專利名稱：一種河鰻的人工繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種河鰻的人工繁殖的方法，具體地說，是河鰻在人工激素調(diào)控下，獲得性成熟的雌鰻和雄鰻，通過人工授精和自然交配獲得大量河鰻受精卵及早期幼苗的方法。
背景技術(shù)：
河鰻，學(xué)名日本鰻鱺Unguilla japonica),是亞洲最重要的洄游性魚類之一，生活史中經(jīng)歷數(shù)次變態(tài)過程，在淡水中生長、育肥，到海洋中產(chǎn)卵、繁殖。目前河鰻養(yǎng)殖所需苗種完全依賴天然捕撈。我國經(jīng)歷了由上世紀(jì)70年代的鰻苗捕撈出口，90年代初部分鰻鱺依靠進(jìn)口，到90年代末長江口捕苗困難的過程。由于生態(tài)資源的破壞，環(huán)境的不斷惡化及玻璃鰻的過度捕撈，導(dǎo)致鰻苗資源逐年下降，鰻苗資源枯竭，鰻苗價格飛升，2010年到2011 年，價格甚至達(dá)到16-20元/尾。而鰻鱺養(yǎng)殖是我國出口創(chuàng)匯的主要品種之一。鰻鱺苗種短缺極大的限制了鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展，開展鰻鱺人工繁殖技術(shù)研究勢在必行。
河鰻人工繁殖周期相當(dāng)漫長，長達(dá)3-6個月。人工繁殖過程中存在著雌雄發(fā)育不同步，催產(chǎn)效率差，受精率低，孵化不穩(wěn)定，開口餌料無法解決等問題。且長期缺乏其海洋中自然繁育的生態(tài)條件的了解認(rèn)識，河鰻的人工繁殖成為公認(rèn)的世界難題。2010年日本水產(chǎn)綜合研究中心在長達(dá)40多年的研究后，宣布完成了河鰻的全人工繁殖，但繁殖過程中催產(chǎn)率，受精率，孵化率，存活率極低，且高成本的投入(幼苗每尾約100萬日元)，以及實(shí)驗(yàn)化的操作條件遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了大批量生產(chǎn)的需要。得到大量優(yōu)質(zhì)的鰻鱺精卵，獲得較高的受精率及孵化率，成為真正實(shí)現(xiàn)鰻鱺的全人工繁殖必須解決的首要問題。
上世紀(jì)70，80年代，我國就開始河鰻人工繁殖的研究。廈門水產(chǎn)學(xué)院(現(xiàn)上海海洋大學(xué))趙長春等在國內(nèi)首先拿到了河鰻人工幼苗，并養(yǎng)到22-23天。至今國內(nèi)無人打破此紀(jì)錄。之后七五和八五期間作為國家重點(diǎn)課題由上海水產(chǎn)大學(xué)(現(xiàn)上海海洋大學(xué))負(fù)責(zé)，聯(lián)合河北省水產(chǎn)研究所、水科院珠江水產(chǎn)研究所、水科院南海水產(chǎn)研究所、復(fù)旦大學(xué)、浙江省海洋水產(chǎn)研究所、中科院南海海洋研究所等進(jìn)行了河鰻人工育苗技術(shù)的研究，取得了很大進(jìn)展。
中國專利文獻(xiàn)CN101461334B公開了一種獲得鰻鱺正常成熟精子的方法，其特征是鰻鱺親本在人工養(yǎng)殖環(huán)境條件下開口攝食后養(yǎng)殖15天以后進(jìn)行鹽度馴化，鹽度馴化由低濃度逐步過渡到海水；鰻鱺養(yǎng)殖池水溫控制在18-25°C之間，白天全遮光，夜晚見月光， 晚上進(jìn)行流水刺激，水中溶氧保持在6mg/l以上，弱堿性水，氨、氮含量不超過0. 02mg/l和 0.05mg/l，鰻鱺雄性自然排精，獲得成熟正常精子。中國專利文獻(xiàn)CN102232363A公開了一種人工誘導(dǎo)花鰻鱺性腺發(fā)育成熟的方法，雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進(jìn)行催熟，劑量為 500U/kg ·體重，每周注射一次，注射時間為6周；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體(CPE)勻漿進(jìn)行催熟，LHRH-A2劑量為250 μ g/kg ·體重，CPE的劑量為4粒/kg ·體重，每7-9天注射一次，注射次數(shù)15-18次。