專利名稱：一種達(dá)摩蘭快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于達(dá)摩蘭的植株再生及產(chǎn)業(yè)化快速生產(chǎn)技術(shù)，涉及一種達(dá)摩蘭快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
達(dá)摩蘭是墨蘭的一種，花香純正幽遠(yuǎn)，花7 9朵，紅色素心，花期I 3月，是一種珍貴的觀賞植物。但目前達(dá)摩蘭的現(xiàn)有生產(chǎn)技術(shù)存在母株稀缺，繁殖基數(shù)少，繁殖率低，分株速度慢，種子小，育種進(jìn)程緩慢，出苗率低等難題，因此，很難獲得理想的發(fā)芽率和更多的鍵壯珍稀苗
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種達(dá)摩蘭快速繁殖方法，該方法培養(yǎng)的苗健壯一致、增殖時(shí)間短、成苗移植后成活率高，成本低，花期一致，便于產(chǎn)業(yè)化統(tǒng)一管理和銷售時(shí)間的控制，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下
一種達(dá)摩蘭快速繁殖方法，具體步驟包括
1)取材、消毒選取達(dá)摩蘭原種苗，切取長(zhǎng)度3 5厘米的側(cè)芽，沖洗干凈后，在水中剪去根及側(cè)芽外層I 2片葉梢，清洗、消毒處理，剝?nèi)ネ鈬M織，切取莖尖，直接接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
2)原球莖誘導(dǎo)所述原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基MS中加入6-BAO. 5mg/L ；NAA I. O mg/L ;香蕉果肉150 g/L ;蛋白胨3g/L ;白糖2% ;活性炭2g/L ;瓊脂6. 5g，培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx，誘導(dǎo)產(chǎn)生原球莖；
3)叢生芽誘導(dǎo)選取步驟2)生長(zhǎng)良好的原球莖轉(zhuǎn)到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基1/2 MS中加入6-BA 3. Omg/L ；NAA 1.0 mg/L ;蛋白胨2g/L ;花寶I號(hào)2 g/L ;活性炭2. O g/L;白糖3%;香蕉果肉150 g/L ;培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ;誘導(dǎo)出叢生芽；
4)增殖培養(yǎng)將過(guò)步驟3)誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽切開，接種到增殖培養(yǎng)基中；每100 150g的增殖培養(yǎng)基接種3個(gè)；所述的增殖培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基1/2 MS中加入6-BA
O.5mg/L ；NAA O. 5mg/L ;活性炭2. O g/L ;花寶2號(hào)2 g/ ;白糖3% ;香蕉果肉150 g/L ;培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ；
5)誘導(dǎo)生根將步驟4)增殖培養(yǎng)出來(lái)的長(zhǎng)至2cm高、3 4片葉的幼苗單株切下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，所述的生根培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基1/2 MS中加入6-BA O. 3mg/L ；NAA 0.5 mg/L ；IBA 1.0 mg/L;活性炭2.0 g/L ;白糖3% ;培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ；
6)試管苗完成當(dāng)試管苗長(zhǎng)至4 5cm，具3 4條根、4 5片葉時(shí)，完成達(dá)摩蘭試管苗培養(yǎng)；以上所述基本培養(yǎng)基1/2 MS指大量元素減半。將所述步驟6)完成的達(dá)摩蘭試管苗進(jìn)行移栽，移栽前先在培養(yǎng)室外自然條件下煉苗4 5d，然后打開瓶蓋煉苗2 4天，煉苗后從瓶中取出幼苗，用清水洗凈附著幼苗根部的培養(yǎng)基，用水苔將根包好，移栽至珍珠巖、細(xì)石與樹皮的混合基質(zhì)中，并用紗布包好3 5粒緩釋肥置于移栽盤中，注意不要直接放在根部。其中花寶I號(hào)成份比例N P K配比為(7 6 :19)，N, P, K分別指的是=NO3硝態(tài)氮、PO3氧化磷、KO3氧化鉀。本發(fā)明培養(yǎng)的苗健壯一致、增殖時(shí)間短、成苗移植后成活率高，成本低，花期一致，便于產(chǎn)業(yè)化統(tǒng)一管理和銷售時(shí)間的控制，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益。


圖I為莖尖誘導(dǎo)形成的原球莖。 圖2為原球莖誘導(dǎo)形成的不定芽。圖3為增殖苗誘導(dǎo)形成的叢生芽。圖4為達(dá)摩蘭生根苗。圖5為試管移栽苗。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但是本發(fā)明不僅限于此。實(shí)施例I
