一種鷓鴣菜人工育苗方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種鷓鴣菜人工培養(yǎng)方法。其步驟為：選擇生長(zhǎng)旺盛的鷓鴣菜，將藻體表面的附著物和雜藻清除；在含青霉素鈉20-60TU/L的溶液中滅菌20-40分鐘；將鷓鴣菜切割成1-3毫米大小的組織塊，移放到200—300目的篩絹上，加入培養(yǎng)液，在溫度為20-25℃，光照強(qiáng)度1500-2000Lux，光照周期12:12小時(shí)，每天至少露干3-5小時(shí)，每4-5天換一次培養(yǎng)液，在更換培養(yǎng)液的同時(shí)用無菌的蒸餾水洗滌藻體，培養(yǎng)15-20天后可見種苗。鷓鴣菜的人工育苗技術(shù)可以大大縮短生長(zhǎng)周期，一年四季都可以生產(chǎn)苗種，增加養(yǎng)殖頻率繼而增加鷓鴣菜的產(chǎn)量。滿足生產(chǎn)的需求進(jìn)而滿足患者的需要，具有巨大的社會(huì)效益。
【專利說明】一種鷓鴣菜人工育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鷓鴣菜組織培養(yǎng)人工育苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鶴聘菜leprieurii (Montagne) J.1 屬于仙菜目紅葉藻科是暖溫性海藻,分布于我國浙江、福建以及廣東沿海。由于鶴?鳥菜含有海人草酸(degenic acid)及海人草素(degene aside),具有驅(qū)蟲作用，被中醫(yī)用來治療寄生于人體大腸內(nèi)的蛔蟲，我國中成藥復(fù)方鷓鴣菜散就是以鷓鴣菜為主要原料制成的。它還經(jīng)常被添加到一些治療由蟲積或蟲咬引起的疾病的中藥配方中。如治療蟲積型急性胰腺炎，治療蟲積型失眠癥和治療蟲咬型臁瘡等。此外，還有學(xué)者對(duì)其降壓作用機(jī)理進(jìn)行探討，研究表明鷓鴣菜具有降低血壓的作用。隨著對(duì)鷓鴣菜的深入研究，它將會(huì)成為應(yīng)用廣泛的海洋植物藥用資源。但是由于環(huán)境變化及人為破壞等原因，鷓鴣菜資源量卻逐步減少，無法滿足社會(huì)需求。雖然我國學(xué)者曾進(jìn)行人工栽培研究，但因生產(chǎn)周期長(zhǎng)、成本高、種苗發(fā)育參差不齊等諸多問題未能得以推廣，目前藥農(nóng)仍靠自然生長(zhǎng)采收鷓鴣菜。
[0003]目前鷓鴣菜的養(yǎng)殖未有組織培養(yǎng)育苗技術(shù)，還是沿用自然采苗的傳統(tǒng)模式，每年七、八月份在鷓鴣菜即將衰老的季節(jié)將采苗繩或其它附著物置于采苗區(qū)讓藻體放散出來的四分孢子或者果孢子附著，到第二年一月份再將附著有孢子的繩索移植到養(yǎng)殖區(qū)域，隨著氣候慢慢變暖，附著著的孢子就會(huì)開始發(fā)育，四、五月份為鷓鴣菜生長(zhǎng)最旺盛的時(shí)期就可以收割鷓鴣菜。
[0004]自然生長(zhǎng)的養(yǎng)殖 模式存在生產(chǎn)周期固定且長(zhǎng)、成本高、種苗發(fā)育參差不齊等諸多問題。采苗時(shí)間固定，一旦錯(cuò)過采苗時(shí)間就很難采到苗種。因?yàn)殒咦釉诜派⒑髸?huì)迅速找到合適的附著物附著，如果找不到附著物的就會(huì)迅速死亡。由于是自然生長(zhǎng)模式，其生長(zhǎng)遵循自身發(fā)育規(guī)律，一年只能在固定月份收獲藻體，因此為了獲得足夠的藻體只能擴(kuò)大養(yǎng)殖場(chǎng)地。養(yǎng)殖場(chǎng)地的擴(kuò)大必然增加成本。傳統(tǒng)方式采集的孢子其發(fā)育能力不可控，導(dǎo)致發(fā)育后的種苗可能出現(xiàn)參差不齊的現(xiàn)象。再則附著物上的孢子密度也不能精確的控制，這樣就出現(xiàn)了孢子附著多的地方就生長(zhǎng)茂盛，孢子附著少的地方就生長(zhǎng)稀疏的情況。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是:本發(fā)明的目的是利用植物細(xì)胞所具有的“全能性”，提供一種鷓鴣菜種苗人工培養(yǎng)方法。本發(fā)明的方法生產(chǎn)周期短、成本低、種苗健壯整齊。
