一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法。包括取材、扦插培養(yǎng)、室內(nèi)管理、越夏養(yǎng)護(hù)、越冬管理和壯苗培育，本發(fā)明通過(guò)采用低頻率的超聲波進(jìn)行處理，能促進(jìn)生根，明顯加速和誘導(dǎo)植物細(xì)胞的分裂，刺激細(xì)胞生長(zhǎng)，加速原生質(zhì)體的蛋白質(zhì)合成，提高了不定芽增殖率。且本發(fā)明中采取間歇輻照，不會(huì)產(chǎn)生激烈的空化效應(yīng)，避免了超聲對(duì)細(xì)胞造成的局部損傷。本發(fā)明通過(guò)采取在暗培養(yǎng)中培養(yǎng)生根大大減少了生長(zhǎng)抑制劑，利于生根。本發(fā)明提供了完整的越夏養(yǎng)護(hù)、腋芽誘導(dǎo)、越冬管理和壯苗培育的具體方法，促進(jìn)了芍藥扦插快繁技術(shù)在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用，對(duì)芍藥種苗規(guī)?；a(chǎn)具有重要意義。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]芍藥(Paeonia lactiflora Pali)，為芍藥科芍藥屬多年生宿根草本植物，自古就有“花相”之譽(yù)，其花兼具色、香、韻之美，盛開(kāi)之時(shí)，其花朵碩大，花容俏麗。芍藥作為中國(guó)的傳統(tǒng)名花，除在園林綠化、藥用等方面外，芍藥在鮮切花生產(chǎn)方面應(yīng)用前景亦廣闊。但芍藥種苗生產(chǎn)相對(duì)滯后，無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。多數(shù)觀賞芍藥品種由于雌、雄蕊瓣化率高而喪失或部分喪失結(jié)實(shí)性，且播種繁殖不能保持母本性狀，故多采用傳統(tǒng)的分株法進(jìn)行繁殖。一株三年生芍藥種苗采用分株法繁殖，僅能分得3-5棵子株，繁殖系數(shù)較低。
[0003]扦插繁殖具有簡(jiǎn)單易行、成本低廉，繁殖系數(shù)較大的優(yōu)點(diǎn)，已在許多園藝植物的快速繁殖上得以應(yīng)用。芍藥為多年生草本植物，地上部分莖無(wú)腋芽分化，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為芍藥即使扦插生根，也由于缺少生長(zhǎng)點(diǎn)而不能成苗。因此芍藥扦插快繁研究起步較晚，且主要集中在插穗生根和插穗初期成活方面。張延?xùn)|等(2009)選擇10個(gè)中原芍藥品種進(jìn)行扦插試驗(yàn)，認(rèn)為其成活率(生根與形成愈傷組織)為20%-93%，整體成活率為86%。
[0004]目前，仍存在不定芽增殖率低、組培苗馴化移栽成活困難等問(wèn)題，還達(dá)不到實(shí)際應(yīng)用水平的要求。此外，生根苗的越夏養(yǎng)護(hù)、腋芽誘導(dǎo)、越冬管理和壯苗培育等方面的研究還存在大片空白。因此，若能解決芍藥扦插快繁的上述問(wèn)題，使芍藥扦插快繁技術(shù)達(dá)到應(yīng)用水平，對(duì)芍藥種苗規(guī)?；a(chǎn)具有重要意義。`
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法，不僅可以大大提高不定芽增殖率，而且還提出了生根苗的越夏養(yǎng)護(hù)、腋芽誘導(dǎo)、越冬管理和壯苗培育的具體方法，促進(jìn)了芍藥扦插快繁技術(shù)在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用，對(duì)芍藥種苗規(guī)?；a(chǎn)具有重要意義。
[0006]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法，包括以下步驟: 步驟一、取材
4月下旬至5月上旬芍藥開(kāi)花前后選取長(zhǎng)勢(shì)健壯、無(wú)病害的嫩莖，將芍藥嫩莖剪制為具有三個(gè)節(jié)后作為插穗備用，插穗上切口距上芽Icm ；
步驟二、扦插培養(yǎng)
