn)需要，而且是針對(duì)紅麻、廣玉蘭等植物，與小葉矮生型廣玉蘭生長(zhǎng)特點(diǎn)和性質(zhì)有區(qū)別，目前針對(duì)小葉矮生型廣玉蘭栽培方法的研究還是空白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種繁殖率高、繁殖速度快的小葉矮生型廣玉蘭種苗培養(yǎng)方法。
[0008]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0009]一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，包括以下歩驟:
[0010]I)、擬接種材料的選擇與預(yù)處理:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化新枝，剪去巳展平的葉片，用洗衣粉沖洗三遍，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3h ；
[0011]2)、外植體的消毒:在超凈臺(tái)上，先用75% (vol)乙醇溶液消毒I~2min，然后用0.2% (vol)的新潔爾敏溶液消毒15min,最后用10% (vol)次氯酸鈉溶液消毒15~20min,用無(wú)菌水沖洗三遍后無(wú)菌濾紙吸干水份；
[0012]3)、無(wú)菌系的建立:在超凈臺(tái)上將嫩枝切成1.3~2.0cm的莖段，每個(gè)莖段帶I~2個(gè)莖節(jié)，切除切口處因消毒而壞死的組織，將外植體培養(yǎng)于第一培養(yǎng)基進(jìn)行新芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，培育成無(wú)菌系；
[0013]4)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖:待莖段新芽伸長(zhǎng)至Icm以上時(shí)，將新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，并在該培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的增殖；
[0014]5)、將叢生芽在靠 近試管苗最下面的葉片著生處下面0.3~0.4_處切成單芽，切口為每個(gè)單芽最下面的葉片著生處下面0.3mm~0.4mm處,并將單芽接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)；
[0015]6)、試管苗的煉苗與移栽:將生根的試管苗移栽至泥炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開(kāi)薄膜煉苗，每天葉面噴水3~5次，15~20天后施肥料液；30~35天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，經(jīng)3~4個(gè)月培養(yǎng)后直接移栽至土壤或大的容器中。
[0016]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:所述用于建立無(wú)菌系的第一培養(yǎng)基的配方為:MS+0.5~lmg/L ZT+1.0 ~2.0mg/L ΒΑ+0.05 ~0.lmg/L NAA+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 5.5 ~6.5g/L, pH值為5.6~5.8。
[0017]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:所述用于誘導(dǎo)叢生芽并增殖的第二培養(yǎng)基的配方為:MS+2 ~3mg/L ΚΤ+0.2 ~0.3mg/L NAA+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 5.5 ~6.5g/L, pH 值為 5.6 ~5.8。
[0018]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:所述用于試管苗壯苗與生根的第三培養(yǎng)基的配方為:1/2MS+0.5 ~1.0mg/LIBA+0.5 ~IAC g/L+蔗糖 20g/L+瓊脂粉 5.5 ~6.5g/L，pH值為 5.6 ~
5.8。
[0019]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:所述步驟3)中無(wú)菌系的建立、所述步驟4)中叢生芽的誘導(dǎo)與增殖、以及所述步驟5)中壯苗與生根培養(yǎng)，均在如下條件下進(jìn)行:溫度24~26°C、光照強(qiáng)度3000LX，光照時(shí)間為10~12h/d。
[0020]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:所述的步驟6)的基質(zhì)中泥炭和珍珠巖的重量比為4:1~3:
1
[0021]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:所述的步驟6)的肥料液中含有0.1~0.2wt%硝酸銨、0.1~0.2wt%磷酸二氫鉀、0.1~0.2wt%硫酸鎂。
[0022]半木質(zhì)化枝條:一般所指當(dāng)年生的枝條，新的枝條在經(jīng)過(guò)兩個(gè)月左右的時(shí)間會(huì)出現(xiàn)木質(zhì)化的傾向，半木質(zhì)化就是嫩枝至木質(zhì)化枝條的過(guò)渡生長(zhǎng)階段，就好比人生長(zhǎng)階段的