但是關(guān)于河鰻在人工激素調(diào)控下，獲得成熟的雌鰻和雄鰻，通過人工授精和自然交配獲得大量河鰻受精卵及早期幼苗的方法目前還未見報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種河鰻的人工繁殖方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種河鰻的人工繁殖方法，通過定期注射鯉魚腦垂體勻漿液和HCG，促使親魚達(dá)到性成熟，并通過自然產(chǎn)卵或人工授精，獲得受精卵和初孵仔魚，所述的人工繁殖方法包括以下三個步驟a、親魚催熟將收集的降海河鰻親本馴養(yǎng)7天后，引入沉淀過濾的天然海水，鹽度 17%。，用人工海鹽調(diào)配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調(diào) 3-4%。，直到鹽度上升到30-35%。；根據(jù)魚體體重，親魚背部肌肉注射催熟劑鯉魚腦垂體勻漿液混合HCG，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半；雌鰻在注射5-7針后， 水溫達(dá)到20士0. 5°C時，停止注射；雄魚繼續(xù)注射催熟劑，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子；b、親魚催產(chǎn)雌鰻注射最后一針催熟劑，24h后注射催產(chǎn)劑17α -羥基孕酮混合HCG，并挑選已經(jīng)可以產(chǎn)精的雄鰻，注射一針催熟劑；翌日凌晨，收集自然產(chǎn)卵的受精卵；未產(chǎn)卵雌鰻，進(jìn)行半干法人工授精；C、受精卵孵化得到的受精卵立即轉(zhuǎn)運(yùn)到孵化桶中進(jìn)行孵化；曝氣，保證溶解氧充足， 并形成微水流能帶動卵粒浮動；每四小時換一半水體，直至成功孵出魚苗。
所述的催熟劑為0. 5mg/500g ·體重的鯉魚腦垂體勻漿液混合150IU/500g ·體重的HCG，催產(chǎn)劑為5mg/500g ·體重的17 α -羥基孕酮混合150IU/500g ·體重的HCG。
所述的步驟a中環(huán)境因子為鹽度17-30%。，水溫16°C -24°C, pH 7. 5-8. 2，溶解氧 4_15mg/L，投放密度為50尾/池，雌雄分開。
所述的步驟b環(huán)境因子為鹽度30-35%。，水溫19. 5-22. 5°C, pH 7. 0-8. 0，溶解氧 5_15mg/L，投放密度12尾/池，雌雄比例1 :3。
所述的步驟C中環(huán)境因子為鹽度33士0.5%。，水溫21 士0.5，pH 7.2-7. 5，溶解氧 6mg/L以上，氨、氮含量分別不超過0. 02mg/L和0. 05mg/L, Ca2+，Mg2+質(zhì)量濃度范圍分別為 325-330 mg/L，1160-1165 mg/L。
所述的孵化密度為600-800粒/L。
所述的步驟a中將收集的降海河鰻親本放入搭有遮陽布大棚的池中，池底遮陽網(wǎng)下加覆蓋物。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于1、本發(fā)明的突出特點(diǎn)是在人工催熟河鰻條件下，通過適應(yīng)性馴養(yǎng)，鹽度馴化，人工水質(zhì)的調(diào)控管理，能夠防止麻醉劑及操作損傷，降低激素注射劑量，使雌鰻在后期依靠自身已經(jīng)調(diào)動的生殖機(jī)制達(dá)到卵巢發(fā)育的最后階段，通過人工催產(chǎn)，大量河鰻能自然交配產(chǎn)卵；2、優(yōu)化人工授精前雌鰻挑選程序，利用已經(jīng)具有產(chǎn)卵行為的雌鰻，能有計(jì)劃有把握的完成人工授精；3、嚴(yán)格控制孵化環(huán)境因子，能得到大量初孵幼苗，提高了人工繁殖河鰻得到優(yōu)質(zhì)受精卵和初孵魚苗的水平。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。
