專利名稱：一種東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
百合是ー種重要的觀賞植物，具有較高的經(jīng)濟價值。其中麝香百合 (Longiflorum)、亞洲百合(Asiatic)、東方百合(Oriental)及喇卩入百合(Trumpet)是商業(yè)上最重要的百合四大雜種系，各具有獨特的優(yōu)良性狀。東方百合花大，花色鮮艷并具有濃郁的香味，而且對灰霉病(Botrytis)有著很強的抗性，是目前國內(nèi)最受歡迎的百合切花品系。然而目前市場上出售的切花品種都是從國外引進的品種，我們還沒有自己的商品品種， 因此選擇已引進的東方百合優(yōu)良品種進行雜交是進行品種改良和快速繁殖優(yōu)良百合品種的有效途徑。綜合不同雜種系間的優(yōu)良性狀已成為百合育種中的ー個重要目標，但是遠緣雜交不親合阻礙了百合育種的進一歩發(fā)展。百合遠緣雜交存在受精前及受精后兩種障礙， 受精后的障礙主要表現(xiàn)在受精后幼胚發(fā)育不完整，雜種種子發(fā)育不全，播種后都不能發(fā)芽生長，百合雜種胚培養(yǎng)技術(shù)能夠有效解決受精后障礙。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對上述問題，提供了ー種育種效果好、育種周期短的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，對東方百合雜種系授粉后，將其小胚、胚珠或子房切片剝離進行離體培養(yǎng)。具體的培養(yǎng)步驟為，(I)以東方百合雜種系為材料，定植在溫室中培養(yǎng)至開花；(2)取東方百合的開花株，對其授粉，授粉30-40天后，將其獲得的蒴果取下進行滅菌處理；(3)在培養(yǎng)皿中將殺過菌的蒴果剝開，將小胚、胚珠或子房切片接種在培養(yǎng)基中， 接種比例為I : 20 30 (g/ml培養(yǎng)基)，然后放置在溫度為23 27°C的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)15 45天即可發(fā)芽，發(fā)芽后繼續(xù)培養(yǎng)3 4個月后培養(yǎng)成完整植株。小胚、胚珠經(jīng)過15天的培養(yǎng)即可發(fā)芽；子房切片培養(yǎng)30天可明顯看到膨大的胚珠以后，剝離出來繼續(xù)培養(yǎng)15天即可發(fā)芽。在培養(yǎng)皿中將殺過菌的蒴果ー側(cè)剝開，看一看蒴果的腔室中胚珠的發(fā)育狀態(tài)，有的明顯能看到線狀的小胚，就直接剝出來培養(yǎng)；有的胚珠已經(jīng)成熟不容易剝離小胚，就采取直接接種胚珠培養(yǎng)的方法，有的只能看到水狀的胚珠，有透明的種皮包著，看不到胚；有的連胚珠也看不到的，就采取子房切片培養(yǎng)的方法；步驟⑵中，用亞洲百合雜種系對東方百合雜種系進行授粉。步驟(2)中所述的滅菌方法為，先將蒴果在75%的酒精中浸泡1-2秒，然后用鑷子夾著放到酒精燈火焰上方撩燒，進行表面殺菌。步驟(3)中將小胚進行離體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為1/2MS+BA0. 05 O. 2mg/l+NAA O. 05 O. 2mg/l+ 鹿糖 50000mg/l ο步驟(3)中將胚珠進行離體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為1/2MS+BA0. 05 O. 2mg/l+蔗糖 40000mg/lο步驟(3)中將子房切片進行離體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為MS+NAA0. I O. 3mg/l+蔗糖 30000mg/l。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過人工配制的培養(yǎng)基提供雜種幼胚營養(yǎng)，使之繼續(xù)生長發(fā)育直至成苗。 雜交子房、胚珠和雜交幼胚離體培養(yǎng)是目前克服受精后障礙的有效方法，其中以幼胚離體培養(yǎng)成功幾率最大。幼胚離體培養(yǎng)被廣泛地用來挽救在胚胎發(fā)育的中后期敗育或不成熟的種間雜種胚。通過雜交授粉子房及幼胚的離體培養(yǎng)可在胚敗育之前將其取出培養(yǎng)，避免遠緣雜種胚早衰，有效解決百合受精后障礙，使大量遠緣雜交胚繼續(xù)發(fā)育成正常種子，盡快進入選育程序，縮短了育種周期，同時獲得了大量的遠緣雜交后代，實現(xiàn)了百合屬種間遠緣雜交， 創(chuàng)造了一批新種質(zhì)，胚挽救技術(shù)與百合瓶內(nèi)結(jié)球技術(shù)的結(jié)合，有效縮短了百合雜交后代的培育周期和調(diào)高了雜種成活率。