去除插穗最下端的一片復(fù)葉，用生根劑浸泡插穗下端l_2cm處30-60 min,然后將插穗置于溫度為20-25°C，相對(duì)濕度為85-90%的溫室內(nèi)靜置12h，之后將插穗插入裝有基質(zhì)的三角瓶?jī)?nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)，插入深度為3cm，同時(shí)對(duì)三角瓶施加頻率為25kHz的超聲波，超聲波每工作5s,停止5~8s,總計(jì)工作8min ;所述基質(zhì)由泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液組成，各組分的體積比例為3:1:3:1:0.005:0.005，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ；步驟三、室內(nèi)管理
保持溫室的溫度為20~30°C，相對(duì)濕度75~85%，并對(duì)插穗進(jìn)行間歇噴霧，噴霧方法為:生根前每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液，生根后每 5 d噴一次質(zhì)量百分比濃度為0.2%的KH2PO4溶液和質(zhì)量百分比濃度為0.2%的尿素溶液以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)；
步驟四、越夏養(yǎng)護(hù)
插穗生根28~32天后開(kāi)始煉苗，煉苗完成后進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段，溫室內(nèi)每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液；進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段后即開(kāi)始進(jìn)行腋芽誘導(dǎo)，期間定期噴施復(fù)合肥溶液和微量元素，并用萌芽劑涂抹最下端隱芽；所述萌芽劑由6-芐基腺嘌、激動(dòng)素、赤霉素、甘油和羊毛脂組成，各組份配比為6-芐基腺嘌
0.04%-0.10%、激動(dòng)素 0.01%-0.05%、赤霉素 0.005%-0.02%、二甲亞砜 1.0-3.0%、甘油 1% 和羊毛脂 94.93%-97.59% ；
步驟五、越冬管理
入冬后將生根苗置于溫棚內(nèi)，保持溫度不低于0°C，相對(duì)濕度不低于70% ；
步驟六、壯苗培育
第二年3月解凍后將生根苗從容器內(nèi)取出，連同基質(zhì)團(tuán)塊移栽入大田，澆一次透水，起 8~12cm高土壟保溫保墑。
[0007]步驟二所述基質(zhì)的制備方法為:按體積比為3:1:3:1:0.005:0.005稱(chēng)取泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ;然后將泥炭、珍珠巖、蛭石和人畜糞便按比例攪拌均勻，并進(jìn)行滅菌，之后向基質(zhì)中加入圓褐固氮菌菌液，準(zhǔn)備使用時(shí)的前7天加入枯草桿菌菌液。
[0008]本發(fā)明中的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌種保藏編號(hào)為ATCC6633,保藏于美國(guó)菌種保藏中心，又稱(chēng)美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，位于美國(guó)維吉尼亞州。本發(fā)明中的枯草芽孢桿菌ATCC6633購(gòu)自南京便診生物科技有限公司。
[0009]本發(fā)明中的圓褐固氮菌(Azotobacter chroococcum)菌種保藏編號(hào)ACCC10098,包藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。本發(fā)明中的圓褐固氮菌ATCC6633 購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。
[0010]本發(fā)明的有益效果有以下幾個(gè)方面:
一、本發(fā)明采用頻率為25kHz的超聲波進(jìn)行處理，頻率較低能促進(jìn)生根，明顯加速和誘導(dǎo)植物細(xì)胞的分裂，刺激細(xì)胞生長(zhǎng)，加速原生質(zhì)體的蛋白質(zhì)合成，提高了不定芽增殖率。且本發(fā)明中超聲波每工作5s，停止5~8s，總計(jì)工作8min，輻照之間存在短期間隙，因此不會(huì)產(chǎn)生激烈的空化效應(yīng)，避免了超聲對(duì)細(xì)胞造成的局部損傷。
