專(zhuān)利名稱(chēng)：一種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蛹蟲(chóng)草是以蠶蛹為宿主的一種真菌，與冬蟲(chóng)夏草同科同屬，其化學(xué)成分及藥理藥效與冬蟲(chóng)夏草極為相似，并且是衛(wèi)生部批準(zhǔn)的新資源食品，適用人群廣泛。然而，目前，人工培養(yǎng)的蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量有限，其營(yíng)養(yǎng)成分含量低，質(zhì)量參差不齊，無(wú)法滿(mǎn)足人們的需要。質(zhì)量較高的蛹蟲(chóng)草，其藥效成分如蟲(chóng)草素含量遠(yuǎn)高于冬蟲(chóng)夏草，蟲(chóng)草素的藥用價(jià)值極為廣泛，在免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗菌抗病毒、抗炎抗白血病等均具有明顯的療效，因此蟲(chóng)草素含量的高低，也是蛹蟲(chóng)草優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，以提高蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素的含量,從而生產(chǎn)高質(zhì)量的蛹蟲(chóng)草。為了達(dá) 到上述目的，本發(fā)明提供一種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基主要由干香蛹粉和大米粉組成。優(yōu)選地，其中所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基由A液與B粉混合制成；其中，所述A液含有如下濃度的成分=KH2PO41. 2^1. 5g/L ；NaH2P04 O. 8^1. 2g/L ;所述B粉含有以重量計(jì)的干蠶蛹粉和大米粉，且所述A液與B粉的液固比為1:1，所述干蠶蛹粉或大米粉的粒徑彡O. 18mm。優(yōu)選地，其中所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的0%_100%。優(yōu)選地，其中所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的40%_100%。優(yōu)選地，其中所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的50%。優(yōu)選地，其中所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的80%。優(yōu)選地，其中所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的100%。優(yōu)選地，其中所述干蠶蛹粉或大米粉的粒徑彡O. 18mm。本發(fā)明還提供上述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟以純凈水將ΚΗ2Ρ04、NaH2PO4溶解、并充分混勻后再加入干蠶蛹粉、大米粉混合均勻，裝入培養(yǎng)瓶，密封，滅菌，冷卻。優(yōu)選地，其中所述滅菌的條件為121°C，1.1Mpa滅菌3(T45 min。本發(fā)明進(jìn)一步提供上述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基在蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)中的應(yīng)用。相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果
本發(fā)明主要以干蠶蛹粉和大米(B組分)為研究對(duì)象，研究了以蠶蛹和大米不同比例的培養(yǎng)基培養(yǎng)的蛹蟲(chóng)草的蟲(chóng)草素含量的區(qū)別，首次獲得可培養(yǎng)出含有較高蟲(chóng)草素含量的蛹蟲(chóng)草的培養(yǎng)基并發(fā)現(xiàn)其中干蠶蛹粉所占比例為40%以上時(shí)，蟲(chóng)草素的含量隨之有所增加，并且在50%、80%以及100%時(shí)蟲(chóng)草素含量較佳。


圖1為本發(fā)明中提供的培養(yǎng)基中干蠶蛹粉含量對(duì)應(yīng)的蟲(chóng)草變化圖。
具體實(shí)施例方式應(yīng)該指出，以下具體說(shuō)明都是例示性的，旨在對(duì)本發(fā)明提供進(jìn)一步的發(fā)明。除非另有說(shuō)明，本文使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域人員通常理解的相同含義。下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)闡述本發(fā)明的具體內(nèi)容?！?、培養(yǎng)基的配制
蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基為水溶液，由干蠶蛹粉(江蘇省溧陽(yáng)市蠶蛹加工廠)、大米粉、KH2PO4 (磷酸二氫鉀)以及NaH2PO4 (磷酸二氫鈉)構(gòu)成，其中干蠶蛹購(gòu)自江蘇省溧陽(yáng)市蠶蛹加工廠，并粉碎成粒徑< O. 18mm的干蠶蛹粉；大米購(gòu)自樺川縣樺譽(yù)糧油有限責(zé)任公司，并粉碎成粒徑(O. 18mm的大米粉，蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下
稱(chēng)取KH2PO4 1.5 g^NaH2PO4 I g加入純凈水中溶解并充分混勻，定容至I L，得到鹽溶液。(同樣鹽溶液準(zhǔn)備11份)
