專利名稱：一種蛹蟲草及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種蛹蟲草及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
蛹蟲草屬于真菌門(Eumycota)子囊菌綱(Ascomycetes)肉座菌目(Hypocreales)麥角菌科(Clavicipitaceae)蟲草屬(Cordyceps),學(xué)名為 Cordyceps miltaris (L) Link,是一種野生資源稀少的名貴藥用真菌。蛹蟲草菌粉和蛹蟲草菌粉膠囊是兩個一類國家中藥新藥，均于2003年4月獲得正式生產(chǎn)批件(2003B00975、2003B00976)，產(chǎn)品生產(chǎn)批準(zhǔn)文號為國藥準(zhǔn)字Z20030034、國藥準(zhǔn)字Z20030035?！?br> 目前，在蛹蟲草培育和菌粉應(yīng)用方面存在原材料(繭種和菌種)的選擇和蛹蟲草菌粉加工等方面的問題。其中，工業(yè)化培育蛹蟲草有兩種原料最為重要，缺一不可，一是寄主昆蟲，二是蛹蟲草菌種。中國專利申請87106987. 3和中國專利申請00130381. 3公開了蠶蛹蟲草的人工培育方法及蠶蛹蟲草工業(yè)化生產(chǎn)方法。但是，中國專利申請00130381. 3僅注重蛹蟲草菌種的選育，沒有注重對寄主昆蟲蠶蛹的選育，產(chǎn)品寄生率僅為61. 18%;所用的菌種在產(chǎn)前只進(jìn)行了菌種的激活培養(yǎng)，導(dǎo)致成品率低；用罐頭瓶進(jìn)行培養(yǎng)蠶蛹蟲草，工作效率低，不利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)；在冷藏室內(nèi)存放干燥的蛹蟲草,成本高。此外,現(xiàn)有的蛹蟲草產(chǎn)品中的菌粉目數(shù)為6(Γ80目，影響了產(chǎn)品的質(zhì)量和吸收性。在生產(chǎn)和應(yīng)用方面的這些問題急需解決，但迄今為止，尚未見有相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的之一是提供一種蛹蟲草的制備方法。本發(fā)明的另一個目的是提供采用該制備方法制得的蛹蟲草。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種蛹蟲草的制備方法，該制備方法包括下述步驟(I)將蛹蟲草菌液注入柞蠶生物繭的蠶蛹，16 18°C下培養(yǎng)7 10天獲得僵蛹；(2)僵蛹經(jīng)無光照培養(yǎng)5 7天，蛹體表面形成子實(shí)體原基；(3)僵蠶再經(jīng)光照培養(yǎng)1(Γ15天，光照強(qiáng)度為80(Γ1000勒克斯；之后白天自然光光照培養(yǎng)，晚上光照培養(yǎng)、光照強(qiáng)度為80(Γ1000勒克斯，直至子實(shí)體長出子囊殼。 就上述制備方法而言，在所述步驟(I)中，優(yōu)選地，所述柞蠶生物繭為以卵量母種獲得的柞蠶生物繭。所述卵量母種是指直接用于繼代繁育柞蠶的柞蠶種。柞蠶生物繭是指按一定程序繁育，并以其活體為原料用于醫(yī)藥保健、食品、化工等生產(chǎn)行業(yè)的優(yōu)質(zhì)柞蠶繭(除去絲繭)。優(yōu)選地，所述柞蠶生物繭的蠶蛹出蛹率為85%以上，健蛹率為94、8%。優(yōu)選地，所述柞蠶生物繭的蠶蛹在注入蛹蟲草菌液前經(jīng)過消毒。就上述制備方法而言，在所述步驟(I)中，優(yōu)選地，所述蛹蟲草菌液是由以下方法制備的
a.將凍干保藏的野生蛹蟲草菌種接種至脫脂牛乳，25°C下培養(yǎng)7天后分別接種至斜面復(fù)壯培養(yǎng)基和液體復(fù)壯培養(yǎng)基，25°C下培養(yǎng)7天，其中按重量份數(shù)計，所述斜面復(fù)壯培養(yǎng)基的組成為蠶蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素O. 01份、瓊脂20份、水1000份、pH 5. 8 ;所述液體復(fù)壯培養(yǎng)基的組成為蠶蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素O. 01份、水1000份、pH 5. 8 ；b.