本發(fā)明選取達(dá)摩蘭原種苗無(wú)病蟲害的健壯母株上切取長(zhǎng)度3 5厘米的側(cè)芽為外植體材料，經(jīng)過(guò)莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)，20d后周圍出現(xiàn)許多白色顆粒狀愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)逐漸轉(zhuǎn)為綠色，25天后即可形成大量原球莖；再經(jīng)過(guò)分化培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，30 40d開始分化，逐步誘導(dǎo)出叢生芽，增殖到一定數(shù)量后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根后可煉苗移栽。從而擴(kuò)大繁殖系數(shù)，縮短育苗周期，滿足市場(chǎng)需求，為珍稀物種達(dá)摩蘭大量繁殖進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。培養(yǎng)基
MS基本培養(yǎng)基采用1986，北京高等教育出版社出版，陳正華主編的《木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用》中的配方進(jìn)行配制的。原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基MS中加入6-BA O. 5mg/L ；NAA I. O mg/L ;香蕉果肉150 g/L ;蛋白胨3g/L ;白糖2% ;活性炭2g/L;瓊脂6. 5g。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基1/2 MS (大量元素減半)中加入6-BA 3. Omg/L ；NAA 1.0 mg/L ；AC 2. Og/L ;香蕉肉 150 g/L ;蛋白胨 2g/L ;花寶 I 號(hào) 2 g/L ；AC 2.0 g/L ;白
糖3%。增殖培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基1/2 MS (大量元素減半)中加入；6-BA O. 5mg/L ；NAA
O.5mg/L ；AC 2. 0 g/L ;花寶 2 號(hào) 2 g/ ;白糖 3% ;香蕉肉 150 g/L。生根培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基1/2 MS(大量元素減半)中加入6-BA O. 3mg/L ；NAA O. 5mg/L ；IBA I. 0 mg/L ；AC 2. 0 g/L ；白糖 3%?；九囵B(yǎng)基1/2MS是指MS基本培養(yǎng)基中大量元素減半，其他成分不變。
材料消毒處理先對(duì)材料進(jìn)行適當(dāng)清洗，用剪刀截取2 3cm長(zhǎng)帶腋芽莖段，在水中剪去根及側(cè)芽外層I 2片葉梢，用洗衣粉清洗表面，流水沖洗30min左右，置于超凈工作臺(tái)上，用75%酒精浸泡3min，然后用O. 1%升汞消毒8min，無(wú)菌水沖洗3 4次后用利福平(70 75mg/L)浸泡3min，并用無(wú)菌水沖洗I次，剝?nèi)ネ鈬M織，切取莖尖，直接接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C,光照時(shí)間12h/d,光照強(qiáng)度1000 1500Lx ;誘導(dǎo)25d左右，如圖I所示，平均誘導(dǎo)原球莖7 8個(gè)，誘導(dǎo)率達(dá)96%以上。叢生芽誘導(dǎo)將所述經(jīng)過(guò)步驟2)誘導(dǎo)產(chǎn)生的原球莖重復(fù)培養(yǎng)后，選取生長(zhǎng)良好的原球莖轉(zhuǎn)到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，所述的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ;40d左右開始分化，誘導(dǎo)出叢生芽，如圖2芽誘導(dǎo)分化率高，健壯，深綠。增殖培養(yǎng)將所述經(jīng)過(guò)步驟3)誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽切開，分別接種在增殖培養(yǎng)基中；100 150g的增殖培養(yǎng)基接種3個(gè)；所述的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí) 間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx，如圖4所示，叢生芽萌動(dòng)形成大量植株，芽健壯，增殖率聞。誘導(dǎo)生根將所述經(jīng)過(guò)步驟4)培養(yǎng)出來(lái)的長(zhǎng)至2cm高、3 4片葉的幼苗單株切下，轉(zhuǎn)接到不同生根培養(yǎng)基上，每瓶5株，所述的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx，生根率達(dá)90%以上，如圖4所示。試管苗完成當(dāng)試管苗長(zhǎng)至4 5cm，具3 4條根時(shí)，4 5片葉時(shí)，完成達(dá)摩蘭植株再生及產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)試管苗培養(yǎng)，如圖5所示。所述步驟6)完成的達(dá)摩蘭試管苗進(jìn)行移栽，移栽前先在培養(yǎng)室外煉苗一周左右。然后從瓶中取出，洗凈附著的培養(yǎng)基，用水苔將根包好，移栽至珍珠巖、細(xì)石與樹皮的混合基質(zhì)中，并用紗布包好3 5粒緩釋肥置于移栽盤中，注意不要直接放在根部，移栽后保持一定的溫度和濕度。