青春期。
[0023]本發(fā)明具有的有益效果:
[0024]叢生芽的誘導(dǎo)率達(dá)到90%以上，壯苗生根培養(yǎng)后的生根率達(dá)到95%以上，存活率可達(dá)100%，具有繁殖速度快、繁殖率高、脫病毒及提純復(fù)壯等優(yōu)點(diǎn)，克服現(xiàn)有技術(shù)中繁殖系數(shù)低、周期長(zhǎng)、受季節(jié)限制等缺陷，可在短時(shí)間內(nèi)工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗以滿足城鄉(xiāng)綠化之需。以一個(gè)莖段為例，一年內(nèi)可工廠化快速繁殖種苗上萬(wàn)株，且質(zhì)量?jī)?yōu)異。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅僅局限于實(shí)施例。
[0026]實(shí)施例1
[0027]—種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，包括以下歩驟:
[0028]I)、擬接種材料的選擇與預(yù)處理:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化新枝，剪去巳展平的葉片，用洗衣粉沖洗三遍，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3h ；
[0029]2)、外植體的消毒:在超凈臺(tái)上，先用75% (vol)乙醇溶液消毒lmin，然后用0.2%(vol)的新潔爾敏溶液消毒15min，最后用10% (vol)次氯酸鈉溶液消毒15min，用無(wú)菌水沖洗三遍后無(wú)菌濾紙吸干水份；
[0030]3)、無(wú)菌系的建立:在超凈臺(tái)上將嫩枝切成1.3cm長(zhǎng)的莖段，每個(gè)莖段帶I~2個(gè)莖節(jié)，切除切口處因消毒而壞死的組織，將外植體培養(yǎng)于第一培養(yǎng)基進(jìn)行新芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，培育成無(wú)菌系；
[0031]第一培養(yǎng)基的配方為:MS+0.5mg/L ZT+1.0mg/L BA+0.05mg/L NAA+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉 5.5g/L，pH 值為 5.6 ~5.8。
[0032]經(jīng)過(guò)培養(yǎng)一個(gè)月培養(yǎng)，誘導(dǎo)出來(lái)叢生芽，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，誘導(dǎo)率為92%。
[0033]4)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖:待莖段新芽伸長(zhǎng)至Icm以上時(shí)，將新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，并在該培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的增殖；
[0034]用于誘導(dǎo)叢生芽并增殖的第二培養(yǎng)基的配方為:MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+蔗糖30g/L+ 瓊脂粉 5.5g/L，pH 值為 5.6 ~5.8。
[0035]增殖培養(yǎng)一個(gè)月，長(zhǎng)出較多叢芽，增殖系數(shù)達(dá)到3~4。(增殖系數(shù)=瓶苗在一個(gè)周期內(nèi)形成的有效苗數(shù)/接種苗數(shù)，是一個(gè)衡量植物分化能力的指標(biāo))。
[0036]5)、將叢生芽在靠近試管苗最下面的葉片著生處下面0.3_處切成單芽，切口為每個(gè)單芽最下面的葉片著生處下面0.3mm處，并將單芽接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng);
[0037]用于試管苗壯苗與生根的第三培養(yǎng)基的配方為:l/2MS+0.5mg/LIBA+0.5ACg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉5.5g/L，pH值為5.6~5.8。
[0038]轉(zhuǎn)接好生根，放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，過(guò)了一個(gè)星期，試管苗基部開(kāi)始膨脹，開(kāi)始冒根，再過(guò)一個(gè)星期，根基本長(zhǎng)好了，每顆根數(shù)3~5條，根長(zhǎng)I~2cm，生根率97%。[0039]6)、試管苗的煉苗與移栽:將生根的試管苗移栽至泥炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中，基質(zhì)中泥炭和珍珠巖的重量比為3:1。澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開(kāi)薄膜煉苗，每天葉面噴水3~5次，15天后施肥料液，肥料液中含有0.1#%硝酸銨、0.lwt%磷酸二氫鉀、0.lwt%硫酸鎂。30天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，經(jīng)3個(gè)月培養(yǎng)后，移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，存活率達(dá)100%且緩苗期短、生長(zhǎng)快。
