專利名稱：一種綠花重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種綠花重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)快繁方法。
背景技術(shù)：
鐵線蓮(Clematis florida Thunb)為毛茛科、鐵線蓮屬藤本植物。具有很高的觀賞和藥用功能，藥用以根或全草入藥。利尿，理氣通便，活血止痛。用于小便不利，腹脹，便閉；外用治關(guān)節(jié)腫痛，蟲蛇咬傷。我國是鐵線蓮的原產(chǎn)地，有100多個品種，生于低山區(qū)的丘陵灌叢中，多為單瓣鐵線蓮。重瓣鐵線蓮“ Clematis florida var.plena D.Don ”是鐵線蓮的一個變種，花朵顏色多樣，外圈6片花瓣，內(nèi)為細(xì)碎花瓣組成的“球”，具有極高的觀賞價值。重瓣鐵線蓮是國際花卉園藝上一類重要垂直綠化材料，每年種苗交易量達(dá)數(shù)百萬之多。綠花重瓣鐵線蓮更加珍貴，是花卉中少有的品種。綠花重瓣鐵線蓮花色新奇，花瓣為淺綠色有上百枚，整個花朵成綠色秀球，花徑可達(dá)6厘米以上，三年生以上的植株可節(jié)節(jié)開花，具有極高的觀賞價值和開發(fā)前景。綠花重瓣鐵線蓮不能產(chǎn)生種子，繁殖方式是采用壓條、分株或扦插，繁殖速度很慢，限制了珍貴品種綠花重瓣鐵線蓮生產(chǎn)的發(fā)展。采用組織培養(yǎng)的方法可以快速繁殖珍貴品種綠花重瓣鐵線蓮，提供栽培種苗，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種綠花重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)快繁方法。包括以下步驟:
I)取綠花重瓣鐵線蓮幼莖的莖尖，在超凈臺上用無菌水沖洗、75%酒精浸泡處理20 30秒，再用0.1 0.2% 升汞浸泡消毒6 10分鐘，無菌水沖洗干凈后接種到叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)；2)將初代誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的叢生芽分成單個小芽，接種到叢芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)；3)當(dāng)芽苗長至2 3cm時接種到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；
采用的培養(yǎng)基配方如下:
①叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+ 6-BA 1.0 2.0 mg/L + NAA 0.02 0.2 mg/L + KT 0.2
0.5 mg/L + 白糖 20 30g/L + 土豆 50g/L + 瓊脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8，
②叢芽增殖培養(yǎng)基:MS+ 6-BA 2.0 3.0 mg/L + NAA (λ I (λ 5 mg/L + KT (λ 5
1.0 mg/L + 白糖 20 30g/L + 蛋白胨 lg/L + 瓊脂 0.3 0.5%, pH5.6 5.8，
③壯苗生根培養(yǎng)基:1/2MS+ 0.2 0.5mg/L NM + 0.2 0.5mg/L IBA +活性碳0.1%+ 白糖 20g/L + 蛋白胨 lg/L + 瓊脂 0.3 0.5%，pH5.6 5.8 ;
培養(yǎng)條件如下:
①初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 溫度23°C 25°C，空氣濕度60% 65%，光照50 100lx, 8h/d ；
②繼代培養(yǎng):溫度24 26°C，濕度65% 70%，光照強(qiáng)度800 12001x，光照10h/d；
③生根培養(yǎng):溫度25 27°C，濕度65% 70%，光照強(qiáng)度1500 20001x，光照12h/d。1/2MS指MS培養(yǎng)基配方元素減半，配方元素不包括蔗糖和瓊脂。
本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn):
綠花重瓣鐵線蓮采用幼莖的莖尖誘導(dǎo)產(chǎn)生叢芽成苗，具有生長繁殖速度快，能保持親本的優(yōu)良特性，種苗成品率高等優(yōu)點(diǎn)，該品種快繁方法目前尚末見報道過。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
一種綠花重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)快繁方法，具體步驟如下:
1、外植體處理和接種
采集綠花重瓣鐵線蓮?fù)庵搀w莖尖，在超凈臺上用無菌水沖洗、75%的酒精處理30秒，再用0.1 %升汞浸泡消毒10分鐘，無菌水沖洗干凈后將莖尖接種于叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。當(dāng)叢芽產(chǎn)生后，轉(zhuǎn)入?yún)惭吭鲋撑囵B(yǎng)基再培養(yǎng)，不斷擴(kuò)大種苗數(shù)量。需要大苗時，將2 3 cm長的叢芽切下后轉(zhuǎn)到壯苗生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，即生長成帶根的綠花重瓣鐵線蓮試管苗。2、培養(yǎng)基配方:根據(jù)不同生育階段其培養(yǎng)基最佳配方如下:
①叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS + 6-BA 1.0 2.0 mg/L + NAA 0.02 0.2 mg/L + KT 0.2
0.5 mg/L + 白糖 20 30g/L + 土豆 50g/L + 瓊脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8。培養(yǎng)基添加激素量及激素組合6-ΒΑ+ΝΑΑ ；ΚΤ+ΝΑΑ ；6-ΒΑ+ΚΤ+ΝΑΑ ;雖然都能芽誘產(chǎn)生叢芽，但誘導(dǎo)叢芽率差異極顯著，不加土豆汁和添加土豆汁誘導(dǎo)叢芽率差異也是極顯著。因此試驗(yàn)結(jié)果該配方是最佳的組合。
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②叢芽增殖培養(yǎng)基:MS+ 6-BA 2.0 3.0 mg/L + NAA 0.1 0.5 mg/L + KT