[0006]本發(fā)明提供的技術(shù)方案
本發(fā)明鷓鴣菜種苗人工培養(yǎng)按以下方法步驟進(jìn)行:
第一步:鷓鴣菜藻體組織塊準(zhǔn)備
a.選料:選擇生長(zhǎng)旺盛期即采收的鷓鴣菜，將鷓鴣菜藻體表面的附著物和雜藻清除；
b.滅菌:將鷓鴣菜藻體浸泡在含青霉素鈉20-60TU/L的溶液中滅菌20-40分鐘；
c.切塊:將經(jīng)滅菌的鷓鴣菜藻體切割成1-3毫米大小的組織塊，然后用無菌水漂洗；d.附著:將切好的鷓鴣菜組織塊移放到經(jīng)滅菌好的200—300目的篩絹上，篩絹?zhàn)鳛榻M織塊的附著基；
第二步:鷓鴣菜組織塊培養(yǎng)
e.苗種附著:將鋪滿鷓鴣菜組織塊的篩絹在常溫下用培養(yǎng)液保持濕潤3-4小時(shí)，培養(yǎng)液的添加量以培養(yǎng)液浸過篩絹為準(zhǔn)，保證鷓鴣菜組織塊不跑位，使鷓鴣菜組織塊附著于篩絹上；f.種苗培育:鷓鴣菜組織塊附著牢固后移入培養(yǎng)箱，同時(shí)適當(dāng)加大培養(yǎng)液用量，以淹沒組織塊為限，培養(yǎng)溫度為20-25°C，光照強(qiáng)度1500-2000Lux，光照周期12:12小時(shí)，每天至少露干3-5小時(shí)，每4-5天換一次培養(yǎng)液，在更換培養(yǎng)液的同時(shí)用無菌的蒸餾水洗滌，以去除累積在藻體表面上的鹽分；
g.出苗:鷓鴣菜組織塊經(jīng)培育15-20天后可見種苗，出苗的篩絹直接放置到養(yǎng)殖的海區(qū)即可生長(zhǎng)成鷓鴣菜；
培養(yǎng)液的配制:上述培養(yǎng)液用消毒海水和蒸餾水按比例調(diào)配，比重控制在
1.005-1.010之間，調(diào)配好的海水加入以下組分，其含量為質(zhì)量比:
組份含量
NaN035-lOppm
ΚΗ2Ρ040.5-1.0ppm
6-節(jié)氛基嘿呤0.05-0.lppm
二氯苯氧乙酸0.05-0.lppm
蔡乙酸0.05-0.lppm。
[0007]本發(fā)明的有益效果
鷓鴣菜的人工育苗技術(shù)可以大大縮短生長(zhǎng)周期，組織塊在15-20天左右就可以出苗，這樣一年四季都可以生產(chǎn)苗種，增加養(yǎng)殖頻率繼而增加鷓鴣菜的產(chǎn)量。這樣在不變或減少養(yǎng)殖用地的情況下大大增加了生物量，為養(yǎng)殖戶帶來可觀的經(jīng)濟(jì)效益。人工育苗避開了自然采苗的不可控性，可以做到操作最優(yōu)化。組織塊供體最優(yōu)化、組織塊布局密度最適化、育苗條件最優(yōu)化……這樣育出的種苗健壯整齊。整齊健壯的苗種保證了鷓鴣菜的質(zhì)量，也為以其為原料的產(chǎn)品的質(zhì)量保證奠定了基礎(chǔ)。產(chǎn)量的提高可以滿足生產(chǎn)的需求進(jìn)而滿足患者的需要，也為新研究、新開發(fā)做了鋪墊，具有巨大的社會(huì)效益。
【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳述。
[0009]本發(fā)明鷓鴣菜苗的組織培養(yǎng)主要步驟分二步:鷓鴣菜組織塊準(zhǔn)備,鷓鴣菜組織塊培養(yǎng)。
[0010]第一步原料選擇:鷓鴣菜組織塊的選擇和切割是決定鷓鴣菜苗種發(fā)育的首要條件，只有健康優(yōu)良的鷓鴣菜組織塊才能培育出健壯的鷓鴣菜苗種。在鷓鴣菜生長(zhǎng)旺盛期采收鷓鴣菜，將鷓鴣菜藻體表面的附著物和雜藻清除。清洗附著物和雜藻時(shí)要注意，盡量減少對(duì)鷓鴣菜藻體的損傷，保持鷓鴣菜藻體的完整，便于后續(xù)步驟的進(jìn)行。將洗干凈的的鷓鴣菜藻體進(jìn)行滅菌處理，將鷓鴣菜藻體浸泡在含青霉素鈉20-60TU/L的溶液中滅菌20-40分鐘。處理完的鷓鴣菜藻體在解剖鏡下進(jìn)行挑選，選擇比較嫩的完整藻體進(jìn)行組織塊切割，切成1-3毫米大小的組織塊，用無菌消毒水漂洗。隨后將鷓鴣菜組織塊移放到滅菌好的200—300目的篩絹上，篩絹?zhàn)鳛榻M織塊的附著基。