將經(jīng)液體復(fù)壯培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的蛹蟲草菌液注入柞蠶生物繭的蠶蛹，16 18°C下培養(yǎng)10天后，22°C下光照培養(yǎng)30天，確認(rèn)能否長出子實(shí)體；c.將能夠長出子實(shí)體的野生蛹蟲草菌種從斜面復(fù)壯培養(yǎng)基接種至擴(kuò)增菌種液體培養(yǎng)基，25°C下培養(yǎng)24小時后振蕩培養(yǎng)72小時；其中，按重量份數(shù)計，所述擴(kuò)增菌種液體培養(yǎng)基的組成為蠶蛹粉8份、蔗糖8份、奶粉10份、維生素液20份、磷酸二氫鉀I. 5份、磷酸二氫鈉I. O份、水1000份、pH 5. O ;按重量份數(shù)計,所述維生素液的組成為鹽酸硫胺素O. I份，核黃素O. 025份，吡哆醇O. 025份，泛酸鈣O. I份，對氨基苯甲酸O. 025份， 氯化膽堿O. I份，肌醇O. I份，葉酸O. 0025份，生物素O. 001份，以及蒸餾水1000份。就上述制備方法而言，在所述步驟(I)中，優(yōu)選地，所述蠶蛹置于培養(yǎng)盤中培養(yǎng)；優(yōu)選地，所述蠶蛹置于培養(yǎng)盤中培養(yǎng)且培養(yǎng)時相互不重疊。就上述制備方法而言，在所述步驟(2)中，優(yōu)選地，所述僵蠶在無光照培養(yǎng)前經(jīng)過消毒；更優(yōu)選地，所述僵蠶在無光照培養(yǎng)前經(jīng)過消毒并被覆蓋塑料薄膜。優(yōu)選地，上述制備方法還包括以下步驟(4)干燥得到的蛹蟲草。在所述步驟(4)中，更優(yōu)選地，所述干燥條件為在頻率2450±50MH的微波中、5(T60°C下干燥至含水量為5 8%。優(yōu)選地，上述制備方法還包括以下步驟(5)粉碎得到的蛹蟲草。在所述步驟(5)中，更優(yōu)選地，所述粉碎為先將蛹蟲草粗粉碎至2(Γ80目，再經(jīng)球磨粉碎至150-300目。更優(yōu)選地，所述球磨粉碎的條件為粉碎時間為3小時，球磨轉(zhuǎn)速為600轉(zhuǎn)/min，罐體溫度為15°C，球體溫度為20°C。本發(fā)明還提供了根據(jù)上述制備方法制備的蛹蟲草。另一方面，本發(fā)明還提供了根據(jù)上述制備方法制備的蛹蟲草在制備藥品、保健品、食品或化妝品中的用途。本發(fā)明選擇柞蠶生物繭和經(jīng)過復(fù)壯的蛹蟲草菌種培育出成品率高(從61. 18%提高至90%以上)和質(zhì)量優(yōu)質(zhì)的蛹蟲草，并通過采用超微粉碎技術(shù)，使產(chǎn)品的分散性、溶解性、吸收性得到根本的改善，大大提高了原料的利用率，以及產(chǎn)品的生物活性、營養(yǎng)成份含量和吸收性，從而提高了其抗疲勞和抗氧化功能。本發(fā)明得到的產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量得到充分改善，從而更具有營養(yǎng)，易于消化吸收，原有的自然風(fēng)味也得以進(jìn)一步保留。與已有的蛹蟲草菌粉相比，本發(fā)明的蛹蟲草菌粉主要具有以下特征(I)淡淡的香味；(2)顏色較深，呈“黃褐色”；(3)手感細(xì)膩、光滑、易吸潮，抹在手背皮膚上用指搓即可被皮膚吸收。本發(fā)明的制備方法包括獲得生物繭種、儲存、取蛹消毒、蛹蟲草菌種復(fù)壯、出草試驗(yàn)、擴(kuò)制、接種蠶蛹、上盤培養(yǎng)、上架培養(yǎng)、下架干制、超微粉碎、包裝儲存等，詳見附圖
I。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明對繭種進(jìn)行了選育，對蛹蟲草菌種進(jìn)行復(fù)壯和出草試驗(yàn)，選用出草率達(dá)100%的菌種進(jìn)行生產(chǎn)，培育出的蛹蟲草成品率達(dá)到90%以上，比采用其他大繭或種繭高出2(Γ30%;本發(fā)明采用培養(yǎng)盤直接進(jìn)行上架立體培養(yǎng)，省去了洗瓶上瓶工序，提高工作效率20% (一培養(yǎng)盤相當(dāng)于20罐頭瓶)；本發(fā)明得到的蛹蟲草于干燥后直接進(jìn)行超微粉碎，粉碎粒徑為15(Γ300目，以菌粉形態(tài)儲存，省去冷藏和采收等工序，節(jié)省空間，降低成本，適于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