I)精確稱(chēng)取IOOOg大米粉，加入到上述制備好的I L鹽溶液中混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹含量為0，即得到編號(hào)為0%的培養(yǎng)基。2)分別精確稱(chēng)取900g大米粉，和IOOg干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的10%，即得到編號(hào)為10%的培養(yǎng)基。

3)分別精確稱(chēng)取SOOg大米粉，和200g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的20%，即得到編號(hào)為20%的培養(yǎng)基。4) 分別精確稱(chēng)取700g大米粉，和300g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的IL鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的30%，即得到編號(hào)為30%的培養(yǎng)基。5)分別精確稱(chēng)取600g大米粉，和400g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的40%，即得到編號(hào)為40%的培養(yǎng)基。6)分別精確稱(chēng)取500g大米粉，和500g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的50%，即得到編號(hào)為50%的培養(yǎng)基。7)分別精確稱(chēng)取400g大米粉，和600g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的60%，即得到編號(hào)為60%的培養(yǎng)基。8)分別精確稱(chēng)取300g大米粉，和700g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的70%，即得到編號(hào)為70%的培養(yǎng)基。9)分別精確稱(chēng)取200g大米粉，和SOOg干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的80%，即得到編號(hào)為80%的培養(yǎng)基。10)分別精確稱(chēng)取IOOg大米粉，和900g干蠶蛹粉混合后加入到上述制備好的I L鹽溶液中再混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹占蠶蛹和大米總重量的90%，即得到編號(hào)為90%的培養(yǎng)基。11)精確稱(chēng)取IOOOg干蠶蛹粉，加入到上述制備好的I L鹽溶液中混合均勻，平均裝入40個(gè)培養(yǎng)瓶中(50mL/個(gè))，此培養(yǎng)基中蠶蛹含量占蠶蛹粉與大米總重量的100%，即得到編號(hào)為100%的培養(yǎng)基。分裝完全后密封、121 °C，1.1Mpa滅菌3(T45 min、冷卻，得到該培養(yǎng)基。二、蛹蟲(chóng)草的培養(yǎng)與粉碎
I)采用以下方法進(jìn)行蛹蟲(chóng)草的 無(wú)菌培養(yǎng)、收獲以及干燥，培養(yǎng)兩類(lèi)蛹蟲(chóng)草，菌種分別為SZ和GZ，其中菌種SZ為蘇州桑蠶專(zhuān)科學(xué)校提供；菌種GZ購(gòu)于貴州益生原生物技術(shù)有限公司該方法包括以下步驟
A、接種在超凈臺(tái)中向裝有所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中接種蛹蟲(chóng)草菌種(SZ或GZ)，為液體菌種，密度控制在3-5個(gè)菌球/mL，每培養(yǎng)瓶I mL，在溫度22°C、濕度75 85%條件下避光培養(yǎng)3 5天，至蛹蟲(chóng)草菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基表面；
B、第5 20天采用的光照培養(yǎng)白天12小時(shí)日光燈光照，溫度2(T22°C、濕度80 85%，光照強(qiáng)度控制在100 150Lx ;晚上12小時(shí)閉光，溫度18 20°C、濕度75 85% ;每天通風(fēng)2次，早晚各一次,每次20 30分鐘；
C、第20 35天采用的光照培養(yǎng)白天12小時(shí)自然光加日光燈光照，溫度2(T22°C、濕度75% 85%，總光照強(qiáng)度控制在1000 1200 Lx ;晚上12小時(shí)閉光，溫度18 20°C、濕度75 85% ;每天通風(fēng)2次，早晚各一次，每次20 30分鐘；
D、收獲光照培養(yǎng)后，將所述培養(yǎng)瓶中成熟的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體取出，剩余部分按照步驟C的方法繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體成熟；
E、干燥將收獲的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體置于墊有紗布的不銹鋼盤(pán)中，均勻鋪開(kāi)，3(T37°C熱風(fēng)循環(huán)烘干待用，其水分含量控制在10%以下。2)粉碎
分別稱(chēng)取50 g上述烘干的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體,放入超微破碎機(jī)中，超微粉碎6 min,破碎全過(guò)程用Γ Ο 的水作為冷卻液，確保有效成分的釋放和生物活性的穩(wěn)定。三、蟲(chóng)草素含量檢測(cè)
