馬精液稀釋液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種馬精液稀釋液及其制備方法，本發(fā)明的馬精液稀釋液包含以下重量份的原料：葡萄糖45~75份，雙糖2.5~5.5份，棉籽糖1.5~3.5份，檸檬酸鈉0.4~0.8份，檸檬酸鉀0.5~0.9份，Hepes9.5~9.6份，水1000份，相對于1000份水相同體積的脫脂奶，以及相對1000ml稀釋液，用量為100萬-300萬國際單位的抗生素。其制備方法為將上述組分溶解于水中，高壓滅菌，冷卻，與經(jīng)加熱、過濾并冷卻的脫脂奶混合，然后加入抗生素，密封即得。本發(fā)明的馬精液稀釋液可有效延長馬精子的存活時間，提高保存質量和活率，提高精子的質膜完整性和頂體完整性，進而提高母馬受胎率。
【專利說明】馬精液稀釋液及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種馬精液稀釋液，該馬精液稀釋液用于馬精液稀釋后常溫或者低溫體外保存及母馬的人工授精，屬于動物繁殖【技術領域】。
【背景技術】
[0002]我國是世界養(yǎng)馬大國且資源豐富，據(jù)畜禽遺傳品種志(2010)統(tǒng)計，我國擁有41個馬種和29個驢種，但是生產方式較為落后，繁殖技術多年停滯不前，甚至有些地區(qū)出現(xiàn)嚴重倒退。近些年，隨著國內馬術運動、休閑騎乘及娛樂觀賞馬業(yè)的逐漸興起，全國有大小型養(yǎng)馬場、馬術俱樂部、馬匹改良站(點)等上萬家，由國外進口的優(yōu)質種公馬數(shù)量有所增加，但仍無法滿足我國對優(yōu)質種公馬育種需求日益擴大的新形勢的需要，且地域分布極不平衡。由于各地運動用馬繁育種馬運輸成本過高，嚴重妨礙了優(yōu)質種公馬的利用，亟需推廣現(xiàn)代馬屬動物人工授精技術體系。
[0003]目前，馬精液保存技術主要分為液態(tài)保存和冷凍保存兩種。液態(tài)保存主要以低溫保存為主，隨著國外的馬種登記委員會允許使用低溫和冷凍精液配種獲得的幼駒進行登記，精液低溫保存運輸技術得到快速發(fā)展。低溫保存技術可以保證馬精液在短時間內(3-5天)保持較高的活率，其受胎率與自然交配相近，故使用廣泛。此外，馬精液冷凍保存技術可以最大程度克服地域和時間的制約，長時間保存馬品種的遺傳資源。但是其應用技術推廣仍遠不如牛等家畜普及，主要因為很多優(yōu)秀的種公馬精液不適合冷凍保存，且精液冷凍制作程序較為復雜，技術性較強，解凍后精子活率較低溫保存精液低，且人工授精率較鮮精低。
[0004]早期進行人工授精及精液保存時主要使用以葡萄糖或蔗糖為基礎的稀釋液，其保存時間短、精液保存時間也短。后改為以奶類為主的稀釋液進行保存，但是其只使用奶類作為稀釋液成分，未添加葡萄糖等糖類及緩沖物質來調節(jié)保存過程中稀釋液的PH值變化，對精子的保存時間和質膜完整性產生不良的影響。
[0005]用于馬精液保存的稀釋液種類很多，大多數(shù)是以牛奶、卵黃或乳脂/明膠為基礎的稀釋液。雖然卵黃稀釋液能夠獲得類似的牛奶稀釋液效果，但是其制作工藝較為復雜，通常也不能提高精子質量或受胎率，因此使用較少。近些年，人們開始研究確定成分的稀釋液來減少其中的有害物質，而這些物質可能同樣存在于復雜的生物物質(如牛奶和卵黃)中。對于低溫保存后精液質量較差的種公馬，應使用不同的稀釋液進行保存實驗以找到最適合這匹種公馬的稀釋液。國內關于馬精液稀釋液的報道較少且較早，稀釋液配制單一，效果較差；目前，國外精液保存技術已經(jīng)商業(yè)化，主要的稀釋液有INRA96?、INRA82、Kenney、E-Z Minxin'\Universal 等。
