專利名稱：一種帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
煙草黑脛病(tobacco black shank)是世界煙草生產(chǎn)中的主要病害。目前，在實(shí)驗(yàn)室、溫室有采用平板菌絲塊貼接(王革，鄭小波，陸家云等.云南省煙草黑脛病菌致病力分化的研究.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，20(4):30-35)、攪碎菌絲液或游動(dòng)孢子液灌根等煙草黑脛病菌接種方法。菌絲塊通常貼接于根莖部，病菌從根莖交接處的表皮侵染；菌絲液或游動(dòng)孢子液灌根常常人為造成一些傷口，以便病菌從根部侵染。這兩種方法操作復(fù)雜、費(fèi)工費(fèi)時(shí)，一般不適用于大田人工接種。在田間應(yīng)用較多的是谷物培養(yǎng)物接種，接種后病菌可在未利用的谷物培養(yǎng)基上繁殖、存活一段時(shí)間，保障了病菌與煙株根莖部的充分接觸，有利于病菌侵染，但也存在較大風(fēng)險(xiǎn)，谷物培養(yǎng)的病菌很容易成為其拮抗菌的誘餌而導(dǎo)致病菌消解， 病菌數(shù)量降低，不能有效侵染煙株而發(fā)病。因此，有必要制備類似于煙草連作導(dǎo)致黑脛病發(fā)生嚴(yán)重的田間土壤來模仿田間自然發(fā)病，以便測(cè)定煙草品種對(duì)黑脛病的抗感性、篩選防治煙草黑脛病的藥劑或生防菌、天然產(chǎn)物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土 ；另一目的在于提供一種該模擬栽培土的制備方法；第三目的在于提供該模擬栽培土的應(yīng)用。本發(fā)明的第一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的模擬栽培土包括目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土，所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土的體積比為1:21:41。本發(fā)明的另一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的方法包括培養(yǎng)物準(zhǔn)備、栽培基質(zhì)配制和栽培土配制,具體包括
A、培養(yǎng)物準(zhǔn)備，將接種并培養(yǎng)成熟的帶煙草黑脛病病菌的培養(yǎng)物搗碎或攪碎成粒徑 1^3mm的粗粉狀；
B、栽培基質(zhì)配制，將破碎好培養(yǎng)物顆粒與栽培基料按體積比1:2 4混合，并攪拌混勻制成栽培基質(zhì)；
C、栽培土配制，將栽培基質(zhì)與基土按體積比1:2 4混合均勻即制成帶煙草黑脛病病菌的栽培土。本發(fā)明第三目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土用于煙草品種對(duì)黑脛病的抗感性測(cè)定；或篩選防治煙草黑脛病的藥劑或生防菌、天然產(chǎn)物。所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土用作盆栽土；或塘施煙株根系、撒施煙株根莖四周作為人造病菌土供大田栽培用。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有以下優(yōu)點(diǎn)及效果
1、帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土中病菌數(shù)量穩(wěn)定、侵染更有效。制作形成的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土類似于煙草連作自然形成的帶煙草黑脛病病菌的植煙土。由于栽培基質(zhì)經(jīng)過處理，雜菌量小，而且栽培基質(zhì)本身有機(jī)質(zhì)含量高，易吸水、持水力強(qiáng)，有利于病菌的存活，同時(shí)為病菌的侵染創(chuàng)造了良好的濕度環(huán)境，病菌與寄主接觸時(shí)間長(zhǎng)，侵染成功幾率更大，侵染更有效；
2、病菌侵染方式更接近自然。帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土可直接用于盆栽土，病菌可以通過根莖部、根系侵染煙株；也可以在大田塘施煙株根系，即置換原栽培土，形成帶煙草黑脛病病菌的客土，病菌可以通過根系侵染煙株；撒施煙株根莖四周，病菌可以通過根莖部侵染煙株；還可以同時(shí)塘施煙株根系、撒施煙株根莖四周，病菌可以通過根莖部、根系侵染煙株。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制， 基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變更或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述的模擬栽培土包括目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土，所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土的體積比為1:21:41。