[0040]上述步驟3)中無(wú)菌系的建立、上述步驟4)中叢生芽的誘導(dǎo)與增殖、以及所述步驟5)中壯苗與生根培養(yǎng)，均在如下條件下進(jìn)行:溫度24~26°C、光照強(qiáng)度3000LX，光照時(shí)間為 10h/do
[0041]實(shí)施例2
[0042]一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，包括以下歩驟:
[0043]I)、擬接種材料的選擇與預(yù)處理:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化新枝，剪去巳展平的葉片，用洗衣粉沖洗三遍，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3h ；
[0044]2)、外植體的消毒:在超凈臺(tái)上，先用75% (vol)乙醇溶液消毒2min，然后用0.2%(vol)的新潔爾敏溶液消毒15min，最后用10% (vol)次氯酸鈉溶液消毒20min，用無(wú)菌水沖洗三遍后無(wú)菌濾紙吸干水份；
[0045]3)、無(wú)菌系的建立:在超凈臺(tái)上將嫩枝切成2.0cm長(zhǎng)的莖段，每個(gè)莖段帶I~2個(gè)莖節(jié)，切除切口處因消毒而壞死的組織，將外植體培養(yǎng)于第一培養(yǎng)基進(jìn)行新芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，培育成無(wú)菌系；
[0046]第一培養(yǎng)基的配方為:MS+lmg/LZT+2.0mg/L BA+0.lmg/L NAA+鹿糖 30g/L+瓊脂粉
6.5g/L, pH 值為 5.6 ~5.7。
[0047]經(jīng)過(guò)培養(yǎng)一個(gè)月培養(yǎng)，誘導(dǎo)出來(lái)叢生芽，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，誘導(dǎo)率為94%。
[0048]4)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖:待莖段新芽伸長(zhǎng)至Icm以上時(shí)，將新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，并在該培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的增殖；
[0049]用于誘導(dǎo)叢生芽并增殖的第二培養(yǎng)基的配方為:MS+3mg/L KT+0.3mg/L NAA+鹿糖30g/L+ 瓊脂粉 6.5g/L，pH 值為 5.6 ~5.7。
[0050]增殖培養(yǎng)一個(gè)月，長(zhǎng)出較多叢芽，增殖系數(shù)達(dá)到3~5。(增殖系數(shù)=瓶苗在一個(gè)周期內(nèi)形成的有效苗數(shù)/接種苗數(shù)，是一個(gè)衡量植物分化能力的指標(biāo))。
[0051]5)、將叢生芽在靠近試管苗最下面的葉片著生處下面0.4mm處切成單芽，切口為每個(gè)單芽最下面的葉片著生處下面0.4mm處，并將單芽接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng);
[0052]用于試管苗壯苗與生根的第三培養(yǎng)基的配方為:1/2MS+1.0mg/LIBA+lACg/L+蔗糖 20g/L+ 瓊脂粉 6.5g/L，pH 值為 5.6 ~5.7。
[0053]轉(zhuǎn)接好生根，放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，過(guò)了一個(gè)星期，試管苗基部開(kāi)始膨脹，開(kāi)始冒根，再過(guò)一個(gè)星期，根基本長(zhǎng)好了，每顆根數(shù)3~6條，根長(zhǎng)1.2~2cm，生根率98%。
[0054]6)、試管苗的煉苗與移栽:將生根的試管苗移栽至泥炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中，基質(zhì)中泥炭和珍珠巖的重量比為4:1。澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開(kāi)薄膜煉苗，每天葉面噴水3~5次，20天后施肥料液，肥料液中含有0.2被％硝酸銨、0.2wt%磷酸二氫鉀、0.2wt%硫酸鎂。35天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，經(jīng)4個(gè)月培養(yǎng)后，移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，存活率達(dá)100%且緩苗期短、生長(zhǎng)快。[0055]上述步驟3)中無(wú)菌系的建立、上述步驟4)中叢生芽的誘導(dǎo)與增殖、以及所述步驟5)中壯苗與生根培養(yǎng)，均在如下條件下進(jìn)行:溫度24~26°C、光照強(qiáng)度3000LX，光照時(shí)間為 12h/d。
[0056]實(shí)施例3
[0057]—種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，包括以下歩驟:
[0058]I)、擬接種材料的選擇與預(yù)處理:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化新枝，剪去巳展平的葉片，用洗衣粉沖洗三遍，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3h ；
[0059]2)、外植體的消毒:在超凈臺(tái)上，先用75% (vol)乙醇溶液消毒lmin，然后用0.2%(vol)的新潔爾敏溶液消毒15min，最后用10% (vol)次氯酸鈉溶液消毒18min，用無(wú)菌水沖洗三遍后無(wú)菌濾紙吸干水份；
[0060]3)、無(wú)菌系的建立:在超凈臺(tái)上將嫩枝切成1.5cm長(zhǎng)的莖段，每個(gè)莖段帶I~2個(gè)莖節(jié)，切除切口處因消毒而壞死的組織，將外植體培養(yǎng)于第一培養(yǎng)基進(jìn)行新芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，培育成無(wú)菌系；
[0061]第一培養(yǎng)基的配方為:MS+0.7mg/L ZT+1.5mg/L BA+0.07mg/L NAA+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉6g/L，pH值為5.7~5.8。
[0062]經(jīng)過(guò)培養(yǎng)一個(gè) 月培養(yǎng)，誘導(dǎo)出來(lái)叢生芽，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，誘導(dǎo)率為91%。
[0063]4)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖:待莖段新芽伸長(zhǎng)至Icm以上時(shí)，將新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，并在該培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的增殖；
[0064]用于誘導(dǎo)叢生芽并增殖的第二培養(yǎng)基的配方為:MS+2.5mg/L KT+0.25mg/LNAA+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L，pH值為5.6~5.8。
[0065]增殖培養(yǎng)一個(gè)月，長(zhǎng)出較多叢芽，增殖系數(shù)達(dá)到3~4。(增殖系數(shù)=瓶苗在一個(gè)周期內(nèi)形成的有效苗數(shù)/接種苗數(shù)，是一個(gè)衡量植物分化能力的指標(biāo))。
[0066]5)、將叢生芽在靠近試管苗最下面的葉片著生處下面0.35mm處切成單芽，切口為每個(gè)單芽最下面的葉片著生處下面0.35mm處，并將單芽接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗生根
培養(yǎng)；
[0067]用于試管苗壯苗與生根的第三培養(yǎng)基的配方為:l/2MS+0.75mg/LIBA+0.75AC g/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉6g/L，pH值為5.6~5.8。
[0068]轉(zhuǎn)接好生根，放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，過(guò)了一個(gè)星期，試管苗基部開(kāi)始膨脹，開(kāi)始冒根，再過(guò)一個(gè)星期，根基本長(zhǎng)好了，每顆根數(shù)4~5條，根長(zhǎng)I~2cm，生根率98%。
[0069]6)、試管苗的煉苗與移栽:將生根的試管苗移栽至泥炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中，基質(zhì)中泥炭和珍珠巖的重量比為3:1。澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開(kāi)薄膜煉苗，每天葉面噴水3~5次，17天后施肥料液，肥料液中含有0.15wt%硝酸銨、0.15wt%磷酸二氫鉀、0.15wt%硫酸鎂。30天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，經(jīng)3個(gè)月培養(yǎng)后，移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，存活率達(dá)100%且緩苗期短、生長(zhǎng)快。
[0070]上述步驟3)中無(wú)菌系的建立、上述步驟4)中叢生芽的誘導(dǎo)與增殖、以及所述步驟
5)中壯苗與生根培養(yǎng)，均在如下條件下進(jìn)行:溫度24~26°C、光照強(qiáng)度3000LX，光照時(shí)間為 llh/d。
[0071]最后應(yīng)說(shuō)明的是:以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明而并非限制本發(fā)明所描述的技術(shù)方案，因此，盡管本說(shuō)明書(shū)參照上述的各個(gè)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明已進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，但是，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，仍然可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或等同替換，而一切不脫離本發(fā)明的精神和范圍的 技術(shù)方案及其改進(jìn)，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。