[0011]二、生長(zhǎng)抑制劑是植物體內(nèi)一種對(duì)生根有妨礙作用的物質(zhì)，生命周期中隨著時(shí)間的延長(zhǎng)含量增高。而扦插繁殖所取的材料來(lái)自一些已經(jīng)長(zhǎng)成的植株，其體內(nèi)含有大量生長(zhǎng)抑制劑，大大抑制了扦插后生根。本發(fā)明通過(guò)采取在暗培養(yǎng)中培養(yǎng)生根大大減少了生長(zhǎng)抑制劑，利于生根。
[0012]三、本發(fā)明誘導(dǎo)生根的基質(zhì)中含有圓褐固氮菌大大提高了基質(zhì)內(nèi)的含氮量，促進(jìn)了植株的生長(zhǎng)，利于幼苗的成長(zhǎng)。此外，圓褐固氮菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生生長(zhǎng)素，進(jìn)一步促進(jìn)了根部的誘導(dǎo)生成。[0013]四、由于枯草芽孢桿菌在自然界中廣泛存在，對(duì)人畜無(wú)毒無(wú)害，不污染環(huán)境，具有顯著的抗菌活性和極強(qiáng)的抗逆能力，且枯草芽孢桿菌可促進(jìn)植物種子、幼苗和根系的生長(zhǎng)發(fā)育，增強(qiáng)了植物的抗病性。本發(fā)明的基質(zhì)在使用前加入枯草芽孢桿菌既可以起到抗病的作用也可以可到促進(jìn)幼苗和根系生長(zhǎng)發(fā)育的作用，提高了生根率。
[0014]五、本發(fā)明提供了完整的越夏養(yǎng)護(hù)、腋芽誘導(dǎo)、越冬管理和壯苗培育的具體方法， 促進(jìn)了芍藥扦插快繁技術(shù)在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用，對(duì)芍藥種苗規(guī)模化生產(chǎn)具有重要意義。
[0015]六、本發(fā)明通過(guò)采取多種渠道同時(shí)促進(jìn)植物生根、生長(zhǎng)，結(jié)果繁殖率高，整體成活率達(dá)到94%，成活苗長(zhǎng)勢(shì)健壯，性狀優(yōu)良。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
[0017]一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法，包括以下步驟:
步驟一、取材
4月下旬至5月上旬芍藥開(kāi)花前后選取長(zhǎng)勢(shì)健壯、無(wú)病害的嫩莖，將芍藥嫩莖剪制為具有三個(gè)節(jié)后作為插穗備用，插穗上切口距上芽Icm ；
步驟二、扦插培養(yǎng)
去除插穗最下端的一片復(fù)葉，用生根劑浸泡插穗下端l_2cm處30-60 min,然后將插穗置于溫度為20-25°C，相對(duì)濕度為85-90%的溫室內(nèi)靜置12h，之后將插穗插入裝有基質(zhì)的三角瓶?jī)?nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)，插入深度為3cm，同時(shí)對(duì)三角瓶施加頻率為25kHz的超聲波，超聲波每工作5s,停止5~8s,總計(jì)工作8min ;所述基質(zhì)由泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液組成，各組分的體積比例為3:1:3:1:0.005:0.005，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ；
步驟三、室內(nèi)管理`保持溫室的溫度為20~30°C，相對(duì)濕度75~85%，并對(duì)插穗進(jìn)行間歇噴霧，噴霧方法為:生根前每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液，生根后每 5 d噴一次質(zhì)量百分比濃度為0.2%的KH2PO4溶液和質(zhì)量百分比濃度為0.2%的尿素溶液以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)；
步驟四、越夏養(yǎng)護(hù)
插穗生根28~32天后開(kāi)始煉苗，煉苗完成后進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段，溫室內(nèi)每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液；進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段后即開(kāi)始進(jìn)行腋芽誘導(dǎo)，期間定期噴施復(fù)合肥溶液和微量元素，并用萌芽劑涂抹最下端隱芽；所述萌芽劑由6-芐基腺嘌、激動(dòng)素、赤霉素、甘油和羊毛脂組成，各組份配比為6-芐基腺嘌
