專(zhuān)利名稱(chēng)：一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物。
背景技術(shù)：
鑒于化學(xué)農(nóng)藥具有眾所周知的諸多弊端，目前國(guó)內(nèi)外農(nóng)業(yè)生產(chǎn)均提出研究高效、低毒、低殘留、無(wú)公害的農(nóng)藥，開(kāi)發(fā)天然植物源農(nóng) 藥就是最好的途徑之一，也是當(dāng)前研究的熱門(mén)課題。植物源農(nóng)藥來(lái)源于植物本身，對(duì)環(huán)境和人體具有較高的安全性，是未來(lái)殺蟲(chóng)劑研究的重點(diǎn)。傳統(tǒng)中藥本身就是天然植物源，某些中藥既可以用于人體治療疾病，同時(shí)還能有效的殺滅植物害蟲(chóng)，受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度關(guān)注。為了尋找殺蚜蟲(chóng)和抗枯萎病毒最佳植物源藥物，本課題組通過(guò)對(duì)多種單方中藥和幾種不同復(fù)方中藥的反復(fù)篩選，對(duì)比以及農(nóng)田實(shí)驗(yàn)，最終用復(fù)方中藥提取物取得了理想的殺蟲(chóng)效果。從天然植物源中尋找活性物質(zhì)替代化學(xué)農(nóng)藥，以減少化學(xué)農(nóng)藥對(duì)人體的傷害和對(duì)環(huán)境的污染，已成為當(dāng)前農(nóng)業(yè)研究的方向。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物，是由以下原料藥提取制備得到的川穹20 30g，黃柏15 25g，白頭翁15 25g，苦參20 30g，蒲公英30 40g ；提取方法為(I)取各原料藥，粉碎成粗粉，加蒸餾水1000 1800ml浸泡40 60分鐘，振蕩、煮沸50 70分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，藥渣加蒸餾水1000 1200ml，煎煮35 45分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，合并兩次濾液，濃縮得到生藥量為lg/ml的濃縮液，向濃縮液中添加2%(即100ml濃縮液中加入2g)的吐溫80助溶劑，超聲波振動(dòng)，得水提液；(2)上述藥渣加3倍(重量倍數(shù))95% (體積百分?jǐn)?shù))乙醇,磁力攪拌3. 5 4. 5h，恒溫振蕩儀中37°C振蕩2. 5 3. 5h，靜置20 28h，過(guò)濾，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓低溫濃縮至含生藥為I. 5g/ml,即得復(fù)方中藥提取物，4 0C冰箱保存?zhèn)溆?。本發(fā)明的復(fù)方中藥提取物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，對(duì)蚜蟲(chóng)、植物枯萎病原菌具有良好的滅殺作用，可以作為化學(xué)農(nóng)藥的替代品進(jìn)行應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例I制備一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物配方為川穹25g，黃柏20g,白頭翁20g，苦參25g，蒲公英35g ；提取方法為
(I)取各原料藥，粉碎成粗粉，加蒸餾水1400ml浸泡50分鐘，振蕩、煮沸60分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，藥渣加蒸餾水1100ml，煎煮40分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，合并兩次濾液，濃縮得到生藥量為lg/ml的濃縮液，向濃縮液中添加2% (即100ml濃縮液中加入2g)的吐溫80助溶劑，超聲波振動(dòng)，得水提液；(2)上述藥渣加3倍(重量倍數(shù))95% (體積百分?jǐn)?shù))乙醇,磁力攪拌4h，恒溫振蕩儀中37°C振蕩3h，靜置24h，過(guò)濾，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀上減壓低溫濃縮至含生藥為I. 5g/ml,即得復(fù)方中藥提取物，4 0C冰箱保存?zhèn)溆?。?shí)施例2制備一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物配方為川穹20g，黃柏25g，白頭翁15g，苦參30g，蒲公英30g ；提取方法為(I)取各原料藥，粉碎成粗粉，加蒸餾水IOOOml浸泡60分鐘，振蕩、煮沸50分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，藥渣加蒸餾水1000ml，煎煮35分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，合并兩次濾液，濃縮得到生藥量為lg/ml的濃縮液，向濃縮液中添加2% (即100ml濃縮液中加入2g)的吐溫80助溶劑，超聲波振動(dòng)，得水提液；(2)上述藥渣加3倍(重量倍數(shù))95% (體積百分?jǐn)?shù))乙醇,磁力攪拌3. 5h，恒溫振蕩儀中37°C振蕩2. 5h，靜置20h，過(guò)濾，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓低溫濃縮至含生藥為I. 