以下結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中圖I顯示了本發(fā)明的制備方法的工藝步驟；圖2為本發(fā)明的超微粉碎(粒徑為300目)蛹蟲草粉溶解于水中的照片；圖3表示現(xiàn)有普通方法粉碎(粒徑為100目)蛹蟲草粉溶解于水中的照片。
具體實(shí)施例方式以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為常規(guī)商購得到。實(shí)施例I柞蠶生物繭種于當(dāng)年11月中下旬入庫儲存，儲存溫度為-廣2°C、儲存濕度為50 60%，儲存厚度為30cm。蛹期標(biāo)準(zhǔn)出蛹率90%，健蛹率94%。I.蠶蛹的處理在生產(chǎn)前f 2天，將柞蠶生物繭放入割繭機(jī)孔內(nèi)距離切割刀尖下約O. Γ0. 5mm處，然后開始向同一方向旋轉(zhuǎn)割繭器，切割刀快速將繭層切開，蠶蛹自然從繭殼脫落到盛蛹器內(nèi)，每盤200個蛹，不準(zhǔn)重疊，然后將蠶蛹用傳送機(jī)傳入到消毒室內(nèi)，先通過自動噴霧器向蛹體表面噴淋水2分鐘，后用傳送機(jī)傳入消毒液噴淋2分鐘，最后用純凈水噴淋2分鐘，進(jìn)入接種室待用。2.蛹蟲草菌種的處理菌種為凍干法保藏的野生蛹蟲草菌種，于生產(chǎn)前2個月開始進(jìn)行菌種激活。2-1菌種激活培養(yǎng)基為脫脂牛乳1000ml，分裝至容量為IOOml的三角瓶中，每瓶25ml，滅菌，冷卻；取出5支凍干保藏的菌種，編號，在無菌條件下，將凍干保藏的菌瓶蓋取下，用接種針將菌種塊移入激活培養(yǎng)基中，每個菌號5瓶，接完種后放入25°C溫度培養(yǎng)室中培養(yǎng)7天。2-2蛹蟲草菌種的復(fù)壯按常規(guī)方法制備斜面復(fù)壯培養(yǎng)基，其配方為蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，全脂奶粉10g，生物素10毫克，水1000ml，瓊脂20g，pH 5.8。按常規(guī)方法制備液體復(fù)壯培養(yǎng)基，其配方為蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，全脂奶粉10g，生物素 10 毫克，水 1000ml，pH 5.8。于無菌室內(nèi)的潔凈工作臺上，每個菌號接入50支斜面固體菌種和3瓶激活的液體菌種，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度為25°C，培養(yǎng)7天。出草試驗(yàn)用注射器吸取得到的蛹蟲草菌液，將蛹蟲草菌液注入體表經(jīng)消毒的蠶蛹，每瓶菌液注入100個蠶蛹；前10天在16 18°C溫度下培養(yǎng)，后30天提高溫度至2(T22°C并增加光照，光照強(qiáng)度為1000勒克斯，培養(yǎng)至長出子實(shí)體，選擇能夠100%出子實(shí)體的菌種進(jìn)行菌種擴(kuò)制。2-3制備菌種擴(kuò)增液體培養(yǎng)基，其配方為蠶蛹粉Sg、蔗糖Sg、奶粉10g、維生素液20ml、磷酸二氫鉀I. 5g、磷酸二氫鈉I. 0g、硫酸鎂O. 5g、水1000ml, pH 5。所述維生素液按下列配方組成鹽酸硫胺素100毫克，核黃素25毫克，吡哆醇25毫克，泛酸鈣100毫克，對氨基苯甲酸25毫克，氯化膽堿100毫克，肌醇100毫克，葉酸2. 5毫克，生物素I毫克，力口蒸餾水1000毫升。按配方精確稱取配方的各成分配制培養(yǎng)基，其中將蠶蛹粉加水煮沸、過濾后，在將濾液加入其余培養(yǎng)基成分的混合物中，定容，充分?jǐn)嚢瑁盅b在培養(yǎng)容器中，裝量為容器的3/10 ;然后在I. 2公斤/每平方米壓力下進(jìn)行滅菌，時間為30分鐘；滅菌后，經(jīng)冷卻，在培養(yǎng)基內(nèi)接入經(jīng)驗(yàn)證長出子實(shí)體的菌種(來自斜面復(fù)壯培養(yǎng)基)，在25°C溫度下培養(yǎng)24小時，然后放入液體菌種振蕩器中，振蕩培養(yǎng)72小時。2-4菌種檢驗(yàn)·
·