所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土的體積比為1:2. 5^3. 5:5 7。所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物為固體培養(yǎng)物或液體培養(yǎng)物；所述的栽培基料為草炭、農(nóng)家肥或餅肥中的任意一種或一種以上的混合物；所述的基土為腐植土、耕作土或非耕作土中的任意一種或一種以上的混合物。所述的農(nóng)家肥為人、家禽、牲畜糞便，或農(nóng)作物秸桿經(jīng)發(fā)酵腐熟處理后制成的農(nóng)家肥。所述的耕作土為水稻、小麥、豆類、谷類、薯類農(nóng)作物種植土中的一種或一種以上的混合土。所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土的方法，所述的方法包括培養(yǎng)物準(zhǔn)備、栽培基質(zhì)配制和栽培土配制，具體包括
所述的培養(yǎng)物準(zhǔn)備是將接種并培養(yǎng)成熟的帶煙草黑脛病病菌的培養(yǎng)物搗碎或攪碎成粒徑l 3mm的粗粉狀；
所述的栽培基質(zhì)配制是將破碎好培養(yǎng)物顆粒與栽培基料按體積比1:2 4混合，并攪拌混勻制成栽培基質(zhì)；
所述的栽培土配制是將栽培基質(zhì)與基土按體積比1:2 4混合均勻即制成帶煙草黑脛病病菌的栽培土。所述的培養(yǎng)物為液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物；所述的栽培基料為經(jīng)過粉碎處理成粒徑f 3_的草炭、腐熟的農(nóng)家肥或餅肥中任意一種或一種以上的混合物。所述的基土為經(jīng)5(T60°C高溫消毒、殺菌處理且無線蟲的腐植土、耕作土或非耕作土中任意一種或一種以上的混合土，基土粉碎成粒徑3_的粗粉狀。下面以煙草黑脛病病菌模擬栽培土為例進(jìn)一步說明本發(fā)明，其他目標(biāo)病菌模擬栽培土同樣可以采用本發(fā)明方法配制。實(shí)施例I
將黑脛病病菌固體培養(yǎng)物與人畜糞便發(fā)酵后的農(nóng)家肥與腐殖土按體積比1:2:4的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物破碎成廣3_粗粉狀，加入2份體積5(T55°C高溫消毒、殺菌處理后的人畜糞便發(fā)酵后的農(nóng)家肥充分混合、拌勻；再將4份體積經(jīng)5(T55°C消毒后的腐殖土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。實(shí)施例2
將黑脛病病菌固體培養(yǎng)物與草炭與水稻耕作土按體積比1:4:8的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物破碎成f 3_粗粉狀，加入4份體積水蒸汽消毒、殺菌處理后的草炭充分混合、拌勻；再將8份體積經(jīng)55飛(TC消毒后且無線蟲的水稻耕作土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。實(shí)施例3
將黑脛病病菌固體培養(yǎng)物與腐熟的餅肥與豆類耕作土按體積比1:3. 5:7的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物破碎成廣3_粗粉狀，加入3. 5 份體積6(T65°C消毒、殺菌處理后的腐熟的餅肥充分混合、拌勻；再將7份體積經(jīng)5(T55°C消毒后且無線蟲的豆類耕作土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。實(shí)施例4
將黑脛病病菌液體培養(yǎng)物、腐熟的農(nóng)作物秸桿農(nóng)家肥與非耕作土按體積比1:2. 5:4 的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物，加入2. 5份體積 5(T55°C消毒、殺菌處理后的腐熟餅肥(粉碎至粒徑f3mm)充分混合、拌勻；再將4份體積經(jīng) 55飛(TC消毒后且無線蟲的非作土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。實(shí)施例5
將黑脛病病菌液體培養(yǎng)物、腐熟的家禽糞便農(nóng)家肥、非耕作土按體積比1:2. 5:4的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物，加入2. 5份體積6(T65°C 消毒、殺菌處理后的腐熟餅肥(粉碎至粒徑f 3mm)充分混合、拌勻；再將4份體積經(jīng)5(T55°C 消毒后且無線蟲的非耕作土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。實(shí)施例6
將黑脛病病菌液體培養(yǎng)物、草炭與農(nóng)家肥組成的復(fù)合栽培基料、非耕作土按體積比 1:3:5的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物，加入3份體積 5(T55°C消毒、殺菌處理后的上述復(fù)合栽培基料(粉碎至粒徑f 3mm)充分混合、拌勻；再將5 份體積經(jīng)5(T55°C消毒后且無線蟲的非作土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。實(shí)施例7