5g/ml,即得復(fù)方中藥提取物，4 0C冰箱保存?zhèn)溆?。?shí)施例3制備一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物配方為川穹30g，黃柏15g，白頭翁25g，苦參20g，蒲公英40g;提取方法為(I)取各原料藥，粉碎成粗粉，加蒸餾水1800ml浸泡40分鐘，振蕩、煮沸70分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，藥渣加蒸餾水1200ml，煎煮45分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，合并兩次濾液，濃縮得到生藥量為lg/ml的濃縮液，向濃縮液中添加2% (即100ml濃縮液中加入2g)的吐溫80助溶劑，超聲波振動(dòng)，得水提液；(2)上述藥渣加3倍(重量倍數(shù))95% (體積百分?jǐn)?shù))乙醇,磁力攪拌4. 5h，恒溫振蕩儀中37°C振蕩3. 5h，靜置28h，過(guò)濾，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓低溫濃縮至含生藥為I. 5g/ml,即得復(fù)方中藥提取物，4 0C冰箱保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)I復(fù)方中藥提取物對(duì)蚜蟲(chóng)的殺滅作用I 材料I. I試劑95%乙醇，山東誠(chéng)摯生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。苯甲酸(分析純)，濟(jì)南魯健試劑材料有限公司生產(chǎn)。1.2中藥川穹、黃柏、白頭翁、苦參、蒲公英，購(gòu)于山東省濟(jì)南市地道藥材公司。I. 3供試蟲(chóng)體選擇個(gè)體大小和形態(tài)一致的無(wú)翅蚜蟲(chóng)。1.4實(shí)驗(yàn)儀器WG_5磁力加熱攪拌器，北京創(chuàng)先科技有限公司生產(chǎn)。RT- II旋轉(zhuǎn)振蕩儀，成都醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。ZH-TI超聲波振動(dòng)器，北京朝陽(yáng)制藥總廠生產(chǎn)。SD-2智能調(diào)控?fù)u床，北京尼達(dá)實(shí)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)。自動(dòng)雙重蒸餾器，上海黃浦科技有限公司生產(chǎn)。
2 方法2. I復(fù)方中藥提取物制備按實(shí)施例I的方法制備得到復(fù)方中藥提取物。2. 2樣品溶液制備復(fù)方中藥提取物加無(wú)菌水按兩倍稀釋法稀釋成500mg、250mg、125mg、62. 5mg、31. 3mg/ml五個(gè)濃度梯度的樣品溶液。2. 3殺蟲(chóng)活性測(cè)定將帶有蚜蟲(chóng)的豆角葉采下，剔除不合要求的個(gè)體，每個(gè)樣品處理供試蟲(chóng)75 100頭，浸入不同濃度的樣 品溶液，IOs后吸出多余的藥液，采用蒸餾水做對(duì)照(CK)，置于加蓋保濕的培養(yǎng)皿中，于室溫下(20-25°C )觀察24h-48h，記錄活蟲(chóng)頭數(shù)，以死亡率表示殺蟲(chóng)效果。3.結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中藥提取物對(duì)蚜蟲(chóng)具有明顯的觸殺作用，死亡率隨濃度增高而顯著增加。但即使在低濃度31. 3mg/ml時(shí),對(duì)姆蟲(chóng)仍有一定的觸殺效果,見(jiàn)表I和表2。表I復(fù)方中藥提取物24h對(duì)蚜蟲(chóng)的殺滅作用
稀釋倍數(shù)WU I ) 供試蟲(chóng)數(shù)(頭) 死亡蟲(chóng)數(shù)(頭) 死亡率(％)
SOOmg857790.58
250mg907684.44
125mg1007373.00
62.5mg956164.21
31. 3mg803240.00
CK7500表2復(fù)方中藥提取物48h對(duì)蚜蟲(chóng)的殺滅作用
稀釋倍數(shù)(/ml) 供試蟲(chóng)數(shù)(頭) 死亡蟲(chóng)數(shù)(頭) 死亡率(％)
SOOmg858397.65
250mg908594.7I7I
125mg1008686.00
62.5mg906572.22
31.3mg804151.25
CK75011.33實(shí)驗(yàn)2復(fù)方中藥提取物對(duì)植物枯萎病原菌的影響I 材料I. I試劑95%乙醇、苯甲酸，山東誠(chéng)摯生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂，葡萄糖，濟(jì)南魯健試劑材料有限公司生產(chǎn)。I. 2中藥川穹、黃柏、白頭翁、苦參、蒲公英，購(gòu)于山東省濟(jì)南市地道藥材公司。I. 3供試菌種西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf. sp. niveum),黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf. sp. cucumerinum)均由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。