一種垂花蕙蘭的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領域】，具體涉及一種垂花蕙蘭的組培快繁方法。該方法包括如下步驟，（1）垂花蕙蘭原球莖的誘導形成：培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基；（2）垂花蕙蘭原球莖的增殖培養(yǎng)：培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.8mg/L+KT0.3～0.8mg/L+50g/L?CW；（3）垂花蕙蘭原球莖分化和壯苗生根：培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA0.5～1.2mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+100g/L?PJ；（4）垂花蕙蘭試管苗的馴化和移栽。本發(fā)明建立了一個低廉高效的垂花蕙蘭組培快繁體系。
【專利說明】一種垂花蕙蘭的組培快繁方法【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領域】，具體涉及一種垂花蕙蘭的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘭花的經(jīng)濟價值很高，其中多數(shù)種是著名觀賞花卉和名貴藥用植物；垂花蕙蘭在國內(nèi)面世后，更顯王者氣象，連續(xù)多年在廣州花王評選中當選為花王。目前國內(nèi)外除育種研究外，大多數(shù)商業(yè)化蘭花繁殖均采用組織培養(yǎng)的方法進行。蘭花的組織培養(yǎng)自20世紀60年代發(fā)展至今，已得到了長足的發(fā)展，建立了較為完善的技術(shù)體系，但較高的培養(yǎng)基成本和較長的組培周期極大地影響了蘭花組培苗的利潤空間。
[0003]樹皮是加工木材時產(chǎn)生的有機廢棄物，來源廣泛，成本較低。目前國內(nèi)外一些蘭花如大花蕙蘭和鐵皮石斛等的栽培主要以松樹皮為基質(zhì),樹皮基質(zhì)的特點是重量輕、有機質(zhì)含量高、保水性較好、透氣性強和具有較高的陽離子交換量，樹皮還可提供植物生長所需的微量元素。陳卿然等(2013)報道發(fā)酵處理后的松樹皮更有利于大花蕙蘭的栽培，因為新鮮的松樹皮中有較多的酚類物質(zhì)和較高的C/N比。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種垂花蕙蘭的組培快繁方法，以建立一個低廉高效的垂花蕙蘭組培快繁技術(shù)體系。
[0005]本發(fā)明解決所述技術(shù)問題的方案是:一種垂花蕙蘭的組培快繁方法，包括如下步驟，
[0006](1)垂花蕙蘭原球莖的誘導形成:培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；其中培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基，白糖30g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121°C、1.1 kg/cm2下滅菌ISmin ;剖開消毒好的蒴果，把種子撒到無菌水中，搖勻，然后接種至培養(yǎng)基質(zhì)上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h ；
[0007](2)垂花蕙蘭原球莖的增殖培養(yǎng):培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA1.0 ~2.0mg/L+NAA0.3 ~0.8mg/L+KT0.3 ~0.8mg/L+50g/L CW (椰乳)；1/2MS為基本培養(yǎng)基，白糖20g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121°C、1.1 kg/cm2下滅菌ISmin ;取已誘導出的原球莖，接種于增殖培養(yǎng)基上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h ；
[0008](3)垂花蕙蘭原球莖分化和壯苗生根:培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0.5 ~1.2mg/L+NAA0.1 ~0.3mg/L+100g/L PJ (馬鈴薯汁)；1/2MS 為基本培養(yǎng)基，白糖20g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121°C、1.1 kg/cm2下滅菌18min ；將增殖培養(yǎng)的原球莖接種于分化和壯苗生根培養(yǎng)基上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h ；