[0006]海藻糖是由兩個葡萄糖分子構成的非還原性雙糖，其在抗逆性強的生物體內含量豐富，可在極端環(huán)境(高溫、高滲透壓和低溫)下對精子起到保護作用。人們在小鼠、兔和牛的精液冷凍保存中添加海藻糖，通過檢測解凍后精子的活率、質膜完整性和頂體完整性等發(fā)現(xiàn)，海藻糖可顯著提高精子凍后的生物功能，減少低溫對其造成的損傷。人們還發(fā)現(xiàn)海藻糖不僅可以為精子的代謝提供能量物質，還可以在脫水精子外形成一保護膜，防止精子因脫水而受到損傷。
[0007]但是，如前所述，當用作動物精液稀釋液時，稀釋液的組成、滲透壓、不同成分與精液的成分之間存在復雜的相互作用，甚至稀釋液中不同的成分之間也存在復雜的相互作用，因而制約了其在實際生產中的應用。另外，由于動物精液中存在復雜的生理成分，對于不同的動物種類來說，同樣的稀釋液往往顯示出相差很大的效果，其中的具體機理目前仍然有待于進一步的研究。目前，將海藻糖等雙糖用于馬精液稀釋液具有何種效果的報道尚未見明確報道。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明的目的在于針對目前國內現(xiàn)有技術的不足，提供一種馬精液稀釋液。
[0009]本發(fā)明提供的馬精液稀釋液，包含以下重量份的組分:
[0010]
【權利要求】
1.一種馬精液稀釋液，其特征在于，其原料包含以下重量份的組分:
2.如權利要求1所述的馬精液稀釋液，其特征在于，包含以下重量份的組分:
3.如權利要求1所述的馬精液稀釋液，其特征在于，所述的雙糖為海藻糖、蔗糖或乳糖。
4.如權利要求1所述的馬精液稀釋液，其特征在于，使用的水為超純水。
5.如權利要求1所述的馬精液稀釋液，其特征在于，脫脂奶為脫脂牛奶或脫脂奶粉水溶液。
6.如權利要求1所述馬精液稀釋液，其特征在于，其制備方法包括如下步驟: (1)將所述配比的葡萄糖、雙糖、棉子糖、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀和Hepes溶解于水中，高溫滅菌； (2)將所述量的脫脂奶加熱15~25min，用消毒紗布過濾，冷卻； (3 )將步驟(1)和步驟(2 )的稀釋液混合，加入抗生素，密封保存。
7.如權利要求5所述的馬精液稀釋液，其特征在于，所述的雙糖為海藻糖、蔗糖或乳糖，所述制備過程均在無菌條件下進行。
8.如權利要求5所述的馬精液稀釋液，其特征在于，步驟(1)中所述配比的各組分，溶于水中，待其全部溶解后，115°C高壓滅菌15-20min，冷卻至30°C以下；步驟(2)中的處理參數(shù)為:取與水等體積的脫脂奶于92°C _97°C水浴加熱，使用61層消毒紗布過濾，冷卻至30°C以下。
9.權利要求1-8任意一項的馬精液稀釋液的制備方法，其特征在于，制備過程包括如下步驟: (1)將所述配比的葡萄糖、雙糖、棉子糖、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀和Hepes溶解于水中，高溫滅菌； (2)將所述量的脫脂奶加熱15-25min，并用消毒紗布過濾，冷卻； (3 )將步驟(1)和步驟(2 )的稀釋液混合，加入抗生素，密封保存。
10.如權利要求1-8任一所述的馬精液稀釋液在用于常溫或冷凍保存馬精液中的用途。`
【文檔編號】A01N1/02GK103858858SQ201210533842
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月11日 優(yōu)先權日:2012年12月11日
【發(fā)明者】韓國才, 張翔, 段洪云, 李平歲 申請人:中國農業(yè)大學