實(shí)施例1親魚催熟環(huán)境因子鹽度17-30%。，水溫160C -24°C,pH 7. 5-8. 2，溶解氧4_15mg/L，投放密度為 50尾/池，雌雄分開。
對收到的降海河鰻親本進(jìn)行適應(yīng)期馴化。將收集的降海河鰻親本放入搭有半邊遮陽布大棚的水泥池中(IOmX 3mX 1. 2m)，馴養(yǎng)7天適應(yīng)人工環(huán)境后，引入沉淀過濾的天然海水(17%。)，用人工海鹽調(diào)配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調(diào)3-4%。，直到鹽度上升到30-35%。。池底遮陽網(wǎng)下加瓦片、PVR管等覆蓋物，白天時魚體躲于覆蓋物中，晚上會在沒有遮陽網(wǎng)下的區(qū)域活動，達(dá)到白天避光，晚上見月光的效果。
其中催熟處理利用河鰻體型及畏光特性，對魚體進(jìn)行催熟處理操作時不用麻醉劑，使用人工親本網(wǎng)控制(參見中國專利申請CN201733718U —種魚類人工繁殖親本控制網(wǎng))，稱量魚體體重，親魚背部肌肉注射催熟劑，所述的催熟劑為鯉魚腦垂體勻漿液(CPE) (0. 5mg/500g ·體重，即 0. 5mg/500g · Bff)混合 HCG (150IU/500g · BW)，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半。雌鰻在注射5-7針后，水溫達(dá)到20士0. 5°C時，停止注射。已經(jīng)開始發(fā)育的雌鰻利用自身的生殖調(diào)控，經(jīng)過1-2周能達(dá)到性腺發(fā)育最后的水和作用階段。此時雄魚繼續(xù)注射催熟劑，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子。
實(shí)施例2親魚催產(chǎn)環(huán)境因子鹽度30-35%。，水溫19. 5-22. 5°C, pH 7. 0-8. 0，溶解氧5_15mg/L，投放密度 12尾/池，雌雄比例1 :3。
2-3周后，已經(jīng)開始發(fā)育的雌鰻利用自身的生殖調(diào)控，達(dá)到卵巢發(fā)育最后的水和作用階段。根據(jù)雌鰻的生殖孔狀態(tài)(突起并少許紅腫)，腹圍變化程度(適量變大但不膨大)，挑選魚體，雌鰻在第一天上午注射最后一針催熟劑，24h后注射催產(chǎn)針，催產(chǎn)劑為17 α -羥基孕酮(OHP) (5mg/500g · Bff)混合HCG(150IU/500g · Bff)。并挑選已經(jīng)可以產(chǎn)精的雄鰻，注射一針CPE (0. 5mg/500g · Bff)混合HCG (150IU/500g · Bff)。催產(chǎn)后投放入池，密度12尾/ 池，雌雄比例1 :3。
其中自然產(chǎn)卵部分，在翌日凌晨3-4點(diǎn)，觀察水體表面追逐的雌雄鰻鱺。在雌雄鰻鱺完成自然交配后用100目紗絹收集受精卵。
其中人工授精部分，捕撈由于雄魚未追逐或者效應(yīng)時間差，長時間在水體表面游動的未產(chǎn)卵雌鰻，捕撈后進(jìn)行半干法人工授精。
實(shí)施例3受精卵孵化環(huán)境因子嚴(yán)格控制鹽度33士0.5%。，水溫21 士0.5，pH 7. 2-7. 5，溶解氧6mg/L以上， 氨、氮含量不超過0. 02mg/L和0. 05mg/L，Ca2+，Mg2+質(zhì)量濃度范圍為325 330 mg/L, 1160 1165 mg/L。
得到的受精卵立即轉(zhuǎn)運(yùn)到特制的50L圓形錐底的孵化桶中進(jìn)行孵化。少量曝氣， 保證溶解氧充足，并形成微水流能帶動卵粒浮動。孵化密度600-800粒/L。從底部虹吸換水，每四小時換一半水體，36-3 成功孵出魚苗。
實(shí)施例4河鰻人工繁殖方法每年11月中下旬將收集的降海河鰻親本放入搭有半邊遮陽布大棚的水泥池中(10mX3mXl. 2m)，馴養(yǎng)7天適應(yīng)人工環(huán)境后，引入沉淀過濾的天然海水(17%。)，用人工海鹽調(diào)配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調(diào)3-4%。，直到池水鹽度上升到30-35%。。池底遮陽網(wǎng)下加瓦片、PVR管等覆蓋物，白天時魚體躲于覆蓋物中， 晚上會在沒有遮陽網(wǎng)下的區(qū)域活動，達(dá)到白天避光，晚上見月光的效果。其間水體鹽度 17-30%。，水溫16°C-M°C，pH 7. 5-8. 2，溶解氧4_15mg/L，投放密度為50尾/池，雌雄分開。