[0011]第二步組織塊培養(yǎng):將鋪滿鷓鴣菜組織塊的篩絹保持濕潤3-4小時(shí)，以便于鷓鴣菜組織塊附著。鷓鴣菜組織塊附著期間培養(yǎng)液添加量不宜加太多，以確保篩絹浸過培養(yǎng)液，但鷓鴣菜組織塊不跑位為限，目的是讓鷓鴣菜組織塊更好地附著于篩絹上。鷓鴣菜組織塊附著牢固后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，這時(shí)可適當(dāng)加大培養(yǎng)液用量，以淹沒組織塊為限。培養(yǎng)溫度為20-25°C，光照強(qiáng)度1500-2000LUX，光照周期12:12小時(shí)，即每天光照及黑暗時(shí)間各12小時(shí)，每天至少露干3-5小時(shí)，每4-5天換一次培養(yǎng)液，在更換培養(yǎng)液的同時(shí)用無菌的蒸餾水洗滌，以去除累積在藻體表面上的鹽分。15-20天后可見種苗，出苗的篩絹直接放置到養(yǎng)殖的海區(qū)即可生長(zhǎng)成健康健壯的鷓鴣菜。
[0012]培養(yǎng)液的配制，培養(yǎng)液是決定苗種好壞的關(guān)鍵。培養(yǎng)液用消毒海水和蒸餾水按比例調(diào)配，比重控制在1.005-1.010之間，調(diào)配好的海水加入NaN03使其在培養(yǎng)液中的濃度為5-10ppm(質(zhì)量比、下同)、加入ΚΗ2Ρ04使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.5-1.0ppm、加入6-芐氨基嘌呤使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.05-0.lppm、加入二氯苯氧乙酸使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.05-0.lppm、加入萘乙酸使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.05-0.lppm,配成最終的培養(yǎng)液。由于NaN03、ΚΗ2Ρ04、6_芐氨基嘌呤(6_BA)、二氯苯氧乙酸(2，4_D)、萘乙酸用量較少，可以分別配置成濃縮液，置于冰箱中冷藏，用時(shí)取相應(yīng)的量添加到培養(yǎng)液中即可。如果在配制過程發(fā)現(xiàn)濃縮液有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰該濃縮液，重新進(jìn)行配制。
[0013]本發(fā)明中， 藻體消毒可采用其他廣譜抗生素替代青霉素鈉同樣能達(dá)到本發(fā)明的藻體消毒目的。
實(shí)施例
[0014]實(shí)施例1:
將洗干凈的鷓鴣菜在含青霉素鈉25TU/L的溶液中滅菌25分鐘，在解剖鏡下切割成1.2毫米的鷓鴣菜組織塊，用無菌水漂洗后移至篩絹上用培養(yǎng)液保持濕潤3小時(shí)；將附著鷓鴣菜組織塊的篩絹放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20°C，光照強(qiáng)度為1500LUX，光周期12:12小時(shí)，每天露干4小時(shí)，每四天更換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)15天后種苗移至海區(qū)放養(yǎng)。
[0015]培養(yǎng)液用消毒海水和蒸懼水調(diào)至鹽度為6.5%。(比重1.005),添加NaN03 使其在培養(yǎng)液中的濃度為6ppm (質(zhì)量比、下同)、加入ΚΗ2Ρ04使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.6ppm、加入6-芐氨基嘌呤使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.06ppm、加入二氯苯氧乙酸使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.06ppm、加入萘乙酸使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.06ppm,配制成培養(yǎng)液。
[0016]實(shí)施例2:
將洗干凈的鷓鴣菜在含青霉素鈉25TU/L的溶液中滅菌25分鐘，在解剖鏡下切割成1.2毫米的組織塊，用無菌水漂洗后移至篩絹上用培養(yǎng)液保持濕潤3小時(shí)。將附著組織塊的篩絹放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX，光周期12:12小時(shí)，每天露干5小時(shí)，每四天更換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)15天后種苗移至海區(qū)放養(yǎng)。