權(quán)利要求
1.一種達(dá)摩蘭快速繁殖方法，其特征在于所述方法的具體步驟包括 O取材、消毒選取達(dá)摩蘭原種苗，切取長(zhǎng)度3 5厘米的側(cè)芽，沖洗干凈后，在水中剪去根及側(cè)芽外層I 2片葉梢，清洗、消毒處理，剝?nèi)ネ鈬M織，切取莖尖，直接接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上； 2)原球莖誘導(dǎo)所述原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基MS中加入6-BAO. 5mg/L ；NAA I. O mg/L ;香蕉果肉 150 g/L ;蛋白胨3g/L ;白糖 2% ;活性炭 2g/L ;瓊脂6. 5g,培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx，誘導(dǎo)產(chǎn)生原球莖； 3)叢生芽誘導(dǎo)選取步驟2)生長(zhǎng)良好的原球莖轉(zhuǎn)到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基1/2 MS中加入6-BA 3. Omg/L ；NAA I. O mg/L ;蛋白胨2g/L ;花寶I號(hào)2 g/L ;活性炭2. O g/L ；白糖3% ;香蕉果肉150 g/L ;培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ;誘導(dǎo)出叢生芽； 4)增殖培養(yǎng)將過(guò)步驟3)誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽切開，接種到增殖培養(yǎng)基中；每100 150g的增殖培養(yǎng)基接種3個(gè)；所述的增殖培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基1/2 MS中加入6-BAO. 5mg/L ；NAA O. 5mg/L ;活性炭2. O g/L ;花寶2號(hào)2 g/ ;白糖3% ;香蕉果肉150 g/L ;培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ； 5)誘導(dǎo)生根將步驟4)增殖培養(yǎng)出來(lái)的長(zhǎng)至2cm高、3 4片葉的幼苗單株切下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，所述的生根培養(yǎng)基的配方為基本培養(yǎng)基1/2 MS中加入6-BA O. 3mg/L5NAA 0.5 mg/L； IBA 1.0 mg/L;活性炭2. O g/L ;白糖3% ;培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1000 1500Lx ； 6)試管苗完成當(dāng)試管苗長(zhǎng)至4 5cm，具3 4條根、4 5片葉時(shí)，完成達(dá)摩蘭試管苗培養(yǎng)；以上所述基本培養(yǎng)基1/2 MS指大量元素減半。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的達(dá)摩蘭快速繁殖方法，其特征在于將所述步驟6)完成的達(dá)摩蘭試管苗進(jìn)行移栽，移栽前先在培養(yǎng)室外自然條件下煉苗4 5d，然后打開瓶蓋煉苗2 4天，煉苗后從瓶中取出幼苗，用清水洗凈附著幼苗根部的培養(yǎng)基，用水苔將根包好，移栽至珍珠巖、細(xì)石與樹皮的混合基質(zhì)中，并用紗布包好3 5粒緩釋肥置于移栽盤中，注意不要直接放在根部。
全文摘要
本發(fā)明提供一種達(dá)摩蘭快速繁殖方法，屬于達(dá)摩蘭的植株再生及產(chǎn)業(yè)化快速生產(chǎn)技術(shù)。解決現(xiàn)有技術(shù)中母株稀缺，繁殖基數(shù)少，繁殖率低，分株速度慢，種子小，育種進(jìn)程緩慢，出苗率低等難題。本發(fā)明選取達(dá)摩蘭原種苗無(wú)病蟲害的健壯母株上切取長(zhǎng)度3～5厘米的側(cè)芽為外植體材料，經(jīng)過(guò)莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)，20d后周圍出現(xiàn)許多白色顆粒狀愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)逐漸轉(zhuǎn)為綠色，25天后即可形成大量原球莖；再經(jīng)過(guò)分化培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，30～40d開始分化，逐步誘導(dǎo)出叢生芽，增殖到一定數(shù)量后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根后可煉苗移栽。從而擴(kuò)大繁殖系數(shù)，縮短育苗周期，滿足市場(chǎng)需求，為珍稀物種達(dá)摩蘭大量繁殖進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102696485SQ201210221460
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月30日
發(fā)明者何官榕, 何碧珠, 彭彪, 鄒雙全 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)