[0009](4)垂花蕙蘭試管苗的馴化和移栽:將垂花蕙蘭生根試管苗從培養(yǎng)室移至塑料大棚放置3~5d后，去瓶蓋煉苗3~5d，然后從瓶內(nèi)取出垂花蕙蘭幼苗，用水輕輕洗去培養(yǎng)基，將待栽的垂花蕙蘭幼苗根部用0.1%多菌靈處理IOs后，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質(zhì)內(nèi)，覆膜保濕5~7d，其間每天通風透氣5~15min兩次，視光照強度適當加蓋遮陽網(wǎng)，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，噴施1000倍液的甲基托布津，此后進行正常的栽培管理。
[0010]作為改進，所述步驟(1)中蒴果的消毒方法為:取未開裂的垂花蕙蘭蒴果，先用70%~75%乙醇處理I~1.5min后，再蘸95%乙醇在酒精燈火焰上灼燒2~3次。
[0011]作為改進，所述步驟(4)中栽培基質(zhì)由松樹皮和珍珠巖按體積比1:1配制而成。
[0012]本發(fā)明在垂花蕙蘭原球莖的誘導形成、原球莖增殖、原球莖分化和生根壯苗階段的培養(yǎng)基中添加了 40%松樹皮，而現(xiàn)有研究中松樹皮一般只在組培苗的馴化移栽過程中使用；培養(yǎng)基質(zhì)經(jīng)高溫高壓滅菌、冷凝后，松樹皮沉于底部，培養(yǎng)基位于上部，大大節(jié)約了培養(yǎng)基的用量，而且實驗發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)效果優(yōu)于普通的培養(yǎng)基；原球莖增殖后使用一次性成苗技術(shù)進行原球莖分化和壯苗生根，簡化了生產(chǎn)程序，縮短了成苗時間；馴化移栽階段利用50%松樹皮+50%珍珠巖為基質(zhì)對垂花蕙蘭組培苗進行假植煉苗，移栽成活率高達98%，建立了低廉高效的垂花蕙蘭組培快繁技術(shù)體系。該體系與常規(guī)蘭花組培方法相比，可縮短周期時長25%，節(jié)約成本35%，適用于工廠化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0013]實施例1
[0014]一種垂花蕙蘭的組培快繁方法，包括如下步驟:
[0015](I)垂花蕙蘭原球莖的誘導形成:培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基，白糖30g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121。。、1.1kg/cm2下滅菌18min。取未開裂的垂花蕙蘭蒴果,先用70%~75%乙醇處理I~1.5min后,再蘸95%乙醇在酒精燈火焰上灼燒2~3次；剖開消毒好的蒴果，把種子撒到無菌水中，搖勻，再接種至培養(yǎng)基質(zhì)上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h。培養(yǎng)40d后，即可誘導形成綠色的原球莖。
[0016](2)垂花蕙蘭原球莖的增殖培養(yǎng):培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0 ~2.0mg/L+NAA0.3 ~0.8mg/L+KT0.3 ~0.8mg/L+50g/L CW (椰乳)；1/2MS為基本培養(yǎng)基，白糖20g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121°C、1.1kg/cm2下滅菌18min。取已誘導出的原球莖,接種于增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)；培養(yǎng)溫度為25±2°C,光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h。40d后，增殖系數(shù)可達12以上。
[0017](3)垂花蕙蘭原球莖分化和壯苗生根:培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0.5 ~1.2mg/L+NAA0.1 ~0.3mg/L+100g/L PJ(馬鈴薯汁)；1/2MS 為基本培養(yǎng)基，白糖20g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121。。、1.1kg/cm2下滅菌18min。將增殖培養(yǎng)的原球莖接種于分化和壯苗生根培養(yǎng)基上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h。60d后，95%原球莖已分化出芽，芽基部長出根，SP可長成完整植株，達到移栽標準。
[0018](4)垂花蕙蘭試管苗的馴化和移栽:將垂花蕙蘭生根試管苗從培養(yǎng)室移至塑料大棚放置3~5d后，去瓶蓋煉苗3~5d，然后從瓶內(nèi)取出垂花蕙蘭幼苗，用水輕輕洗去培養(yǎng)基，將待栽的垂花蕙蘭幼苗根部用0.1%多菌靈處理IOs后，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基\質(zhì)內(nèi)，栽培基質(zhì)由松樹皮和珍珠巖按體積比1:1配制而成，覆膜保濕5~7d，其間每天通風透氣5~15min兩次，視光照強度適當加蓋遮陽網(wǎng)，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，噴施1000倍液的甲基托布津，此后進行正常的栽培管理。30d后，垂花蕙蘭試管苗的移栽成活率達 98%。