【權(quán)利要求】
1.一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下歩驟: 1)、擬接種材料的選擇與預(yù)處理:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化新枝，剪去巳展平的葉片，用洗衣粉沖洗三遍，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3h ； 2)、外植體的消毒:在超凈臺(tái)上，先用75%(vol)乙醇溶液消毒I~2min,然后用0.2%(vol)的新潔爾敏溶液消毒15min,最后用10% (vol)次氯酸鈉溶液消毒15~20min,用無(wú)菌水沖洗三遍后無(wú)菌濾紙吸干水份； 3)、無(wú)菌系的建立:在超凈臺(tái)上將嫩枝切成1.3~2.0cm長(zhǎng)的莖段，每個(gè)莖段帶I~2個(gè)莖節(jié)，切除切口處因消毒而壞死的組織，將外植體培養(yǎng)于第一培養(yǎng)基進(jìn)行新芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，培育成無(wú)菌系； 4)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖:待莖段新芽伸長(zhǎng)至Icm以上時(shí)，將新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，并在該培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的增殖； 5)、將叢生芽在靠近試管苗最下面的葉片著生處下面0.3~0.4mm處切成單芽，切口為每個(gè)單芽最下面的葉片著生處下面0.3mm~0.4mm處,并將單芽接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)； 6)、試管苗的煉苗與移栽:將生根的試管苗移栽至泥炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開(kāi)薄膜煉苗，每天葉面噴水3~5次，15~20天后施肥料液；30~35天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，經(jīng)3~4個(gè)月培養(yǎng)后直接移 栽至土壤或大的容器中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述用于建立無(wú)菌系的第一培養(yǎng)基的配方為:MS+0.5~lmg/LZT+1.0~2.0mg/L ΒΑ+0.05~0.lmg/L NAA+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 5.5 ~6.5g/L，pH 值為 5.6 ~5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述用于誘導(dǎo)叢生芽并增殖的第二培養(yǎng)基的配方為:MS+2~3mg/LKT+0.2~0.3mg/L NAA+蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 5.5 ~6.5g/L，pH 值為 5.6 ~5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述用于試管苗壯苗與生根的第三培養(yǎng)基的配方為:l/2MS+0.5~1.0mg/L ΙΒΑ+0.5~IAC g/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉5.5~6.5g/L，pH值為5.6~5.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述步驟3)中無(wú)菌系的建立、所述步驟4)中叢生芽的誘導(dǎo)與增殖、以及所述步驟5)中壯苗與生根培養(yǎng)，均在如下條件下進(jìn)行:溫度24~26°C、光照強(qiáng)度3000LX，光照時(shí)間為10~12h/d0
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述的步驟6)的基質(zhì)中泥炭和珍珠巖的重量比為4:1~3:1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述的步驟6)的肥料液中含有0.1~0.2wt%硝酸銨、0.1~0.2wt%磷酸二氫鉀、0.1~.0.2wt%硫酸鎂。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103988777SQ201410143713
【公開(kāi)日】2014年8月20日 申請(qǐng)日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】陸錦明, 朱天華, 湯桂鈞 申請(qǐng)人:上海閔行區(qū)苗圃