0.5 1.0 mg/L + 白糖 20 30g/L + 蛋白胨 lg/L + 瓊脂 0.3 0.5%, pH5.6 5.8。培養(yǎng)基添加激素量及激素組合6-ΒΑ+ΝΑΑ ；KT+NAA ;6_BA+KT+NAA ;叢芽都能增殖，但增殖倍數(shù)差異極顯著，不加蛋白胨和添加蛋白胨叢芽粗壯差異極顯著。因此試驗(yàn)結(jié)果該配方是叢芽增殖最佳的組合。③壯苗生根培養(yǎng)基:1/2MS+ 0.2 0.5mg/LNAA + 0.2 0.5mg/LIBA + 活性碳
0.1% + 白糖 20g/L + 蛋白胨 lg/L + 瓊脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8。培養(yǎng)基添加激素量及激素NAA、IBA ;綠花重瓣鐵線蓮幼芽都能生根，但生根遲、早和數(shù)量差異極顯著，不加蛋白胨、活性碳和添加蛋白胨、活性碳苗粗壯差異極顯著。因此試驗(yàn)結(jié)果該配方是壯苗生根最佳的組合。配制方法按常規(guī)操作進(jìn)行。2、培養(yǎng)條件設(shè)定
①叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng):接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)架上培養(yǎng)，設(shè)定溫度23°C 25°C ;空氣濕度 60% 65% ;光照 50 100 lx，8h/d。②叢芽增殖培養(yǎng):接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)架架上培養(yǎng)，設(shè)定溫度24 26°C，濕度65% 70%，光照強(qiáng)度800 12001x，光照10h/d。③壯苗培養(yǎng):接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)架上培養(yǎng)，設(shè)定溫度25 27°C，濕度65% 70%，光照強(qiáng)度1500 20001x，光照12h/d。
權(quán)利要求
1.一種綠花重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:包括以下步驟: I)取綠花重瓣鐵線蓮幼莖的莖尖，在超凈臺上用無菌水沖洗、75%酒精浸泡處理20 30秒，再用0.1 0.2%升汞浸泡消毒6 10分鐘，無菌水沖洗干凈后接種到叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)；2)將初代誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的叢生芽分成單個小芽，接種到叢芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)；3)當(dāng)芽苗長至2 3cm時可以接種到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)； 采用的培養(yǎng)基配方如下: ①叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+ 6-BA 1.0 2.0 mg/L + NAA 0.02 0.2 mg/L + KT 0.2 0.5 mg/L + 白糖 20 30g/L + 土豆 50g/L + 瓊脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8， ②叢芽增殖培養(yǎng)基:MS+ 6-BA 2.0 3.0 mg/L + NAA (λ I (λ 5 mg/L + KT (λ 5 1.0 mg/L + 白糖 20 30g/L + 蛋白胨 lg/L + 瓊脂 0.3 0.5%, pH5.6 5.8， ③壯苗生根培養(yǎng)基:1/2MS+ 0.2 0.5mg/L NM + 0.2 0.5mg/L IBA +活性碳0.1%+ 白糖 20g/L + 蛋白胨 lg/L + 瓊脂 0.3 0.5%，pH5.6 5.8 ; 培養(yǎng)條件如下: ①初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 溫度23°C 25°C，空氣濕度60% 65%，光照50 100lx, 8h/d ； ②繼代培養(yǎng):溫度24 26°C，濕度65% 70%，光照強(qiáng)度800 12001x，光照10h/d； ③生根培養(yǎng):溫度25 27°C，濕度65% 70%，光照強(qiáng)度1500 20001x，光照12h/d。
全文摘要
本發(fā)明提供一種綠花重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)快繁方法，步驟包括1)取綠花重瓣鐵線蓮幼莖的莖尖，在超凈臺上用無菌水沖洗、75％酒精浸泡處理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分鐘，無菌水沖洗干凈后接種到叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)；2)將初代誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的叢生芽分成單個小芽，接種到叢芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)；3)當(dāng)芽苗長至2～3cm時接種到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。本發(fā)明方法可以快速繁殖綠花重瓣鐵線蓮，不僅可以節(jié)約培育種苗成本、提高生產(chǎn)效率，而且不受外界條件的限制，四季皆可進(jìn)行，節(jié)約育苗占地面積，可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)良試管苗，進(jìn)行規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK103202229SQ201310124718
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月11日
發(fā)明者張緒璋, 葉月琴, 魏道智, 湯紹康, 吳團(tuán)結(jié), 陳三輝, 吳雨英, 吳枝泉 申請人:福建農(nóng)林大學(xué)