精確稱(chēng)取各上述不同培養(yǎng)基培養(yǎng)的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體制成的蛹蟲(chóng)草粉50mg于15mL離心管中，加入5mL超純水，渦旋混勻后，放于超聲波清洗機(jī)中超聲50min，20°C。取ImL于1. 5mLEP管中12000rpm離心15min，取ΙΟΟμΙ上清液于新的EP管中，加入900μ1流動(dòng)相溶液(流動(dòng)相溶液為15%的O. 01磷酸鹽緩沖液和85%色譜級(jí)甲醇)，12000rpm離心15min，上清由高效液相色譜法檢測(cè)蟲(chóng)草素含量。每種蛹蟲(chóng)草粉三次重復(fù)。其中高效液相色譜法的檢測(cè)條件為ApoLLo C18柱(250 mmX4. 6 mm, 5 Mm),柱溫30 °C，檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm，流動(dòng)相甲醇(色譜級(jí))一O. 01 moL/L磷酸鈉緩沖液(pH 6.6)15:85，流速 O. 700 mL/min，進(jìn)樣量 10 μ L。四、檢測(cè)結(jié)果分析檢測(cè)結(jié)果處理后見(jiàn)圖1可以看出，兩種菌種的蟲(chóng)草素變化趨勢(shì)基本相同，當(dāng)蠶蛹含量在40%-100%的范圍內(nèi)時(shí)，培養(yǎng)基中隨著干蠶蛹粉所占比例的不斷增加，SZ和GZ兩種菌種生長(zhǎng)的蛹蟲(chóng)草檢測(cè)的蟲(chóng)草素的含量也在不斷地增加，而在這個(gè)范圍內(nèi)，蠶蛹含量達(dá)到50%、80%以及100%時(shí)蟲(chóng)草素的含量較佳。以上所述，僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明的核心技術(shù)特征的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些潤(rùn)飾和改進(jìn)也應(yīng)屬于本發(fā)明的專(zhuān)利 保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基主要由干蠶蛹粉和大米粉組成。
2.如權(quán)利要求1所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基由A液與B粉混合制成；其中，所述A液含有如下濃度的成分=KH2PO41. 2 1. 5g/L ；NaH2PO4 O. 8 1. 2g/L ;所述B粉含有以重量計(jì)的干蠶蛹粉和大米粉，且所述A液與B粉的液固比為1: 1，所述干蠶蛹粉或大米粉的粒徑< O. 18mm。
3.如權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的0%-100%。
4.如權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的40%-100%。
5.如權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的50%。
6.如權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的80%。
7.如權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基中，干蠶蛹粉占B粉重量的100%。
8.—種權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟以純凈水將KH2P04、NaH2P04溶解、并充分混勻后再加入干蠶蛹粉、大米粉混合均勻，裝入培養(yǎng)瓶，密封，滅菌，冷卻。
9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述滅菌的條件為121°C，1.1Mpa滅菌30 45 min。
10.—種權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基在蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用，所述蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基由A液與B粉混合制成；其中，所述A液含有如下濃度的成分KH2PO41.2~1.5g/L；NaH2PO4 0.8~1.2g/L；所述B粉含有以重量計(jì)的干蠶蛹粉和大米粉，且A液與B粉的液固比為1:1；以純凈水將KH2PO4、NaH2PO4溶解、并充分混勻后再加入干蠶蛹粉、大米粉混合均勻，裝入培養(yǎng)瓶，密封，滅菌，冷卻。本發(fā)明所提供的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草。本發(fā)明通過(guò)研究大米和干蠶蛹粉的最佳比例而首次找到可培養(yǎng)出含有較高蟲(chóng)草素含量的蛹蟲(chóng)草的培養(yǎng)基，并發(fā)現(xiàn)其中干蠶蛹粉所占比例為40%以上時(shí)，蟲(chóng)草素的含量有所增加，并且在50%、80%以及100%時(shí)蟲(chóng)草素含量較佳。
文檔編號(hào)A01G1/04GK103044119SQ20131000429
公開(kāi)日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2013年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月7日
發(fā)明者張耀洲, 張麗, 陳劍清, 蓋其靜, 舒特俊 申請(qǐng)人:正源堂(天津)生物科技有限公司