0.04%-0.10%、激動(dòng)素 0.01%-0.05%、赤霉素 0.005%-0.02%、二甲亞砜 1.0-3.0%、甘油 1% 和羊毛脂 94.93%-97.59% ；
步驟五、越冬管理
入冬后將生根苗置于溫棚內(nèi)，保持溫度不低于0°C，相對(duì)濕度不低于70% ；
步驟六、壯苗培育第二年3月解凍后將生根苗從容器內(nèi)取出，連同基質(zhì)團(tuán)塊移栽入大田，澆一次透水，起 8~12cm高土壟保溫保墑。
[0018]步驟二所述基質(zhì)的制備方法為:按體積比為3:1:3:1:0.005:0.005稱(chēng)取泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ;然后將泥炭、珍珠巖、蛭石和人畜糞便按比例攪拌均勻，并進(jìn)行滅菌，之后向基質(zhì)中加入圓褐固氮菌菌液，準(zhǔn)備使用時(shí)的前7天加入枯草桿菌菌液。
[0019]實(shí)施例1
一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法，包括以下步驟:
步驟一、取材
4月25日，芍藥開(kāi)花前后選取長(zhǎng)勢(shì)健壯、無(wú)病害的嫩莖，將芍藥嫩莖剪制為具有三個(gè)節(jié)后作為插穗備用，插穗上切口距上芽Icm ；
步驟二、扦插培養(yǎng)
去除插穗最下端的一片復(fù)葉，用生根劑浸泡插穗下端l_2cm處45 min，然后將插穗置于溫度為22°C，相對(duì)濕度為87%的溫室內(nèi)靜置12h，之后將插穗插入裝有基質(zhì)的三角瓶?jī)?nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)，插入深度為3cm，同時(shí)對(duì)三角瓶施加頻率為25kHz的超聲波，超聲波每工作5s，停止6s,總計(jì)工作8min ;所述基質(zhì)由泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液組成，各組分的體積比例為3:1:3:1:0.005:0.005，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ；
步驟三、室內(nèi)管理
保持溫室的溫度為25°C，相對(duì)濕度80%，并對(duì)插穗進(jìn)行間歇噴霧，噴霧方法為:生根前每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液，生根后每5 d噴一次質(zhì)量百分比濃度為0.2%的KH2PO4溶液和質(zhì)量百分比濃度為0.2%的尿素溶液以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng);`
步驟四、越夏養(yǎng)護(hù)
插穗生根28~32天后開(kāi)始煉苗，煉苗完成后進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段，溫室內(nèi)每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液；進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段后即開(kāi)始進(jìn)行腋芽誘導(dǎo)，期間定期噴施復(fù)合肥溶液和微量元素，并用萌芽劑涂抹最下端隱芽；所述萌芽劑由6-芐基腺嘌、激動(dòng)素、赤霉素、甘油和羊毛脂組成，各組份配比為6-芐基腺嘌0.07%、激動(dòng)素0.03%、赤霉素0.012%、二甲亞砜2.0%、甘油1%和羊毛脂96.26% ；
步驟五、越冬管理
入冬后將生根苗置于溫棚內(nèi)，保持溫度不低于0°C，相對(duì)濕度不低于70% ；
步驟六、壯苗培育
第二年3月解凍后將生根苗從容器內(nèi)取出，連同基質(zhì)團(tuán)塊移栽入大田，澆一次透水，起 IOcm高土壟保溫保墑。
[0020]步驟二所述基質(zhì)的制備方法為:按體積比為3:1:3:1:0.005:0.005稱(chēng)取泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ;然后將泥炭、珍珠巖、蛭石和人畜糞便按比例攪拌均勻，并進(jìn)行滅菌，之后向基質(zhì)中加入圓褐固氮菌菌液，準(zhǔn)備使用時(shí)的前7天加入枯草桿菌菌液。