2-4-1外觀形態(tài)檢查菌球大小均勻，直徑在O. 5 Imm之間，菌液透明，培養(yǎng)前后無明顯變化，無酸味或其它異味；2-4-2 pH值檢查培養(yǎng)后的pH值在5. 8左右；2-4-3顯微鏡檢查一般是細(xì)菌、酵母菌和放線菌，細(xì)菌多數(shù)運(yùn)動活躍，在鏡下呈現(xiàn)桿狀；酵母菌的個體較大，為圓形，有的能產(chǎn)芽孢；放線菌的特征為菌絲較纖細(xì)，呈現(xiàn)分枝狀，菌絲內(nèi)無橫隔。3.培養(yǎng)僵蛹3-1接種蠶蛹在接種車間內(nèi)，于潔凈工作臺上，無菌條件下，將經(jīng)檢驗(yàn)合格的菌液注入連續(xù)接種器內(nèi)，然后按上針頭(型號為12號)，啟動機(jī)器注入蛹體，每個蛹為O. 5 Imm03-2上盤培養(yǎng)將接種后的蠶蛹放入培養(yǎng)盤內(nèi)，每盤為200個左右，以不出現(xiàn)重疊為佳；然后放入僵蛹室內(nèi)培養(yǎng)僵蛹，溫度為16 18°C，培養(yǎng)時間為10天；4天后開始檢查，及時檢出爛蛹。4.僵蛹上盤培養(yǎng)將盤內(nèi)僵蛹進(jìn)行消毒，消毒過程為將僵蛹用傳送機(jī)傳入到消毒室內(nèi)，先通過自動噴霧器向蛹體表面噴淋自來水2分鐘，后用傳送機(jī)傳入消毒液噴淋2分鐘，最后用純凈水噴淋2分鐘。經(jīng)消毒的僵蛹擺入無菌盤中，盤上表面用細(xì)鋼架支成拱形，然后覆蓋塑料薄膜。將經(jīng)覆蓋塑料薄膜的僵蛹盤分別擺放在培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)架上，無光照培養(yǎng)7天，直至蛹體表面出現(xiàn)子實(shí)體原基。上架出草將得到的蛹體進(jìn)行增光培養(yǎng)，前15天每天24小時，其光照強(qiáng)度為1000勒克斯；之后白天采用自然光光照培養(yǎng)，晚上光照培養(yǎng)、光照強(qiáng)度為80(Γ1000勒克斯，直至子實(shí)體長出子囊殼，之后及時干燥。5.干燥將得到的蛹蟲草，放置在波長頻率為2450MHz、溫度為50°C 60°C的微波隧道中干燥，至含水率為5% 8%時完成。6.超微粉碎先將經(jīng)干燥的蛹蟲草體粉碎至粒徑為2(Γ80目，后采用搖擺式球磨機(jī)一次粉碎至粒徑為15(Γ300目，粉碎時間為3小時，轉(zhuǎn)數(shù)為600轉(zhuǎn)/min，罐體溫度為15°C，球體溫度為20°C ;搖擺式球磨機(jī)的撞擊球?yàn)殄e球。
7.包裝儲存將得到的蛹蟲草粉在無菌室內(nèi)，分裝入為容量為500克的包裝瓶內(nèi)，置于陰涼干燥處保存。實(shí)施例2表I :不同制備方法獲得的蛹蟲草的對比試驗(yàn)
權(quán)利要求
1.一種蛹蟲草的制備方法，該制備方法包括下述步驟 (1)將蛹蟲草菌液注入柞蠶生物繭的蠶蛹，16 18°C下培養(yǎng)7 10天獲得僵蛹； (2)僵蛹經(jīng)無光照培養(yǎng)7 10天，蛹體表面形成子實(shí)體原基； (3)僵蠶再經(jīng)光照培養(yǎng)1(Γ15天，光照強(qiáng)度為80(Γ1000勒克斯；之后白天自然光光照培養(yǎng)，晚上光照培養(yǎng)、光照強(qiáng)度為80(Γ1000勒克斯，直至子實(shí)體長出子囊殼。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的制備方法，其特征在于，所述柞蠶生物繭為以卵量母種獲得的柞蠶生物繭。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的制備方法，其特征在于，所述柞蠶生物繭的蠶蛹出蛹率為85%以上，健蛹率為94、8% ;優(yōu)選地，所述柞蠶生物繭的蠶蛹在注入蛹蟲草菌液前經(jīng)過消毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的制備方法，其特征在于，所述蛹蟲草菌液是由以下方法制備的 a.將凍干保藏的野生蛹蟲草菌種接種至脫脂牛乳，25°C下培養(yǎng)7天后分別接種至斜面復(fù)壯培養(yǎng)基和液體復(fù)壯培養(yǎng)基，25°C下培養(yǎng)7天，其中按重量份數(shù)計，所述斜面復(fù)壯培養(yǎng)基的組成為蠶蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素O. 01份、瓊脂20份、水1000份、pH 5.8 ;所述液體復(fù)壯培養(yǎng)基的組成為蠶蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素 O. 01 份、水 1000 份、pH 5.8 b.