具體實施例方式實施例I以東方百合雜交系品種‘索邦’為母本，以亞洲百合雜交系品種‘里諾’為父本，將授粉后36天獲得的蒴果切下，在超凈工作臺上將其進行表面殺菌處理，即先將蒴果在75% 的酒精中浸泡1-2秒，然后用鑷子夾著放到酒精燈火焰上方撩燒，進行表面殺菌。接著在培養(yǎng)皿中將殺過菌的蒴果一側(cè)剝開，將小胚直接剝出來，接種到組成為1/2MS+BA O. Img/ I+NAA O. lmg/1+蔗糖50000mg/l培養(yǎng)基中，接種比例為I 20g/ml，接著放置在溫度為 23°C的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)15天后成功發(fā)芽，繼續(xù)培養(yǎng)3個月后培養(yǎng)成完整植株，培育成百合新品種‘芳馨’。應用上述培養(yǎng)方法雜種成活率達91 %?！架啊拘誀罨S色,無斑點,花徑15cm，花瓣長8cm，花瓣寬4. 5cm，萼片反卷度小，柱頭黃色，無香味。株高56cm,生長期10周；總體評價優(yōu)良。實施例2以東方百合雜交系品種‘expression’為母本，以亞洲百合雜交系品種‘沃爾米’ 為父本，將授粉后40天獲得的蒴果切下，在超凈工作臺上將其進行表面殺菌處理，即先將蒴果在75%的酒精中浸泡1-2秒，然后用鑷子夾著放到酒精燈火焰上方撩燒，進行表面殺菌。接著在培養(yǎng)皿中將殺過菌的蒴果一側(cè)剝開，將小胚直接剝出來，接種到組成為1/2MS+BA
O.2mg/l+NAA O. 05mg/l+蔗糖50000mg/l培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種比例為I : 30g/ml，接著放置在溫度為27°C的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)15天后成功發(fā)芽，繼續(xù)培養(yǎng)4個月后培養(yǎng)成完整植株，培育成百合新品種‘丹彤’。應用上述培養(yǎng)方法雜種成活率達94%?！ね拘誀罨òS色；花瓣基部紅色，邊緣黃色，花瓣分離，有紫色斑點，花徑14cm，花瓣長8cm，花瓣寬3. 7cm,萼片反卷度小，柱頭黃色，無香味。盆花，株高50cm，生長期12周；總體評價優(yōu)良。涉及的親本‘里諾’、‘沃爾米’、‘索邦’、‘expression’均購買自浙江虹越花卉有限公司公司。
權(quán)利要求
1.一種東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，對東方百合雜種系授粉后，將其小胚、胚珠或子房切片剝離，進行離體培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，具體的培養(yǎng)步驟為，(1)以東方百合雜種系為材料，定植在溫室中培養(yǎng)至開花；(2)取東方百合的開花株，對其授粉，授粉30-40天后，將其獲得的蒴果取下進行滅菌處理；(3)在培養(yǎng)皿中將殺過菌的蒴果剝開，將小胚、胚珠或子房切片接種到培養(yǎng)基中，接種比例為I : 20 30g/ml，然后放置在溫度為23 27°C的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)15 45天即可發(fā)芽，發(fā)芽后繼續(xù)培養(yǎng)3 4個月后培養(yǎng)成完整植株。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(2)中，用亞洲百合雜種系對東方百合雜種系進行授粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(2)中所述的滅菌方法為，先將蒴果在75%的酒精中浸泡1-2秒，然后用鑷子夾著放到酒精燈火焰上方撩燒，進行表面殺菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)中將小胚進行離體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為1/2MS+BA0. 05 O. 2mg/l+NAA O. 05 O. 2mg/l+蔗糖 50000mg/lο
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)中將胚珠進行離體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為1/2MS+BA0. 05 O. 2mg/l+蔗糖40000mg/l。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)中將子房切片進行離體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為MS+NAA0. I O. 3mg/l+蔗糖30000mg/l。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供了一種育種效果好、育種周期短的東方百合雜種胚的培養(yǎng)方法。其對東方百合雜種系受粉后，將小胚、胚珠或子房切片剝離，進行離體培養(yǎng)。通過雜交授粉子房及幼胚的離體培養(yǎng)可在胚敗育之前將其取出培養(yǎng)，避免遠緣雜種胚早衰，有效解決百合受精后障礙，使大量遠緣雜交胚繼續(xù)發(fā)育成正常種子，盡快進入選育程序，縮短了育種周期，同時獲得了大量的遠緣雜交后代，實現(xiàn)了百合屬種間遠緣雜交，創(chuàng)造了一批新種質(zhì)，胚挽救技術(shù)與百合瓶內(nèi)結(jié)球技術(shù)的結(jié)合，有效縮短了百合雜交后代的培育周期和調(diào)高了雜種成活率。
文檔編號A01H1/02GK102599053SQ20121006542
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月14日
發(fā)明者于淼, 印東生, 吳海紅, 周腰華, 屈連偉, 李丹, 楊佳明, 梅國宏, 潘百濤, 蘇勝舉, 裴新輝, 趙興華, 邢桂梅 申請人:趙興華