人工親本網(wǎng)控制，稱量魚體體重，親魚背部肌肉注射CPE (0. 5mg/500g)+HCG(150IU/500g)，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半。 雌鰻在注射5-7針后，水溫達(dá)到20士0. 5°C時，停止注射。此時雄魚繼續(xù)注射催熟針，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子。
2-3周后，已經(jīng)開始發(fā)育的雌鰻利用自身的生殖調(diào)控，達(dá)到卵巢發(fā)育最后的水和作用階段。根據(jù)雌鰻的生殖孔狀態(tài)(突起并少許紅腫)，腹圍變化程度(適量變大但不膨大)，挑選魚體，雌鰻在第一天上午注射最后一針催熟針，24h后注射催產(chǎn)針OHP (5mg/500g · Bff)混合HCG(150IU/500g · Bff)。并挑選已經(jīng)可以產(chǎn)精的雄鰻，注射一針CPE (0. 5mg/500g)+HCG(150IU/500g)。催產(chǎn)后投放入池，密度12尾/池，雌雄比例1 :3。在翌日凌晨3-4點(diǎn)，觀察水體表面追逐的雌雄鰻鱺。在雌雄鰻鱺完成自然交配后用100目紗絹收集受精卵。其中長時間在水體表面游動的未產(chǎn)卵雌鰻，捕撈后進(jìn)行半干法人工授精。
得到的受精卵立即轉(zhuǎn)運(yùn)到特制的50L圓形錐底的孵化桶中進(jìn)行孵化。嚴(yán)格控制鹽度33士0.5 %。，水溫21 士0.5，pH 7. 2-7. 5，溶解氧6mg/L以上，氨、氮含量不超過0. 02mg/L 和 0. 05mg/L，Ca2+，Mg2+質(zhì)量濃度范圍為 325 330 mg/L, 1160 1165 mg/L。少量曝氣， 保證溶解氧充足，并形成微水流能帶動卵粒浮動。孵化密度600-800粒/L。從底部虹吸換水，每四小時換一半水體，36-3 成功孵出魚苗。
2011年6月4日，人工授精獲得受精卵55萬粒，受精率33%，6月5日孵出魚苗11 萬尾；2011年6月12日，自然產(chǎn)卵獲得受精卵90萬粒，受精率96. 4%，獲得河鰻初孵魚苗 80萬尾。
本發(fā)明的突出特點(diǎn)是在人工催熟河鰻條件下，通過適應(yīng)性馴養(yǎng)，鹽度馴化，人工水質(zhì)的調(diào)控管理，防止麻醉劑及操作損傷，降低激素注射劑量，雌鰻在后期依靠自身已經(jīng)調(diào)動的生殖機(jī)制達(dá)到卵巢發(fā)育的最后階段；通過人工催產(chǎn)，大量河鰻能自然交配產(chǎn)卵；優(yōu)化人工授精前雌鰻挑選程序，利用已經(jīng)具有產(chǎn)卵行為的雌鰻，能有計(jì)劃有把握的完成人工授精。 嚴(yán)格控制孵化環(huán)境因子，能得到大量初孵幼苗。其中催熟率95%以上，催產(chǎn)率達(dá)到80%以上， 人工授精受精率達(dá)到70%，孵化率80% ；自然產(chǎn)卵受精率達(dá)到96. 5%，孵化率90%。提高了人工繁殖河鰻得到優(yōu)質(zhì)受精卵和初孵魚苗的水平。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種河鰻的人工繁殖方法，通過定期注射鯉魚腦垂體勻漿液和HCG，促使親魚達(dá)到性成熟，并通過自然產(chǎn)卵或人工授精，獲得受精卵和初孵仔魚，其特征在于，所述的人工繁殖方法包括以下三個步驟a、親魚催熟將收集的降海河鰻親本馴養(yǎng)7天后，引入沉淀過濾的天然海水，鹽度 17%。，用人工海鹽調(diào)配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調(diào) 3-4%。，直到鹽度上升到30-35%。