[0017]培養(yǎng)液用消毒海水和蒸懼水調(diào)至鹽度為12.8%0 (比重1.010),添加NaN03 使其在培養(yǎng)液中的濃度為8ppm (質(zhì)量比、下同)、添加ΚΗ2Ρ04使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.8ppm、添加6-芐氨基嘌呤使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.06ppm、添加二氯苯氧乙酸使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.06ppm、添加萘乙酸使其在培養(yǎng)液中的濃度為0.06ppm,配制成培養(yǎng)液。[0018]本發(fā)明選取鷓鴣菜最優(yōu)的組織塊通過營養(yǎng)繁殖人工栽培技術(shù)育成新苗種，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組織塊在15至20天左右就可以出苗，大大縮短了生產(chǎn)周期。而且只要藻體生長(zhǎng)良好就可以作為組織塊供體，不需要在固定的時(shí)間進(jìn)行，保證在藻體生長(zhǎng)的任何時(shí)間都可以培育種苗。生產(chǎn)周期的縮短可以一年內(nèi)多次養(yǎng)殖鷓鴣菜，大大提高鷓鴣菜的產(chǎn)量且無需擴(kuò)大養(yǎng)殖場(chǎng)地，減少成本投入。由于本技術(shù)的苗種是由組織塊發(fā)育而來而不是自然采集，可以保證種苗健壯整齊,成品養(yǎng)殖高產(chǎn)穩(wěn)定。
【權(quán)利要求】
1.一種鷓鴣菜人工育苗方法，按以下步驟進(jìn)行:第一步:鷓鴣菜藻體組織塊準(zhǔn)備a.選料:選擇生長(zhǎng)旺盛期即采收的鷓鴣菜，將鷓鴣菜藻體表面的附著物和雜藻清除；b.滅菌:將鷓鴣菜藻體浸泡在含青霉素鈉20-60TU/L的溶液中滅菌20-40分鐘；c.切塊:將經(jīng)滅菌的鷓鴣菜藻體切割成1-3毫米大小的組織塊，然后用無菌消毒水漂洗；d.附著:將切好的鷓鴣菜組織塊移放到經(jīng)滅菌好的200—300目的篩絹上，篩絹?zhàn)鳛榻M織塊的附著基；第二步:鷓鴣菜組織塊培養(yǎng)e.苗種附著:將鋪滿鷓鴣菜組織塊的篩絹在常溫下保持濕潤3-4小時(shí)，培養(yǎng)液的添加量以浸過篩絹為準(zhǔn)，保證鷓鴣菜組織塊不跑位，使鷓鴣菜組織塊附著于篩絹上；f.種苗培育:鷓鴣菜組織塊附著牢固后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱，同時(shí)適當(dāng)加大培養(yǎng)液用量，以淹沒組織塊為限，培養(yǎng)溫度為20-25°C，光照強(qiáng)度1500-2000Lux，光照周期12:12小時(shí)，每天至少露干3-5小時(shí)，每4-5天換一次培養(yǎng)液，在更換培養(yǎng)液的同時(shí)用無菌的蒸餾水洗滌，以去除累積在藻體表面上的鹽分；g.出苗:鷓鴣菜組織塊經(jīng)培育15-20天后可見種苗，出苗的篩絹直接放置到養(yǎng)殖的海區(qū)即可生長(zhǎng)成鷓鴣菜；培養(yǎng)液的配制:上述培養(yǎng)液用消毒海水和蒸餾水按比例調(diào)配，比重控制在1.005-1.010之間，調(diào)配好的海水加入以下組分，其含量為質(zhì)量比:組份含量NaN035-lOppmΚΗ2Ρ040.5-1.0ppm6-節(jié)氛基P票呤 0.05-0.lppm二氯苯氧乙酸0.05-0.lppm蔡乙酸0.05-0.lppm。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103636496SQ201310612301
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】陳加雄, 李偉濱, 林傳旭, 馬慶濤, 陳楷亮 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院汕頭海洋植物實(shí)驗(yàn)站