[0019]組培苗是垂花蕙蘭規(guī)?；耘嗟闹饕N苗來源。本發(fā)明通過不斷的探索實驗，形成了一套價廉而高效的垂花蕙蘭組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)體系。通過在離體培養(yǎng)基中使用成本較低的有機廢棄物松樹皮，克服了現(xiàn)有植物組培快繁中，由于使用較多的培養(yǎng)基而使組培苗價格居高不下的問題；發(fā)明中使用的一次性成苗技術(shù)簡化了生產(chǎn)程序，縮短了成苗時間，提高了生產(chǎn)效率，進一步降低了垂花蕙蘭組培苗成本。本發(fā)明在原球莖的誘導形成、原球莖增殖、原球莖分化和生根壯苗的培養(yǎng)基中使用了松樹皮，松樹皮經(jīng)高溫高壓滅菌后釋放的一些有效成分有利于原球莖的誘導、增殖、分化和試管苗的生根；該方法全過程使用了松樹皮，提高了垂花蕙蘭組培苗的適應性， 促成了較高的移栽成活率，也為后期提高垂花蕙蘭組培苗的栽培效果和成品花質(zhì)量奠定了基礎。
【權(quán)利要求】
1.一種垂花蕙蘭的組培快繁方法，其特征在于:包括如下步驟， (1)垂花蕙蘭原球莖的誘導形成:培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；其中培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基，白糖30g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121。。、1.1 kg/cm2下滅菌ISmin ;剖開消毒好的蒴果，把種子撒到無菌水中，搖勻，然后接種至培養(yǎng)基質(zhì)上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h ； (2)垂花蕙蘭原球莖的增殖培養(yǎng):培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0 ~2.0mg/L+NAA0.3 ~0.8mg/L+KT0.3 ~0.8mg/L+50g/L CW (椰乳)；1/2MS為基本培養(yǎng)基，白糖20g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121°C、1.1 kg/cm2下滅菌ISmin ;取已誘導出的原球莖，接種于增殖培養(yǎng)基上；培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h ； (3)垂花蕙蘭原球莖分化和壯苗生根:培養(yǎng)基質(zhì)為40%松樹皮+60%培養(yǎng)基；培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA0.5 ~1.2mg/L+NAA0.1 ~0.3mg/L+100g/L PJ (馬鈴薯汁)；1/2MS 為基本培養(yǎng)基，白糖20g/L，瓊脂5~8g/L，pH5.6 ;培養(yǎng)基質(zhì)在121。。、1.1 kg/cm2下滅菌18min ;將增殖培養(yǎng)的原球莖接種于分化和壯苗生根培養(yǎng)基上；培養(yǎng)溫度為25±2°C,光照強度為1500~2000Lx，光暗周期比為12h:12h ； (4)垂花蕙 蘭試管苗的馴化和移栽:將垂花蕙蘭生根試管苗從培養(yǎng)室移至塑料大棚放置3~5d后，去瓶蓋煉苗3~5d，然后從瓶內(nèi)取出垂花蕙蘭幼苗，用水輕輕洗去培養(yǎng)基，將待栽的垂花蕙蘭幼苗根部用0.1%多菌靈處理IOs后，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質(zhì)內(nèi)，覆膜保濕5~7d，其間每天通風透氣5~15min兩次，視光照強度適當加蓋遮陽網(wǎng)，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，噴施1000倍液的甲基托布津，此后進行正常的栽培管理。
2.如權(quán)利要求1所述的一種垂花蕙蘭的組培快繁方法，其特征在于:所述步驟(1)中蒴果的消毒方法為:取未開裂的垂花蕙蘭蒴果，先用70%~75%乙醇處理I~1.5min后，再蘸95%乙醇在酒精燈火焰上灼燒2~3次。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種垂花蕙蘭的組培快繁方法，其特征在于:所述步驟(4)中栽培基質(zhì)由松樹皮和珍珠巖按體積比1:1配制而成。
【文檔編號】A01H4/00GK103609452SQ201310634412
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】陳建中, 孫慶俊, 張海洋, 李百健 申請人:陳建中