將經(jīng)液體復(fù)壯培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的蛹蟲草菌液注入柞蠶生物繭的蠶蛹，16 18°C下培養(yǎng)10天后，2(T22°C下光照培養(yǎng)30天，確認(rèn)能否長出子實(shí)體； c.將能夠長出子實(shí)體的野生蛹蟲草菌種從斜面復(fù)壯培養(yǎng)基接種至擴(kuò)增菌種液體培養(yǎng)基，25°C下培養(yǎng)24小時后振蕩培養(yǎng)72小時；其中，按重量份數(shù)計，所述擴(kuò)增菌種液體培養(yǎng)基的組成為蠶蛹粉8份、蔗糖8份、奶粉10份、維生素液20份、磷酸二氫鉀I. 5份、磷酸二氫鈉I. O份、水1000份、pH 5. O ;按重量份數(shù)計,所述維生素液的組成為鹽酸硫胺素O. I份，核黃素O. 025份，吡哆醇O. 025份，泛酸鈣O. I份，對氨基苯甲酸O. 025份，氯化膽堿O. I份，肌醇O. I份，葉酸O. 0025份，生物素O. 001份，以及蒸餾水1000份。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)的制備方法，其特征在于，在所述步驟(I)中，所述蠶蛹置于培養(yǎng)盤中培養(yǎng)；優(yōu)選地，所述蠶蛹置于培養(yǎng)盤中培養(yǎng)且培養(yǎng)時互相不重疊。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5中任一項(xiàng)的制備方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，所述僵蠶在無光照培養(yǎng)前經(jīng)過消毒；更優(yōu)選地，所述僵蠶在無光照培養(yǎng)前經(jīng)過消毒并被覆蓋塑料薄膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6中任一項(xiàng)的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括以下步驟 (4)干燥得到的蛹蟲草；優(yōu)選地，所述干燥條件為在頻率2450±50MHz的微波中、5(T60°C下干燥至含水量為5 8%。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至7中任一項(xiàng)的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括以下步驟 (5)粉碎得到的蛹蟲草；優(yōu)選地，所述粉碎為先將蛹蟲草粗粉碎至2(Γ80目，再經(jīng)球磨粉碎至15(Γ300目；更優(yōu)選地，所述球磨粉碎的條件為粉碎時間為3小時，球磨轉(zhuǎn)速600轉(zhuǎn)/min，罐體溫度15°C，球體溫度為20°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求I至8中任一項(xiàng)的制備方法制備的蛹蟲草。
10.根據(jù)權(quán)利要求I至8中任一項(xiàng)的制備方法制備的蛹蟲草在制備藥品、保健品、食品或化妝品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種蛹蟲草及其制備方法和用途，該制備方法包括下述步驟(1)將蛹蟲草菌液注入柞蠶生物繭的蠶蛹，16~18℃下培養(yǎng)7~10天獲得僵蛹；(2)僵蛹經(jīng)無光照培養(yǎng)7~10天，蛹體表面形成子實(shí)體原基；(3)僵蠶再經(jīng)光照培養(yǎng)10~15天，光照強(qiáng)度為800~1000勒克斯；之后白天自然光光照培養(yǎng)，晚上光照培養(yǎng)、光照強(qiáng)度為800~1000勒克斯，直至子實(shí)體長出子囊殼。本發(fā)明選擇柞蠶生物繭和經(jīng)過復(fù)壯的蛹蟲草菌種培育出成品率高和質(zhì)量優(yōu)質(zhì)的蛹蟲草，并通過采用超微粉碎技術(shù)使產(chǎn)品的分散性、溶解性、吸收性得到根本的改善，保持了產(chǎn)品原有的生物活性和營養(yǎng)成分，大大提高了原料的利用率。
文檔編號C05G3/00GK102893807SQ20121037658
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者陳文展, 苑桂華 申請人:廣州大光制藥有限公司