將黑脛病病菌液體培養(yǎng)物、草炭與餅肥組成的復(fù)合栽培基料、非耕作土按體積比1:3:6 的比例配制成模擬栽培土。首先將I份體積的黑脛病病菌固體培養(yǎng)物，加入3份體積 5(T55°C消毒、殺菌處理后的上述復(fù)合栽培基料(粉碎至粒徑f 3mm)充分混合、拌勻；再將6 份體積經(jīng)5(T55°C消毒后且無線蟲的薯類耕作土混勻即得到帶黑脛病病菌的模擬栽培土。
權(quán)利要求
1.一種帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土，包括目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土，其特性在于所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土的體積比為1:21:41。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土，其特性在于所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物、栽培基料與基土的體積比為1:2. 5^3. 5:5 7。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土，其特性在于所述的目標(biāo)病菌培養(yǎng)物為固體培養(yǎng)物或液體培養(yǎng)物；所述的栽培基料為草炭、農(nóng)家肥或餅肥中的任意一種或一種以上的混合物；所述的基土為腐殖土、耕作土或非耕作土中的任意一種或一種以上的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土，其特性在于所述的農(nóng)家肥為人、家禽、牲畜糞便，農(nóng)作物秸桿經(jīng)發(fā)酵腐熟處理后制成的農(nóng)家肥。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土，其特性在于所述的耕作土為水稻、小麥、豆類、谷類、薯類農(nóng)作物種植土中的一種或一種以上的混合土。
6.一種制備權(quán)利要求廣5中任意一項(xiàng)所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土的方法，包括培養(yǎng)物準(zhǔn)備、栽培基質(zhì)配制和栽培土配制，其特性在于具體包括A、培養(yǎng)物準(zhǔn)備，將接種并培養(yǎng)成熟的帶煙草黑脛病病菌的培養(yǎng)物搗碎或攪碎成粒徑f 3mm的粗粉狀；B、栽培基質(zhì)配制，將破碎好培養(yǎng)物顆粒與經(jīng)50°C以上高溫消毒、殺菌處理后的栽培基料按體積比1:2 4混合，并攪拌混勻制成栽培基質(zhì)；C、栽培土配制，將栽培基質(zhì)與基土按體積比1:2 4混合均勻即制成帶煙草黑脛病病菌的栽培土。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土制備方法，其特征在于所述的培養(yǎng)物為固體培養(yǎng)物或液體培養(yǎng)物；所述的栽培基料為經(jīng)過粉碎處理成粒徑f 3_的草炭、腐熟的農(nóng)家肥或餅肥中的任意一種或一種以上的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土制備方法，其特征在于所述的基土為經(jīng)5(T60°C高溫消毒、殺菌處理且無線蟲的腐殖土、耕作土或非耕作土中任意一種或一種以上的混合土，基土粉碎成粒徑廣3_的粗粉狀。
9.一種權(quán)利要求廣5中任意一項(xiàng)所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土用于煙草品種對(duì)黑脛病的抗感性測(cè)定；或篩選防治煙草黑脛病的藥劑或生防菌、天然產(chǎn)物。
10.一種權(quán)利要求廣5中任意一項(xiàng)所述的帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土用作盆栽土 ； 或塘施煙株根系、撒施煙株根莖四周作為人造病菌土供大田栽培用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種帶目標(biāo)發(fā)病病菌的模擬栽培土及其制備方法與應(yīng)用，該法制備的栽培土可以用來測(cè)定煙草品種對(duì)黑脛病的抗感性、篩選防治煙草黑脛病的藥劑或生防菌、天然產(chǎn)物。其制備步驟包括(A)病菌固體培養(yǎng)物的破碎；(B)與栽培基料混勻；(C)與基土混勻。本發(fā)明的帶病菌栽培土中病菌接種體質(zhì)量穩(wěn)定、數(shù)量可控，可用于盆栽，也可塘施、撒施煙株根莖四周作為人造病菌土供大田栽培用。應(yīng)用本發(fā)明病菌栽培土比其他方式接種更簡(jiǎn)便、病菌存活時(shí)間更長(zhǎng)、感染煙株更有效。
文檔編號(hào)A01G1/00GK102577790SQ20121002160
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月31日
發(fā)明者盧秀萍, 方敦煌, 殷端, 肖炳光 申請(qǐng)人:云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院