[0021]結(jié)果表明:本發(fā)明通過(guò)采取多種渠道同時(shí)促進(jìn)植物生根、生長(zhǎng)，結(jié)果繁殖率高，整體成活率達(dá)到94%,成活苗長(zhǎng)勢(shì)健壯,性狀`優(yōu)良。
【權(quán)利要求】
1.一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法，其特征在于，包括以下步驟:步驟一、取材4月下旬至5月上旬芍藥開(kāi)花前后選取長(zhǎng)勢(shì)健壯、無(wú)病害的嫩莖，將芍藥嫩莖剪制為具有三個(gè)節(jié)后作為插穗備用，插穗上切口距上芽Icm ；步驟二、扦插培養(yǎng)去除插穗最下端的一片復(fù)葉，用生根劑浸泡插穗下端l_2cm處30-60 min,然后將插穗置于溫度為20-25°C，相對(duì)濕度為85-90%的溫室內(nèi)靜置12h，之后將插穗插入裝有基質(zhì)的三角瓶?jī)?nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)，插入深度為3cm，同時(shí)對(duì)三角瓶施加頻率為25kHz的超聲波，超聲波每工作5s,停止5~8s,總計(jì)工作8min ;所述基質(zhì)由泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液組成，各組分的體積比例為3:1:3:1:0.005:0.005，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9個(gè)/mL ；步驟三、室內(nèi)管理保持溫室的溫度為20~30°C，相對(duì)濕度75~85%，并對(duì)插穗進(jìn)行間歇噴霧，噴霧方法為:生根前每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液，生根后每 5 d噴一次質(zhì)量百分比濃度為0.2%的KH2PO4溶液和質(zhì)量百分比濃度為0.2%的尿素溶液以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)；步驟四、越夏養(yǎng)護(hù)插穗生根28~32天后開(kāi)始煉苗，煉苗完成后進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段，溫室內(nèi)每周?chē)娨淮螌①|(zhì)量百分比濃度為25%多菌靈溶液稀釋500倍后的溶液；進(jìn)入越夏養(yǎng)護(hù)階段后即開(kāi)始進(jìn)行腋芽誘導(dǎo)，期間定期噴施復(fù)合肥溶液和微量元素，并用萌芽劑涂抹最下端隱芽；所述萌芽劑由6-芐基腺嘌、激動(dòng)素、赤霉素、甘油和羊毛脂組成，各組份配比為6-芐基腺嘌 0.04%-0.10%、激動(dòng)素 0.01%-0.05%、赤霉素 0.005%-0.02%、二甲亞砜 1.0-3.0%、甘油 1% 和羊毛脂 94.93%-97.59% ；步驟五、越冬管理入冬后將生根苗置于溫棚內(nèi)，保持溫度不低于0°C，相對(duì)濕度不低于70% ；步驟六、壯苗培育第二年3月解凍后將生根苗從容器內(nèi)取出，連同基質(zhì)團(tuán)塊移栽入大田，澆一次透水，起 8~12cm高土壟保溫保墑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芍藥嫩莖扦插繁殖的方法，其特征在于:步驟二所述基質(zhì)的制備方法為:按體積比為3:1:3:1:0.005:0.005稱(chēng)取泥炭、珍珠巖、蛭石、人畜糞便、 枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液，其中枯草桿菌菌液和圓褐固氮菌菌液的濃度為2.4X IO9 個(gè)/mL;然后將泥炭、珍珠巖、蛭石和人畜糞便按比例攪拌均勻，并進(jìn)行滅菌，之后向基質(zhì)中加入圓褐固氮菌菌液，準(zhǔn)備使用時(shí)的前7天加入枯草桿菌菌液。
【文檔編號(hào)】A01G7/06GK103493677SQ201310505898
【公開(kāi)日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】史國(guó)安, 劉春洋, 郭香鳳, 施江, 李志勇 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)