牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養(yǎng)基及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養(yǎng)基，是在海綿上面均勻開有15個(gè)口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養(yǎng)瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經(jīng)定容調(diào)好PH值即成液體培養(yǎng)基，適量分裝到放有海綿的培養(yǎng)瓶中，使?fàn)I養(yǎng)液剛剛侵泡完海綿塊即可；液體培養(yǎng)基的組分組成為PDB培養(yǎng)基+MY培養(yǎng)基。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的海綿液體培養(yǎng)基，具有以下優(yōu)點(diǎn)：1、牛樟芝組培材料能充分吸收到營養(yǎng)成份，提高品質(zhì)及產(chǎn)量，增殖率可達(dá)5-6倍；2、海綿可重復(fù)利用，且液體培養(yǎng)基分裝配制比較方便，瓶子等用具容易清洗干凈；3、省去購買瓊脂粉的費(fèi)用，降低生產(chǎn)成本。
【專利說明】牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組培苗快繁領(lǐng)域，具體涉及牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]樟芝又名牛樟燕，屬于非裙菌目、多孔科、多年生蕈菌類，學(xué)名為(Antrodiacamphorata),是1990年才被生化界發(fā)表的新種。其生長區(qū)域?yàn)榕_灣山區(qū)海拔450-2000公尺山林間，只生長在臺灣特有百年以上的牛樟樹樹干腐朽之心材內(nèi)壁，或枯死倒伏之牛樟樹木材潮濕表面，其采集極為不易。目前，一般牛樟芝扦插枝的存活率為20%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的就是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了一種可提高牛樟芝扦插枝存活率的海綿液體培養(yǎng)基。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養(yǎng)基，是選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為1cm，在海綿上面均勻開有15個(gè)口徑為0.8cm,深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養(yǎng)瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經(jīng)定容調(diào)好PH值即成液體培養(yǎng)基，適量分裝到放有海綿的培養(yǎng)瓶中，使?fàn)I養(yǎng)液剛剛侵泡完海綿塊即可；所述液體培養(yǎng)基的組分組成為B5培養(yǎng)基+TDZ植物生長調(diào)節(jié)劑0.8mg/L+萘乙酸0.2-0.8mg/L。
[0005]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供了上述海綿液體培養(yǎng)基在牛樟芝扦插枝培育中的應(yīng)用。
`[0006]進(jìn)一步的，上述的應(yīng)用，包括以下步驟:
1)將上述的的分裝好的海綿液體培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌，滅菌溫度為121-123°c，滅菌壓力為0.11-0.13MP，滅菌時(shí)間為22-25分鐘，得到滅菌后培養(yǎng)基；
2)培養(yǎng)材料的接種:無菌狀態(tài)下，將牛樟芝培養(yǎng)材料分切成單芽分別插種到滅菌后的海綿液體培養(yǎng)基的V形孔中，進(jìn)行快速增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為30-35天，增殖率為5-6倍；
3)增殖材料的轉(zhuǎn)接:將步驟2)中增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)；此后當(dāng)培養(yǎng)到30-35天時(shí)，再次將材料進(jìn)行分切更換到新鮮的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；
4)生根培養(yǎng):將步驟3)得到的增殖培養(yǎng)后的牛樟芝增殖材料轉(zhuǎn)接到一定數(shù)量后，將其分切成單株轉(zhuǎn)接到添加有瓊脂粉的固體培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，經(jīng)過2~3個(gè)月培養(yǎng)煉苗后即得到牛樟芝組培苗移植株。
[0007]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明提供的海綿液體培養(yǎng)基，具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、牛樟芝組培材料能充分吸收到營養(yǎng)成份，提高品質(zhì)及產(chǎn)量，增殖率可達(dá)5-6倍，存活率可達(dá)80% ；
2、海綿可重復(fù)利用，且液體培養(yǎng)基分裝配制比較方便，瓶子等用具容易清洗干凈；3、省去購買瓊脂粉的費(fèi)用，降低生產(chǎn)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0008]實(shí)施例1:
(一)海綿液體培養(yǎng)基的制作:
選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為Icm即可，在海綿上面均勻開有15個(gè)口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養(yǎng)瓶底部，開孔的一面朝上。因不加瓊脂粉，可直接用自來水配制藥品并經(jīng)定容調(diào)好PH值即成液體培養(yǎng)基，最后適量分裝到放有海綿的培養(yǎng)瓶中，使?fàn)I養(yǎng)液剛剛侵泡完海綿塊即可；
(二)培養(yǎng)基的滅菌:
由于選用的海綿為耐高溫材料，主要成分為聚氨酯，具有抗腐蝕、無毒副作用、耐高溫(可達(dá)200°C)、強(qiáng)度高(回彈性好)、吸水性極強(qiáng)，可回收利用等優(yōu)點(diǎn)，經(jīng)過多次高壓滅菌后不變型仍可重復(fù)使用；分裝好的培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌(滅菌溫度為121-123度，壓力為
0.ll-ο.13MP，時(shí)間為22-25分鐘)，最后將滅菌好的液體培養(yǎng)基放到培養(yǎng)基儲藏室備用；
(三)培養(yǎng)材料的接種:
在無菌工作臺上將培養(yǎng)材料分切成單芽分別插種到海綿液體培養(yǎng)基的V形孔中，由于海綿有很好的回彈性和吸水性，對插在V形孔中的培養(yǎng)材料有一定的固定作用和保濕功能，利于培養(yǎng)物的生長和養(yǎng)分的吸收；
(四)培養(yǎng)材料的增殖培養(yǎng):
培養(yǎng)在海綿液體培養(yǎng)基上的材料，由于液體培養(yǎng)基中分子或離子運(yùn)動(dòng)較快，其基部能夠充分接觸到營養(yǎng)液并能較好的吸收養(yǎng)分，同時(shí)也將自身切口分泌出來的醌類有害物質(zhì)稀釋到液體培養(yǎng)基中，減少褐化的產(chǎn)生，從而達(dá)到快速增殖的效果，一般培養(yǎng)30-35天后增殖率可達(dá)到5-6倍；
(五)增殖材料的轉(zhuǎn)接:
當(dāng)增殖材料在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-35天后，培養(yǎng)材料不斷地增殖生長，已經(jīng)吸收了大部分的營養(yǎng)成份和水分，同時(shí)液體培養(yǎng)基中也積累了一定的醌類等有害成分；此時(shí)應(yīng)將增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)，此后當(dāng)培養(yǎng)到30-35天時(shí)，不斷地將材料進(jìn)行分切更換到新鮮的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，即可使生產(chǎn)達(dá)到一定數(shù)量和規(guī)模的材料；
(六)生根培養(yǎng):
牛樟芝增殖材料轉(zhuǎn)接到生產(chǎn)所需的數(shù)量后，將其分切成單株轉(zhuǎn)接到添加有瓊脂粉的固體培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，經(jīng)過2~3個(gè)月培養(yǎng)煉苗后即可出瓶移植。
[0009]最后應(yīng)說明的是:以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養(yǎng)基，其特征在于，是選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為1cm，在海綿上面均勻開有15個(gè)口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養(yǎng)瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經(jīng)定容調(diào)好PH值即成液體培養(yǎng)基，適量分裝到放有海綿的培養(yǎng)瓶中，使?fàn)I養(yǎng)液剛剛侵泡完海綿塊即可；所述液體培養(yǎng)基的組分組成為PDB培養(yǎng)基+MY培養(yǎng)基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海綿液體培養(yǎng)基在牛樟芝扦插枝培育中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟: O將權(quán)利要求1所述的的分裝好的海綿液體培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌，滅菌溫度為121-123°C，滅菌壓力為0.11-0.13MP，滅菌時(shí)間為22-25分鐘，得到滅菌后培養(yǎng)基； 2)培養(yǎng)材料的接種:無菌狀態(tài)下，將牛樟芝培養(yǎng)材料分切成單芽分別插種到滅菌后的海綿液體培養(yǎng)基的V形孔中，進(jìn)行快速增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為30-35天，增殖率為5-6倍； 3)增殖材料的轉(zhuǎn)接:將步驟2)中增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)；此后當(dāng)培養(yǎng)到30-35天時(shí)，再次將材料進(jìn)行分切更換到新鮮的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)； 4)生根培養(yǎng):將步驟3)得到的增殖培養(yǎng)后的牛樟芝增殖材料轉(zhuǎn)接到一定數(shù)量后，將其分切成單株轉(zhuǎn)接到添加有瓊脂粉的固體培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，經(jīng)過2~3個(gè)月培養(yǎng)煉苗后即得到牛樟芝組培苗移植株。
【文檔編號】A01G1/04GK103718961SQ201310697027
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】陳財(cái)寶 申請人:柳州市天姿園藝有限公司