;根據(jù)魚體體重，親魚背部肌肉注射催熟劑鯉魚腦垂體勻漿液混合HCG，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半；雌鰻在注射5-7針后， 水溫達(dá)到20士0. 5°C時，停止注射；雄魚繼續(xù)注射催熟劑，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子；b、親魚催產(chǎn)雌鰻注射最后一針催熟劑，24h后注射催產(chǎn)劑17α -羥基孕酮混合HCG，并挑選已經(jīng)可以產(chǎn)精的雄鰻，注射一針催熟劑；翌日凌晨，收集自然產(chǎn)卵的受精卵；未產(chǎn)卵雌鰻，進(jìn)行半干法人工授精；C、受精卵孵化得到的受精卵立即轉(zhuǎn)運(yùn)到孵化桶中進(jìn)行孵化；曝氣，保證溶解氧充足， 并形成微水流能帶動卵粒浮動；每四小時換一半水體，直至成功孵出魚苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的催熟劑為0.5mg/500g 體重的鯉魚腦垂體勻漿液混合150IU/500g 體重的HCG，催產(chǎn)劑為5mg/500g 體重的17 α -羥基孕酮混合150IU/500g ·體重的HCG。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟a中環(huán)境因子為鹽度17-30%。，水溫16°C -24°C, pH 7. 5-8. 2，溶解氧4_15mg/L，投放密度為50尾/池，雌雄分開。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟b環(huán)境因子為鹽度 30-35%。，水溫19. 5-22. 5°C, pH 7. 0-8. 0，溶解氧5_15mg/L，投放密度12尾/池，雌雄比例 1 :3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟c中環(huán)境因子為鹽度 33士0. 5%。，水溫21 士0. 5，pH 7. 2-7. 5，溶解氧6mg/L以上，氨、氮含量分別不超過0. 02mg/ L 和 0. 05mg/L, Ca2+，Mg2+ 質(zhì)量濃度范圍分別為 325-330 mg/L, 1160-1165 mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的孵化密度為600-800粒/L0
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟a中將收集的降海河鰻親本放入搭有遮陽布大棚的池中，池底遮陽網(wǎng)下加覆蓋物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種河鰻人工繁殖方法，包括a、親魚催熟將收集的降海河鰻親魚馴養(yǎng)7天后，逐步提高水體鹽度，并對親魚進(jìn)行背部肌肉注射催熟劑鯉魚腦垂體勻漿液及HCG；b、親魚催產(chǎn)雌鰻注射催產(chǎn)針17α-羥基孕酮和HCG，可以產(chǎn)精的雄鰻注射CPE混合HCG；翌日收集自然產(chǎn)卵的受精卵；未產(chǎn)卵雌鰻，進(jìn)行半干法人工授精；c、受精卵孵化受精卵立即轉(zhuǎn)運(yùn)到特制的孵化桶中進(jìn)行孵化；少量曝氣；每四小時換一半水體，直至成功孵出魚苗。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于能夠防止麻醉劑及操作損傷，降低激素注射劑量；通過人工催產(chǎn)，大量河鰻能自然交配產(chǎn)卵；能有計(jì)劃有把握的完成人工授精；提高了人工繁殖河鰻得到優(yōu)質(zhì)受精卵和初孵魚苗的水平。
文檔編號A01K61/00GK102511424SQ201110437068
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月23日
發(fā)明者劉利平, 吳嘉敏, 王磊, 蔣天寶, 趙長春, 陳文銀 申請人:上海海洋大學(xué)