1.4實(shí)驗(yàn)儀器WG_5磁力加熱攪拌器，北京創(chuàng)先科技有限公司生產(chǎn)。RT- II旋振蕩儀，成都醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。ZH-TI超聲波振動(dòng)器，北京朝陽(yáng)科技醫(yī)療器械總公司生產(chǎn)。自動(dòng)雙重蒸餾器，上海黃浦科技有限公司生產(chǎn)。LXD-5培養(yǎng)箱，江蘇南京醫(yī)療器械公司生產(chǎn)。抑菌圈測(cè)量器，上海紅星醫(yī)療開(kāi)發(fā)責(zé)任有限公司生產(chǎn)。2 方法2. I復(fù)方中藥提取物制備按實(shí)施例I的方法制備得到復(fù)方中藥提取物。2. 2樣品溶液制備復(fù)方中藥提取物加無(wú)菌水按兩倍稀釋法稀釋成0. 5g/ml、0. 25g/ml、0. 125g/ml、0. 0625g/ml、0. 0313g/ml 五個(gè)濃度梯度的樣品溶液。2. 3供試菌液制備取西瓜枯萎病原菌和黃瓜枯萎病原菌斜面活化,置培養(yǎng)箱中35°C培養(yǎng)16h。取活化好的斜面，加入無(wú)菌水震蕩搖 勻，配制成濃度為107Cfu/ml菌懸液，于20分鐘內(nèi)接種至平板培養(yǎng)基進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。2. 4抗菌活性測(cè)定取直徑為6_的濾紙圓片，100°C干熱滅菌2h,滅菌濾紙片放入藥液中浸泡30min，取出晾干。將配制好的菌懸液，注入固體培養(yǎng)基的平皿，用無(wú)菌涂布器均勻涂布于培養(yǎng)基表面，無(wú)菌鑷子夾取含藥紙片，放入菌懸液培養(yǎng)基中，輕輕按壓，使含藥紙片緊貼培養(yǎng)基，置恒溫培養(yǎng)箱中30°C培養(yǎng)48h，每個(gè)培養(yǎng)器皿放藥紙3片，各紙片間距相等，重復(fù)3次，取平均值，最后用抑菌圈測(cè)量器測(cè)定藥物紙片的抑菌圈直徑。3.結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表3)，復(fù)方中藥提取物對(duì)西瓜枯萎病原菌和黃瓜枯萎病原菌具有明顯的抑制作用，其抑制作用隨濃度增高而顯著增加。即使在低濃度0.0313g/ml時(shí)，對(duì)該兩種病原菌仍有較好的抑制效果。表3復(fù)方中藥提取物對(duì)枯萎病原菌的影響
藥液抑菌圈直徑(mm)
病原菌---------------------------
0.5g 0. be 0. 125g 0.0625g 0.03i3g
西瓜枯萎病原菌o 2924IQi
黃瓜枯萎病原菌31L171權(quán)利要求
1.一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物，其特征在于是由以下原料藥提取制備得到的川穹20 30g，黃柏15 25g，白頭翁15 25g，苦參20 30g，蒲公英30 40g ；提取方法為 (1)取各原料藥，粉碎成粗粉，加蒸餾水1000 1800ml浸泡40 60分鐘，振蕩、煮沸50 70分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，藥渣加蒸餾水1000 1200ml，煎煮35 45分鐘，過(guò)濾得濾液和藥渣，合并兩次濾液，濃縮得到生藥量為lg/ml的濃縮液，向濃縮液中添加2%的吐溫80助溶劑，超聲波振動(dòng)，得水提液； (2)上述藥渣加3倍95%乙醇，磁力攪拌3.5 4. 5h，恒溫振蕩儀中37°C振蕩2. 5 .3.5h，靜置20 28h，過(guò)濾，回收乙醇，得醇提液； (3)合并水提液和醇提液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓低溫濃縮至含生藥為I.5g/ml,即得復(fù)方中藥提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種殺滅植物病蟲(chóng)害的復(fù)方中藥提取物，是由以下原料藥提取制備得到的川穹20～30g，黃柏15～25g，白頭翁15～25g，苦參20～30g，蒲公英30～40g；提取方法為(1)取各原料藥，粉碎成粗粉，加蒸餾水浸泡，振蕩、煮沸，過(guò)濾，藥渣加蒸餾水，煎煮，過(guò)濾，合并兩次濾液，濃縮，加助溶劑，超聲波振動(dòng)，得水提液；(2)藥渣加95%乙醇，磁力攪拌，恒溫振蕩儀中振蕩2.5～3.5h，靜置，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓低溫濃縮，即得復(fù)方中藥提取物。本發(fā)明的復(fù)方中藥提取物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，對(duì)蚜蟲(chóng)、植物枯萎病原菌具有良好的滅殺作用，可以作為化學(xué)農(nóng)藥的替代品進(jìn)行應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01N65/36GK102812971SQ20121027979
公開(kāi)日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月8日
發(fā)明者戴爭(zhēng), 張博, 趙玖華, 王升吉, 孫廷林, 任青華, 尚佑芬 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所